第27卷第1期 Vol.27 No.1
微量元素与健康研究
StudiesofTraceElementsandHealth
2010年 1月Jan. 2010
不同方法对黄柏中盐酸小檗碱的提取比较
李定芬,陈新华,戴剑锋
(贵阳中医学院药学系,贵阳 550002)
摘要:采用包括药典法定方法在内的3种提取方法分别对黄柏中盐酸小檗碱进行提取并比较这3种方法的提取效率。方法:以乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)、甲醇分别采用超声提取法与用1%甲醇盐酸连续回流提取法进行提取,用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量作为提取效率的考察指标进行比较。结果:用乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)作为提取溶剂测定结果含量最高。结论:以乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)进行的超声提取工艺简单,快速且提取效率高,但用1%甲醇盐酸连续回流提取法,在考虑经济节约的条件下,也是不错的选择。
关键词:川黄柏;盐酸小檗碱;超声波提取;连续回流提取;高效液相色谱法
中图分类号:O657 文献标识码:B 文章编号:1005-5320(2010)01-0052-02
1 实验部分
仪器与试药:Agilent1100高效液相色谱仪;超声波发生器;索氏提取器;万分之一分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司),型号:AB204-S;黄柏;盐酸小檗碱对照品(110713-200208)由中国药品生物制品检定所提供;乙腈,磷酸,甲醇,盐酸,十二烷基磺酸钠均为分析纯;水为蒸馏水。2 方法与结果
2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(50:50)(每100ml加十二烷基磺酸钠011g)为流动相;流速:1ml/min;检测波长为256nm;理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算大于4000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在100bC干燥5h的盐酸小檗碱对照品适量,用乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)作为溶剂制成每1ml含011mg的溶液,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 方法1:精密称取黄柏样品粉末011g两份,分别置100ml量瓶中,加流动相80ml,超声处理40min,放冷,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液取续滤液,再用0145Lm的微孔滤膜过滤即得1号和2号供试品溶液。方法2:精密称取黄柏样品粉末011g两份,分别置索氏提取器中,用含1%盐酸的甲醇回流提取至提取液无色为止,放冷,将提取液转移至100ml量瓶中,用盐酸甲醇洗涤圆底烧瓶合并提取液且稀释至
收稿日期:2009-08-19
作者简介:李定芬(1965-),女,实验师,大专,主要从事实验室工
作。
刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液取续滤液,再用0145Lm的微孔滤膜过滤即得3号和4号供试品溶液。方法3:精密称取黄柏样品粉末011g两份,分别置100ml量瓶中,用甲醇80ml超声提取40min,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液取续滤液,再用0145Lm的微孔滤膜过滤即得5号和6号供试品溶液。
2.2.3 线性关系考察 由于盐酸小檗碱的标准曲线在本实验条件下过坐标原点,故本实验采用外标一点法进行计算
[1]
。
2.2.4 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10Ll,重复进样5次,用峰面积计算RSD为019%。见表1。
表1 精密度测定结果
峰面积1791.1806.1823.1836.1818.
25374
平均值
标准差
RSD值(%)
1815.2217.250.9
2.2.5 稳定性试验 取1号供试品溶液分别在0、2、4、6、8h测定小檗碱的峰面积并计算RSD为119%。见表2。
表2 稳定性测定结果
峰面积1477.
1453.1498.1461.1522.
