属植物除具有极高的观赏价值外

第24卷第9期　　2005年9月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　　　Vol124No19　Sep.　

2005

淡黄花百合的组织培养

李　黛　谈　锋　祝顺琴

(11遵义师范学院生物系　贵州遵义　563002;21西南师范大学生命科学学院　重庆　400715)

摘要:采用正交试验的方法,在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、62BA(62苄基腺嘌呤)及NAA(α2奈乙酸)对淡黄花百合芽增殖和愈伤组织生长的影响,结果表明:芽增殖的最佳培养基为MS+015ppm62BA+015ppmNAA+4%蔗糖。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+015ppm62BA+1ppmNAA+3%蔗糖。关键词　淡黄花百合　芽增殖　愈伤组织　正交试验

1

2

2

TissueCultureofLiliumsulphureumBaker

LiDai　TanFeng　ZhuShunqin

1

2

2

(11Dept.ofBiology,ZunyiNormalCollege,Zunyi　563002,

21CollegeofLifeScienceSouthwestChinaNormalUniversity,)

Abstract:Usingthemethodoforthogonalexperiment,wedensityofsucrose,62BAandNAAonthebudandcallusgrowthofMSsolidmedium1TheresultshowsthatThebestmediumofbudgr+015+015ppmNAA+4%sucrose1Thebestmediumofcallusgrowth+3%sucrose1

Keywords　LBaker　Budgrowth　CallusOrthogonalexperiment

随着社会的进步,人民生活水平的提高及对健康的重视,开发未病先防的保健产品成为一种发展趋势。百合属植物除具有极高的观赏价值外,还具食用价值,是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物,不仅临床上有着广泛的应用,而且作为加工保健产品的原料也极具开发前景。20世纪90年代以来,我国开发了多种百合饮料和百合粉

[1]

。淡黄花百合(LiliumsulphureumBaker)作为一个药食两用的野生种,为多年生宿根草本植物,产于贵

[2～7]

州省,是百合开发的重要资源,由于百合组织培养繁殖与传统繁殖方法相比具有节省用种量、繁殖速度快、减少病害等优点,目前对百合组培快繁研究较多淡黄花百合组培技术的研究。

,但对药食两用品种淡黄花百合的研究尚未见报道,本文介绍了对

1　材料与方法

111　材料

淡黄花百合(LiliumsulphureumBaker)采自贵州务川县野生林下,在西南师范大学生命科学院药用植物园地内盆栽于紫色壤土中。将鳞茎用自来水冲洗干净、分瓣,在自来水下流水冲洗30min左右,于超净工作台上用75%的酒精浸泡10s左右,然后用011%的升汞消毒15min,无菌水冲洗5次以上。切去鳞片上部,留下长约1cm的中下部,将其接种在pH值为518的MS+015mg/L62BA+1mg/LNAA+3%蔗糖固体培养基中,每瓶接种

一个切段,在温度为25℃,光照强度为1200lx,照光时间为12h/d的条件下培养,36d后可获得无菌丛生芽和愈伤组织。将所得的愈伤组织和不定芽分别接种到MS+015mg/L62BA+015mg/LNAA+3%蔗糖的培养基中扩繁,即可获得供试材料。

收稿日期:2005205229。

作者简介:李黛(19622),女,副教授;主要从事植物生理研究工作。

・27・

第24卷第9期　　2005年9月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　　　Vol124No19　Sep.　2005

112　方法

表1　L9(3)4正交试验

水平

A:62BA(mg/L)

B:NAA(mg/L)

[***********]010011015

C:蔗糖(g/L)

234345234

(空列)

采用正交试验筛选不定芽增殖及愈伤组织增殖和分化的最佳培养基。所用基本培养基均为MS培养基,正交实验采用L9(3)正交表,62BA、NAA、蔗糖浓度三因素三水平的试验设计见表1,D因素作为空列。

将上述供试材料按正交试验方案进行增殖和分化试验。芽增殖试验是将扩繁后的不定芽接到芽增殖培养基中,每瓶2株,每组20个重复,培养40d;愈伤组织增殖试验是将扩繁后的愈

4

因　　子

芽增殖

123

[***********]015110210

愈伤组织增殖

123

芽分化

123

伤组织接到愈伤组织增殖培养基中,每瓶接015cm见方的愈伤组织一块,每组10个重复,培养40d。培养前后用电子

表2L94组号

123456789K1K2K3

[***********][**************]77

天平分别称重计算愈伤组织质量,得出愈伤组织增重(mg/d・g・FW)。芽分分化培养基中,伤组织2块,,后统计分化出的芽数。

芽增殖、愈伤组织增殖和分化的培养条件与鳞片的芽诱导相同。

3

因子

[***********][**************]67

[***********]

