・1071・
利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白的研究
王静 王航雁 王利红 高艳 孙启鸿 高建恩 柳晓兰 张成岗
摘 要 目的 建立并评价一种去除母乳中高丰度蛋白的方法,使低丰度蛋白得到富集,为通过蛋白质组学技术发现母乳中的重要活性蛋白奠定基础。方法 将母乳作为混合蛋白抗原免疫动物制备多克隆抗体,随后用此多克隆抗体通过免疫亲和层析技术去除母乳中的高丰度蛋白,采用免疫印迹法对免疫亲和层析的效果进行验证。结果 母乳中的4种高丰度蛋白均得到一定程度的去除,建立了去除母乳中高丰度蛋白的新方法。结论 通过混合抗原所制备的多克隆抗体可有效去除其中的高丰度抗原,并可使低丰度蛋白得到富集。这一方法也可用于提高血浆等样品中低丰度蛋白的检出效率。 关键词 乳,人;高丰度蛋白;免疫亲和层析 中国图书资料分类号 R15312
Anovelstrategyforsubtractinghigh2abundanceproteinsinhumanmilkbyimmunoaffinitychromatography
WangJing,WangHangyan,WangLihongetal.DepartmentofPediatrics,GeneralHospitalofPLA,Beijing100853,China
Abstract Objective Toestablishandevaluateanovelmethodforsubtractinghigh2abundanceproteinsinordertoenrichlowabun2danceproteinsinhumanmilk,withtheaimofdiscoveringimportantbioactivefactorsbyproteomicsapproachinthefuture.Methods Thewholeproteinsinhumanmilkwereusedasimmunogenstopreparepolyclonalantibody,andthehigh2abundanceproteinsweresubtractedbyimmunoaffinitychromatography.Theeffectwassubsequentlyevaluatedbyimmunoblotting.Results milkpolyclonalanti2bodywassuccessfullypreparedfollowingroutinemethod.After,kindsofhigh2abundanceproteinsinhumanmilkwereremoved.Conclusions Thesedataindicatedthatpreparedbywholeproteinsampleswereavailablefortheremovalofhigh2proteinsofthesamples.According2ly,thismethodcouldalsobeusedindetectingasserum.
Keywords milk,human;,chromatography
目前,进一步研究,乳中尚未报道的蛋白成分[1]。发展新的高丰度蛋白去除方法,提高复杂样品(如母乳、血浆等)中低丰度蛋白的检出效率,对于发现重要生物活性物质具有重要意义。本研究利用母乳中含有高丰度蛋白的特点,直接将其中的全部蛋白作为混合抗原免疫动物制备多克隆抗体,然后通过免疫亲和层析技术与所制备的抗混合抗原的抗体进行结合并洗脱,达到除去部分高丰度蛋白的目的,使低丰度蛋白得到富集,结果发现该方法能有效地去除母乳中的高丰度蛋白,报道如下。1 材料与方法
1.1 实验试剂 福氏佐剂购自Sigma公司,CNBr2活
5ml。采集样本前用酒精棉球消毒乳头及收集者的手,
化的Sepharose4B购自Pharmacia公司,ProteinA/Gagarose及WesternBlottingLuminolReagent购自San2taCruz公司,层析预装柱购自Bio2Rad公司,抗人酪蛋白单克隆抗体及抗人乳铁蛋白单克隆抗体分别购自Neomarker公司及QED公司,抗人白蛋白单克隆抗体及抗人IgA抗体由军事医学科学院放射医学研究所免疫学研究室孙启鸿等提供,辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体购自北京中杉公司。1.2 母乳的采集 收集10位产后2～5天母亲的初乳
采用人工挤压法将乳汁直接挤入消毒的试管内,在4℃
