第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
会论文集，１９９９，２７页
［５］冯建国，陶训，张安盛等．利用人工卵繁殖的螟黄赤眼蜂防治棉铃虫研究．中国生物防治，１９９７．１３（１）
６—８
地衣芽孢杆菌菌株鉴定和生化特征的研究＋
黄福祥１马建彬１朱西儒１谢小保２
（１广州大学生化学院生物系；２广东省微生物研究所）
摘要：从广东省东莞市等地土壤，分离出能抑制巴拿马病（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐｐ）的２３种细菌中，筛选摄有效的８号和１６号两个代表菌种。经过形态观察、生化测定等试验。结果表明：这两种菌是革兰氏染色阳性反应，产生芽孢，８‘和ｌ舻属于“弛衣芽孢杆菌”。本文首次发现８号地衣芽孢杆菌（Ｌｉｃｈｅｎｌｆｏｙｍｉｓｓｐｐ），鉴定结果与前人报道的有所不同。关键词：地衣芽孢杆菌（Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｙｍｉｓｓｐｐ）生化特性分类地位
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香蕉巴拿马病，是对香蕉危害最重要病害之一…。香蕉感染了这种病后，会导致大面积的死亡，农民只有把染病植株毁掉。该病菌是由土壤传播，在土中能潜伏７．１０年之久。当香蕉收到
大面积的感染时，只能改种别的作物。所以，每年都让农民受到很大的损失，特别是风味好，市场价格高的“粉蕉”，受害最为严重，一般发病率达到３５％左右¨１。
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迄今，还没有药能很好地抑制此病。有报导说，往后香蕉将可能难以大面积种植。我们从土壤中分离了２０多各菌株，对巴拿马病有抑制作用的颉抗菌。所以，有较大的发展前途，其中，有２个对此病有特别好的抑制作用，即：８号和１６号。因此，本文对这两种菌进行鉴定，明确其分类地位，以便进行大批量的生产。
杆菌”。因此，决定用鉴定芽孢杆菌：“ＡＰＩＣＨＢ（地衣芽孢杆菌鉴定方法）”测。
５０
进行菌种检
具体步骤：在培养基中，将被测的菌种制成菌悬液，接种反应板中的每个小管。培养期间，菌种会发生糖发酵产酸，导致ｐＨ值下降，指示剂的颜色变化。结果组成该菌株的生化图谱，并用作菌种鉴定。１．２。４生化指标测定
根据前人发现的地衣芽孢杆菌的形态和生化特性，对８号和１０号地衣芽孢杆菌进行相应的生化指标测定“１。
具体步骤如下：在牛肉膏蛋白胨培养基上，用８号和１０号菌株培养２４ｈ。然后，进行菌株的生长、产酸、水解、利用、分解等方面生化实验。
试验每一个处理，重复３次。
２
１材料与方法
１
１材料
１．１．１菌种
从来自广州市番禺区，东莞市等地的土壤中，分离对巴拿马病有较强抑制作用的８号和１０号颉抗菌。１．１．２培养基
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏３ｇ，蛋白胨
１０ｇ，ＮａＣＩ５
ｇ，水１
０００ｍｌ，ｐＨ７４－７．６．
１．１．３生化测试
由广东省微生物研究所提供。１．２方法
１．２．１培养基削备
牛肉膏蛋白胨培养基，分别在培养基上用“平板画线法“２１获得８号和１６号菌的单菌落。观察单菌落的形态和生长情况。ｌ－２．２菌体染色
在牛肉蠹蛋白胨培养基上，用８号和１０号菌株，均以２４ｈ和４８ｈ进行培养。培养２４ｈ后，进行“革兰氏染色。…；培养４８ｈ后，进行芽孢染色。最后，观察其菌体的形态特征。
１．２．３ＡＰＩ
５０
结果分析
用试验的８号和１６号菌株，与迄今为止发
现的“地衣芽孢杆菌”标准菌株进行生化特征的对比。
２．１菌种形态特征
２．１．１地衣芽孢杆菌８号菌种观察结果
经过单菌落分离和染色，该菌是“革兰氏阳性菌”，菌体均一，皆为长杆状，大小：长２—６．６ｋ（见图版１），有鞭毛，。产芽孢，芽孢中生（见图版２），一般单生。生长温度范围广，最低２５℃，最高达５０℃，是属于芽孢杆菌。
ＣＨＢ”’检测
根据对８号和１０号细菌的单菌落、革兰氏染色和芽孢染色的观察。初步确定为“地衣芽孢