97354
平均值
标准差
RSD值(%)
1482.7627.991.9
2.2.6 重复性试验 按方法2.2.2项下的3种方法分别制备供试品溶液6份,分别进样10Ll。测定
#52#
峰面积,计算盐酸小檗碱的含量,方法1、2、3的6次测定结果的RSD分别为015%,1.3%,1.8%,方法2表明方法重复性良好,见表3。
表3 重复性测定结果(方法1)
峰面积1768.31775.41785.71780.11789.3平均值
标准差
RSD值(%)
本实验采用3种提取方法分别对黄柏中盐酸小檗碱进行提取比较,得出的数据表明药典的法定方法仍为最好的方法即:用乙腈-011%磷酸(每100ml加011g十二烷基磺酸钠)超声提取,该法简单易行,提取效率高。同时本实验考察的用含1%盐酸的甲醇连续回流提取法也获得了比较好的效果,可初步认为该法也有一定的研究价值。
4 讨 论
4.1 生物碱盐在水中的溶解度大小的变化规律:含氧酸盐>盐酸盐>氢溴酸盐>氢碘酸盐>小分子有1778.238.330.5
1770.6(方法2)峰面积平均值
标准差
RSD值(%)
1699.71752.11740.31732.3122.471.3
1760.51717.81723.4(方法3)峰面积平均值
标准差
RSD值(%)
1452.81510.31487.91489.3826.781.8
1466.71525.11493.5
表4 供试品测定结果样品称量平均含量(g)
Time(s)Area(%)
对照品25.9331816.925.7581828.9甲醇提取0.102325.7631447.50.102625.7671532.24.30盐酸甲醇提取0.102425.8151766.70.101925.8191696.45.02流动相提取
0.101925.8591782.90.1023
25.919
1771.2
5.16
2.3 样品测定
精密称取黄柏样品粉末6份,每份011g,分成3组,每组2份,每组分别按21212/供试品溶液的制备0项下的方法之一制备供试品溶液,分别制得1号和2号供试品溶液(采用方法1)、3号和4号供试品溶液(采用方法2)、5号和6号供试品溶液(采用方法3)。按2.1/色谱条件0项下精密吸取各供试品溶液10Ll注入液相色谱仪进行色谱分离,将盐酸小檗碱的色谱峰面积带入外标一点法计算公式进行计算并求得含量,结果见表4。3 结 论
机酸盐/多羟基酸盐>大分子有机酸盐,即无机酸盐
水溶解性>有机酸盐溶解性,无机酸盐中又以含氧酸盐的水溶解性大于卤代酸盐。故本实验的混合溶剂用的是011%磷酸。
4.2 川黄柏含小檗碱约1137%~518%,关黄柏含小檗碱约0160%~1164%,故本实验采用的是川黄柏。
4.3 以试样的标准品作为对照物质,与对照物质对
比求算试样含量的方法称为外标法。因为本实验的标准曲线过原点,故可采用外标一点法,此方法简单易行,但要求进样量准确及实验条件恒定。本实验采用的高效液相色谱仪为Agilent1100型,可自动进样,可保证进样量的准确,且所测的样品均在同一条件下进行。为降低误差,应尽量使配置的标准溶液
的浓度于样品中i组分的浓度相近,进样体积也做好相等。外标法的优点是不需要知道校正因子,被测组分出峰、无干扰、保留时间适宜,即可进行定量分析;缺点是进样量必须准确和操作条件要稳定,否则定量误差大,而这两个缺点在本实验中都得到了
较好的解决。
4.4 药材粉末干燥温度控制在60bC,干燥时间为3h。实验中药材的粉末由于装在了广口瓶中,故放入烘箱干燥时,于瓶口盖上了滤纸,一是考虑到滤纸可防止干燥时,烘箱中的铁锈可能会掉入药材中造成污染;另一方面,滤纸也无碍于药材粉末中水分的蒸发。烘干后马上把上述广口瓶立即放入干燥器中,在干燥中的小环境下保存药材有利于防止吸潮。4.5 黄柏中本身含有一部分小檗碱和一部分盐酸小檗碱,因甲醇属强极性溶剂,可提取出其中的盐酸小檗碱;本实验考察的用含1%盐酸的甲醇提取法,由于含有盐酸,能把黄柏药材中的小檗碱酸化为盐酸小檗碱,根据相似相溶原理而被提出。
4.6 容量瓶在使用前先要检查其是否漏水,方法是放入自来水,擦干瓶外水珠,用左手按住瓶塞,右手顶住瓶底,倒立2min,如果不漏,把瓶塞转动约180
#53#
度,再试一次,因为有时瓶塞与瓶口不是任何位置都是密合的。
4.7 容量瓶定容前,应待瓶内液体降至室温。定容至接近刻度标线时,要慢慢滴加,至溶液的弯月面与标线相切,盖上瓶塞,左手食指按住塞子,其余手指拿住瓶颈标线以上部分,右手托住瓶底边缘,将容量瓶倒转,使气泡上升到顶部,振荡,如此反复10次左
右。
4.8 用吸量管移取液体时,要把残留管尖的液体吹出,因在校正移液管时,未把这部分液体体积计算在内。参考文献:
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2005.214.
