农业资源与环境学报
Journal of Agricultural Resources and Environment
响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母
张
帆1，谢
丽2，邹晓阳2，朱建航1*
2. 丰城市中国生态硒谷现代农业管委会，（1. 南昌大学环境与化学工程学院化工系，江西南昌330031；江西丰城330011）
摘对酵母富硒能力影响较大的3个因素：要：考察了发酵条件对产朊假丝酵母富硒能力的影响。通过单因素的筛选，亚硒酸钠浓
度、初始pH 值及培养温度，以胞内总硒含量为响应值，利用响应面法对其进行优化。结果显示：在培养时间30h 、加硒时间对数生L -1，长中期、亚硒酸钠浓度35mg ·初始pH 6.6、接种量10%、培养温度27℃ 、装液量150mL/500mL 的条件下，最大的菌体生物量为6.87g L -1；L -1，g -1，·胞内总硒含量达到12639.7μ g ·硒含量为1839.8μ g ·其中亚硒酸钠转化率为79.1%，有机硒含量占90%以上；胞L -1相差不显著，内实际总硒含量与数学模型理论值12518.8μ g ·响应面法能较好地优化产朊假丝酵母富硒工艺条件。响应面法；总硒含量关键词：产朊假丝酵母；富硒；TS201.3中图分类号：
A 文献标志码：
2095-681906-0575-08文章编号：（2014）
doi:10.13254/j.jare.2014.0260
Optimization of Selenium-enriched Candida utilis by Response Surface Methodology
（1.School of Environmental and Chemical Engineering, Nanchang University, Nanchang 330031, China; 2.Modern Ecological Agricultural Abstract:The fermentation conditions of selenium enrichment by Candida utilis were studied. Based on the results of the single factor experi - ment, three factors including the concentration of sodium selenite, inital pH and incubation temperature were selected. The response surface method was used to optimize the various factors. The optimal conditions were obtained as follows:incubation time was 30h, time of adding Management Committee of Selenium-enriched Valley, Fengcheng 330011, China ）ZHANG Fan 1, XIE Li 2, ZOU Xiao-yang 2, ZHU Jian-hang 1*
selenium was mid-logarithmic, the sodium selenite concentration was 35mg L -1with inital pH of 6.6, incubation concentration of 10%,incu - ·The total selenium content of Candida utilis was 12639.7μ g L -1, and the selenium content of the cells was 1839.8μ g g -1, in which sodium ··selenite conversion rate was 79.1%and the organic selenium was higher than 90%.The actual value of selenium content was substantially riched by Candida utilis .
Keywords:Candida utilis ; selenium enriched; response surface methodology; total selenium content
bation temperature of 27℃ , the medium volume of 150mL/500mL, respectively. Under the optimal condition, the biomass was 6.87g ·L -1.
consistent with the theoretical value, and the response surface methodology was applicable for the fermentation conditions of selenium en -
缺硒会导致很硒是生物体必需的微量营养元素，
动物缺多疾病。人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症[1-3]，硒会导致白肌病和生长缓慢等[4]。目前用于防治疾病和作为饲料添加剂的主要是无机硒[5]，有机硒与无机硒相比，具有较高的生物活性[6]和较低的毒性[7]，故人们
有机硒可以通过人工合成、越来越重视有机硒的补充。
通过微生物将无机生物转化及生物富集等方式生产，
实用、经济的生产硒转化为有机硒是目前比较普遍、
相关文章报道富富硒酵母中有机硒含量较高，方法[8]。
硒酵母中的有机硒的含量达90%以上[9-11]，其中硒代另外半胱氨酸占60%以上，硒代蛋氨酸占20%左右，还有非氨基酸形式的有机硒化合物存在[12]。富硒酵母
是一种非常理想的功能性可以作为一种安全的硒源，
酵食品原料，具有广阔的市场应用前景[13]。一般而言，
g -1，而普通母中所能达到的最大硒量约为3000μ g ·g -1[14]。商业富硒酵母中硒含量一般为500~2000μ g ·目前，国内外关于富硒发酵条件的优化的报道比
考虑发较多，较多是考察培养基对酵母富硒的影响，尤酵条件中多个因素对富硒含量影响的报道却很少，
加硒浓度、发酵温度、其针对发酵过程中的加硒时间、
—575—
2014-09-30收稿日期：
科研专项基金项目：公益性行业（农业）“优质高效富硒农产品关键技
术研究与示范”（201303106）“863”；项目（2009AA02Z210）
硕士，作者简介：张帆（1982—），男，讲师，研究方向为环境资源与利
用。E-mail:[email protected]
*通信作者：朱建航E-mail:[email protected]
·农业资源与环境学报第31卷·第6期
察。值多、因接素种优量化和实验装液可量以等采多用个响影响应面因法素或综合正进行交实验
考
法。响应面法（response surfacem methodology ，RSM ）是利用合理的实验设计并通过实验得到一些数据，然后采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系，最终通过对回归方程的分析来寻求最优工