１１２
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图版１地衣芽孢杆菌８号菌营养体（１００Ｘ）２．１．２单菌落特征
侄３７℃，牛肉膏蛋白瞧培养基中，培养２４ｈ，菌落呈圆形，边缘剧齿状，表面非粘稠状，菌落较小，直径２—３ｍｍ
２．１．３
１
图版２地衣芽孢杆菌８号菌芽孢形态（１００Ｘ）
经过单菌落培养分离，该菌旱革兰氏阳性菌，菌体均一，皆为长杆状，菌长－４¨，（见图版３），一般单生，产鞭毛，。产芽孢，芽孢中生（见图版４）。生长温度广，最低２５℃，最高达５５℃。可能是一株芽孢杆菌。
６号菌种观察结果
图版３
１
６号菌营养体（１００
Ｘ）
图版４１６号菌芽孢形态（１００
ｘ）
２．１．４单菌落特征
在３７。Ｃ，牛肉膏蛋白胨培养基中，培养２４ｈ，菌落呈圆剧齿状，表面湿润有光泽和大量的黏液，菌落大，直径４－５ｒａｍ
２
根据对８号和１６号细菌的单菌落、革兰氏染色和芽孢染色的观察。初步确定为芽孢杆菌，进一步用：ＡＰＩ
１）。
５０
ＣＨＢ进行菌种检测（见表
２ＡＰＩ５０
ＣＨＢ进行菌种检测
表１
ＡＰｌ５０
ＣＨＢ检测列表
空白甘油
七叶灵
柳酵纤维二糖麦芽糖
乳糖
赤藓醇Ｄ一啊啦伯糖Ｌ一阿拉伯糖
核糖Ｄ一木糖Ｌ一木糖阿东醇Ｂ甲基－Ｄ一木糖半乳糖葡萄糖果糖甘露耱山梨糖鼠梨糖
卫矛醇
一
一
蜜二糖蔗糖海藻菊糖松三糖绵子糖淀粉糖原木糖醇龙胆二糖Ｄ一松二糖Ｄ来苏糖Ｄ一塔格糖Ｄ一岩糖Ｌ一岩糖
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＋＋
＋十
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一
一
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＋＋
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一
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一
＋＋一
一
！二里薹二望二笪墨楚蔓二
二
望二堕蕉竖
二二
＋＋表示有反应～表示没反应＋／一表示反应以有为主一／＋表示反应以无为主
用以上结果，组成该菌株的生化图谱，并用来鉴定得出８号和１６号是地衣芽孢杆菌。２．３地衣芽孢菌生化特性
根据地衣芽孢菌的基本的生化特征”１进行相关的生化试验”１，对８号和１０号两种地衣芽孢杆菌的一些生化特性进行比较（见表２）：
表２地衣芽孢茵的一些生化特性比较
名称８号革兰氏反应运动性接触酶厌氧生长ＶＰ反应
ＶＰ培养液中的ｐＨ值最低生长温度Ｃ最高生长温度。Ｃ卵黄反应溶酶菌中
＋＋
１６号
＋
名称８号葡萄糖阿拉伯糖木糖甘露醇水解淀粉
水解马屎酸盐（４周）利用柠檬酸盐利用丙酸盐从Ｎ０３产生Ｎ０２分解酪素
一
１６号
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＋＋＋
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分解酪氨酸
＋＋
ｏ．０２㈣
一
一
＋＋表示有反应～表示没反应＋／一表示反应以有为主一／＋表示反应蚪无为主
从上面两种地衣芽孢的形态结构和生化特性的比较得出：，两种菌虽同属地衣芽孢杆菌，但其单菌落的特征明显不同，其单个菌体的长度也有所不同。而生化特征除了生长范围和ＶＰ培养液中的ｐＨ值不同外，其他的生化特性都相同。
２
同，８号菌只有生长的最高温度和ＶＰ培养液中的ｐＨ值与其他的地衣芽孢杆菌有所不同外，其他的大部分相同。１６号菌与１０２、６５９８、８０４８、９２５９、９７８９、９９４５、１２１３９、１３４３８号菌基本相同很可能是同种。因数据有Ｂ艮要进行进一步的实验。
２．４．２鉴定菌种与模式菌种的比较
本研究菌种与褚西宁等（１９９１）”分离了一株芽孢杆菌相比较，结果见４：
４两种地衣芽孢杆菌８号和１０号与模式菌种
的比较
２．４．１生化特征的比较
把８号和１０号地衣芽孢杆菌，与１
９８３