火焰法测定黄芽白中铅的含量
刘 临
(1.江西省宜春学院化学与生物工程学院;2.江西省高等学校应用化学与化学生物学重点实验室:江西宜春 336000)
摘要:用原子吸收光谱法对江西省宜春市袁州区所辖的三阳镇、西村镇、新坊镇、彬江镇等地的黄芽白叶片中铅的含量进行了分析测定,为其食用提供科学依据。关键词:黄芽白;铅;原子吸收光谱仪
1,2
中图分类号:O657.31 文献标识码:A 文章编号:1005-5320(2010)01-0054-02
DeterminationofthePbcontentfromtheChinesecabbagesbyatomabsorptionspectra
LIULin1,2
(1.CollegeofChemistryandBio-engineering,YichunUniversity;2.KeyLaboratoryofJiangxiProvinceUni2versityforAppliedChemistryandChemicalBiology:JiangxiYichun336000,China)
Abstract:ThispaperdeterminedthecontentofPbofChinesecabbagesbyatomabsorptionspectraamongoftheSanyang,Xicun,Xin2fangandBinjiangTownsunderthejurisdictionofYuanzhouDistrict,YichunCity,JiangxiProvince,inordertoprovidethescientificba2sisforeatingthevegetable.
KeyWords:Chinesecabbage;Pb;AtomAbsorptionspectra
铅对人类健康的潜在危害无处不在,对人体全身各组织器官都有损害,特别对儿童、孕妇尤为严重,铅以游离状态或无机化合物等形式透过血脑屏障,少量与低分子量有机基团和半胱氨酸等结合而进入,年龄越小对铅的通透性越高[1]。铅对血脑屏障的损害主要是作用于星形胶质细胞,造成血脑屏障功能障碍[2]。铅主要通过食物进入人体,不能小视铅的危害。作者采集、测定和分析了江西省宜春市袁州区所辖的三阳镇、西村镇、新坊镇、彬江镇等地的叶类蔬菜黄芽白叶片中铅的含量,为该类蔬菜的食用提供科学依据。
收稿日期:2009-11-19
基金项目:江西省高校重点实验室资助项目(2006)158号)作者简介:刘 临(1964-),男,实验师,从事分析化学教学与
研究工作。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂
TAS-990原子吸收分光光度计(普析通用);FS1604型电子分析天平(上海精科公司);202-1型烘干箱(天津泰斯特仪器有限公司);箱式电阻炉(天津华北实验仪器有限公司);AKRY-UP-1824艾柯超纯水机(成都康宁实验专纯水设备厂)。硝酸(国产,AR级);超纯水。Pb的标准溶液按表1配制。
表1 元素标准溶液
元素Pb
基准物质干燥温度物质质量(s)(e)(g)Pb
0.1000
溶剂HNO3
质量浓度
(mg/ml)
1
1.2 样品的采集与制备
#54#
第27卷第1期 Vol.27 No.1
微量元素与健康研究
StudiesofTraceElementsandHealth
2010年 1月Jan. 2010
不同方法对黄柏中盐酸小檗碱的提取比较
李定芬,陈新华,戴剑锋
(贵阳中医学院药学系,贵阳 550002)
摘要:采用包括药典法定方法在内的3种提取方法分别对黄柏中盐酸小檗碱进行提取并比较这3种方法的提取效率。方法:以乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)、甲醇分别采用超声提取法与用1%甲醇盐酸连续回流提取法进行提取,用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量作为提取效率的考察指标进行比较。结果:用乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)作为提取溶剂测定结果含量最高。结论:以乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)进行的超声提取工艺简单,快速且提取效率高,但用1%甲醇盐酸连续回流提取法,在考虑经济节约的条件下,也是不错的选择。
关键词:川黄柏;盐酸小檗碱;超声波提取;连续回流提取;高效液相色谱法
中图分类号:O657 文献标识码:B 文章编号:1005-5320(2010)01-0052-02
1 实验部分
仪器与试药:Agilent1100高效液相色谱仪;超声波发生器;索氏提取器;万分之一分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司),型号:AB204-S;黄柏;盐酸小檗碱对照品(110713-200208)由中国药品生物制品检定所提供;乙腈,磷酸,甲醇,盐酸,十二烷基磺酸钠均为分析纯;水为蒸馏水。2 方法与结果
2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(50:50)(每100ml加十二烷基磺酸钠011g)为流动相;流速:1ml/min;检测波长为256nm;理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算大于4000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在100bC干燥5h的盐酸小檗碱对照品适量,用乙腈-011%磷酸(十二烷基磺酸钠)作为溶剂制成每1ml含011mg的溶液,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 方法1:精密称取黄柏样品粉末011g两份,分别置100ml量瓶中,加流动相80ml,超声处理40min,放冷,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液取续滤液,再用0145Lm的微孔滤膜过滤即得1号和2号供试品溶液。方法2:精密称取黄柏样品粉末011g两份,分别置索氏提取器中,用含1%盐酸的甲醇回流提取至提取液无色为止,放冷,将提取液转移至100ml量瓶中,用盐酸甲醇洗涤圆底烧瓶合并提取液且稀释至
收稿日期:2009-08-19
作者简介:李定芬(1965-),女,实验师,大专,主要从事实验室工
作。
刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液取续滤液,再用0145Lm的微孔滤膜过滤即得3号和4号供试品溶液。方法3:精密称取黄柏样品粉末011g两份,分别置100ml量瓶中,用甲醇80ml超声提取40min,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液取续滤液,再用0145Lm的微孔滤膜过滤即得5号和6号供试品溶液。
2.2.3 线性关系考察 由于盐酸小檗碱的标准曲线在本实验条件下过坐标原点,故本实验采用外标一点法进行计算
[1]
。
2.2.4 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10Ll,重复进样5次,用峰面积计算RSD为019%。见表1。
表1 精密度测定结果
峰面积1791.1806.1823.1836.1818.
