濒危药用植物三叶青研究进展_钱丽华

2015，27（7）：1301－1308浙江农业学报Acta Agriculturae Zhejiangensis ，http ：//www．zjnyxb．cn

J ］．浙江农业学报，2015，27（7）：1301－1308．钱丽华，戴丹丽，姜慧燕，等．濒危药用植物三叶青研究进展［

DOI ：10. 3969/j．issn．1004－1524. 2015. 07. 30

濒危药用植物三叶青研究进展

1213

钱丽华，戴丹丽，姜慧燕，林蔚红

（

1

杭州市农业科学研究院实验中心，浙江杭州310024；2浙江省农业科学院科研与合作处，浙江杭州310021；3海宁市农业农村经济

信息中心，浙江海宁314400）

摘要：三叶青为中国特有的具有重要药用价值的植物。现代药理研究表明，三叶青具有较好的抗肿瘤活

性，黄酮类化合物是三叶青的主要组成成分和功效成分。在相关文献的基础上，从植物学、化学成分、毒理药理学、临床应用、人工栽培、生物技术等方面对三叶青在各个领域的研究成果进行了总结，并探讨了今后的研究方向，在保护濒危种质资源三叶青的同时，为合理开发与利用三叶青的药用价值提供科学依据。关键词：三叶青；黄酮类化合物；抗肿瘤；生物技术

+

中图分类号：S 567. 239；Ｒ285. 5

文献标志码：A 1524（2015）07-1301-08文章编号：1004-

Ｒesearchprogresses of the endangered medicinal plant Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg

QIAN Li-hua 1，DAI Dan-li 2，JIANG Hui-yan 1，LIN Wei-hong 3（

1

Testing Center ，Hangzhou Academy of Agricultural Sciences ，Hangzhou 310024，China ；

3

2

Cooperative Office of Sci-

entific Ｒesearch，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences ，Hangzhou 310021，China ；nomic Information Center of Haining ，Haining 314400，China ）

Agricultural and ＲuralEco-

Abstract ：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg is one of Chinese characteristics plants which has important medi-cal value．Modern pharmacological studies had shown that it had good antitumor activity ，and flavonoids were the ma-jor and functional components of Tetrastigma hemsleyanum ．This paper provided a detailed description of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg from botany ，chemical composition ，toxicology and pharmacology ，clinical applications ，artificial cultivation and biotechnology ，the future research directions of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg were also discussed ，which could offer scientific references for its rational utilization as medicine and appropriate protec-tion as endangered plant．

Key words ：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg ；flavonoids ；anti-tumor ；biotechnology

三叶青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et

Gilg ），中文学名为三叶崖爬藤，又名蛇附子、石抱子、石猴子、石老鼠、金线吊葫芦，药名为三叶青，是葡萄科崖爬藤属多年生蔓生藤本植物，为

［1］中国特有珍稀中药植物。《中国植物志》记

化痰的作用，临床上用于治疗病毒性脑膜炎、乙型脑炎、病毒性肺炎、黄疸性肝炎等，特别是块中根对小儿高烧有特效。20世纪90年代以来，国学者从三叶青中分离到了黄酮类化合物，经药理试验发现其具有抗肿瘤作用，引发了国内外学者的关注。

载三叶崖爬藤全株供药用，有活血散瘀、解毒、

11-05收稿日期：2014-基金项目：杭州市农业科研攻关项目（20130432B09）

mail ：menoy@hz．cn 作者简介：钱丽华（1975—），女，浙江淳安人，高级农艺师，从事植物生物技术研究。E-

近年来，由于人为过度采挖，三叶青已处于濒危状态，被列入了浙江省首批农作物种质资源保护名录品种。为更好地保护并开发利用好

从植物学、化学成分、毒理这一珍贵药材资源，

药理、临床应用、人工栽培和生物技术研究等方

面对三叶青进行了全面系统的阐述，以期为三叶青的系统深入研究及今后的开发应用提供参考。

三叶青主要分布于浙江、江西、福建、湖南、广西、贵州、云南、海南和台湾等地区，常生于山坡林下的灌丛中或山谷溪边林下的岩石缝中，生

其中紫藤三叶青分布于纬长海拔300 1300m ，

度37ʎ18' 以北的江西、浙江山区，属正宗品种，而

青色藤三叶青分布于中国纬度27ʎ18' 南面的福建、湖南、四川、广东、广西、云南的部分地区，二

［1］

者生长的地域界限分明，不混合生长。

1

1．1

三叶青的植物学研究

生物学特征

2化学成分

［3］

三叶青是葡萄科崖爬藤属多年生蔓生藤本

掌状复叶互生，叶为3小叶，小叶披针形、植物，

长椭圆披针形或卵披针形，长3 10cm ，宽1. 5 3cm ，顶端渐尖，基部楔形或圆形，侧生小叶近圆形，边缘每侧有4 6个锯齿，基部不对称，

锯齿细或有时较粗，两面均无毛；侧脉5 6对，网脉两面不明显，无毛；叶柄长2. 0 7. 5cm ，中央小叶柄长0. 5 1. 8cm ，侧生小叶柄较短，约0. 3 0. 5cm ，无毛或被疏柔毛。花序腋生，长1 5cm ，下部有节，节上有苞片，或假顶生而基部无节和苞片，二级分枝通常4个，集生成伞形，花二歧状，着生在分枝末端；花序梗长1. 2 2. 5cm ，被短柔毛；花梗长1. 0 2. 5mm ，通常

高1. 5 2mm ，顶被灰色短柔毛；花蕾卵圆形，

端圆形；萼碟形，萼齿细小，卵状三角形；花瓣4

片，卵圆形，高1. 3 1. 8mm ，顶端有小角，外4浅展，无毛；雄蕊4个，花药黄色；花盘明显，裂；子房陷在花盘中呈短圆锥状，花柱短，柱头4裂。果实近球形或倒卵球形，直径约0. 6cm ，有种子1颗；种子倒卵椭圆形，顶端微凹，基部圆钝，表面光滑，种脐在种子背面中部向上呈椭圆