[***********]

芽增殖总数

[***********]7

增殖总数

[***********][***********]

2　结果与分析

211　芽增殖试验结果与分析

淡黄花百合芽增殖正交试验

4

L9(3)结果见表2。对表2的结果进行

表3　芽增殖试验结果的方差分析

方差来源

ABCe

方差分析,结果见表3。

表2、表3显示:62BA浓度的差异对淡黄花百合芽增殖的效果以015mg/L为最好,差异达极显著水平,NAA和

偏差平方和

[***********]188

自由度

222173

平均偏差平方和

[***********]4

F值71923

3

F01053111

F01014188

4161341113

蔗糖浓度的效果则分别以015mg/L和　　注:34%为最好,差异均达显著水平。正交

显著;33极显著。

实验中,第5组培养基中增殖的芽较多,生长较好(见图1),此外,从K值看出,蔗糖浓度为3%时效果也较好,因此,淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应为:MS+015mg/L62BA+015mg/L

NAA+3%蔗糖。

・28・

第24卷第9期　　2005年9月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　　　Vol124No19　Sep.　2005

212　愈伤组织增殖和芽分化实验结果与分析21211　愈伤组织增殖实验

表4　愈伤组织增殖L9(3)4试验结果

组号

A

123456789

[***********]110110110

淡黄花百合愈伤组织增殖正交试验L9(3)结果见表4。

4

因子

B[***********]015110210

C345453534

平均接种量

(mg)[***********][***********]061112418

每天平均增重

(mg/d・g・W)

[***********][***********][**************]47

对表4试验结果进行方差分析表明,62BA浓度间、NAA浓度间和蔗糖浓度间的差异不显著,对实验结果进行直观分析,结果见表5。

由表3进行直观分析可知,62BA浓度对愈伤组织增生的影响以015mg/L为最好,NAA以1mg/L为最好,蔗糖以4%为最好,但和3%的差异不大,三个因素对淡黄花百合愈伤

组织增殖影响的大小顺序为:NAA、蔗糖、62BA。由此可知,愈伤组织增生的最适培养基

表5　淡黄花百合愈伤组织增殖实验结果的直观分析

因素和

62BA

K1K2K[**************]NAA[**************]

愈伤组织每天平均增重(mg/d・g・W)

蔗糖

[***********]101911

为:MS+015mg/L62BA+1mg/LNAA+4%蔗糖。图2是在2号培养基中增殖良好的愈伤组织。

21212　芽分化实验结果与分析

由表6可知,,62BA浓度以1mg/L最好,以0mg/L最好,蔗糖3%～4%均可,但每块愈伤组织分化出的平均

组号

A

123456789

K1K2K3

[***********][***********]142

表6　芽分化L9(3)4试验结果

因　　子

B[***********][***********]100

C[***********]129

接种的愈伤组织块数

[***********]

分化出的每块愈伤组织

芽总数分化出的平均芽数

[1**********]3

[***********][***********]

芽数不多,最高的仅有1171个,因此,诱导愈伤组织分化芽的最适培养基还有待进一步研究。

213　壮苗及组培苗移栽

将芽增殖所得的不定芽转接在MS+1mg/L62BA+015mg/LNAA+3%蔗糖的培

养基中,10d左右鳞茎开始膨大,20d左右形成较大的鳞茎,芽也生长得较为健壮,移栽后较易存活且生长良好。

参考文献

1　杨林莎,孙艳红,方晓艳1中药百合的研究进展.河南中医药学刊,2002,17(1):74～751

2　安利民,杨红燕,李惠芝等1利用组织培养对秦岭百合属植物的保种繁殖研究.西北植物学报,1996,16(5):5～713　阮少宁,杨华,梁一池等1香水百合组织培养的试验研究.福建林学院学报,2001,21(2):142～14514　李标,胡琼华,何显静1紫红花滇百合的组织培养.植物生理学通讯,2002,38(2):4015　庄志鸿,刘建1试管内形成东方百合鳞茎的组织培养.植物生理学通讯,2002,38(2):401

6　吕玉虎,李彬青

,吴淑平等1百合的离体组织培养和快速繁殖.信阳农业高等专科学校学报,2002,12(2)1

7　王刚,杜捷,李桂英等1兰州百合和野百合组织培养及快速繁殖研究.西北师范大学学报(自然科学版),2002,38(1):69～711

・29・

第24卷第9期　　2005年9月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　　　Vol124No19　Sep.　