25374
平均值
标准差
RSD值(%)
1815.2217.250.9
2.2.5 稳定性试验 取1号供试品溶液分别在0、2、4、6、8h测定小檗碱的峰面积并计算RSD为119%。见表2。
表2 稳定性测定结果
峰面积1477.
1453.1498.1461.1522.
97354
平均值
标准差
RSD值(%)
1482.7627.991.9
2.2.6 重复性试验 按方法2.2.2项下的3种方法分别制备供试品溶液6份,分别进样10Ll。测定
#52#
峰面积,计算盐酸小檗碱的含量,方法1、2、3的6次测定结果的RSD分别为015%,1.3%,1.8%,方法2表明方法重复性良好,见表3。
表3 重复性测定结果(方法1)
峰面积1768.31775.41785.71780.11789.3平均值
标准差
RSD值(%)
本实验采用3种提取方法分别对黄柏中盐酸小檗碱进行提取比较,得出的数据表明药典的法定方法仍为最好的方法即:用乙腈-011%磷酸(每100ml加011g十二烷基磺酸钠)超声提取,该法简单易行,提取效率高。同时本实验考察的用含1%盐酸的甲醇连续回流提取法也获得了比较好的效果,可初步认为该法也有一定的研究价值。
4 讨 论
4.1 生物碱盐在水中的溶解度大小的变化规律:含氧酸盐>盐酸盐>氢溴酸盐>氢碘酸盐>小分子有1778.238.330.5
1770.6(方法2)峰面积平均值
标准差
RSD值(%)
1699.71752.11740.31732.3122.471.3
1760.51717.81723.4(方法3)峰面积平均值
标准差
RSD值(%)
1452.81510.31487.91489.3826.781.8
1466.71525.11493.5
表4 供试品测定结果样品称量平均含量(g)
Time(s)Area(%)
对照品25.9331816.925.7581828.9甲醇提取0.102325.7631447.50.102625.7671532.24.30盐酸甲醇提取0.102425.8151766.70.101925.8191696.45.02流动相提取
0.101925.8591782.90.1023
25.919
1771.2
5.16
2.3 样品测定
精密称取黄柏样品粉末6份,每份011g,分成3组,每组2份,每组分别按21212/供试品溶液的制备0项下的方法之一制备供试品溶液,分别制得1号和2号供试品溶液(采用方法1)、3号和4号供试品溶液(采用方法2)、5号和6号供试品溶液(采用方法3)。按2.1/色谱条件0项下精密吸取各供试品溶液10Ll注入液相色谱仪进行色谱分离,将盐酸小檗碱的色谱峰面积带入外标一点法计算公式进行计算并求得含量,结果见表4。3 结 论
机酸盐/多羟基酸盐>大分子有机酸盐,即无机酸盐
水溶解性>有机酸盐溶解性,无机酸盐中又以含氧酸盐的水溶解性大于卤代酸盐。故本实验的混合溶剂用的是011%磷酸。
4.2 川黄柏含小檗碱约1137%~518%,关黄柏含小檗碱约0160%~1164%,故本实验采用的是川黄柏。
4.3 以试样的标准品作为对照物质,与对照物质对
比求算试样含量的方法称为外标法。因为本实验的标准曲线过原点,故可采用外标一点法,此方法简单易行,但要求进样量准确及实验条件恒定。本实验采用的高效液相色谱仪为Agilent1100型,可自动进样,可保证进样量的准确,且所测的样品均在同一条件下进行。为降低误差,应尽量使配置的标准溶液
的浓度于样品中i组分的浓度相近,进样体积也做好相等。外标法的优点是不需要知道校正因子,被测组分出峰、无干扰、保留时间适宜,即可进行定量分析;缺点是进样量必须准确和操作条件要稳定,否则定量误差大,而这两个缺点在本实验中都得到了
较好的解决。
4.4 药材粉末干燥温度控制在60bC,干燥时间为3h。实验中药材的粉末由于装在了广口瓶中,故放入烘箱干燥时,于瓶口盖上了滤纸,一是考虑到滤纸可防止干燥时,烘箱中的铁锈可能会掉入药材中造成污染;另一方面,滤纸也无碍于药材粉末中水分的蒸发。烘干后马上把上述广口瓶立即放入干燥器中,在干燥中的小环境下保存药材有利于防止吸潮。4.5 黄柏中本身含有一部分小檗碱和一部分盐酸小檗碱,因甲醇属强极性溶剂,可提取出其中的盐酸小檗碱;本实验考察的用含1%盐酸的甲醇提取法,由于含有盐酸,能把黄柏药材中的小檗碱酸化为盐酸小檗碱,根据相似相溶原理而被提出。