腹面两侧洼穴呈沟状，从下部近1/4处向上形，

斜展直达种子顶端。花期为每年4—6月，果期

［1］

8—11月。

蹇京蓉报道三叶青有紫藤三叶青和青色藤三叶青2个品种，紫藤三叶青靠近根部藤的表皮颜色为紫褐色，青色藤三叶青藤的表面颜色为青白色，两者分布区域不同，但繁殖方式、生长习性相同，叶子和果实的外貌大致相同。1．2生态学特征

［2］

AbduL 就发现三叶早在20世纪80年代，

青叶中含有黄酮类、没食子酸和花青素类等成之后众多研究表明三叶青中含有黄酮类、氨分，

基酸类、萜类、强心苷类、甾体类、多糖类、有机酸

［4－5］

，类、挥发油和油脂以及丰富的微量元素并

分离到了单体化合物，累计分离并鉴定的化合物

已有52个（表1），其中5，7，4' 三羟基黄酮6-α-L 吡喃鼠李糖-（1-4）-L 吡喃阿拉伯糖甙和5，α-7，4' 三羟基黄酮-8-L 吡喃鼠李糖-（1-4）-L α-α-吡喃阿拉伯糖甙为三叶青中发现的新物质，分别被命名为崖爬藤甙和异崖爬藤甙，其是否为三叶青中重要的功能成分还没有确证，有待于今后进一步的研究。

鉴于黄酮类化合物的抗肿瘤活性，研究者以

采用热回流法、超声法和微三叶青饮片为材料，

波法，通过对乙醇浓度、料液比、提取时间、提取功率等条件的优化建立了各自的三叶青黄酮提

［13－17］

。刘江取工艺，提取率为0. 30% 0. 79%波等

筛选出了分离纯化三叶青黄酮效果较好

的树脂HPD826，建立了分离纯化工艺，纯化后产

［18］

物中三叶青总黄酮含量提高了2. 44倍。目前

［19］［20］

槲皮素和山奈酚已建立了三叶青总黄酮、

［21］

以及β-谷甾醇含量等的测定方法，方法重复

［22］

性、稳定性以及可操作性好；程林等还建立了

［18］

浙江省10个产地的三叶青HPLC 指纹图谱测定方法，为三叶青药材的质量控制提供了参考。付ICP-OES 同时测定三建立了微波消解-叶青中多种微量元素的分析方法。虽然对三叶金娥等

青黄酮类化合物的提取、纯化都有研究，但产业化提取工艺还不够成熟，需要进一步优化提取和纯化工艺。

［5］

表1

三叶青中分离并鉴定的化合物

Compounds isolated and identified from Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg

提取部位根地上部分地上部分

提取/萃取溶剂氯仿萃取石油醚萃取石油醚萃取氯仿萃取乙酸乙酯萃取正丁醇萃取

4

—

95%乙醇提取

化合物名称

6'-O-苯甲酰基胡萝卜甙、胡萝卜甙、β－谷甾醇蒲公英萜酮、蒲公英萜－谷醇、β甾醇、麦角甾醇α-香树脂醇、三十二酸水杨酸、丁二酸

7-O-L-3-O-D-山奈酚-β-吡喃鼠李糖-β-吡喃葡萄糖苷、没食子酸乙酯胡萝卜苷、环四谷胺肽甘露醇、

Table 1

序号123

参考文献［6］［7］［8］

5，7，4' 三羟基黄酮-6，8-2C-D 吡喃葡萄糖甙和5，7，4' 三羟基黄酮6-L 吡喃鼠李［9］β-α-（1-4）-L 吡喃阿拉伯糖甙（命名为崖爬藤甙）、5，7，4' 三羟基黄酮-8-L 吡喃鼠α-α-糖-（1-4）-L 吡喃阿拉伯糖甙（命名为异崖爬藤甙）α-李糖-3-O-β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素和山柰酚-新橙皮糖苷

［10］

2，3-6，10，14-2-11］樟脑、丁二醇、己酸、苯甲醇、苯乙醇、苯酚、三甲基-十五烷酮、异丙［苯、二苯胺、豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、补骨脂内酯、十七酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸甲酯

2-D-2羰基-D 葡萄糖酸、3，4-12］羟基苯甲酸、果糖、木酮糖、肉豆蔻酸（十四酸）、二羟基［

D-9，12-9，12，15-苯甲酸、葡萄糖、十六酸、十七酸、油酸、十八碳二烯酸、十九碳三烯

9，12，15-二十碳三烯酸、二十酸、棕榈酸、α-亚麻酸酸、

56

块根块根

乙酸乙酯萃取乙醚提取

7块根石油醚萃取

29［26］、Lewis 肺癌瘤株［27］、白血结肠癌细胞HT-

3

3．1

毒理药理学研究

三叶青的毒理学研究江月仙等

［23］

［28］］

HL60细胞［29］病K562、以及人宫颈癌细胞［30］

HeLa229［30］、人胃腺癌细胞株AGS 、人恶性［30］黑色素瘤细胞株A375、人膀胱癌细胞株

按《保健食品检验与评价技术5637［30］的凋亡试验结果相似；同时也有研究者发现三叶青对肿瘤细胞的体外抑制作用不但呈剂量依赖性，还与作用时间呈正相关量依赖性3．2．2

［34－36］

［31－33］

（2003版）中食品安全性毒理学评价试验，规范》

对三叶青进行了毒理学评价，发现大鼠急性经口各组试验大鼠及小试验和小鼠急性经口试验中，

鼠均未见明显症状，也无死亡，三叶青对雌雄大

－1

对雌雄小鼠经口LD 50均大于100g ·kg 体质量，－1

鼠经口LD 50均大于40g ·kg 体质量，按急性毒

；也

有研究发现三叶青提取物体外抑制作用不呈剂

。

保护肝脏

三叶青提取物能通过降低CCl 4所致小鼠急性肝损伤后血清中谷丙转氨酶（ALT ）、谷草转氨

酶（AST ）、碱性磷酸酶（ALP ）及丙二醛（MDA ）含提高超氧化物歧化酶（SOD ）活性，起到对急量，

80g ·kg －1的剂量用于临床性肝损伤的保护作用，治疗是安全的酯

［37］

［38］

性分级判定标准，属实际无毒；同时选用了组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌进行了Ames 试验，并采用环磷酰胺开展了小鼠骨髓细胞微核和小鼠精子畸形试验，结果均为阴性，说明三叶青未显示有致突变性。3．23．2．1

