HYPERION红外显微镜操作步骤
1- 向MCT检测器中灌满液氮。由于检测器冷却过程中会消耗部分液氮，因此灌满后需等待约5分钟，再次向检测器中灌入液氮。待灌满后将漏斗拔出。(MCT检测器可持续使用约8个小时，如需连续工作超过8小时，则在液氮耗尽之前需重新补加液氮，以保证仪器正常工作。)
在此期间，可以继续对仪器进行相关设置。
2- 按下显微镜面板上的可见光按钮，根据实验类型需要，选择透射模式(按钮图标为两个被水平线隔开的向上箭头)或反射模式(按钮图标为一个被水平线反射的箭头)。
>>>如果OPUS已经打开，则以下三个步骤可略过。
3- 双击桌面上的 OPUS图标，打开OPUS软件。
4- 在OPUS登录窗口选择操作者名称，输入密码。系统默认密码为“OPUS”(注意大写)。点击OK键。
5- 出现关于OPUS窗口。点击OK键。
6- 将样品置于样品台上，调节聚焦旋钮，先粗调，后微调，对样品聚焦。
7- 使用操作杆将样品台移动到一个空位置。完全打开刀口光阑。刀口光阑调节旋钮位于显微镜右侧靠上的位置。
图标，即高级测量。 8- 选择测量菜单下的
9- 如已经将实验参数保存在一个*.XPM文件中(如果没有，你需要建立一个参数文件，详见附件的参数设置部分), 例如Mice.XPM，则只需要做如下几项调整：
i) ii)
在Basic对话框中, 点击 Load按钮，选择*.XPM实验方法文件。然后在Sample name和Sample Form中输入相关信息。 在 Advanced 对话框中：
a. 在File name中输入相关信息。
b. 在Path中直接输入路径，或者将既列路径改为您所需的路径。 c. 点击Save按钮保存已设置的方法文件，根据需要可以覆盖或另
存。
d. 在Data blocks to be saved中勾选Absorbance(或Transmission)
及Single Channel和Background三个数据块。
其它参数无需更改。
iii)
10- 如果液氮已经灌入10分钟以上，在透射模式下，点击Check signal (在此之前，你需要按下显微镜前面板上的红外按钮和透射按钮)。正常状况下，约15-30秒后，将会出现干涉图和信号强度。下列有关同轴聚焦(condenser)的操作步骤只适用于透射模式。
i) 按下前面板的可见模式按钮。 ii) 缓慢关闭刀口光阑，使在目镜中呈现一个正方形，使“＋”标记刚好充
满正方形且位于中心。
iii) iv)
v)
按下前面板的红外模式按钮。
旋转同轴聚焦旋钮使信号强度达到最大值。
同轴聚焦的中心调节。调节光阑位于底部。切换到可见观察模式，使用底部的瞳形光阑（大圈用于观测样品；小圈仅用作调节透射同轴聚焦）。调节透射同轴聚焦后面的两个旋钮，使小光圈位于十字中心，同时调节同轴聚焦旋钮，使光圈边缘清晰。
11- 得到最大振幅后，点击Exit 键关闭Measurement 窗口。
12-从工具条中点击（video assisted measurement），或从Measure 下
。 拉菜单选择
13- 在新打开的窗口中，点击Basic对话框。点击Load按钮，选择所建立的实验参数方法。
14- 点击XY Stage对话框
i) 将灰色对话框中相应的X和Y值键入“Move to”空白对话框中。
ii) 点击Calibrate Stage按钮，校正样品台。
iii) 等到样品台停止移动，点击Move to position按钮，这将使样品台
移回样品所在处。
iv) 点击Start video assisted measurement (3D)按钮，在显微镜前面
板上按下可见光按钮。
15- 完全打开刀口光阑，在显示图像上单击鼠标右键，在Mouse Mode项下选择click to move，即可用鼠标移动样品。
16- 在显示图像上右击鼠标，点击snapshot，捕获图像。如果要得到样品更大范围的图像，可以选择Set + scan overview image area，屏幕上方会弹出一个矩形对话框（如图）包括两个按钮：Add region和Overview area now defined.
