植物一氧化氮(NO)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 15µmol/L -400µmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关样本中一氧化氮(NO)含量。 实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物一氧化氮(NO)水平。用纯化的植物一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物一氧化氮(NO)浓度。 试剂盒组成 1 2 3 4 5 6
30倍浓缩洗涤液 酶标试剂 酶标包被板 样品稀释液 显色剂A 液 显色剂B 液
20ml ×1瓶 6ml ×1瓶 12孔×8条 6ml ×1瓶 6ml ×1瓶 6ml ×1/瓶
7 8 9 10 11 12
终止液 标准品稀释液 说明书 封板膜 密封袋
6ml ×1瓶 1.5ml ×1瓶 1份 2张 1个
标准品（800µmol/L） 0.5ml ×1瓶
96T
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。 操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。 400µmol/L 200µmol/L 100µmol/L 50µmol/L 25µmol/L
5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品
150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。 操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。 注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月
植物一氧化氮(NO)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 15µmol/L -400µmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关样本中一氧化氮(NO)含量。 实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物一氧化氮(NO)水平。用纯化的植物一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物一氧化氮(NO)浓度。 试剂盒组成 1 2 3 4 5 6
30倍浓缩洗涤液 酶标试剂 酶标包被板 样品稀释液 显色剂A 液 显色剂B 液
20ml ×1瓶 6ml ×1瓶 12孔×8条 6ml ×1瓶 6ml ×1瓶 6ml ×1/瓶
7 8 9 10 11 12
终止液 标准品稀释液 说明书 封板膜 密封袋
6ml ×1瓶 1.5ml ×1瓶 1份 2张 1个
标准品（800µmol/L） 0.5ml ×1瓶
96T
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。 操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。 400µmol/L 200µmol/L 100µmol/L 50µmol/L 25µmol/L
5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品
150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液 150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。 操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。 注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月