三叶青的药理学抗肿瘤

研究表明三叶青对多种肿瘤细胞株系均有一定的抑制生长或促进凋亡作用，且体外抑瘤作用大多呈剂量依赖性。冯正权等

［24］

，其效果强于或相当于联苯双

；张同远［39］还对CCl 4慢性肝损伤大鼠血

清中透明质酸（HA ）、层粘蛋白（LN ）进行了测

LN 定，发现三叶青可显著抑制大鼠血清中HA 、的异常增高，具有良好的抗肝纤维化作用；还有

研究发现三叶青对卡介苗（BCG ）和脂多糖（LPS ）诱导的小鼠免疫性肝损伤具有保护作用

［40］

采用三叶青

7901胃癌细胞，乙醇提取物体外处理SGC-结果7901细表明不同浓度乙醇提取物均能抑制SGC-胞的增殖并呈剂量依赖性，肿瘤生长抑制率最高7721肝癌细胞［25］、达到74. 7%，这与SMMC-人

，三叶青乙酸乙酯提取物能明显降低HBV

［37］

［41］

的DNA 复制水平。有研究者认为三叶青护

肝功能成分为黄酮类化合物，也有人认为三

·1304·浙江农业学报

［42］

［43］

、多糖对肝损伤具有一定

第27卷第7期

叶青中总氨基酸

的保护作用。3．2．3

抗病毒

程等，而对抗原特异性T 细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小。三叶青的解热作用与羟色胺、去甲肾上腺素影响体温调节中枢介质5-以及多巴胺有关

［57］

三叶青提取物含氮碱A 和含酮物F 、粗全浸

提取物Sl 和S2均显示出不同程度的抗病毒作用，其中A 和F 对流感病毒PＲ3及仙台病毒有较

［44］

强的抑制效果，也有发现三叶青脂溶性成分有显著抗病毒及抗出血热的作用3．2．4抗炎、镇痛及解热

资古明等

［45］

［6］

。

4临床应用

早在1956年，朱祖禄等

［58］

。

就用三叶青对28

研究发现，小鼠腹腔注射三叶

能降低腹腔毛细血管青中含氮化合物THDN 后，

的通透性，抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀和大鼠

棉芽肉球肿的生长，在热板法和苯醌致痛模型上镇痛作用明显。黄真等3．2．5

其他

在三叶青水提物对小鼠的抗炎试验中获得了相似的结果。

［46］

例麻疹并发肺炎患者进行了临床治疗，得到了满

意的疗效，拉开了三叶青临床治疗的序幕。到目前为止，三叶青已经在小儿高热、扁桃体炎、支气

肺炎、咽喉炎、肝炎、病毒性脑膜炎、类风湿管炎、

性关节炎、抗艾滋病毒、血液病、心脑血管疾病、抗肿瘤等临床治疗方面取得了显著的疗效

［59］

。

三叶青能有效改善关节炎症，对试验小鼠关

［47］

节炎有一定的治疗作用；能显著抑制缩宫素和己烯雌酚联用诱发的小鼠子宫平滑肌收缩的频率、幅度及子宫平滑肌收缩张力，可用于治疗

［48］

痛经；还可有效改善烫伤引起的肠道免疫功

增强及预防机体烫伤后抗炎症能力，对烫伤能、

特别是在抗肿瘤方面，以三叶青为主，配以黄芪、

人参皂苷制成的金芪片，共治疗102例恶性肿瘤病人，总有效率达到78. 33%

［53］

。以三叶青为主

要成分的金丝地甲胶囊也对抑制Lewis 肺肿瘤细

SMMC-772l 肝肿瘤细胞、HL-60人淋巴母细胞胞、

SCG-7901胃肿瘤细胞、HCT-116性白血病细胞、

结肠肿瘤细胞生长有明显效果。而且三叶青对毒蛇咬伤、痈疽、蚊虫叮治疗妇科疾病血崩白带、

咬、肛裂也有一定的效果。

引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用

3．3三叶青药理作用机理3．3．1

抗肿瘤机理

［49］

。

现有的研究认为三叶青黄酮主要是通过促

进肿瘤细胞凋亡、提高免疫能力以及抗氧化达到抗肿瘤效果

［50］

32－33，35］

。研究人员［26，也在三叶青

5人工栽培

三叶青人工栽培的研究起步较晚，目前，三

3，对癌症株系细胞抑制作用研究中发现Caspase-CytC 以及Bcl-2，Bid ，Bax ，Bcl-xl 和基质金属蛋白2的表达量有明显的变化；同时发现能酶MMP-［51］

通过增强单核巨噬细胞的吞噬能力、上调基2（TIMP-2）mＲNA的表质金属蛋白酶抑制酶-［52］［53］

达来增强机体的免疫力；魏克民等按照“保健食品功能学评价程序和检验方法规范”对三叶青增强免疫力的功能进行了验证，徐彩菊也通过免疫试验和抗氧化试验对此进行了验证。等3．3．2