4.6 容量瓶在使用前先要检查其是否漏水,方法是放入自来水,擦干瓶外水珠,用左手按住瓶塞,右手顶住瓶底,倒立2min,如果不漏,把瓶塞转动约180
#53#
度,再试一次,因为有时瓶塞与瓶口不是任何位置都是密合的。
4.7 容量瓶定容前,应待瓶内液体降至室温。定容至接近刻度标线时,要慢慢滴加,至溶液的弯月面与标线相切,盖上瓶塞,左手食指按住塞子,其余手指拿住瓶颈标线以上部分,右手托住瓶底边缘,将容量瓶倒转,使气泡上升到顶部,振荡,如此反复10次左
右。
4.8 用吸量管移取液体时,要把残留管尖的液体吹出,因在校正移液管时,未把这部分液体体积计算在内。参考文献:
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2005.214.
火焰法测定黄芽白中铅的含量
刘 临
(1.江西省宜春学院化学与生物工程学院;2.江西省高等学校应用化学与化学生物学重点实验室:江西宜春 336000)
摘要:用原子吸收光谱法对江西省宜春市袁州区所辖的三阳镇、西村镇、新坊镇、彬江镇等地的黄芽白叶片中铅的含量进行了分析测定,为其食用提供科学依据。关键词:黄芽白;铅;原子吸收光谱仪
1,2
中图分类号:O657.31 文献标识码:A 文章编号:1005-5320(2010)01-0054-02
DeterminationofthePbcontentfromtheChinesecabbagesbyatomabsorptionspectra
LIULin1,2
(1.CollegeofChemistryandBio-engineering,YichunUniversity;2.KeyLaboratoryofJiangxiProvinceUni2versityforAppliedChemistryandChemicalBiology:JiangxiYichun336000,China)
Abstract:ThispaperdeterminedthecontentofPbofChinesecabbagesbyatomabsorptionspectraamongoftheSanyang,Xicun,Xin2fangandBinjiangTownsunderthejurisdictionofYuanzhouDistrict,YichunCity,JiangxiProvince,inordertoprovidethescientificba2sisforeatingthevegetable.
KeyWords:Chinesecabbage;Pb;AtomAbsorptionspectra
铅对人类健康的潜在危害无处不在,对人体全身各组织器官都有损害,特别对儿童、孕妇尤为严重,铅以游离状态或无机化合物等形式透过血脑屏障,少量与低分子量有机基团和半胱氨酸等结合而进入,年龄越小对铅的通透性越高[1]。铅对血脑屏障的损害主要是作用于星形胶质细胞,造成血脑屏障功能障碍[2]。铅主要通过食物进入人体,不能小视铅的危害。作者采集、测定和分析了江西省宜春市袁州区所辖的三阳镇、西村镇、新坊镇、彬江镇等地的叶类蔬菜黄芽白叶片中铅的含量,为该类蔬菜的食用提供科学依据。
收稿日期:2009-11-19
基金项目:江西省高校重点实验室资助项目(2006)158号)作者简介:刘 临(1964-),男,实验师,从事分析化学教学与
研究工作。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂
TAS-990原子吸收分光光度计(普析通用);FS1604型电子分析天平(上海精科公司);202-1型烘干箱(天津泰斯特仪器有限公司);箱式电阻炉(天津华北实验仪器有限公司);AKRY-UP-1824艾柯超纯水机(成都康宁实验专纯水设备厂)。硝酸(国产,AR级);超纯水。Pb的标准溶液按表1配制。
表1 元素标准溶液
元素Pb
基准物质干燥温度物质质量(s)(e)(g)Pb
0.1000
溶剂HNO3
质量浓度
(mg/ml)
1
1.2 样品的采集与制备
#54#