17- 使用操作杆移动样品，也可以在显示图像上右击鼠标，用鼠标控制样品位置。
i) ii) iii) iv)
将您需要扫描的样品范围的最顶端移动到显示窗口内，点击Add region按钮。
移动操纵杆，将您需要扫描的样品范围的最右端移动到显示窗口内，再次点击Add region按钮。 同法可对样品的底端和左端进行操纵。 最后点击Overview area now defined按钮。
18- 现在软件将在计算机屏幕右侧的窗口显示Overview Image。整个过程根据扫描区间的大小，需要数秒钟到数分钟。
19-整个过程计算机自动完成，最终在右侧窗口显示overview image全图。
20- 在全视图(屏幕右侧图像)上单击鼠标右键,选择Mouse mode – No action，否则无论你的鼠标在Overview Image点到哪儿，显示图像就会移动到你所点击的地方。
21- 可以通过单击鼠标左键拖拉Overview Image和显示图像之间的灰色分隔条来放大全视图。
22- 在Overview Image上单击鼠标右键，选择Export – Image to file来保存图
像。
23- 下面进行测量区域mapping的设置。
i) 在全景图Overview Image上右击鼠标，选择Measurement
Spots/Grid…菜单中的Define rectangular grid，定义mapping的矩形区域。
ii) 找到你要做mapping的样品区域，将鼠标移到该区域的左上角，
向右下角拖拉鼠标，选定你期望的区域。
iii)
将弹出一个小窗口。点击向上箭头增加Number of grid positions in X直到Delta X值接近50微米或您期望的步长。
iv)
v)
同样，设定Number of grid positions in Y直至Delta Y值接近您所期望的步长。
单击OK后，全景图Overview Image上出现您所定义的测量点。
24- 在全景图Overview Image上单击鼠标右键，选择Export菜单中的Image to file，可以保存已经定义好测量点的全景图Overview Image以及测量点的缩放图。
25- 也可以只保存测量点，在全景图上单击鼠标右键，选择Export菜单中的Measurement positions来导出测量点。这个操作可以保证在同一位置上精准的重复前面的实验，而无需24步操作，只需在全景图Overview Image上单击鼠标右键，选择Import菜单中的Measurement positions，然后在选择已保存的文件来导入测量点。
26-单击鼠标左键拖拉Overview Image和显示图像之间的灰色分隔条来缩小全视图Overview Image尺寸。
27- 使用操作杆移动到一个空白区域（反射用铝镜做背景，透射用空气做背景）。
28- 关闭刀口光阑至50 microns(。
29- 按下显微镜前控制板上的红外按钮，切换到红外光。
30- 在显示图像上单击鼠标右键，选择Starting Measurement菜单中的Collect background at current position，采集背景。你也可以选择Keep current position as background来定义一个点为背景测量点。
31- 这时，你可以观测屏幕右下角的绿色状态条中的测量进度，当绿条中显示
Video measurement时，则背景采集完毕。
32- 在显示图像上单击鼠标右键，选择Starting Measurement菜单中的Measure marked positions，测量标记的位置。
33- 扫描结束后，点击屏幕右上角下面的退出键)，关闭测量窗口(注意：不是OPUS窗口)。
34- 退出测量窗口后，你的文件名将会出现在window list窗口中(屏幕左侧)，文件下方会有几个数据块。点击文件名，然后左file菜单中选择save file来保存文件。
35- 双击AB数据块，可以浏览所采集的光谱图。
参数设置
以下为显微镜测试参数设置，以供参考。
1- 基本设置
测量参数：当第一次设置参数时，点击“调入”键并选择“Scope2-
transmission.XPM”，它将调用OPUS文件夹下的XPM文件夹中的文件。如果想使用反射模式，就选择Scope2-reflection.XPM