2005

淡黄花百合的组织培养

李　黛　谈　锋　祝顺琴

(11遵义师范学院生物系　贵州遵义　563002;21西南师范大学生命科学学院　重庆　400715)

摘要:采用正交试验的方法,在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、62BA(62苄基腺嘌呤)及NAA(α2奈乙酸)对淡黄花百合芽增殖和愈伤组织生长的影响,结果表明:芽增殖的最佳培养基为MS+015ppm62BA+015ppmNAA+4%蔗糖。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+015ppm62BA+1ppmNAA+3%蔗糖。关键词　淡黄花百合　芽增殖　愈伤组织　正交试验

1

2

2

TissueCultureofLiliumsulphureumBaker

LiDai　TanFeng　ZhuShunqin

1

2

2

(11Dept.ofBiology,ZunyiNormalCollege,Zunyi　563002,

21CollegeofLifeScienceSouthwestChinaNormalUniversity,)

Abstract:Usingthemethodoforthogonalexperiment,wedensityofsucrose,62BAandNAAonthebudandcallusgrowthofMSsolidmedium1TheresultshowsthatThebestmediumofbudgr+015+015ppmNAA+4%sucrose1Thebestmediumofcallusgrowth+3%sucrose1

Keywords　LBaker　Budgrowth　CallusOrthogonalexperiment

随着社会的进步,人民生活水平的提高及对健康的重视,开发未病先防的保健产品成为一种发展趋势。百合属植物除具有极高的观赏价值外,还具食用价值,是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物,不仅临床上有着广泛的应用,而且作为加工保健产品的原料也极具开发前景。20世纪90年代以来,我国开发了多种百合饮料和百合粉

[1]

。淡黄花百合(LiliumsulphureumBaker)作为一个药食两用的野生种,为多年生宿根草本植物,产于贵

[2～7]

州省,是百合开发的重要资源,由于百合组织培养繁殖与传统繁殖方法相比具有节省用种量、繁殖速度快、减少病害等优点,目前对百合组培快繁研究较多淡黄花百合组培技术的研究。

,但对药食两用品种淡黄花百合的研究尚未见报道,本文介绍了对

1　材料与方法

111　材料

淡黄花百合(LiliumsulphureumBaker)采自贵州务川县野生林下,在西南师范大学生命科学院药用植物园地内盆栽于紫色壤土中。将鳞茎用自来水冲洗干净、分瓣,在自来水下流水冲洗30min左右,于超净工作台上用75%的酒精浸泡10s左右,然后用011%的升汞消毒15min,无菌水冲洗5次以上。切去鳞片上部,留下长约1cm的中下部,将其接种在pH值为518的MS+015mg/L62BA+1mg/LNAA+3%蔗糖固体培养基中,每瓶接种

一个切段,在温度为25℃,光照强度为1200lx,照光时间为12h/d的条件下培养,36d后可获得无菌丛生芽和愈伤组织。将所得的愈伤组织和不定芽分别接种到MS+015mg/L62BA+015mg/LNAA+3%蔗糖的培养基中扩繁,即可获得供试材料。

收稿日期:2005205229。

作者简介:李黛(19622),女,副教授;主要从事植物生理研究工作。

・27・

第24卷第9期　　2005年9月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　　　Vol124No19　Sep.　2005

112　方法

表1　L9(3)4正交试验

水平

A:62BA(mg/L)

B:NAA(mg/L)

[***********]010011015

C:蔗糖(g/L)

234345234

(空列)

采用正交试验筛选不定芽增殖及愈伤组织增殖和分化的最佳培养基。所用基本培养基均为MS培养基,正交实验采用L9(3)正交表,62BA、NAA、蔗糖浓度三因素三水平的试验设计见表1,D因素作为空列。

将上述供试材料按正交试验方案进行增殖和分化试验。芽增殖试验是将扩繁后的不定芽接到芽增殖培养基中,每瓶2株,每组20个重复,培养40d;愈伤组织增殖试验是将扩繁后的愈

4

因　　子

芽增殖

123

[***********]015110210

愈伤组织增殖

123

芽分化

123

伤组织接到愈伤组织增殖培养基中,每瓶接015cm见方的愈伤组织一块,每组10个重复,培养40d。培养前后用电子

表2L94组号

123456789K1K2K3

[***********][**************]77

天平分别称重计算愈伤组织质量,得出愈伤组织增重(mg/d・g・FW)。芽分分化培养基中,伤组织2块,,后统计分化出的芽数。

芽增殖、愈伤组织增殖和分化的培养条件与鳞片的芽诱导相同。

3

因子

[***********][**************]67

[***********]