艺参数，解决多变量问题的一种统计方法。响应面法不仅能考察发酵条件中的各个关键因素，
而且能同时考察各种显著影响因素之间交互作用对优化结果的影响，从而得到最优的发酵条件。
本研究所用产朊假丝酵母为一株高产谷胱甘肽的菌株，前期对其发酵产谷胱甘肽培养基进行了优化[15]。在此基础上本文对产朊假丝酵母的富硒能力进行研究，并对富硒条件进行单因素筛选和响应面优化，同时利用催化吸收光度法作为硒含量的定量测定方法[16]，旨在为高性能富硒产朊假丝酵母的制备及应用提供基础依据。
1
1.1菌种
材料与方法
菌种来源：从江西省丰城市富硒果园中采集土壤
样品，在高硒浓度200mg ·
L -1培养基中培养，划线分离纯化得到菌株，通过26S rDNA D1/D2序列测定分
析及形态、生理生化试验初步鉴定为产朊假丝酵母1.2Candida 主要试utilis 剂及）。仪由器
本实验室筛选和保藏。亚硒酸钠标准品；盐酸苯肼；EDTA 二钠；变色酸；
氯酸钾；
TGL-16C 722s 高可氯酸见分。光光度化培养箱离计；立式压力蒸汽灭菌器；SPX-250心机；洁；净大工作容量台恒温SW-QJ-2FD 振荡器；PHS-3C ；智能生
精密1.3pH 培养计；
基
FHH-1恒温水浴锅；A1104N 分析天平。KH 种子培养基：葡萄糖40g ·L -1、酵母粉10g ·
L -1、2PO 4发酵2培g ·L -1、K 2养基：HPO 4葡萄糖1g ·
40L -1，pH 6.5。g ·L -1、L -1、MgSO NH 4）21.4培养4SO 0.34条件
g 10·L g
·-1，L -1、pH 6.5。PO ·酵母粉101.8g g ·
KH 241.2g L -1、K 2HPO 4·L -1、斜面培养：将产朊假丝酵母接种于麦芽汁琼脂斜
面上，
30℃ 培养48h 。200种子培养：—576mL —种子培养从基平的板500上取mL 1三环角斜瓶面中，菌体摇床接（到30装℃ 有，·发-1）培养36h 。
酵培养：将培养好的种子液以10%的接种量接
种于装有200mL 发酵培养基500mL 三角瓶中，
摇床（30℃ ，200r ·min -1）培养24h ，菌体对数生长中期添加1.5亚1.5.1分硒析酸方法
钠溶液，添加浓度为25mg ·
L -1。取菌4体mL 干重的发酵测液定
6000r ·min -1离心5min ，去离子水1.5.2洗3次，收集菌105℃ 烘干至恒定质量，称重。1缓、2、3分硒、4别标准曲线体的，
绘制
、5取mL 含于硒150.2mL μ g 的·
mL -1比色管的亚硒酸钠标准液0、mL 冲冷水，加水至液2mL 中冷却后，
15，氯酸mL 用，钾1摇2cm 匀mL 比色，在，变沸色中，皿水酸于浴508中2加mL 入EDTA 1mL ，加nm 热，盐酸苯肼1波20长下min 测，于
定吸1.5.3光度产，绘朊制标准假丝酵曲母线生长。
曲线的测定
后以50010%mL 的接的三种量角接瓶种中，装此入时发培酵养培基养中基不含200硒mL ，
然，后然
置于摇床（30℃ 、200r ·min -1）中振荡培养，
发酵过程中每隔一定时间取样，测定发酵液的菌体干重。以菌
体干重为纵坐标、培养时间为横坐标，绘出产朊假丝酵1.5.4母的生长取样10品的曲线。
mL 消发解[17]
酵液于50mL 离心管中，6000r ·
min -1离心5min ，去离子水洗3次，收集菌体。将离心后得到的菌体置于150mL 三角瓶中，加入15mL 混合酸
（硝酸∶ 高氯酸=4∶ 1），缓慢加热进行消化，直到溶液变成无色透明并伴有滚滚白烟时停止加热，冷却后，
定容1.5.5，待测菌。
1）体胞胞内内总硒硒含含量量的的测测定[17]
（定。在25mL 比色管中，
加入样品1mL ，EDTA 1mL ，缓冲液2mL ，氯酸钾2mL ，变色酸2mL ，盐酸苯肼1mL ，加水至15mL ，摇匀，
在沸水浴中加热20min ，于冷水中冷却后，用1cm 比色皿于最大吸收波长下测定吸光度，
对应标准曲线算出硒含量。
50mL （2离）胞心内无管中，机硒6含000量r ·的min 测定。取10mL 发酵液于
-1离心5min ，去离子水
洗mL 3次，中硒蒸馏浓度水收。
，集80菌℃ 体水。浴在中离加心热后1得h 到，离的心菌，体测中定加上入清10
液
（3）胞内有机硒含量的测定。有机硒含量（μ g ·
L -1）（（
总硒含量（·-1）-无机硒含量（μ g ·L -1）2.12结果与分析
2.1.1单通生长因素过产曲分朊线析
假的丝绘酵制
母生长曲线的绘制，
了解其生长情况，为后期的发酵时间及加硒时间的确定提供数据
依据。如图1所示，产朊假丝酵母的生长情况0~4h 是h h ，延滞为稳对数期，
定期。
生长中期4~16h 为为10对h 数，对期，数生长其中末对期数为生长16初h ，
期16~48为4765432100
10
20
培养30
时间/h
40
50
60
图1产朊假丝酵母的生长曲线Figure 1The growth curve of Candida utilis
2.1.2影响
加硒时间对产朊假丝酵母生物量和总硒含量的根据产朊假丝酵母的生长曲线得出酵母进入生
长对数初期、中期、末期的时间，分别选取加硒时间为发酵初期、对数初期、对数中期、
对数末期，考察加硒时间对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响。如图2所示，在初期添加亚硒酸钠对细胞生长和胞内硒的富集
[***********]1菌体干重75000
总硒含量
4
8
12
16
7000
加硒时间/h
图2加硒时间对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 2Effects selenium of time content of adding of selenium Candida utilis
on the biomass and
有不利影响，当加硒时间为对数中期时，
总硒含量最高，加硒时间为对数末期时，生物量略有升高，但总硒含2.1.3量呈影响
发下酵降时趋间势。对产因朊此假，加丝硒酵时母间生选择物量对和总数中期硒含最量佳的
。
选择发酵时间24、30、36、42、48h ，做发酵饰演的单因素实验，分析发酵时间对产朊假丝酵母生物量和
含硒量的影响。如图3所示，随着发酵时间的增加，产朊30假丝培养生h 生酵物母量的生和总物硒量含和总量均硒达到含量最高均呈，上培升趋势，
30物h 量和总硒含量均没有变化。因此，
发养酵时时间间延选择长，
7较合适。
[***********]菌体干重7500
总硒含量
020
25
30
发酵35
时间/h
40
45
507000图3发酵时间对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 3Effects of incubation content of Candida time on the utilis
biomass and selenium
量2.1.4的影响
亚硒酸钠浓度对产朊假丝酵母生物量和总硒含
在发酵培养生长对数中期添加不同浓度的亚硒
酸钠，考察加硒浓度对产朊假丝酵母生物量和含硒量
的影响。如图4所示，当亚硒酸钠浓度低于15mg ·L -1时，其添加对菌体的生长没有影响，