年以前的发现的２１种地衣芽孢“１进行一系列生化特征的比较（见表３）。
从表３中可看出：８号１６号两种地衣芽孢杆菌和２１种地衣芽孢杆菌的生化特征大部分相
表３地衣芽孢杆菌待鉴定菌种与模式菌株生化特征的对啦
。¨６
＋
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＋＋
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ｔ
２１种苗都能在葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇产酸。都能水解淀粉。不能水解马尿酸盐。都能利用柠檬酸
钠，丙酸盐都能从Ｎ０３产生Ｎ０２。都能分解酪素，不能分解酪氮酸。
麦§§墨猫）Ｑ呈地蠢莹孢ｊ至蕾§盎的比寝
琶拄曼
８号１６号
￡鉴
酋住古尘Ｉ些２
２－６．６２－４．０
生基垂廑ｌ蔓２
２５－５０２５－５５
差孢友式
中生中生
：
亡翌Ｌ酸
无无互
Ｚ：』：Ｑ２§：丝
＊ＣＫ～一产乳酸的芽孢杼菌，革兰氏染色均为阳性。
从表４可以看出：该产乳酸菌和８号和１６号的生长温度、大小和产乳酸都不同。因为没有该菌的样本，不能进一步的研究。所以，初步认为：该产乳酸菌和８号和１６号是不同的菌。
过查新证明，目前，尚未见有相同报道。由于时间关系，条件有限，不能做深入试验，其有待进一步的研究。
１６号菌也属于呈革兰氏阳性菌，菌体形状、产鞭毛，、产芽孢以及方式，同８号，但是，菌体长２－４ｒ晡１，生长温度广，最高达５５。Ｃ。是一株地衣芽孢杆菌。生化特征与以前报道的１０２、６５９８、８０４８、９２５９、９７８９、９９４５、１２１３９号菌基本相同，所以很可能是同一种。
从土壤中提取的８号和１
６号菌是地衣芽
２结论与讨论
被鉴定８号菌是革兰氏阳性菌，菌体均一，皆为长杆状，产芽孢，芽孢中生，长２－６．６１．ｔＭ一般单生，产鞭毛，生长温度广，最低２５。Ｃ，最高达５０℃是一株芽孢杆菌。生化特征与以前的发现的地衣芽孢杆菌大部分相同，但其生长温度，在ＶＰ培养液中的ｐＨ值，与以前报道的地衣芽孢杆菌有所不同。
所以，８号菌有可能是该属的一个新种。经
１１６
孢杆菌属。对香蕉的巴拿马病有很好的抑制作用，通过对这两种菌的形态特征的研究、分类地位的鉴定，使人们能更好的利用这两种菌，来控
第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
制制香蕉巴拿马病，解决生产实际问题。
参考文献
【１］中国农作物病虫害编辑委员会编．中国农作物病虫害（下册）１９８１，北京：农业出版社．１８４９－－ｉ８５０［２］黄秀丽．微生物学实验指导．高等教育出版社，１９９９［３］赵斌，何绍江主编．微生物学实验．北京：科学出版社２００２
［４］ＢｉｏＭｅｒｉｅｖｘＩＤＥＮＹＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＳＵＳＣＥＰＴＩＢＩＬＩＴＹＴＥＳＴＩＮＧＡＰＩＡＴＢＳＹＳＴＥＭ
［５］戈登・海恩斯・帕格著．蔡秒英，刘津太，战立克译．芽孢杆菌属．北京：农业出版社１９８３［６］楮西宁，卫军，陈海波，刘东兴，袁滔著．微生物学通报．１９９１，１８（３）
茁二■磊鬲磊焉磊－
对广东省微生物研究所欧阳友、陈仪本老师指导，以及提供试验条件表示衷心感谢
放线菌ＬＡ５菌株产生的抗真菌抗生素的初步研究＋
曾会才＋邬国良余风玉李振华
（中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州５７１７３７）
摘要：对放线菌ＬＡ５菌株的抑菌谱进行了初步测定，结果表明：放线菌ＬＡ５菌株对辣椒疫霉菌Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ
ｃａｐｓｉｃｉ、稻瘟菌毋订ｃｕｌａｒｉａｇｒｉｓｅａ、香蕉炭疽菌Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｍｕｓａｅ、香蕉枯萎镰刀菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ、香蕉黑星病菌ＰｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａｍｕｓＢＪ＇ｕｍ和芒果炭疽菌Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ“ｏｅｏｓｐｏｒｉｏｄｌｅｓ等６种植物病原菌表现很强的抗菌活性，对茄子腐皮镶刀菌Ｆｕｓａ旷Ｊｕｍｓｏｌａｎｉ具有明显的抑效果；通过阳离子交换层析法对ＬＡ５菌株产生的抗生素进行了分离纯化，获得了抗生素ＬＡ５的结晶，理化性质测定结果表明，这种抗生索
属水溶性、弱虢眭抗生素，对光、热稳定，符合农药贮藏稳定性要求。
关键词：放线菌ＬＡ５菌株抑菌谱抗真菌抗生素
Ｔｅｓｔｉｎｇ
ｏｎ
Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ＳｐｅｃｔｒｕｍｏｆａｎｄＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ
Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ
ＺＥＮＧ
ＡｅｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓＳｔｒａｉｎＬＡ５’
ＹＵＦｅｎｇ－Ｙｕ
ＬＩＺｈｅｎｇ—Ｈｕａ
Ｈｕｉ・Ｃａｉ’ＷＵ
Ｇｕｏ－ｌｉａｎｇ
Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＶｉｃｅＰｒｏＬＺｅｎｇＨｕｉｃａｉ
＋基金项目：中国热带农业科学院科技基金重点支助项目。
＋作者简介：曾会才（１９６４一）＇男，博士，副研究员，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｃ０８１＠１２６．ＣＯＩＴＩ。
＋ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅｓｅｉｅｎｃｃａｎｄＴｃｃｈｎｏｌｏｇｙＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ．
＋Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺｅｎｇＨｕｉ・Ｃａｉ，Ｐｈ．Ｄ。ＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｅ—ｍａｉｈｚｈｃ０８１＠１２６．ｃｏｒｎ
１１７
地衣芽孢杆菌菌株鉴定和生化特征的研究
作者：作者单位：
黄福祥， 马建彬， 朱西儒， 谢小保
黄福祥,马建彬,朱西儒(广州大学生化学院生物系)， 谢小保(广东省微生物研究所)
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第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
会论文集，１９９９，２７页
［５］冯建国，陶训，张安盛等．利用人工卵繁殖的螟黄赤眼蜂防治棉铃虫研究．中国生物防治，１９９７．１３（１）
６—８
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黄福祥１马建彬１朱西儒１谢小保２
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ｔｈｅＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳｐｅｃｉｅａｎｄｔｈｅＣｈａｒａｃｔｅｒｅｓ
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ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ
ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５１０４０５：２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｉｒｏｂｉｏｌｏｇｙｉｎＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ）
Ａｂｓｔｒｕｃｔ：Ｔｈｅ
ｉｄａｎｄｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ｗｈｉｃｈｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｏｉｌｇｒｏｗｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｄｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅ
１６＇
ｆｉｅｌｄ．ｗｅ∞ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｂｅｃａｕｓｅｔｈｅｙｗｅｒｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｗｉｔｈｓｐｅｃｉｅｓｏｆ
ｂａｎａｎａＢａｎａｍ（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐｐ）Ｎｏ．８’ａｎｄ
ａｍｏｎｇ２３ｓｐｅｃｉｅｓｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ，ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ∞ｔＯＬｉｃｈｅｎｉｆｏｙｍｉｓｓｐｐｂｙｏｂｓｅｒｖｉｎｇｔｈｅｐｈｏｍａｎｄｔｈｅ
ＧｌａｍＳｔａｉｎａｎｄｓｐｅｒｍｓｐｏｒｅｓｏ０１１．Ｎｏ．８’．ａｉｉｃｗｓｐｅｃｉｅ
ｂｉｏ—ｃｈｅｍｉｃｔｅｓｔｓ．ＴｈｅｍｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｙＷｅｌＴｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈ
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ｔｈｅｈｉｏ－ｃｈｅｍｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｓ
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ＫｅｙＷｏｒｄｓ：Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｙｍｉｓｓｐ
香蕉巴拿马病，是对香蕉危害最重要病害之一…。香蕉感染了这种病后，会导致大面积的死亡，农民只有把染病植株毁掉。该病菌是由土壤传播，在土中能潜伏７．１０年之久。当香蕉收到
大面积的感染时，只能改种别的作物。所以，每年都让农民受到很大的损失，特别是风味好，市场价格高的“粉蕉”，受害最为严重，一般发病率达到３５％左右¨１。
第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
迄今，还没有药能很好地抑制此病。有报导说，往后香蕉将可能难以大面积种植。我们从土壤中分离了２０多各菌株，对巴拿马病有抑制作用的颉抗菌。所以，有较大的发展前途，其中，有２个对此病有特别好的抑制作用，即：８号和１６号。因此，本文对这两种菌进行鉴定，明确其分类地位，以便进行大批量的生产。
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５０
进行菌种检
具体步骤：在培养基中，将被测的菌种制成菌悬液，接种反应板中的每个小管。培养期间，菌种会发生糖发酵产酸，导致ｐＨ值下降，指示剂的颜色变化。结果组成该菌株的生化图谱，并用作菌种鉴定。１．２。４生化指标测定
根据前人发现的地衣芽孢杆菌的形态和生化特性，对８号和１０号地衣芽孢杆菌进行相应的生化指标测定“１。
