中药A 注射剂特殊毒性实验
【实验目的】 通过对中药A 注射剂的刺激性、过敏性、溶血性实验，研究该注
射剂的安全性。
【实验原理】 略。 【实验材料】
动物： SD 大鼠20只，雌雄各半，200—250g ；豚鼠60只，雌雄
各半，200—250g ；家兔1只，1.5～2.0 kg。
试剂： 中药A 注射剂，75%乙醇，蛋清，蒸馏水，0.9%氯化钠溶
液，苦味酸试剂。
仪器： 全光谱灯，离心机，恒温箱，含玻璃珠的三角烧瓶，剃须
刀，砂纸，玻璃纸，胶布，绷带，试管，玻璃棒，载玻片。
【实验方法】
（一）刺激性试验方法 皮肤刺激性试验 1 实验动物
选SD 大鼠，20只，雌、雄各半。设赋形剂（75%乙醇）对照，采用同体左右侧自身对比法。试验前24小时对背部给药区用剃须刀进行脱毛处理。去毛范围左、右各3 cm×3 cm。给药前检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤，有损伤的皮肤不进行试验。进行破损皮肤的刺激性研究时，在用药部位用砂纸磨或划“井”字并以渗血为度。 2 给药方法
取受试物0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋形剂75%乙醇作对照。贴敷时间4小时。贴敷结束后，除去受试物并用温水清洁给药部位。 3 结果观察
在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。按表1给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。
①单次给药皮肤刺激性试验，在去除药物后30-60分钟，24、48和72小时肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。如存在持久性损伤，有必要延长观察期限以评价上述变化的恢复情况和时间。但延长期一般不超过14天。对
出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行组织病理学检查。 4 结果评价
计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价。
表1. 皮肤刺激反应评分标准
判断指标：
表2. 皮肤刺激强度评价标准
（二）过敏性试验方法 全身主动过敏试验（ASA ）
对致敏成立的动物体内，静脉注射抗原，观察抗原与IgE 抗体结合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性过敏反应。 1 实验动物
体重为300-400克的豚鼠60只。 2 试验分组
应设立阴性、阳性及空白对照组和受试物A 高浓度、中浓度、低浓度不同剂量组。阴性对照组应给予同体积的溶媒，阳性对照组给予1-5mg/只蛋清，受试物低剂量组给予临床最大剂量（/kg或m 2）。每组动物10只。 3 致敏
静脉滴注，早晚各一次，为期一周。 4 激发
① 激发途径：一次快速静脉内给药。
② 激发次数：末次注射后第10-14日一次激发。 ③ 激发剂量：为致敏剂量的3倍量，给药容积1-2ml 。 5 观察指标
① 致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。
② 激发：静脉注射后30分钟，按表2详细观察每只动物的反应，症状的出现及消失时间。观察3小时。 6 结果评价
可按表4判断过敏反应发生程度。计算过敏反应发生率。根据过敏反应发生率和发生程度进行综合判断。
激发注射后，若发现有过敏反应症状时，可取健康未致敏豚鼠2只，自静脉注射激发剂量的受试物，观察有无由于受试物作用引起的类似过敏反应症状，以供结果判断时参考。
表3 过敏反应症状
表4全身致敏性评价标准
（三）溶血性试验方法
常规的体外试管法（肉眼观察法） 1血细胞悬液的配制
取家兔血5毫升，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，1000-1500r/min离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2-3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2％的混悬液，供试验用。 2 受试物的制备
除另有规定外，临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品溶液；用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。
3 试验方法
取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按下表所示依次加入2%红细胞悬液、蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，观察3小时。按下列顺序加入各种溶液：
1.4 结果观察
若试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。 1.5 结果判断
当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，则受试物A 可以注射使用；若受试物管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，则受试物A 不宜注射使用。 【实验结论】 略。 【讨论】 略。