总硒含量呈上升趋势，当亚硒酸钠浓度超过15mg ·L -1后，亚硒酸钠的添加对产朊假丝酵母的生长有一定的抑制作用；
胞内总硒含量在亚硒酸钠添加量为30mg ·L -1时达到最高值，此时胞内总硒含量为10212.6μ g ·L -1，且可同时
获得5.58g ·L -1的生物量。因此，选择亚硒酸钠的添加浓2.1.5度为影响
初30始mg pH ·
L -1值。对产朊假丝酵母生物量和含硒量的为考察初始pH 值对产朊假丝酵母生物量和含
硒7.5量高的、8的初进行影响始pH 研究。，分别选取初始pH 值为5、
5.5、6、6.5、7、值均如不利图5于所胞示内，较硒低的的富初集始，在pH 初值始和pH
较
—577—
·农业资源与环境学报第31卷·第6期
[***********]000260001菌体干重总硒含量400000000
5
10
亚硒15
酸钠20
浓度/mg25
·
-130
35
402000
L 图4亚硒酸钠浓度对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 4Effects and of selenium sodium content selenite of concentration Candida utilis
on the biomass
[***********]21菌体干重总硒含量
80000
5
6
7
8
7000
图5初始pH 值对产朊假丝酵pH 值
母生物量和含硒量的影响Figure 5Effects of inital of pH Candida on the biomass utilis
and selenium content
值为6.5时，产朊假丝酵母生物量和总硒含量均达到
最大值，为5.35g ·L -1和10162.2μ g ·L -1。因此最适的初2.1.6始pH 选接取种值不量为同对6.5的产。
接朊种假量丝进行酵母发生酵物培量养和，
含研究硒量接的种影响
量对产朊假丝酵母生物量和总硒含量的影响。如图6所示，随着接种量的增加，产朊假丝酵母的生物量和总
硒量也呈上升趋势，在接种量超过10%后，菌体的生物量和总硒含量趋于稳定。
因此选定发酵培养的接种量为10%。影响
2.1.7培养温度对产朊假丝酵母生物量和含硒量的
微生物的生长以及代谢是由一系列的生化反应
组成的，而温度对于这些反应具有较明显的影响，
设置培养温度20~40℃ ，
以5℃ 为间隔，研究温度对产朊假丝酵母生物量和总硒含量的影响。如图7所示，温度对产朊假丝酵母的生长及胞内硒的富集具有较—578—
[***********]0327000菌体干重16000总硒含量
05000000
5
接种10
量/%
15
204000
图6接种量对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响Figure 6Effects selenium of inoculum content concentration of Candida utilis
on the biomass and
[***********]00021菌体干重8000总硒含量0
20
25
30
度/℃
35
40
6000
温图7培养温度对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响Figure 7Effects selenium of incubation content temperature of Candida on utilis
the biomass and
大影响，随着温度的升高，
菌体生物量和总硒含量均呈现先升高后降低的趋势，
并且菌体生物量及总硒含量均在25℃ 时达到最高。因此，
选取25℃ 为发酵培养2.1.8的最装佳液温量度对。
产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
量mL 和总的分发别硒酵用含培500量养的基mL 影响，考三角。察瓶如装装图液取8量所对50示产、
100，装朊液假、150量丝对酵、200产母朊生、250假
物
丝酵母的生长和硒的富集具有一定的影响，适当减少装液量以增加通气量可以提高产朊假丝酵母的生物
量和总硒含量，而装液量为50mL 时，胞内总硒含量明显减少，在装液量为150mL 时菌体生物量和总硒
含量均可达到最佳值。因此，选定150mL/500mL 的装2.2液2.2.1响量应进行面优化
发酵培养。
在响单因应面素法试试验验基础设计上与，结可果
知亚硒酸钠浓度、
初始
张帆，等：响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母
[***********]002菌体干重1总硒含量90000
50
100
液150
量/mL
200
250
8000
装图8装液量对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 8Effects of medium content volume of Candida on the utilis
biomass and selenium
pH 大。值和培养温度对产朊假丝酵母富硒工艺的3母胞个因因素此对根提据取Box-Behnken 工艺进行响应试验设计原理，
可影响较选取这pH 选面分析。取亚硒以产朊假丝酵
用响值内应和总面培硒试养含验结温量为度进行响应果，确三值定因，
产素朊三假水丝平酵共酸母富17钠浓硒组度的试、最验。初始佳利
工艺条件。响应面试验因素水平见表1，响应面分析及结2.2.2果见采模表用型2Design-Expert 评价
。软件对表2中实验数据进行二次多项式逐步回归拟合，
得到的83.98831.34数学模B +1型为903.56：Y =-1.31× 105+2775.98A +21C +
如表AB -0.453所AC 示-28.74，模型BC 的-49.60F =151.38A 2-1、P 810.56
失拟项检验的P >0.05（不显著），R 2合实验数据充分，表明响应值胞=0.994内总硒9含，说量明实模际型值拟
与
预测值之间具有较好的拟合度。
回归方程中各变量对响应值影响的显著性由F 检验来判定，
P 值越小相应变量的显著程度越高。
A 、C 、A B 、A 2
、B 2
、C 2
的P 值均小于0.05，说明亚硒酸钠浓度、温度、交互项AB 及三因素的二次项对胞内总硒含量均具有显著影响。由回归方程各项方差结果可知，在所选取的各因素水平范围内，按照对结果的影响排序，其顺序为亚硒酸钠浓度> 温2.2.3度> 初运响始用应Design-Expert 面分析
pH 值。软件分析处理实验所得数
据，对提取率有交互影响的响应面分析立体曲面图见图9。
响应面图形是响应值对各试验因子A 、B 、C 所构成的三维空间的曲面图，从响应面分析图上可形象地
表1响应面试验因素水平
Table 1Level and code of independent variable used for response
因素
编码水平
-101亚硒酸钠浓度·
-1253035B -初始pH 值66.57C -温度/℃
20
25
30
表2响应面分析及结果
试验号A B C Y -总硒含量/μ g ·