条件下,2000g离心20min,避开上层的脂质层,吸取乳清部分,将10份样本混合,BCA法测定蛋白浓度,分装并冻存于-70℃冰箱中待检。1.3 实验动物 3月龄的雌性日本大耳白兔3只,体重2～215kg,由解放军总医院实验动物中心提供。114 母乳多克隆抗体的制备 母乳样本经完全福氏佐剂乳化后(终浓度4mg/ml),皮下多点注射免疫白兔(免疫剂量1125mg/只),免疫前取兔耳血留作正常血清对照。在初次免疫后的第4、6、8周分别以等量的抗原与非完全福氏佐剂乳化进行加强免疫,加强免疫后第10天取耳血,间接ELISA法测定抗体效价,抗体效价达到105以上时,从动物颈动脉放血,分离血清。115 母乳多克隆抗体的纯化 将ProteinA/Gagarose装柱,操作步骤按说明书进行,将收集到的抗母乳蛋白的兔血清置于纯化柱中孵育30min,分别用浓度为
作者简介:王静,硕士生。主要从事母乳对婴儿发育影响的研究作者单位:100853 北京 解放军总医院小儿内科(王静、王航雁);军事医学科学院放射医学研究所(王利红、高艳、孙启鸿、高建恩、柳晓兰、张成岗)
通信作者:张成岗,电话:[1**********]0;E2mail:zhangcg@bmi1ac1cn基金项目:国家自然科学基金资助项目(30300358,30200154);北京市自然科学基金资助项目(7053080,7061004)
・1072・
100mmol/L及10mmol/L的Tris2HCl(pH810)洗涤,最
后用100mmol/L甘氨酸(pH310)洗脱,分管收集洗脱
液,经SDS2PAGE电泳,将含有抗体的洗脱液合并。116 母乳的免疫亲和层析 参照说明书操作步骤,将纯化后的母乳多克隆抗体与CNBr2活化的Sepharose4B偶联并装柱,柱体积为115ml。基于抗原与抗体结合的特
μm的滤纸加压过滤,用纯水稀释至异性,母乳经0145
115ml(约8mg)。室温下在层析柱内孵育30min过柱,收集过柱液,以115ml的100mmol/LTris2HCl洗涤出大部分未与抗体结合的母乳蛋白,收集此段洗涤液作为去除高丰度蛋白的母乳,再充分洗涤层析柱,用200mmol/L甘氨酸(pH210)洗脱与抗体上结合的蛋白,分管收集洗脱液,平衡及再生亲和层析柱。将收集到的样本进行
图2 母乳样品的免疫亲和层析SDS2PAGE电泳,合并含有洗脱蛋白的洗脱液。
11Marker;21母乳;31经孵育、过柱,收集到的柱体积液;41洗涤液洗
117 Westernblot法对免疫亲和层析效果验证 将母
下的未与抗体结合的母乳蛋白(去高丰度蛋白质的母乳);5～101依次收集
乳与免疫亲和层析收集到的非特异洗脱液(去除高丰到的6管洗脱液
度蛋白后的母乳)进行SDS2PAGE电泳,经半干式电转Figure2 Immunoaffinitychromatographyofsubtractinghigh2abun2仪转至醋酸纤维素膜上,含5%脱脂奶粉的TBS封闭danceproteinsinhumanmilk过夜,再分别在含抗人酪蛋白单克隆抗体(1∶2000),抗人乳铁蛋白单克隆抗体(1∶2000),抗人白蛋白单克隆 如抗体(1∶1000)及抗人IgA抗体(1∶1000)的TBS2T冲液中室温孵育115h,再用TBS2T5min酪蛋白分子量为30～40kD,箭头所4次,1∶指条带正位于此分子量区,提示酪蛋白在一定程度上3000)的TBS2TTBS2T缓冲液洗被去除;乳铁蛋白分子量约为79kD,箭头所指条带符合涤5min×4次,其分子量范围,经亲和层析后条带消失,但其下方约应,并感光于柯达X线片上显影。66kD处的条带也很清晰,由于这4组使用不同的抗体
分别与转至膜上的蛋白结合,该条带在4组结果中均
2 结 果
有显影,考虑为非特异性条带,尽管如此,该条带也有
2.1 抗母乳蛋白多克隆抗体的制备、纯化结果 于免疫减弱趋势,仍能提示乳铁蛋白有所去除;分泌型IgA分
5
第8周后测定兔抗血清效价已达10以上,收集抗血清,过子量为78～80kD,箭头所指的特异性条带消失,提示分ProteinA/Gagarose亲和柱纯化。抗血清经纯化后出现泌型IgA被有效去除;人血清白蛋白分子量为67kD,明显的IgG55kD的重链带和24kD的轻链带(图1)
。箭头所指的约66kD处及31kD处的条带有消失,考虑
66kD处为白蛋白条带,31kD处的条带可能为白蛋白的片段。
因此提示血清白蛋白有所去除。
道为母乳亲和层析前后的比较,可观察到4泳道中高丰度蛋白有所减少,而在具有相同上样体积的情况下,一些新的条带显现出来(见图中左箭头标注)。7～10泳道中可观察到在80、60及30kD附近有明显的高丰
度蛋白洗脱下来。
图1 抗母乳蛋白多克隆抗体的纯化(SDS2PAGE)