具体步骤如下：在牛肉膏蛋白胨培养基上，用８号和１０号菌株培养２４ｈ。然后，进行菌株的生长、产酸、水解、利用、分解等方面生化实验。
试验每一个处理，重复３次。
２
１材料与方法
１
１材料
１．１．１菌种
从来自广州市番禺区，东莞市等地的土壤中，分离对巴拿马病有较强抑制作用的８号和１０号颉抗菌。１．１．２培养基
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏３ｇ，蛋白胨
１０ｇ，ＮａＣＩ５
ｇ，水１
０００ｍｌ，ｐＨ７４－７．６．
１．１．３生化测试
由广东省微生物研究所提供。１．２方法
１．２．１培养基削备
牛肉膏蛋白胨培养基，分别在培养基上用“平板画线法“２１获得８号和１６号菌的单菌落。观察单菌落的形态和生长情况。ｌ－２．２菌体染色
在牛肉蠹蛋白胨培养基上，用８号和１０号菌株，均以２４ｈ和４８ｈ进行培养。培养２４ｈ后，进行“革兰氏染色。…；培养４８ｈ后，进行芽孢染色。最后，观察其菌体的形态特征。
１．２．３ＡＰＩ
５０
结果分析
用试验的８号和１６号菌株，与迄今为止发
现的“地衣芽孢杆菌”标准菌株进行生化特征的对比。
２．１菌种形态特征
２．１．１地衣芽孢杆菌８号菌种观察结果
经过单菌落分离和染色，该菌是“革兰氏阳性菌”，菌体均一，皆为长杆状，大小：长２—６．６ｋ（见图版１），有鞭毛，。产芽孢，芽孢中生（见图版２），一般单生。生长温度范围广，最低２５℃，最高达５０℃，是属于芽孢杆菌。
ＣＨＢ”’检测
根据对８号和１０号细菌的单菌落、革兰氏染色和芽孢染色的观察。初步确定为“地衣芽孢
１１２
第三届令国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
图版１地衣芽孢杆菌８号菌营养体（１００Ｘ）２．１．２单菌落特征
侄３７℃，牛肉膏蛋白瞧培养基中，培养２４ｈ，菌落呈圆形，边缘剧齿状，表面非粘稠状，菌落较小，直径２—３ｍｍ
２．１．３
１
图版２地衣芽孢杆菌８号菌芽孢形态（１００Ｘ）
经过单菌落培养分离，该菌旱革兰氏阳性菌，菌体均一，皆为长杆状，菌长－４¨，（见图版３），一般单生，产鞭毛，。产芽孢，芽孢中生（见图版４）。生长温度广，最低２５℃，最高达５５℃。可能是一株芽孢杆菌。
６号菌种观察结果
图版３
１
６号菌营养体（１００
Ｘ）
图版４１６号菌芽孢形态（１００
ｘ）
２．１．４单菌落特征
在３７。Ｃ，牛肉膏蛋白胨培养基中，培养２４ｈ，菌落呈圆剧齿状，表面湿润有光泽和大量的黏液，菌落大，直径４－５ｒａｍ
２
根据对８号和１６号细菌的单菌落、革兰氏染色和芽孢染色的观察。初步确定为芽孢杆菌，进一步用：ＡＰＩ
１）。
５０
ＣＨＢ进行菌种检测（见表
２ＡＰＩ５０
ＣＨＢ进行菌种检测
表１
ＡＰｌ５０
ＣＨＢ检测列表
空白甘油
七叶灵
柳酵纤维二糖麦芽糖
乳糖
赤藓醇Ｄ一啊啦伯糖Ｌ一阿拉伯糖
核糖Ｄ一木糖Ｌ一木糖阿东醇Ｂ甲基－Ｄ一木糖半乳糖葡萄糖果糖甘露耱山梨糖鼠梨糖
卫矛醇
一
一
蜜二糖蔗糖海藻菊糖松三糖绵子糖淀粉糖原木糖醇龙胆二糖Ｄ一松二糖Ｄ来苏糖Ｄ一塔格糖Ｄ一岩糖Ｌ一岩糖
十＋
＋＋
＋十
一＋
一
一
＋
十／一
＋
＋＋
＋＋
＋
十
＋十＋
＋
＋
一
＋／一
一
一／＋一／十
一
一一
＋＋
一
一
肌醇甘露醇山梨醇
＋
＋一
＋＋一
一
＋＋一
一
！二里薹二望二笪墨楚蔓二
二
望二堕蕉竖
二二
＋＋表示有反应～表示没反应＋／一表示反应以有为主一／＋表示反应以无为主
用以上结果，组成该菌株的生化图谱，并用来鉴定得出８号和１６号是地衣芽孢杆菌。２．３地衣芽孢菌生化特性
根据地衣芽孢菌的基本的生化特征”１进行相关的生化试验”１，对８号和１０号两种地衣芽孢杆菌的一些生化特性进行比较（见表２）：
表２地衣芽孢茵的一些生化特性比较
名称８号革兰氏反应运动性接触酶厌氧生长ＶＰ反应
ＶＰ培养液中的ｐＨ值最低生长温度Ｃ最高生长温度。Ｃ卵黄反应溶酶菌中
＋＋
１６号
＋
名称８号葡萄糖阿拉伯糖木糖甘露醇水解淀粉
水解马屎酸盐（４周）利用柠檬酸盐利用丙酸盐从Ｎ０３产生Ｎ０２分解酪素
一
１６号
＋
＋＋＋
＋＋
＋＋＋
＋＋
＋
＂
坫
％
坫
＋
∞
一
船
．
＋
＋
．．
＋
１１４