L -1100012031.720-1111298.9300011801.8410-110853.4511012239.361-1011844.9700011902.48-1018985.59-10-17735.31001-110235.5110-1-19876.[1**********].513-1-108669.[1**********].[1**********].[1**********].117
-1
1
8223.9
表3方差分析
方差来源平方和自由度均方
F 值
P 值
显著性模型3.665× 10794.072× 106151.38
A 2.239× 10712.239× 107832.14
AB 1.763× 10511.763× 1056.550.0375AC 517.501517.500.0190.8936BC 20647.37120647.370.770.4100A 26.474× 10616.474× 106240.65
B 28.627× 10618.627× 10532.070.0008C 22.620× 10612.620× 10697.41
残差1.883× 105726900.89失拟项1.554× 105351811.116.3
0.0537不显著
纯误差32872.9048218.23
总离差
3.684× 107
16
—579—
·农业资源与环境学报第31卷·第6期
看出最佳参数及各参数之间的相互作用，
等高线的形状可反映交互效应的强弱，
椭圆形表示两因素交互作用显著，而圆形则与之相反[18-19]。根据回归方程得出不
同因子的响应面分析图及相应等高线图结果见图9。如图9所示，亚硒酸钠浓度对胞内总硒含量的影响显
7.00
B -初始6.80
pH 6.60
值6.40
6.20
（A ，B ）的6.00响应面和25.0027.00A -29.0031.0033.0035.00
亚硒酸钠浓度/mg·L -1a. Y =f 等高线图
30.00
28.00C -温度/℃ 26.0024.00
22.0033.00
35.0020.0025.00
27.0029.0031.00
A -亚硒酸钠浓度/mg·
L -1b. Y =f （A ，C ）的响应面和等高线图
30.00
28.00C -温度26.00
6.80
7.00
/℃
24.00
22.00
c. Y =f （B ，C ）的响20.00应面和6.00
6.206.406.60
B -初始pH 值等高线图
图9两因素交互作用对胞内总硒含量的响应面图和等高线图Figure 9Response surface and contour plots for the effect of
—580—
operating parameters
著，温度的影响次之，
初始pH 值的影响较小；由等高线的密集程度及形状可知亚硒酸钠和初始pH 值的交互作用显著。
利用软件分析可知，产朊假丝酵母富硒的最佳的
工6.63艺条件为亚硒酸钠浓度35.00mg ·
L -1、初始pH 2.2.4、温为了验度证26.88检试验验
℃ ，预测总硒含量为12518.8μ g ·
L -1。模型预测的准确性，将最佳工艺条件：
培养时间30h 、加硒时间对数生长中期、
亚硒酸钠浓接种量10%、培养温度27
验，℃ 度、35装得液mg 出量·L -1菌体150，初的生mL/500始pH 6.6物量，mL 、胞内，平总行进行硒含量3及次实有机际硒培含养量实
，
结果见表4。如表4所示，最优条件下总硒含量的实际值为12639.7μ g ·L -1，硒含量为1839.8μ g ·
g -1，其中亚硒酸钠转化率为79.1%，有机硒含量占90%以上，与理论值12518.8μ g ·L -1的相对误差为0.94%，相差不显著，说明预测值与实际值之间有较好的拟合
性，进一步验证了回归模型的可靠性。
3讨论
由于酵母作为一种高效的富硒微生物，
越来越受到科研工作者的重视，
表5中列出了近几年酵母菌富硒研究的相关进展，其中主要以酿酒酵母和产朊假丝
表4验证试验
试验号菌体生物
总硒硒亚硒酸钠
有机硒量/g·L -1转化率/%含量/%16.9412含量/
673.4-11含826.1量/
-179.392.726.8712599.21833.978.893.636.8112646.61857.179.192.2平均值
6.87
12639.7
1839.8
79.1
92.8
表5酵母菌富硒研究
菌种
总硒含量/菌体干量/硒参考
-1g ·L -1文献含量/
-1Saccharomyces cerevisiae
15803.86.442454.0[21]Candida utilis 15304.611.321352.0[22]Candida utilis 11613.95.122268.3[23]Saccharomyces cerevisiae
10654.610.621003.3[24]Candida utilis Y58272.45.701451.3[25]Saccharomyces cerevisiae 1204.06.01200.3[26]Saccharomyces cerevisiae
753.6
2.83
266.3
[27]
张帆，等：响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母
酵硒时间、
加μ g ·母硒g 的富硒能力尤为突出，
胞内硒含量平均达到2000-1以上。本研究通过考察发酵过程中的加浓度、发酵温度、pH 值、接种量和装液量等多个影响因素综合进行评价。
通过产朊假丝酵母的培养时间及加硒时间的考察，发现富硒的时间主要集中在酵母的对数生长期，这与王大慧等[22]报道的结果类似。随着酵母生长进入
稳定期，富硒含量逐渐趋于稳定，说明在酵母快速生长阶段对于硒的吸收与富集有较大影响，
可能因为硒在酵母生长繁殖的过程中掺入到初级代谢产物中，到了稳定期以后，酵母的生长基本停止，
代谢降低，乙醇等发酵产物开始积累，硒很难再掺入到细胞内。
由图4可知，随着硒浓度的增大，菌体量则随之减少，是由于高浓度的硒对酵母生长产生了较大抑
制，影响酵母正常代谢过程，葛晓光等[17]的研究中也发现了同样的现象，因此合适的亚硒酸钠添加量对于
提高富硒酵母的性能十分必要。同时，
酵母的培养条件如初始pH 值、温度、装液量对富硒含量均有较大影响，在实验中发现pH 值偏酸性有利于富硒含量的提高，王大慧等[28]通过酸胁迫来提高酵母富硒性能，
通过对不同pH 值环境下酵母细胞生长、
谷胱甘肽合成以及有机硒转化情况进行研究，
同样发现弱酸胁迫可以明显提高酵母胞内有机硒含量。
4结论
通过单因素和响应面法试验优化产朊假丝酵母
富硒工艺条件，得到最佳工艺参数为：培养时间30h 、加硒时间对数生长中期、亚硒酸钠浓度35mg ·L -1，初
始mL/500pH 6.6、接种量10%、培养温度27℃ 、装液量150
-1
μ 胞g ·内g 总硒mL 含。量为在最优12条件639.7下，μ g 菌·L 体-1，生有物机量为硒含量为6.87mg 1·
839.8
L ，-1，其中亚硒酸钠转化率为79.1%，有机硒占90%
以上L ；胞内总硒含量与数学模型理论值12518.8μ g ·
-1的相对误差为0.94%，相差不显著，说明响应面模型与实际情况有较好的拟合性，响应面法能较好地优化产朊假丝酵母富硒工艺条件。