M1Marker;11纯化前抗母乳蛋白兔血清;21纯化后抗母乳
图3 Westernblot法对免疫亲和层析的验证
a1免疫亲和层析前的母乳样本;b1经免疫亲和层析去除高丰度蛋白
蛋白多克隆抗体的母乳样本
Figure1 Purificationofanti2humanmilkpolyclonalanti2body(SDS2PAGE)
Figure3 Westernblotverificationtothehigh2abundanceproteinssubtractinginhumanmilkanalizedbyimmunoaffinitychromatography
2.2 母乳样品的免疫亲和层析 如图2所示,2、4泳
・1073・
3 讨 论
早在20世纪70年代,就有提取全脑组织的蛋白作为混合抗原制备组织特异性抗体的报道[2]。抗体的生成
[3]
受抗原的免疫原性及免疫量等因素影响,母乳中主要含有酪蛋白、分泌型IgA、乳铁蛋白及α乳白蛋白等4种高丰度蛋白,已有大量文献表明这4种蛋白都曾被制备出相应抗体,证明了其免疫原性,且这4种高丰度蛋白在母乳中的浓度均在1mg/ml以上,能确保一定的免疫量。本研究通过Westernblot法对免疫亲和层析效果进行验证,结果显示母乳经免疫亲和层析后,这4种高丰度蛋白特异性显影条带均有减弱或消失,提示我们所制备的抗母乳复合性多克隆抗体中含有这4种高丰度蛋白的抗体,通过免疫亲和层析可将高丰度蛋白去除。同时,经免疫亲和层析后的母乳SDS2PAGE电泳结果中可见到新的蛋白条带显现出来,提示低丰度蛋白得到了富集。以上结果证明了该技术的可行性。但由于抗体的产生是由抗原的免疫原性及免疫量等因素决定的[4],虽然微量的低丰度蛋白产生抗体的可能性较小且很难达到有效的效价,仍不能排除有这些抗体存在的可能,同时也会伴有其他蛋白的丢失。成分,分别免疫动物制备抗体,会存在分离的抗原不纯、多次洗脱过程中蛋白被稀释以及有价值蛋白丢失等问题。蛋白质组学不可能做到鉴定出母乳中所有的蛋白,只要能够促进低丰度蛋白的发现与研究,就具有一定可行性。因此,利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白,富集得到低丰度蛋白,可能会促进母乳活性成分的研究。该技术同样可用于血浆蛋白质组以及其他器官蛋白质组学的研究。
参 考 文 献
1
KoukiM,MargaretL,YoshikazuYetal.Identificationofminorpro2teinsofhumancolostrumsandmaturemilkbytwo2dimensionalelectro2phoresis.Eletrophroesis,1998,(19):25212
StrongDD,HerschmanHR.Identificationandcharacterizationofabrain2specificantigenenrichedinneonatalbrain.I.Developmental,regionaldistributionandmolecularweightstudies.BrainRes,1978,151(1):833
EchanLA,TangHY,Ali2KhanNetal.Depletionofmultiplehigh2abundanceproteinsimprovesproteinprofilingcapacitiesofhumanserumandplasma.Proteomics,2005,5(13)4
SleisterHM,RaoAG.:atoolforthegenera2ofinatorysimilarsequence.JImmu2,122)(2006204217收稿 2006208218修回)
(责任编辑 李恩江)
・信 息・
《中华创伤杂志》征订启事
《中华创伤杂志》创刊于1985年9月,是国内惟一能全面、系统地反映我国创伤医学成果和发展动向的高级医学专业学术期刊。本刊能较充分地反映我国创伤医学领域临床和基础研究所取得的重要进展和重大成就,如严重多发伤救治和创伤评分,交通伤临床救治及基础理论研究、创伤流行病学分析,部位伤救治,创伤分子生物学、创伤免疫学研究等。本刊主要栏目有专家论坛、述评、论著、经验交流、新技术、病例报道、综述、讲座等。本刊以从事创伤医学和相关学科的各级临床医师和研究人员为读者对象。
国家科技部中国科技信息研究所信息中心、中国科学院文献情报中心等单位均将本刊收录并列为核心期刊,其影响因子和总被引
(CA)、(P
・1071・
利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白的研究