[***********]

芽增殖总数

[***********]7

增殖总数

[***********][***********]

2　结果与分析

211　芽增殖试验结果与分析

淡黄花百合芽增殖正交试验

4

L9(3)结果见表2。对表2的结果进行

表3　芽增殖试验结果的方差分析

方差来源

ABCe

方差分析,结果见表3。

表2、表3显示:62BA浓度的差异对淡黄花百合芽增殖的效果以015mg/L为最好,差异达极显著水平,NAA和

偏差平方和

[***********]188

自由度

222173

平均偏差平方和

[***********]4

F值71923

3

F01053111

F01014188

4161341113

蔗糖浓度的效果则分别以015mg/L和　　注:34%为最好,差异均达显著水平。正交

显著;33极显著。

实验中,第5组培养基中增殖的芽较多,生长较好(见图1),此外,从K值看出,蔗糖浓度为3%时效果也较好,因此,淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应为:MS+015mg/L62BA+015mg/L

NAA+3%蔗糖。

・28・

第24卷第9期　　2005年9月　　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　　　Vol124No19　Sep.　2005

212　愈伤组织增殖和芽分化实验结果与分析21211　愈伤组织增殖实验

表4　愈伤组织增殖L9(3)4试验结果

组号

A

123456789

[***********]110110110

淡黄花百合愈伤组织增殖正交试验L9(3)结果见表4。

4

因子

B[***********]015110210

C345453534

平均接种量

(mg)[***********][***********]061112418

每天平均增重

(mg/d・g・W)

[***********][***********][**************]47

对表4试验结果进行方差分析表明,62BA浓度间、NAA浓度间和蔗糖浓度间的差异不显著,对实验结果进行直观分析,结果见表5。

由表3进行直观分析可知,62BA浓度对愈伤组织增生的影响以015mg/L为最好,NAA以1mg/L为最好,蔗糖以4%为最好,但和3%的差异不大,三个因素对淡黄花百合愈伤

组织增殖影响的大小顺序为:NAA、蔗糖、62BA。由此可知,愈伤组织增生的最适培养基

表5　淡黄花百合愈伤组织增殖实验结果的直观分析

因素和

62BA

K1K2K[**************]NAA[**************]

愈伤组织每天平均增重(mg/d・g・W)

蔗糖

[***********]101911

为:MS+015mg/L62BA+1mg/LNAA+4%蔗糖。图2是在2号培养基中增殖良好的愈伤组织。

21212　芽分化实验结果与分析

由表6可知,,62BA浓度以1mg/L最好,以0mg/L最好,蔗糖3%～4%均可,但每块愈伤组织分化出的平均

组号

A

123456789

K1K2K3

[***********][***********]142

表6　芽分化L9(3)4试验结果

因　　子

B[***********][***********]100

C[***********]129

接种的愈伤组织块数

[***********]

分化出的每块愈伤组织

芽总数分化出的平均芽数

[1**********]3

[***********][***********]

芽数不多,最高的仅有1171个,因此,诱导愈伤组织分化芽的最适培养基还有待进一步研究。

213　壮苗及组培苗移栽

将芽增殖所得的不定芽转接在MS+1mg/L62BA+015mg/LNAA+3%蔗糖的培

养基中,10d左右鳞茎开始膨大,20d左右形成较大的鳞茎,芽也生长得较为健壮,移栽后较易存活且生长良好。

参考文献

1　杨林莎,孙艳红,方晓艳1中药百合的研究进展.河南中医药学刊,2002,17(1):74～751

2　安利民,杨红燕,李惠芝等1利用组织培养对秦岭百合属植物的保种繁殖研究.西北植物学报,1996,16(5):5～713　阮少宁,杨华,梁一池等1香水百合组织培养的试验研究.福建林学院学报,2001,21(2):142～14514　李标,胡琼华,何显静1紫红花滇百合的组织培养.植物生理学通讯,2002,38(2):4015　庄志鸿,刘建1试管内形成东方百合鳞茎的组织培养.植物生理学通讯,2002,38(2):401

6　吕玉虎,李彬青

,吴淑平等1百合的离体组织培养和快速繁殖.信阳农业高等专科学校学报,2002,12(2)1

7　王刚,杜捷,李桂英等1兰州百合和野百合组织培养及快速繁殖研究.西北师范大学学报(自然科学版),2002,38(1):69～711

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