安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＡｎｈｕｉ
Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．２００６，３４（１４）：３２５８，３２６４
责任编辑姜丽责任校对胡剑胜
用ＤＮｓ光度法测定还原糖的条件研究
杨贵明，４‘访ｔＪ＇２廖鼠．－化Ｔ－，薛秋生
（承德医学院蚕业研究所，河北承德０６７０００）
摘要研究了用ＤＮＳ光度法测定还原糖的影响因素。结果表明：ＤＮＳ试剂的适宜用量为２．０ｍｌ；样品及标准溶液测定时，显色液体积必须一致；沸水浴显色时间不低于２ｍｉｎ，显色定容３０ｍｉｎ后于５２０ａｍ处测定有色溶液的吸光度。关键词还原糖；ＤＮＳ；光度法；测定条件
文献标识码Ａ文章编号０５１７—６６１１（２００６）１４—３２５８一叭中图分类号Ｑ５３２
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Ｒｅｄｕｃｉｎｇ
ｓｕｇａｒ；ＤＮＳ；Ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒ
植物体中碳水化合物的测定方法很多［１－３］，可以将低聚糖和多糖转化为具有还原性的单糖后再进行测定。测定还原糖的３，５一二硝基水杨酸（ＤＮＳ）光度法测定具有简便、快
１．００、１．２５、１．５０、１．７５、２．００、２．２５、２．５０、２．７５ｍｌＤＮＳ试剂，各管
均补水至５ｍｌ以保证显色时溶液体积一致，同时做试剂空白，以蒸馏水为对照测定５２０ｎｍ处吸收值。
１．２．５显色时间影响试验。取１０支２５ｍｌ比色管，各加入ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液及２ｍｌＤＮＳ试剂，并补水至
５ｍｌ，沸水浴中分别显色０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、
２ｍｌ２５０４．５、５．０
速等特点，但不同资料介绍的条件有一定差异刚，从而影响
了测定结果的准确性和可比性。笔者对还原糖的ＤＮＳ光度法测定条件进行了探讨，指出了影响分析测定的关键因素，力求操作简便、快速、准确、可靠，使测定结果更具准确性和可比性。１材料与方法１．１材料
１．１．１
ｍｉｎ，以蒸馏水为对照测定其吸光度。
１．２．６显色时溶液体积影响试验。取７支２５ｍ１比色管，各加入２ｍｌ２５０ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液和２ｍｌＤＮＳ试剂，分别补水０、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２１．０ｍｌ，按“１．２．１”的方法显色，以水为对照。２结果与分析
２．１标准曲线绘制结果直线方程为：Ｙ－－４１．９４４６Ｘ“．００７
８，
ＤＮＳ试剂。甲液：溶解６．９ｇ结晶酚于１５ＩＩｌｌ浓度为
１０％的氢氧化钠水溶液中，稀释至７０ｍ１，加入６．９ｇ亚硫酸氢钠。乙液：称取２５５ｇ酒石酸钾钠，加到３００ｍｌ浓度为１０％氢氧化钠溶液中，加入８８０ｍｌ浓度为１％的ＤＮＳ溶液。将甲液与乙液混合即得黄色ＤＮＳ试剂，贮于棕色瓶中，室温下放置１周后使用。
１．１．２
式中ｌ，为溶液中还原糖浓度（ｍｇ／ｋｇ），Ｘ为溶液的吸光度。２．２有色溶液的吸收光谱试验结果（图１）从图１可以看出：当波长大于５３５ｎｍ时，Ａ０很小，Ａ１一Ａ０几乎等于Ａ１；波长小于５３５ｎｍ时，随着波长的减小，Ａ０增加，Ａ１一Ａ０也逐渐增加，但并无峰值出现。因此，从试剂空白不宜太大及有色溶液的吸收值适宜读数考虑，吸收波长选用５２０ｎｍ。
ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液。准确称取０．１２５０ｇ分析纯
葡萄糖（１０５ｏＣ干燥至恒重），用蒸馏水溶解并定容至５００ｍｌ。１．１．３仪器。７２２Ｓ分光光度计。１．２方法
