实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
一、概述
槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。
主要化学成分的结构及理化性质：
芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子
水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结
晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分
（一）实验目的
1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。
（二）实验原理
1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish 反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf 值也应不同。
（三）实验药材、仪器与试剂
1、药材：槐米50g(每组) 。
2、仪器：电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml 烧杯、冰箱、滤纸、PH 试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。
3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。
（四）实验方法
1、芦丁的提取：（碱提酸沉法）
取槐米50g ，加0.4%硼砂水溶液400ml 至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min ，随时补充失去的水分及控制PH 值，四层纱布过滤，药渣再重复处理一次（不用调PH 值）。合并两次滤液，用浓盐酸调PH=3，放入冰箱中析晶。
2、芦丁的精制：（水重结晶法）
（1）抽滤：用虹吸法先除去上清液，再进行抽滤，可更换滤纸。
（2）精制：取全部芦丁粗品，加入蒸馏水800ml ，煮沸至全部溶解（15min ），趁热抽滤，放入冰箱析晶。
3、芦丁的水解：（酸水解法）
取芦丁1g ，加入2%硫酸150ml ，小火加热微沸30min ，注意观察现象：溶液由浑浊变澄清，逐渐析出黄色结晶，抽滤，得到槲皮素粗品。剩下的芦丁要妥善保管，下次课还要带来。
4、鉴别反应
（1）称槲皮素重量，计算水解率。
（2）薄层色谱鉴定
样品：自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。（每组称取20mg ）
对照品：芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液。
展开剂：90%乙醇溶液
显色：喷三氯化铝溶液，紫外光（365nm ）观察荧光。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf 值。
（3）显色反应
①Molish 反应：取芸香苷及槲皮素样品分别1ml ，加入3%α-萘酚溶液1滴，振摇，沿壁滴加浓硫酸1ml ，观察现象。
②盐酸-镁粉反应：分别取样品1ml ，加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉，观察现象。
③纸片反应：取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液1滴，观察现象。（同理，再用醋酸镁显色）
（五）注意事项
1、提取时控制小火加热，微沸即可。
2、加热完成后要放冷抽滤。
3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH ，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH 值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
4、用HCl 调PH 时，应注意PH 不要过低，因为PH 过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
5、Molish 反应中加入浓硫酸后不可振摇。
6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好，否则荧光颜色淡或没有。
（六）思考题
1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响？
2、加石灰乳和硼砂分别有何目的？
实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
一、概述
槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。
主要化学成分的结构及理化性质：
芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子
水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结
晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分
（一）实验目的
1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。
（二）实验原理
1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish 反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf 值也应不同。
（三）实验药材、仪器与试剂
1、药材：槐米50g(每组) 。
2、仪器：电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml 烧杯、冰箱、滤纸、PH 试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。
3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。
（四）实验方法
1、芦丁的提取：（碱提酸沉法）
取槐米50g ，加0.4%硼砂水溶液400ml 至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min ，随时补充失去的水分及控制PH 值，四层纱布过滤，药渣再重复处理一次（不用调PH 值）。合并两次滤液，用浓盐酸调PH=3，放入冰箱中析晶。
2、芦丁的精制：（水重结晶法）
（1）抽滤：用虹吸法先除去上清液，再进行抽滤，可更换滤纸。
（2）精制：取全部芦丁粗品，加入蒸馏水800ml ，煮沸至全部溶解（15min ），趁热抽滤，放入冰箱析晶。
3、芦丁的水解：（酸水解法）
取芦丁1g ，加入2%硫酸150ml ，小火加热微沸30min ，注意观察现象：溶液由浑浊变澄清，逐渐析出黄色结晶，抽滤，得到槲皮素粗品。剩下的芦丁要妥善保管，下次课还要带来。
4、鉴别反应
（1）称槲皮素重量，计算水解率。
（2）薄层色谱鉴定
样品：自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。（每组称取20mg ）
对照品：芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液。
展开剂：90%乙醇溶液
显色：喷三氯化铝溶液，紫外光（365nm ）观察荧光。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf 值。
（3）显色反应
①Molish 反应：取芸香苷及槲皮素样品分别1ml ，加入3%α-萘酚溶液1滴，振摇，沿壁滴加浓硫酸1ml ，观察现象。
②盐酸-镁粉反应：分别取样品1ml ，加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉，观察现象。
③纸片反应：取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液1滴，观察现象。（同理，再用醋酸镁显色）
（五）注意事项
1、提取时控制小火加热，微沸即可。
2、加热完成后要放冷抽滤。
3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH ，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH 值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
4、用HCl 调PH 时，应注意PH 不要过低，因为PH 过低（PH2以下）会使芦丁形成钅羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
5、Molish 反应中加入浓硫酸后不可振摇。
6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好，否则荧光颜色淡或没有。
（六）思考题
1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响？
2、加石灰乳和硼砂分别有何目的？