王静 王航雁 王利红 高艳 孙启鸿 高建恩 柳晓兰 张成岗
摘 要 目的 建立并评价一种去除母乳中高丰度蛋白的方法,使低丰度蛋白得到富集,为通过蛋白质组学技术发现母乳中的重要活性蛋白奠定基础。方法 将母乳作为混合蛋白抗原免疫动物制备多克隆抗体,随后用此多克隆抗体通过免疫亲和层析技术去除母乳中的高丰度蛋白,采用免疫印迹法对免疫亲和层析的效果进行验证。结果 母乳中的4种高丰度蛋白均得到一定程度的去除,建立了去除母乳中高丰度蛋白的新方法。结论 通过混合抗原所制备的多克隆抗体可有效去除其中的高丰度抗原,并可使低丰度蛋白得到富集。这一方法也可用于提高血浆等样品中低丰度蛋白的检出效率。 关键词 乳,人;高丰度蛋白;免疫亲和层析 中国图书资料分类号 R15312
Anovelstrategyforsubtractinghigh2abundanceproteinsinhumanmilkbyimmunoaffinitychromatography
WangJing,WangHangyan,WangLihongetal.DepartmentofPediatrics,GeneralHospitalofPLA,Beijing100853,China
Abstract Objective Toestablishandevaluateanovelmethodforsubtractinghigh2abundanceproteinsinordertoenrichlowabun2danceproteinsinhumanmilk,withtheaimofdiscoveringimportantbioactivefactorsbyproteomicsapproachinthefuture.Methods Thewholeproteinsinhumanmilkwereusedasimmunogenstopreparepolyclonalantibody,andthehigh2abundanceproteinsweresubtractedbyimmunoaffinitychromatography.Theeffectwassubsequentlyevaluatedbyimmunoblotting.Results milkpolyclonalanti2bodywassuccessfullypreparedfollowingroutinemethod.After,kindsofhigh2abundanceproteinsinhumanmilkwereremoved.Conclusions Thesedataindicatedthatpreparedbywholeproteinsampleswereavailablefortheremovalofhigh2proteinsofthesamples.According2ly,thismethodcouldalsobeusedindetectingasserum.
Keywords milk,human;,chromatography
目前,进一步研究,乳中尚未报道的蛋白成分[1]。发展新的高丰度蛋白去除方法,提高复杂样品(如母乳、血浆等)中低丰度蛋白的检出效率,对于发现重要生物活性物质具有重要意义。本研究利用母乳中含有高丰度蛋白的特点,直接将其中的全部蛋白作为混合抗原免疫动物制备多克隆抗体,然后通过免疫亲和层析技术与所制备的抗混合抗原的抗体进行结合并洗脱,达到除去部分高丰度蛋白的目的,使低丰度蛋白得到富集,结果发现该方法能有效地去除母乳中的高丰度蛋白,报道如下。1 材料与方法
1.1 实验试剂 福氏佐剂购自Sigma公司,CNBr2活
5ml。采集样本前用酒精棉球消毒乳头及收集者的手,
化的Sepharose4B购自Pharmacia公司,ProteinA/Gagarose及WesternBlottingLuminolReagent购自San2taCruz公司,层析预装柱购自Bio2Rad公司,抗人酪蛋白单克隆抗体及抗人乳铁蛋白单克隆抗体分别购自Neomarker公司及QED公司,抗人白蛋白单克隆抗体及抗人IgA抗体由军事医学科学院放射医学研究所免疫学研究室孙启鸿等提供,辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体购自北京中杉公司。1.2 母乳的采集 收集10位产后2～5天母亲的初乳
采用人工挤压法将乳汁直接挤入消毒的试管内,在4℃