１．２．１试验方法。吸取含糖待测液３ｍｌ于２５ｍｌ比色管中，加入２．０ｍｌＤＮＳ试剂，沸水浴显色５ｍｉｎ，取出冷却，用水定容至刻度，同时做空白对照，用１ｃｍ比色皿测定５２０ｎｍ处吸光度。
１．２．２标准曲线的绘制。分别吸取２５０ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液０、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０ｍｌ于７支２５ｍｌ比色管中，各加入２．０
ｍｌ
２５０
ｏ
基
ｏ
ＤＮＳ试剂（各管均补水至５ＩＩｌｌ），按“１．２．１”的方
法显色测定。
１．２．３有色溶液的吸收光谱试验。将葡萄糖标准溶液按“１．２．１”的方法显色（同时做试剂空白），在不同波长时以蒸
波长∥ａｍ
图１有色溶液的吸收光谱
馏水为对照测定有色溶液及试剂空白的吸光度，得到吸收煳普。
１．２．４
ＤＮＳ试剂用量影响试验。于１０支２５ｍｌ比色管中各
２５０
注：Ａ０为试剂空白的吸收值；Ａ１为含糖溶液的吸收值；Ａ１－Ａ０
为Ａ１与Ａ０的差值。下同。
２．３
加入２ｍｌ
ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液，再分别加入０．５０、０．７５、
作者简介杨贵明（１９６１一），男，河北定州人，硕士，研究员，从事植物
营养研究工作。
收稿日期２００６．０４．１１
ＤＮＳ试剂用量对吸光度的影响（图２）从图２可知，
万方数据
在ＤＮＳ试剂用量较低（１．５ｍ１以下）时，Ａ０、Ａ１及Ａ１一Ａ０的
（下转第３２６４页）
３２６４
安徽农业科学
２００６血
表５
标准加入法检验干扰物的排除试验结果
ｎ‘
编号混翕液的配妻准液浓摊：至誉譬鬻含蓄ｏ８
７
制
Ｄ值的差０．５／／ｍｌ
度／／ｍｇ／ｍｌ
ＯＤ值的０Ｄ值
”“阻则左
００００．２４５
１０．２Ａ００．２６４０．０１９犟０・４２０．２Ａ＋Ｏ．１Ｂ０．０５０．３４２０．０９７器
３
０．２Ａ＋Ｏ．２Ｂ０．１００．４５２０．２０７盎ｕ・３
４
０．２Ａ＋Ｏ．３Ｂ０．１５０．５０７０．２６２５。０．２Ａ＋Ｏ．４Ｂ０．２００．６２００．３７５ｏ
口一一
０．２
６
０．２Ａ＋Ｏ．５Ｂ０．２５０．７０３０．４５８一．
Ｏ．２Ａ＋０．６Ｂ
Ｏ．３０
０．７９１
０．５４６
０・ｌ
７
注：Ａ为待测样品溶液；Ｂ为标准液０．５ｍ咖ｌｌｌ。０
（上接第３２５８页）
鑫ｏｏ
ｏ鑫ｏ
显示时间／／ｍｉｎ
图３显色时间对吸光度的影响
ＤＮＳ试剂用量∥ｒｎｌ
表２有色溶液的稳定时间对吸光度的影响
图２
Ｉ）ＮＳ试剂用量对吸光度的影响
变化趋势基本一致，几乎是直线上升；增加ＤＮＳ试剂用量，０．２０．４６６０．５０．４７６其吸收值增加缓慢，且无最大值。因此，确定ＤＮＳ试剂的适１．Ｏ
０．４７６宜用量为２．０ＩＩｌｌ。
１．５
０．４７６
２．Ｏ
０．４７６
２．４显色时间对吸光度的影响（图３）从图３可知，显色３．Ｏ
０．４７８时间小于２ｍｉｎ时，反应不完全，超过２ｍｉｎ，其吸收值基本４．Ｏ０．４７８５．００．４７９无差异。故显色时间最低不能低于２ｍｉｎ。
６．０
Ｏ．４８０２．５显色时溶液体积对吸光度的影响（表１）从表１可以７．０
０．４８３８．０
０．４８３
看出，显色时溶液体积不同，其吸收值有很大差异，显色时溶液体积越大，显色后有色溶液的吸收值越小，且差异相当容０．５６ｈ后有色溶液的吸收值趋于稳定。大。显色溶液体积以５ＩＩｌｌ为宜。
３结论与讨论
表１
显色时溶液体积对吸光度的影响
ＤＮＳ光度法测定还原糖具有快速、简便的特点，该试验结果表明，准确定量加入２．０
ｍｌ
ＤＮＳ试剂，保持显色时显色
４．Ｏ０．４８２液体积一致，沸水浴显色时间不低于２ｍｉｎ，显色定容３０５．Ｏ０．４７１ｍｉｎ后于５２０ｎｍ处测定有色溶液的吸光度，是保证测定数６．５０．３９６９．００．３１９据准确、可靠的关键。１４．００．２２２参考文献
１９．００．１６３２５．Ｏ