抗炎解毒、解热

［56］

［54－55］

叶青野生驯化栽培中，仅对光、肥、水因子进行了初步研究

［60－62］

，认为67%左右的遮荫处理是三

［63］

叶青的最佳光照条件代替野生三叶青

［64］

，人工栽培三叶青可以

－1

等。也有人采用500mg ·L

L －1的生根粉溶液浸泡插穗切口，或用1000mg ·IBA 浸渍2 3年生老枝插条10s 后扦插于黄土中，实现了三叶青的人工扦插繁殖等

［66］

［62，65］

。钱丽华

通过对三叶青试管苗进行高温、低温胁迫，

MDA 和可溶性蛋白等含量变化，测定SOD ，发现40ħ 以上高温、10ħ 以下低温不利于三叶青试管为三叶青人工栽培温度控制提供了参苗的生长，

考。但目前人工栽培技术体系还不成熟，无法进

导致三叶青人工栽培停滞不前，种行推广应用，植面积无法扩大。

从免疫学角度对三叶青抗炎解

毒机理进行了探讨，认为三叶青主要作用于T 淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞的形成过

倪荷芳等

6

6．1

生物技术

组培快繁钱丽华等

［67］

有利于三叶青愈伤组织中黄酮的积累，总黄酮

－1［77］

含量达到20. 23mg ·g 。彭昕等建立了三叶青愈伤组织两步培养法生产总黄酮的技术，50d 愈伤组织中总黄酮最大浓度可以达到（28. 4ʃ 3. 9）mg ·g －1，明显高于原植株叶片中的黄酮含量，接近根茎中的黄酮含量，而且致密型愈伤组织悬浮培养较松散型愈伤组织更有利

20d 黄酮含于继代培养和三叶青黄酮的积累，

－1［78］

，量达到40. 9mg ·g 还建立了两步法生产

［79］

40d 总三叶青总黄酮的细胞悬浮培养体系，－1

黄酮含量达到（47. 5ʃ 2. 21）mg ·g ，明显高于

［80］

率原植株及固体培养的愈伤组织。杜苏瑞

以三叶青茎段腋芽为外植体，

成功建立了三叶青组培快繁技术，不定芽增殖系

［68］数达到5. 45，生根率98%。符渊淼、彭昕［69］

不定等采用同样的外植体实现了快速繁殖，［70］

芽增殖系数分别为7. 27和9ʃ 1. 6。徐刚等建立的三叶青组培快繁技术，芽增值率达到3 5

倍。钟毓倩等

［72］

［71］

则认为茎尖为最佳外植体。吴浩

以不带腋芽的茎段为外植体诱导愈伤组织，并通过愈伤组织脱分化形成不定芽，基本实

20d 愈伤诱导率达到现了三叶青的人工繁殖，96. 7%，40d 后愈伤组织分化率为66. 7%，而且B 5培养基交替继代方式有利于三叶青采取MS ，

愈伤组织的继代和分化。上述研究表明，三叶青三叶青种苗的规模化离体快繁的技术已趋成熟，繁育基本可以实现。6．2

分子生物学袁带秀等

［73］

先尝试用黄瓜碱型发根农杆菌K599侵染三叶

成功诱导出了转基因青无菌苗或实生苗叶片，

毛状根，毛状根成活率达到90%，而且毛状根根

－1

系中总黄酮含量最高可达64. 167mg ·g ，槲皮

－1

山奈酚含量最高素含量最高为7. 795mg ·g ，

·g －1。为45. 203mg

虽然通过愈伤组织、细胞悬浮培养、转基因毛状根等技术手段所获得的组织或细胞中的黄

酮含量接近或高于原植株的黄酮含量，但要进入到规模化生产还为时尚早，有必要对其进行深入研究。

首次采用POD 同工酶分析方

法，对湘南湘西3个不同产地的三叶青物种资源进行了亲缘关系分析，初步确定它们是3个独立的物种，但又存在遗传距离不等的遗传关系。杨

［74］

华等利用ISSＲ分子标记技术研究建立了重复性强、稳定性好的反应体系，为分子水平的遗传

［68］

多样性分析奠定了基础。符渊淼则首次将DNA 条形码技术应用于三叶青及其近缘种的种质鉴定，确定了ITS 及rbcL +matK +ITS 序列是鉴定三叶青和其他崖爬藤属植物的最佳条形码。分子生物学技术特别是DNA 条形码技术在三叶青物种鉴别中的应用研究还处于起步阶段，今后应在加强三叶青种质资源收集的基础上进行深

建立实用、可行、适合三叶青种质资源鉴入研究，

以保护这一珍贵药用资源并规范别的技术，

市场。6．3

次生代谢物生产卢爱芳等

［75］

7展望

癌症是威胁人类生命的第一大杀手，近年来

由于城市化进程加快导致的环境恶化、食品安全等问题，使得癌症人群日趋扩大，且放化疗药物的耐受性日益严重，中医中药以及营养支持疗法为治疗恶性肿瘤提供了一条充满希望的道路。三叶青作为一种民间抗肿瘤药物，已经转为临床用药，常与其他药物配伍用于抗肿瘤治疗，取得了显著的临床疗效。现有的野生三叶青资源已处于濒危状态，被列入了浙江省首批农作物种质资源保护名录，根本无法满足社会需求。因此，三叶青的人工繁殖将是一个非常重要的研究领域，尽管这方面的研究已经取得一些成果，但仍处于起步阶段。建议在以下几方面进行深入研究：（1）三叶青的人工栽培。三叶青的驯化栽培、扦插繁殖以及组培快繁技术问题都已基本解决，但是人工栽培中块根产量低、生长周期长仍是瓶

研究认为可以利用三叶青叶片

和茎段诱导的愈伤组织生产三叶青黄酮，愈伤组

－1织中三叶青黄酮含量可达到18. 047mg ·g ，分

化出不定根的愈伤组织是提取黄酮较好的材

［76］－1

料。钱丽华等研究发现24h ·d 连续光照

．时珍国医国药，2010，21（10）：酮提取工艺研究［J ］2588－2590．

颈问题，同时三叶青人工栽培质量控制研究仍处

于空白阶段，需通过深入研究建立起三叶青人工栽培操作规程，提高产量和质量，满足市场需求和医学需求。（2）利用生物技术生产三叶青黄酮。三叶青的主要活性成分为黄酮类化合物，从目前濒危的野生资源或者从有限的人工栽培植株中提取三叶青生物活性成分显然很不现实，而利用生物技术来生产生物活性成分是一条可行、经济、快速、不受气候限制的途径，但目前这方面的报道极少，现有的研究尚无法进入产业化生产。因此，有必要利用不定根、转基因毛状根、酶促反应、生物诱导转化等技术进行深入研究并加以突破。参考文献：