７％ＮａＣｌｐｌｑ５．７
＋－ｉ－
分解酪氨酸
＋＋
ｏ．０２㈣
一
一
＋＋表示有反应～表示没反应＋／一表示反应以有为主一／＋表示反应蚪无为主
从上面两种地衣芽孢的形态结构和生化特性的比较得出：，两种菌虽同属地衣芽孢杆菌，但其单菌落的特征明显不同，其单个菌体的长度也有所不同。而生化特征除了生长范围和ＶＰ培养液中的ｐＨ值不同外，其他的生化特性都相同。
２
同，８号菌只有生长的最高温度和ＶＰ培养液中的ｐＨ值与其他的地衣芽孢杆菌有所不同外，其他的大部分相同。１６号菌与１０２、６５９８、８０４８、９２５９、９７８９、９９４５、１２１３９、１３４３８号菌基本相同很可能是同种。因数据有Ｂ艮要进行进一步的实验。
２．４．２鉴定菌种与模式菌种的比较
本研究菌种与褚西宁等（１９９１）”分离了一株芽孢杆菌相比较，结果见４：
４两种地衣芽孢杆菌８号和１０号与模式菌种
的比较
２．４．１生化特征的比较
把８号和１０号地衣芽孢杆菌，与１
９８３
年以前的发现的２１种地衣芽孢“１进行一系列生化特征的比较（见表３）。
从表３中可看出：８号１６号两种地衣芽孢杆菌和２１种地衣芽孢杆菌的生化特征大部分相
表３地衣芽孢杆菌待鉴定菌种与模式菌株生化特征的对啦
。¨６
＋
＋．＋
＋＋
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．
＋
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．
＋
＋
一
＋＋＋＋
一
＋十
－
＋＋＋＋
一
＋＋
－
＋＋＋＋
－
＋
十
ｕ
第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
ｔ
２１种苗都能在葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇产酸。都能水解淀粉。不能水解马尿酸盐。都能利用柠檬酸
钠，丙酸盐都能从Ｎ０３产生Ｎ０２。都能分解酪素，不能分解酪氮酸。
麦§§墨猫）Ｑ呈地蠢莹孢ｊ至蕾§盎的比寝
琶拄曼
８号１６号
￡鉴
酋住古尘Ｉ些２
２－６．６２－４．０
生基垂廑ｌ蔓２
２５－５０２５－５５
差孢友式
中生中生
：
亡翌Ｌ酸
无无互
Ｚ：』：Ｑ２§：丝
＊ＣＫ～一产乳酸的芽孢杼菌，革兰氏染色均为阳性。
从表４可以看出：该产乳酸菌和８号和１６号的生长温度、大小和产乳酸都不同。因为没有该菌的样本，不能进一步的研究。所以，初步认为：该产乳酸菌和８号和１６号是不同的菌。
过查新证明，目前，尚未见有相同报道。由于时间关系，条件有限，不能做深入试验，其有待进一步的研究。
１６号菌也属于呈革兰氏阳性菌，菌体形状、产鞭毛，、产芽孢以及方式，同８号，但是，菌体长２－４ｒ晡１，生长温度广，最高达５５。Ｃ。是一株地衣芽孢杆菌。生化特征与以前报道的１０２、６５９８、８０４８、９２５９、９７８９、９９４５、１２１３９号菌基本相同，所以很可能是同一种。
从土壤中提取的８号和１
６号菌是地衣芽
２结论与讨论
被鉴定８号菌是革兰氏阳性菌，菌体均一，皆为长杆状，产芽孢，芽孢中生，长２－６．６１．ｔＭ一般单生，产鞭毛，生长温度广，最低２５。Ｃ，最高达５０℃是一株芽孢杆菌。生化特征与以前的发现的地衣芽孢杆菌大部分相同，但其生长温度，在ＶＰ培养液中的ｐＨ值，与以前报道的地衣芽孢杆菌有所不同。
所以，８号菌有可能是该属的一个新种。经
１１６
孢杆菌属。对香蕉的巴拿马病有很好的抑制作用，通过对这两种菌的形态特征的研究、分类地位的鉴定，使人们能更好的利用这两种菌，来控
第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会
制制香蕉巴拿马病，解决生产实际问题。
参考文献
【１］中国农作物病虫害编辑委员会编．中国农作物病虫害（下册）１９８１，北京：农业出版社．１８４９－－ｉ８５０［２］黄秀丽．微生物学实验指导．高等教育出版社，１９９９［３］赵斌，何绍江主编．微生物学实验．北京：科学出版社２００２
［４］ＢｉｏＭｅｒｉｅｖｘＩＤＥＮＹＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＳＵＳＣＥＰＴＩＢＩＬＩＴＹＴＥＳＴＩＮＧＡＰＩＡＴＢＳＹＳＴＥＭ