０．１０９
【ｌ】张惟杰．复合多糖生化研究技术【Ｍ】．上海：上海科学技术出版社，
１９８７．
２．６有色溶液的稳定性（表２）从表２可以看出，显色定
【２】陈齐英，孙雪奇，徐晓霞．３，５－－－６ｆｉ基水杨酸比色法测定亮菌口服
万
方数据液中多糖的含量叨．华西药学杂志，２０００，１５（３）：１９３—１９４．
用DNS光度法测定还原糖的条件研究
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
杨贵明， 蒋爱华， 薛秋生
承德医学院蚕业研究所,河北,承德,067000安徽农业科学
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES2006,34(14)84次
参考文献(2条)
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引用本文格式：杨贵明. 蒋爱华. 薛秋生 用DNS光度法测定还原糖的条件研究[期刊论文]-安徽农业科学 2006(14)
安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＡｎｈｕｉ
Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．２００６，３４（１４）：３２５８，３２６４
责任编辑姜丽责任校对胡剑胜
用ＤＮｓ光度法测定还原糖的条件研究
杨贵明，４‘访ｔＪ＇２廖鼠．－化Ｔ－，薛秋生
（承德医学院蚕业研究所，河北承德０６７０００）
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ｔｈｅＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎＦａｃｔｏｒｏｆＲｅｄｕｃｅｄＳｕｇａｒｗｉｔｈＤＮＳＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
ＹＡＮＧＧｕｉ—ｍｉｎｇｅｔａｌ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｅｒｉｃｕｈｕｒｅ，ＣｈｅｎｇｄｅＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈｅｎｇｄｅ，Ｈｅｂｅｉ０６７０００）Ｓｔｕｄｙ
ｏｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
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ｓｕｇａｒ
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Ｓａｎｌｅ
ｗａｓ２．０ｍ１．
ｗａｔｅｒ
Ｔｈｅｓｏｌｕｔｉｏｎｖｏｌｕｍｅｏｆｓａｍｐｌｅｓａｎｄｓｔａｎｄａｒｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｍｕｓｔｂｅｋｅｐｔｔｈｅｂａｔｈ
ｗａｓ
ｗｈｅｎｒｅａｃｔｅｄ．ＣｏｌｏｕｒｒｅａｃｔｉｏｎｉｎｔＩｌｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｂｏｉｌｉｎｇ
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ｌｅａｓｔ２ｍｉｎｕｔｅｓ．ＡｂｓｏｒｂａｌｉｃｅｏｆｔｈｅｃｏｌｏｕｒｅｄｓｏｌｕｔｉｏｎＷａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ｔｈｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ５２０ｎｍｆｏｒ３０ｍｉｎｕｔｅｓｆｏｒｔｌｌｅ
ｖｏｌｕｍｅ－ｍａｋｉｎｇ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ
Ｒｅｄｕｃｉｎｇ
ｓｕｇａｒ；ＤＮＳ；Ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒ
植物体中碳水化合物的测定方法很多［１－３］，可以将低聚糖和多糖转化为具有还原性的单糖后再进行测定。测定还原糖的３，５一二硝基水杨酸（ＤＮＳ）光度法测定具有简便、快
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均补水至５ｍｌ以保证显色时溶液体积一致，同时做试剂空白，以蒸馏水为对照测定５２０ｎｍ处吸收值。
１．２．５显色时间影响试验。取１０支２５ｍｌ比色管，各加入ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液及２ｍｌＤＮＳ试剂，并补水至
５ｍｌ，沸水浴中分别显色０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、
２ｍｌ２５０４．５、５．０
速等特点，但不同资料介绍的条件有一定差异刚，从而影响
了测定结果的准确性和可比性。笔者对还原糖的ＤＮＳ光度法测定条件进行了探讨，指出了影响分析测定的关键因素，力求操作简便、快速、准确、可靠，使测定结果更具准确性和可比性。１材料与方法１．１材料
１．１．１
ｍｉｎ，以蒸馏水为对照测定其吸光度。
１．２．６显色时溶液体积影响试验。取７支２５ｍ１比色管，各加入２ｍｌ２５０ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液和２ｍｌＤＮＳ试剂，分别补水０、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２１．０ｍｌ，按“１．２．１”的方法显色，以水为对照。２结果与分析
２．１标准曲线绘制结果直线方程为：Ｙ－－４１．９４４６Ｘ“．００７
８，
ＤＮＳ试剂。甲液：溶解６．９ｇ结晶酚于１５ＩＩｌｌ浓度为
１０％的氢氧化钠水溶液中，稀释至７０ｍ１，加入６．９ｇ亚硫酸氢钠。乙液：称取２５５ｇ酒石酸钾钠，加到３００ｍｌ浓度为１０％氢氧化钠溶液中，加入８８０ｍｌ浓度为１％的ＤＮＳ溶液。将甲液与乙液混合即得黄色ＤＮＳ试剂，贮于棕色瓶中，室温下放置１周后使用。
１．１．２
式中ｌ，为溶液中还原糖浓度（ｍｇ／ｋｇ），Ｘ为溶液的吸光度。２．２有色溶液的吸收光谱试验结果（图１）从图１可以看出：当波长大于５３５ｎｍ时，Ａ０很小，Ａ１一Ａ０几乎等于Ａ１；波长小于５３５ｎｍ时，随着波长的减小，Ａ０增加，Ａ１一Ａ０也逐渐增加，但并无峰值出现。因此，从试剂空白不宜太大及有色溶液的吸收值适宜读数考虑，吸收波长选用５２０ｎｍ。
ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液。准确称取０．１２５０ｇ分析纯
葡萄糖（１０５ｏＣ干燥至恒重），用蒸馏水溶解并定容至５００ｍｌ。１．１．３仪器。７２２Ｓ分光光度计。１．２方法
１．２．１试验方法。吸取含糖待测液３ｍｌ于２５ｍｌ比色管中，加入２．０ｍｌＤＮＳ试剂，沸水浴显色５ｍｉｎ，取出冷却，用水定容至刻度，同时做空白对照，用１ｃｍ比色皿测定５２０ｎｍ处吸光度。
１．２．２标准曲线的绘制。分别吸取２５０ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液０、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０ｍｌ于７支２５ｍｌ比色管中，各加入２．０
ｍｌ
２５０
ｏ
基
ｏ
ＤＮＳ试剂（各管均补水至５ＩＩｌｌ），按“１．２．１”的方
法显色测定。
１．２．３有色溶液的吸收光谱试验。将葡萄糖标准溶液按“１．２．１”的方法显色（同时做试剂空白），在不同波长时以蒸
波长∥ａｍ
图１有色溶液的吸收光谱
馏水为对照测定有色溶液及试剂空白的吸光度，得到吸收煳普。