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农业资源与环境学报
Journal of Agricultural Resources and Environment
响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母
张
帆1，谢
丽2，邹晓阳2，朱建航1*
2. 丰城市中国生态硒谷现代农业管委会，（1. 南昌大学环境与化学工程学院化工系，江西南昌330031；江西丰城330011）
摘对酵母富硒能力影响较大的3个因素：要：考察了发酵条件对产朊假丝酵母富硒能力的影响。通过单因素的筛选，亚硒酸钠浓
度、初始pH 值及培养温度，以胞内总硒含量为响应值，利用响应面法对其进行优化。结果显示：在培养时间30h 、加硒时间对数生L -1，长中期、亚硒酸钠浓度35mg ·初始pH 6.6、接种量10%、培养温度27℃ 、装液量150mL/500mL 的条件下，最大的菌体生物量为6.87g L -1；L -1，g -1，·胞内总硒含量达到12639.7μ g ·硒含量为1839.8μ g ·其中亚硒酸钠转化率为79.1%，有机硒含量占90%以上；胞L -1相差不显著，内实际总硒含量与数学模型理论值12518.8μ g ·响应面法能较好地优化产朊假丝酵母富硒工艺条件。响应面法；总硒含量关键词：产朊假丝酵母；富硒；TS201.3中图分类号：
A 文献标志码：
2095-681906-0575-08文章编号：（2014）
doi:10.13254/j.jare.2014.0260
Optimization of Selenium-enriched Candida utilis by Response Surface Methodology
（1.School of Environmental and Chemical Engineering, Nanchang University, Nanchang 330031, China; 2.Modern Ecological Agricultural Abstract:The fermentation conditions of selenium enrichment by Candida utilis were studied. Based on the results of the single factor experi - ment, three factors including the concentration of sodium selenite, inital pH and incubation temperature were selected. The response surface method was used to optimize the various factors. The optimal conditions were obtained as follows:incubation time was 30h, time of adding Management Committee of Selenium-enriched Valley, Fengcheng 330011, China ）ZHANG Fan 1, XIE Li 2, ZOU Xiao-yang 2, ZHU Jian-hang 1*
selenium was mid-logarithmic, the sodium selenite concentration was 35mg L -1with inital pH of 6.6, incubation concentration of 10%,incu - ·The total selenium content of Candida utilis was 12639.7μ g L -1, and the selenium content of the cells was 1839.8μ g g -1, in which sodium ··selenite conversion rate was 79.1%and the organic selenium was higher than 90%.The actual value of selenium content was substantially riched by Candida utilis .
Keywords:Candida utilis ; selenium enriched; response surface methodology; total selenium content
bation temperature of 27℃ , the medium volume of 150mL/500mL, respectively. Under the optimal condition, the biomass was 6.87g ·L -1.
consistent with the theoretical value, and the response surface methodology was applicable for the fermentation conditions of selenium en -
缺硒会导致很硒是生物体必需的微量营养元素，
动物缺多疾病。人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症[1-3]，硒会导致白肌病和生长缓慢等[4]。目前用于防治疾病和作为饲料添加剂的主要是无机硒[5]，有机硒与无机硒相比，具有较高的生物活性[6]和较低的毒性[7]，故人们
有机硒可以通过人工合成、越来越重视有机硒的补充。
通过微生物将无机生物转化及生物富集等方式生产，
实用、经济的生产硒转化为有机硒是目前比较普遍、
相关文章报道富富硒酵母中有机硒含量较高，方法[8]。
硒酵母中的有机硒的含量达90%以上[9-11]，其中硒代另外半胱氨酸占60%以上，硒代蛋氨酸占20%左右，还有非氨基酸形式的有机硒化合物存在[12]。富硒酵母
是一种非常理想的功能性可以作为一种安全的硒源，
酵食品原料，具有广阔的市场应用前景[13]。一般而言，
g -1，而普通母中所能达到的最大硒量约为3000μ g ·g -1[14]。商业富硒酵母中硒含量一般为500~2000μ g ·目前，国内外关于富硒发酵条件的优化的报道比
考虑发较多，较多是考察培养基对酵母富硒的影响，尤酵条件中多个因素对富硒含量影响的报道却很少，
加硒浓度、发酵温度、其针对发酵过程中的加硒时间、
—575—
2014-09-30收稿日期：
科研专项基金项目：公益性行业（农业）“优质高效富硒农产品关键技
术研究与示范”（201303106）“863”；项目（2009AA02Z210）
硕士，作者简介：张帆（1982—），男，讲师，研究方向为环境资源与利
用。E-mail:[email protected]
*通信作者：朱建航E-mail:[email protected]
·农业资源与环境学报第31卷·第6期
察。值多、因接素种优量化和实验装液可量以等采多用个响影响应面因法素或综合正进行交实验
考