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2015，27（7）：1301－1308浙江农业学报Acta Agriculturae Zhejiangensis ，http ：//www．zjnyxb．cn

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DOI ：10. 3969/j．issn．1004－1524. 2015. 07. 30

濒危药用植物三叶青研究进展

1213

钱丽华，戴丹丽，姜慧燕，林蔚红

（

1

杭州市农业科学研究院实验中心，浙江杭州310024；2浙江省农业科学院科研与合作处，浙江杭州310021；3海宁市农业农村经济

信息中心，浙江海宁314400）

摘要：三叶青为中国特有的具有重要药用价值的植物。现代药理研究表明，三叶青具有较好的抗肿瘤活

性，黄酮类化合物是三叶青的主要组成成分和功效成分。在相关文献的基础上，从植物学、化学成分、毒理药理学、临床应用、人工栽培、生物技术等方面对三叶青在各个领域的研究成果进行了总结，并探讨了今后的研究方向，在保护濒危种质资源三叶青的同时，为合理开发与利用三叶青的药用价值提供科学依据。关键词：三叶青；黄酮类化合物；抗肿瘤；生物技术

+

中图分类号：S 567. 239；Ｒ285. 5

文献标志码：A 1524（2015）07-1301-08文章编号：1004-

Ｒesearchprogresses of the endangered medicinal plant Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg

QIAN Li-hua 1，DAI Dan-li 2，JIANG Hui-yan 1，LIN Wei-hong 3（

1

Testing Center ，Hangzhou Academy of Agricultural Sciences ，Hangzhou 310024，China ；

3

2

Cooperative Office of Sci-

entific Ｒesearch，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences ，Hangzhou 310021，China ；nomic Information Center of Haining ，Haining 314400，China ）

Agricultural and ＲuralEco-

Abstract ：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg is one of Chinese characteristics plants which has important medi-cal value．Modern pharmacological studies had shown that it had good antitumor activity ，and flavonoids were the ma-jor and functional components of Tetrastigma hemsleyanum ．This paper provided a detailed description of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg from botany ，chemical composition ，toxicology and pharmacology ，clinical applications ，artificial cultivation and biotechnology ，the future research directions of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg were also discussed ，which could offer scientific references for its rational utilization as medicine and appropriate protec-tion as endangered plant．

Key words ：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg ；flavonoids ；anti-tumor ；biotechnology

三叶青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et

Gilg ），中文学名为三叶崖爬藤，又名蛇附子、石抱子、石猴子、石老鼠、金线吊葫芦，药名为三叶青，是葡萄科崖爬藤属多年生蔓生藤本植物，为

［1］中国特有珍稀中药植物。《中国植物志》记

化痰的作用，临床上用于治疗病毒性脑膜炎、乙型脑炎、病毒性肺炎、黄疸性肝炎等，特别是块中根对小儿高烧有特效。20世纪90年代以来，国学者从三叶青中分离到了黄酮类化合物，经药理试验发现其具有抗肿瘤作用，引发了国内外学者的关注。

载三叶崖爬藤全株供药用，有活血散瘀、解毒、

11-05收稿日期：2014-基金项目：杭州市农业科研攻关项目（20130432B09）

mail ：menoy@hz．cn 作者简介：钱丽华（1975—），女，浙江淳安人，高级农艺师，从事植物生物技术研究。E-

近年来，由于人为过度采挖，三叶青已处于濒危状态，被列入了浙江省首批农作物种质资源保护名录品种。为更好地保护并开发利用好

从植物学、化学成分、毒理这一珍贵药材资源，

药理、临床应用、人工栽培和生物技术研究等方

面对三叶青进行了全面系统的阐述，以期为三叶青的系统深入研究及今后的开发应用提供参考。

三叶青主要分布于浙江、江西、福建、湖南、广西、贵州、云南、海南和台湾等地区，常生于山坡林下的灌丛中或山谷溪边林下的岩石缝中，生

其中紫藤三叶青分布于纬长海拔300 1300m ，

度37ʎ18' 以北的江西、浙江山区，属正宗品种，而

青色藤三叶青分布于中国纬度27ʎ18' 南面的福建、湖南、四川、广东、广西、云南的部分地区，二

［1］

者生长的地域界限分明，不混合生长。

1

1．1

三叶青的植物学研究

生物学特征

2化学成分

［3］

三叶青是葡萄科崖爬藤属多年生蔓生藤本

掌状复叶互生，叶为3小叶，小叶披针形、植物，

长椭圆披针形或卵披针形，长3 10cm ，宽1. 5 3cm ，顶端渐尖，基部楔形或圆形，侧生小叶近圆形，边缘每侧有4 6个锯齿，基部不对称，

锯齿细或有时较粗，两面均无毛；侧脉5 6对，网脉两面不明显，无毛；叶柄长2. 0 7. 5cm ，中央小叶柄长0. 5 1. 8cm ，侧生小叶柄较短，约0. 3 0. 5cm ，无毛或被疏柔毛。花序腋生，长1 5cm ，下部有节，节上有苞片，或假顶生而基部无节和苞片，二级分枝通常4个，集生成伞形，花二歧状，着生在分枝末端；花序梗长1. 2 2. 5cm ，被短柔毛；花梗长1. 0 2. 5mm ，通常

高1. 5 2mm ，顶被灰色短柔毛；花蕾卵圆形，

端圆形；萼碟形，萼齿细小，卵状三角形；花瓣4

片，卵圆形，高1. 3 1. 8mm ，顶端有小角，外4浅展，无毛；雄蕊4个，花药黄色；花盘明显，裂；子房陷在花盘中呈短圆锥状，花柱短，柱头4裂。果实近球形或倒卵球形，直径约0. 6cm ，有种子1颗；种子倒卵椭圆形，顶端微凹，基部圆钝，表面光滑，种脐在种子背面中部向上呈椭圆