１．２．４
ＤＮＳ试剂用量影响试验。于１０支２５ｍｌ比色管中各
２５０
注：Ａ０为试剂空白的吸收值；Ａ１为含糖溶液的吸收值；Ａ１－Ａ０
为Ａ１与Ａ０的差值。下同。
２．３
加入２ｍｌ
ｍｇ／ｋｇ葡萄糖标准溶液，再分别加入０．５０、０．７５、
作者简介杨贵明（１９６１一），男，河北定州人，硕士，研究员，从事植物
营养研究工作。
收稿日期２００６．０４．１１
ＤＮＳ试剂用量对吸光度的影响（图２）从图２可知，
万方数据
在ＤＮＳ试剂用量较低（１．５ｍ１以下）时，Ａ０、Ａ１及Ａ１一Ａ０的
（下转第３２６４页）
３２６４
安徽农业科学
２００６血
表５
标准加入法检验干扰物的排除试验结果
ｎ‘
编号混翕液的配妻准液浓摊：至誉譬鬻含蓄ｏ８
７
制
Ｄ值的差０．５／／ｍｌ
度／／ｍｇ／ｍｌ
ＯＤ值的０Ｄ值
”“阻则左
００００．２４５
１０．２Ａ００．２６４０．０１９犟０・４２０．２Ａ＋Ｏ．１Ｂ０．０５０．３４２０．０９７器
３
０．２Ａ＋Ｏ．２Ｂ０．１００．４５２０．２０７盎ｕ・３
４
０．２Ａ＋Ｏ．３Ｂ０．１５０．５０７０．２６２５。０．２Ａ＋Ｏ．４Ｂ０．２００．６２００．３７５ｏ
口一一
０．２
６
０．２Ａ＋Ｏ．５Ｂ０．２５０．７０３０．４５８一．
Ｏ．２Ａ＋０．６Ｂ
Ｏ．３０
０．７９１
０．５４６
０・ｌ
７
注：Ａ为待测样品溶液；Ｂ为标准液０．５ｍ咖ｌｌｌ。０
（上接第３２５８页）
鑫ｏｏ
ｏ鑫ｏ
显示时间／／ｍｉｎ
图３显色时间对吸光度的影响
ＤＮＳ试剂用量∥ｒｎｌ
表２有色溶液的稳定时间对吸光度的影响
图２
Ｉ）ＮＳ试剂用量对吸光度的影响
变化趋势基本一致，几乎是直线上升；增加ＤＮＳ试剂用量，０．２０．４６６０．５０．４７６其吸收值增加缓慢，且无最大值。因此，确定ＤＮＳ试剂的适１．Ｏ
０．４７６宜用量为２．０ＩＩｌｌ。
１．５
０．４７６
２．Ｏ
０．４７６
２．４显色时间对吸光度的影响（图３）从图３可知，显色３．Ｏ
０．４７８时间小于２ｍｉｎ时，反应不完全，超过２ｍｉｎ，其吸收值基本４．Ｏ０．４７８５．００．４７９无差异。故显色时间最低不能低于２ｍｉｎ。
６．０
Ｏ．４８０２．５显色时溶液体积对吸光度的影响（表１）从表１可以７．０
０．４８３８．０
０．４８３
看出，显色时溶液体积不同，其吸收值有很大差异，显色时溶液体积越大，显色后有色溶液的吸收值越小，且差异相当容０．５６ｈ后有色溶液的吸收值趋于稳定。大。显色溶液体积以５ＩＩｌｌ为宜。
３结论与讨论
表１
显色时溶液体积对吸光度的影响
ＤＮＳ光度法测定还原糖具有快速、简便的特点，该试验结果表明，准确定量加入２．０
ｍｌ
ＤＮＳ试剂，保持显色时显色
４．Ｏ０．４８２液体积一致，沸水浴显色时间不低于２ｍｉｎ，显色定容３０５．Ｏ０．４７１ｍｉｎ后于５２０ｎｍ处测定有色溶液的吸光度，是保证测定数６．５０．３９６９．００．３１９据准确、可靠的关键。１４．００．２２２参考文献
１９．００．１６３２５．Ｏ
０．１０９
【ｌ】张惟杰．复合多糖生化研究技术【Ｍ】．上海：上海科学技术出版社，
１９８７．
２．６有色溶液的稳定性（表２）从表２可以看出，显色定
【２】陈齐英，孙雪奇，徐晓霞．３，５－－－６ｆｉ基水杨酸比色法测定亮菌口服
万
方数据液中多糖的含量叨．华西药学杂志，２０００，１５（３）：１９３—１９４．
用DNS光度法测定还原糖的条件研究
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
杨贵明， 蒋爱华， 薛秋生
承德医学院蚕业研究所,河北,承德,067000安徽农业科学
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES2006,34(14)84次
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引用本文格式：杨贵明. 蒋爱华. 薛秋生 用DNS光度法测定还原糖的条件研究[期刊论文]-安徽农业科学 2006(14)