法。响应面法（response surfacem methodology ，RSM ）是利用合理的实验设计并通过实验得到一些数据，然后采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系，最终通过对回归方程的分析来寻求最优工
艺参数，解决多变量问题的一种统计方法。响应面法不仅能考察发酵条件中的各个关键因素，
而且能同时考察各种显著影响因素之间交互作用对优化结果的影响，从而得到最优的发酵条件。
本研究所用产朊假丝酵母为一株高产谷胱甘肽的菌株，前期对其发酵产谷胱甘肽培养基进行了优化[15]。在此基础上本文对产朊假丝酵母的富硒能力进行研究，并对富硒条件进行单因素筛选和响应面优化，同时利用催化吸收光度法作为硒含量的定量测定方法[16]，旨在为高性能富硒产朊假丝酵母的制备及应用提供基础依据。
1
1.1菌种
材料与方法
菌种来源：从江西省丰城市富硒果园中采集土壤
样品，在高硒浓度200mg ·
L -1培养基中培养，划线分离纯化得到菌株，通过26S rDNA D1/D2序列测定分
析及形态、生理生化试验初步鉴定为产朊假丝酵母1.2Candida 主要试utilis 剂及）。仪由器
本实验室筛选和保藏。亚硒酸钠标准品；盐酸苯肼；EDTA 二钠；变色酸；
氯酸钾；
TGL-16C 722s 高可氯酸见分。光光度化培养箱离计；立式压力蒸汽灭菌器；SPX-250心机；洁；净大工作容量台恒温SW-QJ-2FD 振荡器；PHS-3C ；智能生
精密1.3pH 培养计；
基
FHH-1恒温水浴锅；A1104N 分析天平。KH 种子培养基：葡萄糖40g ·L -1、酵母粉10g ·
L -1、2PO 4发酵2培g ·L -1、K 2养基：HPO 4葡萄糖1g ·
40L -1，pH 6.5。g ·L -1、L -1、MgSO NH 4）21.4培养4SO 0.34条件
g 10·L g
·-1，L -1、pH 6.5。PO ·酵母粉101.8g g ·
KH 241.2g L -1、K 2HPO 4·L -1、斜面培养：将产朊假丝酵母接种于麦芽汁琼脂斜
面上，
30℃ 培养48h 。200种子培养：—576mL —种子培养从基平的板500上取mL 1三环角斜瓶面中，菌体摇床接（到30装℃ 有，·发-1）培养36h 。
酵培养：将培养好的种子液以10%的接种量接
种于装有200mL 发酵培养基500mL 三角瓶中，
摇床（30℃ ，200r ·min -1）培养24h ，菌体对数生长中期添加1.5亚1.5.1分硒析酸方法
钠溶液，添加浓度为25mg ·
L -1。取菌4体mL 干重的发酵测液定
6000r ·min -1离心5min ，去离子水1.5.2洗3次，收集菌105℃ 烘干至恒定质量，称重。1缓、2、3分硒、4别标准曲线体的，
绘制
、5取mL 含于硒150.2mL μ g 的·
mL -1比色管的亚硒酸钠标准液0、mL 冲冷水，加水至液2mL 中冷却后，
15，氯酸mL 用，钾1摇2cm 匀mL 比色，在，变沸色中，皿水酸于浴508中2加mL 入EDTA 1mL ，加nm 热，盐酸苯肼1波20长下min 测，于
定吸1.5.3光度产，绘朊制标准假丝酵曲母线生长。
曲线的测定
后以50010%mL 的接的三种量角接瓶种中，装此入时发培酵养培基养中基不含200硒mL ，
然，后然
置于摇床（30℃ 、200r ·min -1）中振荡培养，
发酵过程中每隔一定时间取样，测定发酵液的菌体干重。以菌
体干重为纵坐标、培养时间为横坐标，绘出产朊假丝酵1.5.4母的生长取样10品的曲线。
mL 消发解[17]
酵液于50mL 离心管中，6000r ·
min -1离心5min ，去离子水洗3次，收集菌体。将离心后得到的菌体置于150mL 三角瓶中，加入15mL 混合酸
（硝酸∶ 高氯酸=4∶ 1），缓慢加热进行消化，直到溶液变成无色透明并伴有滚滚白烟时停止加热，冷却后，
定容1.5.5，待测菌。
1）体胞胞内内总硒硒含含量量的的测测定[17]
（定。在25mL 比色管中，
加入样品1mL ，EDTA 1mL ，缓冲液2mL ，氯酸钾2mL ，变色酸2mL ，盐酸苯肼1mL ，加水至15mL ，摇匀，
在沸水浴中加热20min ，于冷水中冷却后，用1cm 比色皿于最大吸收波长下测定吸光度，
对应标准曲线算出硒含量。
50mL （2离）胞心内无管中，机硒6含000量r ·的min 测定。取10mL 发酵液于
-1离心5min ，去离子水
洗mL 3次，中硒蒸馏浓度水收。
，集80菌℃ 体水。浴在中离加心热后1得h 到，离的心菌，体测中定加上入清10
液
（3）胞内有机硒含量的测定。有机硒含量（μ g ·
L -1）（（
总硒含量（·-1）-无机硒含量（μ g ·L -1）2.12结果与分析
2.1.1单通生长因素过产曲分朊线析
假的丝绘酵制
母生长曲线的绘制，
了解其生长情况，为后期的发酵时间及加硒时间的确定提供数据
依据。如图1所示，产朊假丝酵母的生长情况0~4h 是h h ，延滞为稳对数期，
定期。
生长中期4~16h 为为10对h 数，对期，数生长其中末对期数为生长16初h ，
期16~48为4765432100
10
20
培养30
时间/h
40
50
60
图1产朊假丝酵母的生长曲线Figure 1The growth curve of Candida utilis
2.1.2影响
加硒时间对产朊假丝酵母生物量和总硒含量的根据产朊假丝酵母的生长曲线得出酵母进入生
长对数初期、中期、末期的时间，分别选取加硒时间为发酵初期、对数初期、对数中期、
对数末期，考察加硒时间对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响。如图2所示，在初期添加亚硒酸钠对细胞生长和胞内硒的富集
[***********]1菌体干重75000
总硒含量
4
8
12
16
7000
加硒时间/h
图2加硒时间对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 2Effects selenium of time content of adding of selenium Candida utilis
on the biomass and
有不利影响，当加硒时间为对数中期时，
总硒含量最高，加硒时间为对数末期时，生物量略有升高，但总硒含2.1.3量呈影响
发下酵降时趋间势。对产因朊此假，加丝硒酵时母间生选择物量对和总数中期硒含最量佳的
。
选择发酵时间24、30、36、42、48h ，做发酵饰演的单因素实验，分析发酵时间对产朊假丝酵母生物量和
含硒量的影响。如图3所示，随着发酵时间的增加，产朊30假丝培养生h 生酵物母量的生和总物硒量含和总量均硒达到含量最高均呈，上培升趋势，
30物h 量和总硒含量均没有变化。因此，
发养酵时时间间延选择长，
7较合适。
[***********]菌体干重7500
总硒含量
020
25
30
发酵35
时间/h
40
45
507000图3发酵时间对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 3Effects of incubation content of Candida time on the utilis
biomass and selenium
量2.1.4的影响
亚硒酸钠浓度对产朊假丝酵母生物量和总硒含
在发酵培养生长对数中期添加不同浓度的亚硒
酸钠，考察加硒浓度对产朊假丝酵母生物量和含硒量