条件下,2000g离心20min,避开上层的脂质层,吸取乳清部分,将10份样本混合,BCA法测定蛋白浓度,分装并冻存于-70℃冰箱中待检。1.3 实验动物 3月龄的雌性日本大耳白兔3只,体重2～215kg,由解放军总医院实验动物中心提供。114 母乳多克隆抗体的制备 母乳样本经完全福氏佐剂乳化后(终浓度4mg/ml),皮下多点注射免疫白兔(免疫剂量1125mg/只),免疫前取兔耳血留作正常血清对照。在初次免疫后的第4、6、8周分别以等量的抗原与非完全福氏佐剂乳化进行加强免疫,加强免疫后第10天取耳血,间接ELISA法测定抗体效价,抗体效价达到105以上时,从动物颈动脉放血,分离血清。115 母乳多克隆抗体的纯化 将ProteinA/Gagarose装柱,操作步骤按说明书进行,将收集到的抗母乳蛋白的兔血清置于纯化柱中孵育30min,分别用浓度为
作者简介:王静,硕士生。主要从事母乳对婴儿发育影响的研究作者单位:100853 北京 解放军总医院小儿内科(王静、王航雁);军事医学科学院放射医学研究所(王利红、高艳、孙启鸿、高建恩、柳晓兰、张成岗)
通信作者:张成岗,电话:[1**********]0;E2mail:zhangcg@bmi1ac1cn基金项目:国家自然科学基金资助项目(30300358,30200154);北京市自然科学基金资助项目(7053080,7061004)
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100mmol/L及10mmol/L的Tris2HCl(pH810)洗涤,最
后用100mmol/L甘氨酸(pH310)洗脱,分管收集洗脱
液,经SDS2PAGE电泳,将含有抗体的洗脱液合并。116 母乳的免疫亲和层析 参照说明书操作步骤,将纯化后的母乳多克隆抗体与CNBr2活化的Sepharose4B偶联并装柱,柱体积为115ml。基于抗原与抗体结合的特
μm的滤纸加压过滤,用纯水稀释至异性,母乳经0145
115ml(约8mg)。室温下在层析柱内孵育30min过柱,收集过柱液,以115ml的100mmol/LTris2HCl洗涤出大部分未与抗体结合的母乳蛋白,收集此段洗涤液作为去除高丰度蛋白的母乳,再充分洗涤层析柱,用200mmol/L甘氨酸(pH210)洗脱与抗体上结合的蛋白,分管收集洗脱液,平衡及再生亲和层析柱。将收集到的样本进行
图2 母乳样品的免疫亲和层析SDS2PAGE电泳,合并含有洗脱蛋白的洗脱液。
11Marker;21母乳;31经孵育、过柱,收集到的柱体积液;41洗涤液洗
117 Westernblot法对免疫亲和层析效果验证 将母
下的未与抗体结合的母乳蛋白(去高丰度蛋白质的母乳);5～101依次收集
乳与免疫亲和层析收集到的非特异洗脱液(去除高丰到的6管洗脱液
度蛋白后的母乳)进行SDS2PAGE电泳,经半干式电转Figure2 Immunoaffinitychromatographyofsubtractinghigh2abun2仪转至醋酸纤维素膜上,含5%脱脂奶粉的TBS封闭danceproteinsinhumanmilk过夜,再分别在含抗人酪蛋白单克隆抗体(1∶2000),抗人乳铁蛋白单克隆抗体(1∶2000),抗人白蛋白单克隆 如抗体(1∶1000)及抗人IgA抗体(1∶1000)的TBS2T冲液中室温孵育115h,再用TBS2T5min酪蛋白分子量为30～40kD,箭头所4次,1∶指条带正位于此分子量区,提示酪蛋白在一定程度上3000)的TBS2TTBS2T缓冲液洗被去除;乳铁蛋白分子量约为79kD,箭头所指条带符合涤5min×4次,其分子量范围,经亲和层析后条带消失,但其下方约应,并感光于柯达X线片上显影。66kD处的条带也很清晰,由于这4组使用不同的抗体
分别与转至膜上的蛋白结合,该条带在4组结果中均
2 结 果
有显影,考虑为非特异性条带,尽管如此,该条带也有
2.1 抗母乳蛋白多克隆抗体的制备、纯化结果 于免疫减弱趋势,仍能提示乳铁蛋白有所去除;分泌型IgA分
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第8周后测定兔抗血清效价已达10以上,收集抗血清,过子量为78～80kD,箭头所指的特异性条带消失,提示分ProteinA/Gagarose亲和柱纯化。抗血清经纯化后出现泌型IgA被有效去除;人血清白蛋白分子量为67kD,明显的IgG55kD的重链带和24kD的轻链带(图1)
。箭头所指的约66kD处及31kD处的条带有消失,考虑
66kD处为白蛋白条带,31kD处的条带可能为白蛋白的片段。
因此提示血清白蛋白有所去除。
道为母乳亲和层析前后的比较,可观察到4泳道中高丰度蛋白有所减少,而在具有相同上样体积的情况下,一些新的条带显现出来(见图中左箭头标注)。7～10泳道中可观察到在80、60及30kD附近有明显的高丰
度蛋白洗脱下来。