操作者名称：你的名字，但也可以不填。
样品名称：鼠1，鼠2，等
样品形态：例子中老鼠肝脏的具体形态（液、固态等）
路径： 在这里不能被改变，若要改变需在“高级设置”中改变
文件名：在这里不能被改变，若要改变需在“高级设置”中改变
2- 高级设置
文件名：输入相关文件名。
路径：“…”按钮允许浏览并选择你想要保存的路径。
分辨率：4 cm-1
样品扫描时间：128次
背景扫描时间：128次
（样品和背景的扫描时间根据实际信号强弱而定）
保存数据从：4000cm-1—600cm-1
结果谱图：Absorbance（透射模式），或Reflectance（反射模式）
要保存的数据块：选择Absorbance和Background
*如果参数已设置完毕，就可以选择保存到新的文件*.XPM，如“Mice.XPM”。
3- 光学设置(一般无需更改)
光源设置：Globar（中红外）
分束器：KBr
光阑设置：12mm
测量通道：外部右侧
检测器设置：MCT IRScope;450;0.9
扫描速度：7:20.0 KHz（55，Vertex，Tensor型仪器值要略小于该值）
样品信号增益：自动
背景信号增益：自动
转换设备后的延迟：0
测量前的延迟：0
4- 采样(一般无需更改)
最高采样频率限制：8000
最低采样频率限制：0
干涉图大小：(14218 点)
FT大小：(16K)
低通滤波器：1;16 KHz (12639 cm-1)
采样模式：Double-sided: Forward-Backward
相关模式：no
5- FT(一般无需更改)
相位分辨率：32
相干涉图点数：(1777)
相位校正模式：Mertz
去趾函数：Norton-Beer Medium
填零因子：2
干涉图大小：(14218 点)
FT大小：16K
(√)检查“FT之前进行干涉图非线性校正”
6- 显示
(√)检查“测量前显示单次扫描”
Y轴的值应在1.1（顶）—0.1（底）
X轴的值应在4000（左）—650（右）——中带MCT检测器。
7- 背景
不需改变这里的参数
8- 检查信号
在参数设置过程中不需进行此步操作。只需在运行实验之前检查一下信号。
9-上述参数设置完毕后，重新回到“高级设置”选项，点击“保存”。在此例中，将被保存于“Mice.XPM”的文件中。
HYPERION红外显微镜操作步骤
1- 向MCT检测器中灌满液氮。由于检测器冷却过程中会消耗部分液氮，因此灌满后需等待约5分钟，再次向检测器中灌入液氮。待灌满后将漏斗拔出。(MCT检测器可持续使用约8个小时，如需连续工作超过8小时，则在液氮耗尽之前需重新补加液氮，以保证仪器正常工作。)
在此期间，可以继续对仪器进行相关设置。
2- 按下显微镜面板上的可见光按钮，根据实验类型需要，选择透射模式(按钮图标为两个被水平线隔开的向上箭头)或反射模式(按钮图标为一个被水平线反射的箭头)。
>>>如果OPUS已经打开，则以下三个步骤可略过。
3- 双击桌面上的 OPUS图标，打开OPUS软件。
4- 在OPUS登录窗口选择操作者名称，输入密码。系统默认密码为“OPUS”(注意大写)。点击OK键。
5- 出现关于OPUS窗口。点击OK键。
6- 将样品置于样品台上，调节聚焦旋钮，先粗调，后微调，对样品聚焦。
7- 使用操作杆将样品台移动到一个空位置。完全打开刀口光阑。刀口光阑调节旋钮位于显微镜右侧靠上的位置。
图标，即高级测量。 8- 选择测量菜单下的
9- 如已经将实验参数保存在一个*.XPM文件中(如果没有，你需要建立一个参数文件，详见附件的参数设置部分), 例如Mice.XPM，则只需要做如下几项调整：
i) ii)
在Basic对话框中, 点击 Load按钮，选择*.XPM实验方法文件。然后在Sample name和Sample Form中输入相关信息。 在 Advanced 对话框中：
a. 在File name中输入相关信息。
b. 在Path中直接输入路径，或者将既列路径改为您所需的路径。 c. 点击Save按钮保存已设置的方法文件，根据需要可以覆盖或另
存。
d. 在Data blocks to be saved中勾选Absorbance(或Transmission)
及Single Channel和Background三个数据块。
其它参数无需更改。
iii)