腹面两侧洼穴呈沟状，从下部近1/4处向上形，

斜展直达种子顶端。花期为每年4—6月，果期

［1］

8—11月。

蹇京蓉报道三叶青有紫藤三叶青和青色藤三叶青2个品种，紫藤三叶青靠近根部藤的表皮颜色为紫褐色，青色藤三叶青藤的表面颜色为青白色，两者分布区域不同，但繁殖方式、生长习性相同，叶子和果实的外貌大致相同。1．2生态学特征

［2］

AbduL 就发现三叶早在20世纪80年代，

青叶中含有黄酮类、没食子酸和花青素类等成之后众多研究表明三叶青中含有黄酮类、氨分，

基酸类、萜类、强心苷类、甾体类、多糖类、有机酸

［4－5］

，类、挥发油和油脂以及丰富的微量元素并

分离到了单体化合物，累计分离并鉴定的化合物

已有52个（表1），其中5，7，4' 三羟基黄酮6-α-L 吡喃鼠李糖-（1-4）-L 吡喃阿拉伯糖甙和5，α-7，4' 三羟基黄酮-8-L 吡喃鼠李糖-（1-4）-L α-α-吡喃阿拉伯糖甙为三叶青中发现的新物质，分别被命名为崖爬藤甙和异崖爬藤甙，其是否为三叶青中重要的功能成分还没有确证，有待于今后进一步的研究。

鉴于黄酮类化合物的抗肿瘤活性，研究者以

采用热回流法、超声法和微三叶青饮片为材料，

波法，通过对乙醇浓度、料液比、提取时间、提取功率等条件的优化建立了各自的三叶青黄酮提

［13－17］

。刘江取工艺，提取率为0. 30% 0. 79%波等

筛选出了分离纯化三叶青黄酮效果较好

的树脂HPD826，建立了分离纯化工艺，纯化后产

［18］

物中三叶青总黄酮含量提高了2. 44倍。目前

［19］［20］

槲皮素和山奈酚已建立了三叶青总黄酮、

［21］

以及β-谷甾醇含量等的测定方法，方法重复

［22］

性、稳定性以及可操作性好；程林等还建立了

［18］

浙江省10个产地的三叶青HPLC 指纹图谱测定方法，为三叶青药材的质量控制提供了参考。付ICP-OES 同时测定三建立了微波消解-叶青中多种微量元素的分析方法。虽然对三叶金娥等

青黄酮类化合物的提取、纯化都有研究，但产业化提取工艺还不够成熟，需要进一步优化提取和纯化工艺。

［5］

表1

三叶青中分离并鉴定的化合物

Compounds isolated and identified from Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg

提取部位根地上部分地上部分

提取/萃取溶剂氯仿萃取石油醚萃取石油醚萃取氯仿萃取乙酸乙酯萃取正丁醇萃取

4

—

95%乙醇提取

化合物名称

6'-O-苯甲酰基胡萝卜甙、胡萝卜甙、β－谷甾醇蒲公英萜酮、蒲公英萜－谷醇、β甾醇、麦角甾醇α-香树脂醇、三十二酸水杨酸、丁二酸

7-O-L-3-O-D-山奈酚-β-吡喃鼠李糖-β-吡喃葡萄糖苷、没食子酸乙酯胡萝卜苷、环四谷胺肽甘露醇、

Table 1

序号123

参考文献［6］［7］［8］

5，7，4' 三羟基黄酮-6，8-2C-D 吡喃葡萄糖甙和5，7，4' 三羟基黄酮6-L 吡喃鼠李［9］β-α-（1-4）-L 吡喃阿拉伯糖甙（命名为崖爬藤甙）、5，7，4' 三羟基黄酮-8-L 吡喃鼠α-α-糖-（1-4）-L 吡喃阿拉伯糖甙（命名为异崖爬藤甙）α-李糖-3-O-β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素和山柰酚-新橙皮糖苷

［10］

2，3-6，10，14-2-11］樟脑、丁二醇、己酸、苯甲醇、苯乙醇、苯酚、三甲基-十五烷酮、异丙［苯、二苯胺、豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、补骨脂内酯、十七酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸甲酯

2-D-2羰基-D 葡萄糖酸、3，4-12］羟基苯甲酸、果糖、木酮糖、肉豆蔻酸（十四酸）、二羟基［

D-9，12-9，12，15-苯甲酸、葡萄糖、十六酸、十七酸、油酸、十八碳二烯酸、十九碳三烯

9，12，15-二十碳三烯酸、二十酸、棕榈酸、α-亚麻酸酸、

56

块根块根

乙酸乙酯萃取乙醚提取

7块根石油醚萃取

29［26］、Lewis 肺癌瘤株［27］、白血结肠癌细胞HT-

3

3．1

毒理药理学研究

三叶青的毒理学研究江月仙等

［23］

［28］］

HL60细胞［29］病K562、以及人宫颈癌细胞［30］

HeLa229［30］、人胃腺癌细胞株AGS 、人恶性［30］黑色素瘤细胞株A375、人膀胱癌细胞株

按《保健食品检验与评价技术5637［30］的凋亡试验结果相似；同时也有研究者发现三叶青对肿瘤细胞的体外抑制作用不但呈剂量依赖性，还与作用时间呈正相关量依赖性3．2．2

［34－36］

［31－33］

（2003版）中食品安全性毒理学评价试验，规范》

对三叶青进行了毒理学评价，发现大鼠急性经口各组试验大鼠及小试验和小鼠急性经口试验中，

鼠均未见明显症状，也无死亡，三叶青对雌雄大

－1

对雌雄小鼠经口LD 50均大于100g ·kg 体质量，－1

鼠经口LD 50均大于40g ·kg 体质量，按急性毒

；也

有研究发现三叶青提取物体外抑制作用不呈剂

。

保护肝脏

三叶青提取物能通过降低CCl 4所致小鼠急性肝损伤后血清中谷丙转氨酶（ALT ）、谷草转氨

酶（AST ）、碱性磷酸酶（ALP ）及丙二醛（MDA ）含提高超氧化物歧化酶（SOD ）活性，起到对急量，

80g ·kg －1的剂量用于临床性肝损伤的保护作用，治疗是安全的酯

［37］

［38］

性分级判定标准，属实际无毒；同时选用了组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌进行了Ames 试验，并采用环磷酰胺开展了小鼠骨髓细胞微核和小鼠精子畸形试验，结果均为阴性，说明三叶青未显示有致突变性。3．23．2．1

