双向电泳(two-dimensional electrophoresis):
一种平板电泳技术,样品各组分先在第一方向分离(对蛋白质常用等电聚焦法),然后在与第一方向成90的第二方向作电泳分离(常用聚丙烯酰胺凝胶电泳法),是蛋白质组学中的重要研究手段之一。下面简单介绍下我们的双向电泳技术服务流程:
双向电泳技术服务流程:
1. 预实验:客户先提供一定的样本,我公司技术人员提取蛋白后先做1张银染的双向电泳胶(24cm)用于观察和优化实验,客户如对预实验结果满意,方可继续进行实验,预实验胶仍然按常规标准收费;如对预实验不满意,则可放弃实验,我公司不收取任何费用; 2. 签订合同,寄送发票,支付预付款(预实验费用+跑胶费用的一半); 3. 正式实验:保证与预实验的效果相当。
4. 差异点分析:我公司免费为客户作一次差异点分析(例如有5组样本,我公司负责做5组免费分析,其余每组分析收费300元)。
5. 提交给客户带有水印的实验结果图,以便于评估实验效果。寄送发票,客户需支付剩余的跑胶费用以及质谱鉴定预付款(鉴定费用的一半)。 6. 我公司提交全部的双向电泳图及蛋白差异分析图。
7. 挖点酶切:客户可从所有的差异点中自主选择感兴趣的点进行后续鉴定。由于银染胶的上样量很低,不利于鉴定,因此建议客户再做2张考染胶用于质谱鉴定,如果样本数很多,也可能需要增加鉴定胶的数目,具体情况可协商确定。
8. 质谱鉴定:质谱仪型号为Autoflex speed MALDI-TOF-TOF(Bruker Dalton),扫描质量范围为700-3200Da。
9. 蛋白检索:免费为客户进行串联质谱数据的蛋白质数据库检索,软件为Mascot。根据是否有蛋白超过软件本身给定的阈值,来判断鉴定成功与否,鉴定不成功的点不收费(有检索结果的模板可供参考)。
10. 统计鉴定成功斑点的个数,寄送发票,客户需支付质谱鉴定余款; 11. 收到全款后,我公司会提交全部的实验数据和实验报告。
12. 售后服务:如客户在论文写作过程中碰到任何技术问题,可咨询我公司技术人员。
双向电泳实验流程:
1. 蛋白提取和纯化; 2. 蛋白定量:Bradford法; 3. IEF上样; 4. 干胶条泡胀;
5. 等电聚焦:等电聚焦仪(GE ETTAN IPGPHOR3); 6. 胶条保存;
7. SDS-PAGE灌胶:胶的规格为24cm长×19cm高×1mm厚; 8. 胶条平衡;
9. 二向垂直电泳:电泳槽GE ETTAN DALTsix; 10. 染色;
11. 扫描:扫描仪UMAX Powerlook1100,扫描模式为256灰阶透视扫描,分辨率为150dpi; 12. 图像分析:分析软件为ImageMaster 2D platinum 5.0(GE); 13. 质谱前处理;
14. 质谱检测:Autoflex speed MALDI-TOF-TOF(Bruker Dalton),UV波长为355nm,重复速率为200HZ,加速电压为20000V,最优质量分辨率为1500Da,质量范围为700-3200Da;
15. 数据库检索:利用Matrixscience公司的Mascot软件。
送样注意事项:
1. 干冰或低温冰箱降温速度缓慢,样本直接放进冰箱或干冰中容易引起降解。从活体上取下来的组织应在15min内用液氮浸没迅速降温,样本(尤其是内脏组织)不要在生理盐水中过久地漂洗。一些极易降解的组织(如胰腺)应在尽可能短的时间内放入液氮。彻底冷冻后的样本再转移到其他保存环境中。
2. 样本量:每组至少准备500mg组织,对于蛋白含量较低的组织,应适当增加送样量。
样本运输:
1. 运输条件
若寄送的样本为组织、细胞、细菌或蛋白溶液等,应封存好后用干冰中运输。注意干冰一定足量,样本要深埋,并封紧冰盒,以免干冰挥发过快导致样本解冻、蛋白降解。
2. 标记清楚
样本一定要做好标记,应用油性防冻记号笔或标签纸在管上注明样本名称或编号、收集时间等,再用一层透明胶带封好,以免有机溶剂模糊字迹或标签纸掉落。尽可能简化标记、方便区分和识别。 3. 样本封存
放置样本的EP管应用封口膜封紧,用装在密实封口袋中,防止样本泄露。如样本过多需要用到多个封口袋,最好在封口袋上也写明装入本袋的样本名称或编号,便于技术人员识别和保存。
希望以上信息对大家有帮助,感谢阅读,祝实验顺利!