10- 如果液氮已经灌入10分钟以上，在透射模式下，点击Check signal (在此之前，你需要按下显微镜前面板上的红外按钮和透射按钮)。正常状况下，约15-30秒后，将会出现干涉图和信号强度。下列有关同轴聚焦(condenser)的操作步骤只适用于透射模式。
i) 按下前面板的可见模式按钮。 ii) 缓慢关闭刀口光阑，使在目镜中呈现一个正方形，使“＋”标记刚好充
满正方形且位于中心。
iii) iv)
v)
按下前面板的红外模式按钮。
旋转同轴聚焦旋钮使信号强度达到最大值。
同轴聚焦的中心调节。调节光阑位于底部。切换到可见观察模式，使用底部的瞳形光阑（大圈用于观测样品；小圈仅用作调节透射同轴聚焦）。调节透射同轴聚焦后面的两个旋钮，使小光圈位于十字中心，同时调节同轴聚焦旋钮，使光圈边缘清晰。
11- 得到最大振幅后，点击Exit 键关闭Measurement 窗口。
12-从工具条中点击（video assisted measurement），或从Measure 下
。 拉菜单选择
13- 在新打开的窗口中，点击Basic对话框。点击Load按钮，选择所建立的实验参数方法。
14- 点击XY Stage对话框
i) 将灰色对话框中相应的X和Y值键入“Move to”空白对话框中。
ii) 点击Calibrate Stage按钮，校正样品台。
iii) 等到样品台停止移动，点击Move to position按钮，这将使样品台
移回样品所在处。
iv) 点击Start video assisted measurement (3D)按钮，在显微镜前面
板上按下可见光按钮。
15- 完全打开刀口光阑，在显示图像上单击鼠标右键，在Mouse Mode项下选择click to move，即可用鼠标移动样品。
16- 在显示图像上右击鼠标，点击snapshot，捕获图像。如果要得到样品更大范围的图像，可以选择Set + scan overview image area，屏幕上方会弹出一个矩形对话框（如图）包括两个按钮：Add region和Overview area now defined.
17- 使用操作杆移动样品，也可以在显示图像上右击鼠标，用鼠标控制样品位置。
i) ii) iii) iv)
将您需要扫描的样品范围的最顶端移动到显示窗口内，点击Add region按钮。
移动操纵杆，将您需要扫描的样品范围的最右端移动到显示窗口内，再次点击Add region按钮。 同法可对样品的底端和左端进行操纵。 最后点击Overview area now defined按钮。
18- 现在软件将在计算机屏幕右侧的窗口显示Overview Image。整个过程根据扫描区间的大小，需要数秒钟到数分钟。
19-整个过程计算机自动完成，最终在右侧窗口显示overview image全图。
20- 在全视图(屏幕右侧图像)上单击鼠标右键,选择Mouse mode – No action，否则无论你的鼠标在Overview Image点到哪儿，显示图像就会移动到你所点击的地方。
21- 可以通过单击鼠标左键拖拉Overview Image和显示图像之间的灰色分隔条来放大全视图。
22- 在Overview Image上单击鼠标右键，选择Export – Image to file来保存图
像。
23- 下面进行测量区域mapping的设置。
i) 在全景图Overview Image上右击鼠标，选择Measurement
Spots/Grid…菜单中的Define rectangular grid，定义mapping的矩形区域。
ii) 找到你要做mapping的样品区域，将鼠标移到该区域的左上角，
向右下角拖拉鼠标，选定你期望的区域。
iii)
将弹出一个小窗口。点击向上箭头增加Number of grid positions in X直到Delta X值接近50微米或您期望的步长。
iv)
v)
同样，设定Number of grid positions in Y直至Delta Y值接近您所期望的步长。
单击OK后，全景图Overview Image上出现您所定义的测量点。
24- 在全景图Overview Image上单击鼠标右键，选择Export菜单中的Image to file，可以保存已经定义好测量点的全景图Overview Image以及测量点的缩放图。