三叶青的药理学抗肿瘤

研究表明三叶青对多种肿瘤细胞株系均有一定的抑制生长或促进凋亡作用，且体外抑瘤作用大多呈剂量依赖性。冯正权等

［24］

，其效果强于或相当于联苯双

；张同远［39］还对CCl 4慢性肝损伤大鼠血

清中透明质酸（HA ）、层粘蛋白（LN ）进行了测

LN 定，发现三叶青可显著抑制大鼠血清中HA 、的异常增高，具有良好的抗肝纤维化作用；还有

研究发现三叶青对卡介苗（BCG ）和脂多糖（LPS ）诱导的小鼠免疫性肝损伤具有保护作用

［40］

采用三叶青

7901胃癌细胞，乙醇提取物体外处理SGC-结果7901细表明不同浓度乙醇提取物均能抑制SGC-胞的增殖并呈剂量依赖性，肿瘤生长抑制率最高7721肝癌细胞［25］、达到74. 7%，这与SMMC-人

，三叶青乙酸乙酯提取物能明显降低HBV

［37］

［41］

的DNA 复制水平。有研究者认为三叶青护

肝功能成分为黄酮类化合物，也有人认为三

·1304·浙江农业学报

［42］

［43］

、多糖对肝损伤具有一定

第27卷第7期

叶青中总氨基酸

的保护作用。3．2．3

抗病毒

程等，而对抗原特异性T 细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小。三叶青的解热作用与羟色胺、去甲肾上腺素影响体温调节中枢介质5-以及多巴胺有关

［57］

三叶青提取物含氮碱A 和含酮物F 、粗全浸

提取物Sl 和S2均显示出不同程度的抗病毒作用，其中A 和F 对流感病毒PＲ3及仙台病毒有较

［44］

强的抑制效果，也有发现三叶青脂溶性成分有显著抗病毒及抗出血热的作用3．2．4抗炎、镇痛及解热

资古明等

［45］

［6］

。

4临床应用

早在1956年，朱祖禄等

［58］

。

就用三叶青对28

研究发现，小鼠腹腔注射三叶

能降低腹腔毛细血管青中含氮化合物THDN 后，

的通透性，抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀和大鼠

棉芽肉球肿的生长，在热板法和苯醌致痛模型上镇痛作用明显。黄真等3．2．5

其他

在三叶青水提物对小鼠的抗炎试验中获得了相似的结果。

［46］

例麻疹并发肺炎患者进行了临床治疗，得到了满

意的疗效，拉开了三叶青临床治疗的序幕。到目前为止，三叶青已经在小儿高热、扁桃体炎、支气

肺炎、咽喉炎、肝炎、病毒性脑膜炎、类风湿管炎、

性关节炎、抗艾滋病毒、血液病、心脑血管疾病、抗肿瘤等临床治疗方面取得了显著的疗效

［59］

。

三叶青能有效改善关节炎症，对试验小鼠关

［47］

节炎有一定的治疗作用；能显著抑制缩宫素和己烯雌酚联用诱发的小鼠子宫平滑肌收缩的频率、幅度及子宫平滑肌收缩张力，可用于治疗

［48］

痛经；还可有效改善烫伤引起的肠道免疫功

增强及预防机体烫伤后抗炎症能力，对烫伤能、

特别是在抗肿瘤方面，以三叶青为主，配以黄芪、

人参皂苷制成的金芪片，共治疗102例恶性肿瘤病人，总有效率达到78. 33%

［53］

。以三叶青为主

要成分的金丝地甲胶囊也对抑制Lewis 肺肿瘤细

SMMC-772l 肝肿瘤细胞、HL-60人淋巴母细胞胞、

SCG-7901胃肿瘤细胞、HCT-116性白血病细胞、

结肠肿瘤细胞生长有明显效果。而且三叶青对毒蛇咬伤、痈疽、蚊虫叮治疗妇科疾病血崩白带、

咬、肛裂也有一定的效果。

引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用

3．3三叶青药理作用机理3．3．1

抗肿瘤机理

［49］

。

现有的研究认为三叶青黄酮主要是通过促

进肿瘤细胞凋亡、提高免疫能力以及抗氧化达到抗肿瘤效果

［50］

32－33，35］

。研究人员［26，也在三叶青

5人工栽培

三叶青人工栽培的研究起步较晚，目前，三

3，对癌症株系细胞抑制作用研究中发现Caspase-CytC 以及Bcl-2，Bid ，Bax ，Bcl-xl 和基质金属蛋白2的表达量有明显的变化；同时发现能酶MMP-［51］

通过增强单核巨噬细胞的吞噬能力、上调基2（TIMP-2）mＲNA的表质金属蛋白酶抑制酶-［52］［53］

达来增强机体的免疫力；魏克民等按照“保健食品功能学评价程序和检验方法规范”对三叶青增强免疫力的功能进行了验证，徐彩菊也通过免疫试验和抗氧化试验对此进行了验证。等3．3．2