双向电泳(two-dimensional electrophoresis):
一种平板电泳技术,样品各组分先在第一方向分离(对蛋白质常用等电聚焦法),然后在与第一方向成90的第二方向作电泳分离(常用聚丙烯酰胺凝胶电泳法),是蛋白质组学中的重要研究手段之一。下面简单介绍下我们的双向电泳技术服务流程:
双向电泳技术服务流程:
1. 预实验:客户先提供一定的样本,我公司技术人员提取蛋白后先做1张银染的双向电泳胶(24cm)用于观察和优化实验,客户如对预实验结果满意,方可继续进行实验,预实验胶仍然按常规标准收费;如对预实验不满意,则可放弃实验,我公司不收取任何费用; 2. 签订合同,寄送发票,支付预付款(预实验费用+跑胶费用的一半); 3. 正式实验:保证与预实验的效果相当。
4. 差异点分析:我公司免费为客户作一次差异点分析(例如有5组样本,我公司负责做5组免费分析,其余每组分析收费300元)。
5. 提交给客户带有水印的实验结果图,以便于评估实验效果。寄送发票,客户需支付剩余的跑胶费用以及质谱鉴定预付款(鉴定费用的一半)。 6. 我公司提交全部的双向电泳图及蛋白差异分析图。
7. 挖点酶切:客户可从所有的差异点中自主选择感兴趣的点进行后续鉴定。由于银染胶的上样量很低,不利于鉴定,因此建议客户再做2张考染胶用于质谱鉴定,如果样本数很多,也可能需要增加鉴定胶的数目,具体情况可协商确定。
8. 质谱鉴定:质谱仪型号为Autoflex speed MALDI-TOF-TOF(Bruker Dalton),扫描质量范围为700-3200Da。
9. 蛋白检索:免费为客户进行串联质谱数据的蛋白质数据库检索,软件为Mascot。根据是否有蛋白超过软件本身给定的阈值,来判断鉴定成功与否,鉴定不成功的点不收费(有检索结果的模板可供参考)。
10. 统计鉴定成功斑点的个数,寄送发票,客户需支付质谱鉴定余款; 11. 收到全款后,我公司会提交全部的实验数据和实验报告。
12. 售后服务:如客户在论文写作过程中碰到任何技术问题,可咨询我公司技术人员。
双向电泳实验流程:
1. 蛋白提取和纯化; 2. 蛋白定量:Bradford法; 3. IEF上样; 4. 干胶条泡胀;
5. 等电聚焦:等电聚焦仪(GE ETTAN IPGPHOR3); 6. 胶条保存;
7. SDS-PAGE灌胶:胶的规格为24cm长×19cm高×1mm厚; 8. 胶条平衡;
9. 二向垂直电泳:电泳槽GE ETTAN DALTsix; 10. 染色;
11. 扫描:扫描仪UMAX Powerlook1100,扫描模式为256灰阶透视扫描,分辨率为150dpi; 12. 图像分析:分析软件为ImageMaster 2D platinum 5.0(GE); 13. 质谱前处理;
14. 质谱检测:Autoflex speed MALDI-TOF-TOF(Bruker Dalton),UV波长为355nm,重复速率为200HZ,加速电压为20000V,最优质量分辨率为1500Da,质量范围为700-3200Da;
15. 数据库检索:利用Matrixscience公司的Mascot软件。
送样注意事项:
1. 干冰或低温冰箱降温速度缓慢,样本直接放进冰箱或干冰中容易引起降解。从活体上取下来的组织应在15min内用液氮浸没迅速降温,样本(尤其是内脏组织)不要在生理盐水中过久地漂洗。一些极易降解的组织(如胰腺)应在尽可能短的时间内放入液氮。彻底冷冻后的样本再转移到其他保存环境中。
2. 样本量:每组至少准备500mg组织,对于蛋白含量较低的组织,应适当增加送样量。
样本运输:
1. 运输条件
若寄送的样本为组织、细胞、细菌或蛋白溶液等,应封存好后用干冰中运输。注意干冰一定足量,样本要深埋,并封紧冰盒,以免干冰挥发过快导致样本解冻、蛋白降解。
2. 标记清楚
样本一定要做好标记,应用油性防冻记号笔或标签纸在管上注明样本名称或编号、收集时间等,再用一层透明胶带封好,以免有机溶剂模糊字迹或标签纸掉落。尽可能简化标记、方便区分和识别。 3. 样本封存
放置样本的EP管应用封口膜封紧,用装在密实封口袋中,防止样本泄露。如样本过多需要用到多个封口袋,最好在封口袋上也写明装入本袋的样本名称或编号,便于技术人员识别和保存。
希望以上信息对大家有帮助,感谢阅读,祝实验顺利!