［５］戈登・海恩斯・帕格著．蔡秒英，刘津太，战立克译．芽孢杆菌属．北京：农业出版社１９８３［６］楮西宁，卫军，陈海波，刘东兴，袁滔著．微生物学通报．１９９１，１８（３）
茁二■磊鬲磊焉磊－
对广东省微生物研究所欧阳友、陈仪本老师指导，以及提供试验条件表示衷心感谢
放线菌ＬＡ５菌株产生的抗真菌抗生素的初步研究＋
曾会才＋邬国良余风玉李振华
（中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州５７１７３７）
摘要：对放线菌ＬＡ５菌株的抑菌谱进行了初步测定，结果表明：放线菌ＬＡ５菌株对辣椒疫霉菌Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ
ｃａｐｓｉｃｉ、稻瘟菌毋订ｃｕｌａｒｉａｇｒｉｓｅａ、香蕉炭疽菌Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｍｕｓａｅ、香蕉枯萎镰刀菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ、香蕉黑星病菌ＰｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａｍｕｓＢＪ＇ｕｍ和芒果炭疽菌Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ“ｏｅｏｓｐｏｒｉｏｄｌｅｓ等６种植物病原菌表现很强的抗菌活性，对茄子腐皮镶刀菌Ｆｕｓａ旷Ｊｕｍｓｏｌａｎｉ具有明显的抑效果；通过阳离子交换层析法对ＬＡ５菌株产生的抗生素进行了分离纯化，获得了抗生素ＬＡ５的结晶，理化性质测定结果表明，这种抗生索
属水溶性、弱虢眭抗生素，对光、热稳定，符合农药贮藏稳定性要求。
关键词：放线菌ＬＡ５菌株抑菌谱抗真菌抗生素
Ｔｅｓｔｉｎｇ
ｏｎ
Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ＳｐｅｃｔｒｕｍｏｆａｎｄＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ
Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ
ＺＥＮＧ
ＡｅｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓＳｔｒａｉｎＬＡ５’
ＹＵＦｅｎｇ－Ｙｕ
ＬＩＺｈｅｎｇ—Ｈｕａ
Ｈｕｉ・Ｃａｉ’ＷＵ
Ｇｕｏ－ｌｉａｎｇ
Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＶｉｃｅＰｒｏＬＺｅｎｇＨｕｉｃａｉ
＋基金项目：中国热带农业科学院科技基金重点支助项目。
＋作者简介：曾会才（１９６４一）＇男，博士，副研究员，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｃ０８１＠１２６．ＣＯＩＴＩ。
＋ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅｓｅｉｅｎｃｃａｎｄＴｃｃｈｎｏｌｏｇｙＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ．
＋Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺｅｎｇＨｕｉ・Ｃａｉ，Ｐｈ．Ｄ。ＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｅ—ｍａｉｈｚｈｃ０８１＠１２６．ｃｏｒｎ
１１７
地衣芽孢杆菌菌株鉴定和生化特征的研究
作者：作者单位：
黄福祥， 马建彬， 朱西儒， 谢小保
黄福祥,马建彬,朱西儒(广州大学生化学院生物系)， 谢小保(广东省微生物研究所)
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