抗炎解毒、解热

［56］

［54－55］

叶青野生驯化栽培中，仅对光、肥、水因子进行了初步研究

［60－62］

，认为67%左右的遮荫处理是三

［63］

叶青的最佳光照条件代替野生三叶青

［64］

，人工栽培三叶青可以

－1

等。也有人采用500mg ·L

L －1的生根粉溶液浸泡插穗切口，或用1000mg ·IBA 浸渍2 3年生老枝插条10s 后扦插于黄土中，实现了三叶青的人工扦插繁殖等

［66］

［62，65］

。钱丽华

通过对三叶青试管苗进行高温、低温胁迫，

MDA 和可溶性蛋白等含量变化，测定SOD ，发现40ħ 以上高温、10ħ 以下低温不利于三叶青试管为三叶青人工栽培温度控制提供了参苗的生长，

考。但目前人工栽培技术体系还不成熟，无法进

导致三叶青人工栽培停滞不前，种行推广应用，植面积无法扩大。

从免疫学角度对三叶青抗炎解

毒机理进行了探讨，认为三叶青主要作用于T 淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞的形成过

倪荷芳等

6

6．1

生物技术

组培快繁钱丽华等

［67］

有利于三叶青愈伤组织中黄酮的积累，总黄酮

－1［77］

含量达到20. 23mg ·g 。彭昕等建立了三叶青愈伤组织两步培养法生产总黄酮的技术，50d 愈伤组织中总黄酮最大浓度可以达到（28. 4ʃ 3. 9）mg ·g －1，明显高于原植株叶片中的黄酮含量，接近根茎中的黄酮含量，而且致密型愈伤组织悬浮培养较松散型愈伤组织更有利

20d 黄酮含于继代培养和三叶青黄酮的积累，

－1［78］

，量达到40. 9mg ·g 还建立了两步法生产

［79］

40d 总三叶青总黄酮的细胞悬浮培养体系，－1

黄酮含量达到（47. 5ʃ 2. 21）mg ·g ，明显高于

［80］

率原植株及固体培养的愈伤组织。杜苏瑞

以三叶青茎段腋芽为外植体，

成功建立了三叶青组培快繁技术，不定芽增殖系

［68］数达到5. 45，生根率98%。符渊淼、彭昕［69］

不定等采用同样的外植体实现了快速繁殖，［70］

芽增殖系数分别为7. 27和9ʃ 1. 6。徐刚等建立的三叶青组培快繁技术，芽增值率达到3 5

倍。钟毓倩等

［72］

［71］

则认为茎尖为最佳外植体。吴浩

以不带腋芽的茎段为外植体诱导愈伤组织，并通过愈伤组织脱分化形成不定芽，基本实

20d 愈伤诱导率达到现了三叶青的人工繁殖，96. 7%，40d 后愈伤组织分化率为66. 7%，而且B 5培养基交替继代方式有利于三叶青采取MS ，

愈伤组织的继代和分化。上述研究表明，三叶青三叶青种苗的规模化离体快繁的技术已趋成熟，繁育基本可以实现。6．2

分子生物学袁带秀等

［73］

先尝试用黄瓜碱型发根农杆菌K599侵染三叶

成功诱导出了转基因青无菌苗或实生苗叶片，

毛状根，毛状根成活率达到90%，而且毛状根根

－1

系中总黄酮含量最高可达64. 167mg ·g ，槲皮

－1

山奈酚含量最高素含量最高为7. 795mg ·g ，

·g －1。为45. 203mg

虽然通过愈伤组织、细胞悬浮培养、转基因毛状根等技术手段所获得的组织或细胞中的黄

酮含量接近或高于原植株的黄酮含量，但要进入到规模化生产还为时尚早，有必要对其进行深入研究。

首次采用POD 同工酶分析方

法，对湘南湘西3个不同产地的三叶青物种资源进行了亲缘关系分析，初步确定它们是3个独立的物种，但又存在遗传距离不等的遗传关系。杨

［74］

华等利用ISSＲ分子标记技术研究建立了重复性强、稳定性好的反应体系，为分子水平的遗传

［68］

多样性分析奠定了基础。符渊淼则首次将DNA 条形码技术应用于三叶青及其近缘种的种质鉴定，确定了ITS 及rbcL +matK +ITS 序列是鉴定三叶青和其他崖爬藤属植物的最佳条形码。分子生物学技术特别是DNA 条形码技术在三叶青物种鉴别中的应用研究还处于起步阶段，今后应在加强三叶青种质资源收集的基础上进行深

建立实用、可行、适合三叶青种质资源鉴入研究，

以保护这一珍贵药用资源并规范别的技术，

市场。6．3

次生代谢物生产卢爱芳等

［75］

7展望

癌症是威胁人类生命的第一大杀手，近年来

由于城市化进程加快导致的环境恶化、食品安全等问题，使得癌症人群日趋扩大，且放化疗药物的耐受性日益严重，中医中药以及营养支持疗法为治疗恶性肿瘤提供了一条充满希望的道路。三叶青作为一种民间抗肿瘤药物，已经转为临床用药，常与其他药物配伍用于抗肿瘤治疗，取得了显著的临床疗效。现有的野生三叶青资源已处于濒危状态，被列入了浙江省首批农作物种质资源保护名录，根本无法满足社会需求。因此，三叶青的人工繁殖将是一个非常重要的研究领域，尽管这方面的研究已经取得一些成果，但仍处于起步阶段。建议在以下几方面进行深入研究：（1）三叶青的人工栽培。三叶青的驯化栽培、扦插繁殖以及组培快繁技术问题都已基本解决，但是人工栽培中块根产量低、生长周期长仍是瓶

研究认为可以利用三叶青叶片

和茎段诱导的愈伤组织生产三叶青黄酮，愈伤组

－1织中三叶青黄酮含量可达到18. 047mg ·g ，分

化出不定根的愈伤组织是提取黄酮较好的材

［76］－1

料。钱丽华等研究发现24h ·d 连续光照

．时珍国医国药，2010，21（10）：酮提取工艺研究［J ］2588－2590．

颈问题，同时三叶青人工栽培质量控制研究仍处

于空白阶段，需通过深入研究建立起三叶青人工栽培操作规程，提高产量和质量，满足市场需求和医学需求。（2）利用生物技术生产三叶青黄酮。三叶青的主要活性成分为黄酮类化合物，从目前濒危的野生资源或者从有限的人工栽培植株中提取三叶青生物活性成分显然很不现实，而利用生物技术来生产生物活性成分是一条可行、经济、快速、不受气候限制的途径，但目前这方面的报道极少，现有的研究尚无法进入产业化生产。因此，有必要利用不定根、转基因毛状根、酶促反应、生物诱导转化等技术进行深入研究并加以突破。参考文献：

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（责任编辑侯春晓）