图1 抗母乳蛋白多克隆抗体的纯化(SDS2PAGE)
M1Marker;11纯化前抗母乳蛋白兔血清;21纯化后抗母乳
图3 Westernblot法对免疫亲和层析的验证
a1免疫亲和层析前的母乳样本;b1经免疫亲和层析去除高丰度蛋白
蛋白多克隆抗体的母乳样本
Figure1 Purificationofanti2humanmilkpolyclonalanti2body(SDS2PAGE)
Figure3 Westernblotverificationtothehigh2abundanceproteinssubtractinginhumanmilkanalizedbyimmunoaffinitychromatography
2.2 母乳样品的免疫亲和层析 如图2所示,2、4泳
・1073・
3 讨 论
早在20世纪70年代,就有提取全脑组织的蛋白作为混合抗原制备组织特异性抗体的报道[2]。抗体的生成
[3]
受抗原的免疫原性及免疫量等因素影响,母乳中主要含有酪蛋白、分泌型IgA、乳铁蛋白及α乳白蛋白等4种高丰度蛋白,已有大量文献表明这4种蛋白都曾被制备出相应抗体,证明了其免疫原性,且这4种高丰度蛋白在母乳中的浓度均在1mg/ml以上,能确保一定的免疫量。本研究通过Westernblot法对免疫亲和层析效果进行验证,结果显示母乳经免疫亲和层析后,这4种高丰度蛋白特异性显影条带均有减弱或消失,提示我们所制备的抗母乳复合性多克隆抗体中含有这4种高丰度蛋白的抗体,通过免疫亲和层析可将高丰度蛋白去除。同时,经免疫亲和层析后的母乳SDS2PAGE电泳结果中可见到新的蛋白条带显现出来,提示低丰度蛋白得到了富集。以上结果证明了该技术的可行性。但由于抗体的产生是由抗原的免疫原性及免疫量等因素决定的[4],虽然微量的低丰度蛋白产生抗体的可能性较小且很难达到有效的效价,仍不能排除有这些抗体存在的可能,同时也会伴有其他蛋白的丢失。成分,分别免疫动物制备抗体,会存在分离的抗原不纯、多次洗脱过程中蛋白被稀释以及有价值蛋白丢失等问题。蛋白质组学不可能做到鉴定出母乳中所有的蛋白,只要能够促进低丰度蛋白的发现与研究,就具有一定可行性。因此,利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白,富集得到低丰度蛋白,可能会促进母乳活性成分的研究。该技术同样可用于血浆蛋白质组以及其他器官蛋白质组学的研究。
参 考 文 献
1
KoukiM,MargaretL,YoshikazuYetal.Identificationofminorpro2teinsofhumancolostrumsandmaturemilkbytwo2dimensionalelectro2phoresis.Eletrophroesis,1998,(19):25212
StrongDD,HerschmanHR.Identificationandcharacterizationofabrain2specificantigenenrichedinneonatalbrain.I.Developmental,regionaldistributionandmolecularweightstudies.BrainRes,1978,151(1):833
EchanLA,TangHY,Ali2KhanNetal.Depletionofmultiplehigh2abundanceproteinsimprovesproteinprofilingcapacitiesofhumanserumandplasma.Proteomics,2005,5(13)4
SleisterHM,RaoAG.:atoolforthegenera2ofinatorysimilarsequence.JImmu2,122)(2006204217收稿 2006208218修回)
(责任编辑 李恩江)
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《中华创伤杂志》征订启事
《中华创伤杂志》创刊于1985年9月,是国内惟一能全面、系统地反映我国创伤医学成果和发展动向的高级医学专业学术期刊。本刊能较充分地反映我国创伤医学领域临床和基础研究所取得的重要进展和重大成就,如严重多发伤救治和创伤评分,交通伤临床救治及基础理论研究、创伤流行病学分析,部位伤救治,创伤分子生物学、创伤免疫学研究等。本刊主要栏目有专家论坛、述评、论著、经验交流、新技术、病例报道、综述、讲座等。本刊以从事创伤医学和相关学科的各级临床医师和研究人员为读者对象。
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(CA)、(P