的影响。如图4所示，当亚硒酸钠浓度低于15mg ·L -1时，其添加对菌体的生长没有影响，
总硒含量呈上升趋势，当亚硒酸钠浓度超过15mg ·L -1后，亚硒酸钠的添加对产朊假丝酵母的生长有一定的抑制作用；
胞内总硒含量在亚硒酸钠添加量为30mg ·L -1时达到最高值，此时胞内总硒含量为10212.6μ g ·L -1，且可同时
获得5.58g ·L -1的生物量。因此，选择亚硒酸钠的添加浓2.1.5度为影响
初30始mg pH ·
L -1值。对产朊假丝酵母生物量和含硒量的为考察初始pH 值对产朊假丝酵母生物量和含
硒7.5量高的、8的初进行影响始pH 研究。，分别选取初始pH 值为5、
5.5、6、6.5、7、值均如不利图5于所胞示内，较硒低的的富初集始，在pH 初值始和pH
较
—577—
·农业资源与环境学报第31卷·第6期
[***********]000260001菌体干重总硒含量400000000
5
10
亚硒15
酸钠20
浓度/mg25
·
-130
35
402000
L 图4亚硒酸钠浓度对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 4Effects and of selenium sodium content selenite of concentration Candida utilis
on the biomass
[***********]21菌体干重总硒含量
80000
5
6
7
8
7000
图5初始pH 值对产朊假丝酵pH 值
母生物量和含硒量的影响Figure 5Effects of inital of pH Candida on the biomass utilis
and selenium content
值为6.5时，产朊假丝酵母生物量和总硒含量均达到
最大值，为5.35g ·L -1和10162.2μ g ·L -1。因此最适的初2.1.6始pH 选接取种值不量为同对6.5的产。
接朊种假量丝进行酵母发生酵物培量养和，
含研究硒量接的种影响
量对产朊假丝酵母生物量和总硒含量的影响。如图6所示，随着接种量的增加，产朊假丝酵母的生物量和总
硒量也呈上升趋势，在接种量超过10%后，菌体的生物量和总硒含量趋于稳定。
因此选定发酵培养的接种量为10%。影响
2.1.7培养温度对产朊假丝酵母生物量和含硒量的
微生物的生长以及代谢是由一系列的生化反应
组成的，而温度对于这些反应具有较明显的影响，
设置培养温度20~40℃ ，
以5℃ 为间隔，研究温度对产朊假丝酵母生物量和总硒含量的影响。如图7所示，温度对产朊假丝酵母的生长及胞内硒的富集具有较—578—
[***********]0327000菌体干重16000总硒含量
05000000
5
接种10
量/%
15
204000
图6接种量对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响Figure 6Effects selenium of inoculum content concentration of Candida utilis
on the biomass and
[***********]00021菌体干重8000总硒含量0
20
25
30
度/℃
35
40
6000
温图7培养温度对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响Figure 7Effects selenium of incubation content temperature of Candida on utilis
the biomass and
大影响，随着温度的升高，
菌体生物量和总硒含量均呈现先升高后降低的趋势，
并且菌体生物量及总硒含量均在25℃ 时达到最高。因此，
选取25℃ 为发酵培养2.1.8的最装佳液温量度对。
产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
量mL 和总的分发别硒酵用含培500量养的基mL 影响，考三角。察瓶如装装图液取8量所对50示产、
100，装朊液假、150量丝对酵、200产母朊生、250假
物
丝酵母的生长和硒的富集具有一定的影响，适当减少装液量以增加通气量可以提高产朊假丝酵母的生物
量和总硒含量，而装液量为50mL 时，胞内总硒含量明显减少，在装液量为150mL 时菌体生物量和总硒
含量均可达到最佳值。因此，选定150mL/500mL 的装2.2液2.2.1响量应进行面优化
发酵培养。
在响单因应面素法试试验验基础设计上与，结可果
知亚硒酸钠浓度、
初始
张帆，等：响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母
[***********]002菌体干重1总硒含量90000
50
100
液150
量/mL
200
250
8000
装图8装液量对产朊假丝酵母生物量和含硒量的影响
Figure 8Effects of medium content volume of Candida on the utilis
biomass and selenium
pH 大。值和培养温度对产朊假丝酵母富硒工艺的3母胞个因因素此对根提据取Box-Behnken 工艺进行响应试验设计原理，
可影响较选取这pH 选面分析。取亚硒以产朊假丝酵
用响值内应和总面培硒试养含验结温量为度进行响应果，确三值定因，
产素朊三假水丝平酵共酸母富17钠浓硒组度的试、最验。初始佳利
工艺条件。响应面试验因素水平见表1，响应面分析及结2.2.2果见采模表用型2Design-Expert 评价
。软件对表2中实验数据进行二次多项式逐步回归拟合，
得到的83.98831.34数学模B +1型为903.56：Y =-1.31× 105+2775.98A +21C +
如表AB -0.453所AC 示-28.74，模型BC 的-49.60F =151.38A 2-1、P 810.56
失拟项检验的P >0.05（不显著），R 2合实验数据充分，表明响应值胞=0.994内总硒9含，说量明实模际型值拟
与
预测值之间具有较好的拟合度。
回归方程中各变量对响应值影响的显著性由F 检验来判定，
P 值越小相应变量的显著程度越高。
A 、C 、A B 、A 2
、B 2
、C 2
的P 值均小于0.05，说明亚硒酸钠浓度、温度、交互项AB 及三因素的二次项对胞内总硒含量均具有显著影响。由回归方程各项方差结果可知，在所选取的各因素水平范围内，按照对结果的影响排序，其顺序为亚硒酸钠浓度> 温2.2.3度> 初运响始用应Design-Expert 面分析
pH 值。软件分析处理实验所得数
据，对提取率有交互影响的响应面分析立体曲面图见图9。
响应面图形是响应值对各试验因子A 、B 、C 所构成的三维空间的曲面图，从响应面分析图上可形象地
表1响应面试验因素水平
Table 1Level and code of independent variable used for response
因素
编码水平
-101亚硒酸钠浓度·
-1253035B -初始pH 值66.57C -温度/℃
20
25
30
表2响应面分析及结果
试验号A B C Y -总硒含量/μ g ·