25- 也可以只保存测量点，在全景图上单击鼠标右键，选择Export菜单中的Measurement positions来导出测量点。这个操作可以保证在同一位置上精准的重复前面的实验，而无需24步操作，只需在全景图Overview Image上单击鼠标右键，选择Import菜单中的Measurement positions，然后在选择已保存的文件来导入测量点。
26-单击鼠标左键拖拉Overview Image和显示图像之间的灰色分隔条来缩小全视图Overview Image尺寸。
27- 使用操作杆移动到一个空白区域（反射用铝镜做背景，透射用空气做背景）。
28- 关闭刀口光阑至50 microns(。
29- 按下显微镜前控制板上的红外按钮，切换到红外光。
30- 在显示图像上单击鼠标右键，选择Starting Measurement菜单中的Collect background at current position，采集背景。你也可以选择Keep current position as background来定义一个点为背景测量点。
31- 这时，你可以观测屏幕右下角的绿色状态条中的测量进度，当绿条中显示
Video measurement时，则背景采集完毕。
32- 在显示图像上单击鼠标右键，选择Starting Measurement菜单中的Measure marked positions，测量标记的位置。
33- 扫描结束后，点击屏幕右上角下面的退出键)，关闭测量窗口(注意：不是OPUS窗口)。
34- 退出测量窗口后，你的文件名将会出现在window list窗口中(屏幕左侧)，文件下方会有几个数据块。点击文件名，然后左file菜单中选择save file来保存文件。
35- 双击AB数据块，可以浏览所采集的光谱图。
参数设置
以下为显微镜测试参数设置，以供参考。
1- 基本设置
测量参数：当第一次设置参数时，点击“调入”键并选择“Scope2-
transmission.XPM”，它将调用OPUS文件夹下的XPM文件夹中的文件。如果想使用反射模式，就选择Scope2-reflection.XPM
操作者名称：你的名字，但也可以不填。
样品名称：鼠1，鼠2，等
样品形态：例子中老鼠肝脏的具体形态（液、固态等）
路径： 在这里不能被改变，若要改变需在“高级设置”中改变
文件名：在这里不能被改变，若要改变需在“高级设置”中改变
2- 高级设置
文件名：输入相关文件名。
路径：“…”按钮允许浏览并选择你想要保存的路径。
分辨率：4 cm-1
样品扫描时间：128次
背景扫描时间：128次
（样品和背景的扫描时间根据实际信号强弱而定）
保存数据从：4000cm-1—600cm-1
结果谱图：Absorbance（透射模式），或Reflectance（反射模式）
要保存的数据块：选择Absorbance和Background
*如果参数已设置完毕，就可以选择保存到新的文件*.XPM，如“Mice.XPM”。
3- 光学设置(一般无需更改)
光源设置：Globar（中红外）
分束器：KBr
光阑设置：12mm
测量通道：外部右侧
检测器设置：MCT IRScope;450;0.9
扫描速度：7:20.0 KHz（55，Vertex，Tensor型仪器值要略小于该值）
样品信号增益：自动
背景信号增益：自动
转换设备后的延迟：0
测量前的延迟：0
4- 采样(一般无需更改)
最高采样频率限制：8000
最低采样频率限制：0
干涉图大小：(14218 点)
FT大小：(16K)
低通滤波器：1;16 KHz (12639 cm-1)
采样模式：Double-sided: Forward-Backward
相关模式：no
5- FT(一般无需更改)
相位分辨率：32
相干涉图点数：(1777)
相位校正模式：Mertz
去趾函数：Norton-Beer Medium
填零因子：2
干涉图大小：(14218 点)
FT大小：16K
(√)检查“FT之前进行干涉图非线性校正”
6- 显示
(√)检查“测量前显示单次扫描”
Y轴的值应在1.1（顶）—0.1（底）
X轴的值应在4000（左）—650（右）——中带MCT检测器。
7- 背景
不需改变这里的参数
8- 检查信号
在参数设置过程中不需进行此步操作。只需在运行实验之前检查一下信号。
9-上述参数设置完毕后，重新回到“高级设置”选项，点击“保存”。在此例中，将被保存于“Mice.XPM”的文件中。