L -1100012031.720-1111298.9300011801.8410-110853.4511012239.361-1011844.9700011902.48-1018985.59-10-17735.31001-110235.5110-1-19876.[1**********].513-1-108669.[1**********].[1**********].[1**********].117
-1
1
8223.9
表3方差分析
方差来源平方和自由度均方
F 值
P 值
显著性模型3.665× 10794.072× 106151.38
A 2.239× 10712.239× 107832.14
AB 1.763× 10511.763× 1056.550.0375AC 517.501517.500.0190.8936BC 20647.37120647.370.770.4100A 26.474× 10616.474× 106240.65
B 28.627× 10618.627× 10532.070.0008C 22.620× 10612.620× 10697.41
残差1.883× 105726900.89失拟项1.554× 105351811.116.3
0.0537不显著
纯误差32872.9048218.23
总离差
3.684× 107
16
—579—
·农业资源与环境学报第31卷·第6期
看出最佳参数及各参数之间的相互作用，
等高线的形状可反映交互效应的强弱，
椭圆形表示两因素交互作用显著，而圆形则与之相反[18-19]。根据回归方程得出不
同因子的响应面分析图及相应等高线图结果见图9。如图9所示，亚硒酸钠浓度对胞内总硒含量的影响显
7.00
B -初始6.80
pH 6.60
值6.40
6.20
（A ，B ）的6.00响应面和25.0027.00A -29.0031.0033.0035.00
亚硒酸钠浓度/mg·L -1a. Y =f 等高线图
30.00
28.00C -温度/℃ 26.0024.00
22.0033.00
35.0020.0025.00
27.0029.0031.00
A -亚硒酸钠浓度/mg·
L -1b. Y =f （A ，C ）的响应面和等高线图
30.00
28.00C -温度26.00
6.80
7.00
/℃
24.00
22.00
c. Y =f （B ，C ）的响20.00应面和6.00
6.206.406.60
B -初始pH 值等高线图
图9两因素交互作用对胞内总硒含量的响应面图和等高线图Figure 9Response surface and contour plots for the effect of
—580—
operating parameters
著，温度的影响次之，
初始pH 值的影响较小；由等高线的密集程度及形状可知亚硒酸钠和初始pH 值的交互作用显著。
利用软件分析可知，产朊假丝酵母富硒的最佳的
工6.63艺条件为亚硒酸钠浓度35.00mg ·
L -1、初始pH 2.2.4、温为了验度证26.88检试验验
℃ ，预测总硒含量为12518.8μ g ·
L -1。模型预测的准确性，将最佳工艺条件：
培养时间30h 、加硒时间对数生长中期、
亚硒酸钠浓接种量10%、培养温度27
验，℃ 度、35装得液mg 出量·L -1菌体150，初的生mL/500始pH 6.6物量，mL 、胞内，平总行进行硒含量3及次实有机际硒培含养量实
，
结果见表4。如表4所示，最优条件下总硒含量的实际值为12639.7μ g ·L -1，硒含量为1839.8μ g ·
g -1，其中亚硒酸钠转化率为79.1%，有机硒含量占90%以上，与理论值12518.8μ g ·L -1的相对误差为0.94%，相差不显著，说明预测值与实际值之间有较好的拟合
性，进一步验证了回归模型的可靠性。
3讨论
由于酵母作为一种高效的富硒微生物，
越来越受到科研工作者的重视，
表5中列出了近几年酵母菌富硒研究的相关进展，其中主要以酿酒酵母和产朊假丝
表4验证试验
试验号菌体生物
总硒硒亚硒酸钠
有机硒量/g·L -1转化率/%含量/%16.9412含量/
673.4-11含826.1量/
-179.392.726.8712599.21833.978.893.636.8112646.61857.179.192.2平均值
6.87
12639.7
1839.8
79.1
92.8
表5酵母菌富硒研究
菌种
总硒含量/菌体干量/硒参考
-1g ·L -1文献含量/
-1Saccharomyces cerevisiae
15803.86.442454.0[21]Candida utilis 15304.611.321352.0[22]Candida utilis 11613.95.122268.3[23]Saccharomyces cerevisiae
10654.610.621003.3[24]Candida utilis Y58272.45.701451.3[25]Saccharomyces cerevisiae 1204.06.01200.3[26]Saccharomyces cerevisiae
753.6
2.83
266.3
[27]
张帆，等：响应面法优化制备高富硒产朊假丝酵母
酵硒时间、
加μ g ·母硒g 的富硒能力尤为突出，
胞内硒含量平均达到2000-1以上。本研究通过考察发酵过程中的加浓度、发酵温度、pH 值、接种量和装液量等多个影响因素综合进行评价。
通过产朊假丝酵母的培养时间及加硒时间的考察，发现富硒的时间主要集中在酵母的对数生长期，这与王大慧等[22]报道的结果类似。随着酵母生长进入
稳定期，富硒含量逐渐趋于稳定，说明在酵母快速生长阶段对于硒的吸收与富集有较大影响，
可能因为硒在酵母生长繁殖的过程中掺入到初级代谢产物中，到了稳定期以后，酵母的生长基本停止，
代谢降低，乙醇等发酵产物开始积累，硒很难再掺入到细胞内。
由图4可知，随着硒浓度的增大，菌体量则随之减少，是由于高浓度的硒对酵母生长产生了较大抑
制，影响酵母正常代谢过程，葛晓光等[17]的研究中也发现了同样的现象，因此合适的亚硒酸钠添加量对于
提高富硒酵母的性能十分必要。同时，
酵母的培养条件如初始pH 值、温度、装液量对富硒含量均有较大影响，在实验中发现pH 值偏酸性有利于富硒含量的提高，王大慧等[28]通过酸胁迫来提高酵母富硒性能，
通过对不同pH 值环境下酵母细胞生长、
谷胱甘肽合成以及有机硒转化情况进行研究，
同样发现弱酸胁迫可以明显提高酵母胞内有机硒含量。
4结论
通过单因素和响应面法试验优化产朊假丝酵母
富硒工艺条件，得到最佳工艺参数为：培养时间30h 、加硒时间对数生长中期、亚硒酸钠浓度35mg ·L -1，初
始mL/500pH 6.6、接种量10%、培养温度27℃ 、装液量150
-1
μ 胞g ·内g 总硒mL 含。量为在最优12条件639.7下，μ g 菌·L 体-1，生有物机量为硒含量为6.87mg 1·
839.8
L ，-1，其中亚硒酸钠转化率为79.1%，有机硒占90%
以上L ；胞内总硒含量与数学模型理论值12518.8μ g ·
-1的相对误差为0.94%，相差不显著，说明响应面模型与实际情况有较好的拟合性，响应面法能较好地优化产朊假丝酵母富硒工艺条件。
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