中药A 注射剂特殊毒性实验
【实验目的】 通过对中药A 注射剂的刺激性、过敏性、溶血性实验，研究该注
射剂的安全性。
【实验原理】 略。 【实验材料】
动物： SD 大鼠20只，雌雄各半，200—250g ；豚鼠60只，雌雄
各半，200—250g ；家兔1只，1.5～2.0 kg。
试剂： 中药A 注射剂，75%乙醇，蛋清，蒸馏水，0.9%氯化钠溶
液，苦味酸试剂。
仪器： 全光谱灯，离心机，恒温箱，含玻璃珠的三角烧瓶，剃须
刀，砂纸，玻璃纸，胶布，绷带，试管，玻璃棒，载玻片。
【实验方法】
（一）刺激性试验方法 皮肤刺激性试验 1 实验动物
选SD 大鼠，20只，雌、雄各半。设赋形剂（75%乙醇）对照，采用同体左右侧自身对比法。试验前24小时对背部给药区用剃须刀进行脱毛处理。去毛范围左、右各3 cm×3 cm。给药前检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤，有损伤的皮肤不进行试验。进行破损皮肤的刺激性研究时，在用药部位用砂纸磨或划“井”字并以渗血为度。 2 给药方法
取受试物0.5 ml直接涂布于一侧已去毛的皮肤上，然后用二层纱布（2.5 cm×2.5 cm）和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定；另一侧涂布赋形剂75%乙醇作对照。贴敷时间4小时。贴敷结束后，除去受试物并用温水清洁给药部位。 3 结果观察
在自然光线或全光谱灯光下观察皮肤反应。按表1给出的评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分。
①单次给药皮肤刺激性试验，在去除药物后30-60分钟，24、48和72小时肉眼观察并记录涂敷部位有无红斑和水肿等情况。如存在持久性损伤，有必要延长观察期限以评价上述变化的恢复情况和时间。但延长期一般不超过14天。对
出现中度及以上皮肤刺激性的动物应在观察期结束时对给药局部进行组织病理学检查。 4 结果评价
计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价。
表1. 皮肤刺激反应评分标准
判断指标：
表2. 皮肤刺激强度评价标准
（二）过敏性试验方法 全身主动过敏试验（ASA ）
对致敏成立的动物体内，静脉注射抗原，观察抗原与IgE 抗体结合后导致肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性过敏反应。 1 实验动物
体重为300-400克的豚鼠60只。 2 试验分组
应设立阴性、阳性及空白对照组和受试物A 高浓度、中浓度、低浓度不同剂量组。阴性对照组应给予同体积的溶媒，阳性对照组给予1-5mg/只蛋清，受试物低剂量组给予临床最大剂量（/kg或m 2）。每组动物10只。 3 致敏
静脉滴注，早晚各一次，为期一周。 4 激发
① 激发途径：一次快速静脉内给药。
② 激发次数：末次注射后第10-14日一次激发。 ③ 激发剂量：为致敏剂量的3倍量，给药容积1-2ml 。 5 观察指标
① 致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。
② 激发：静脉注射后30分钟，按表2详细观察每只动物的反应，症状的出现及消失时间。观察3小时。 6 结果评价
可按表4判断过敏反应发生程度。计算过敏反应发生率。根据过敏反应发生率和发生程度进行综合判断。
激发注射后，若发现有过敏反应症状时，可取健康未致敏豚鼠2只，自静脉注射激发剂量的受试物，观察有无由于受试物作用引起的类似过敏反应症状，以供结果判断时参考。
表3 过敏反应症状
表4全身致敏性评价标准
（三）溶血性试验方法
常规的体外试管法（肉眼观察法） 1血细胞悬液的配制
取家兔血5毫升，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，1000-1500r/min离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2-3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2％的混悬液，供试验用。 2 受试物的制备
除另有规定外，临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品溶液；用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。
3 试验方法
取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按下表所示依次加入2%红细胞悬液、蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，观察3小时。按下列顺序加入各种溶液：
1.4 结果观察
若试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。 1.5 结果判断
当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，则受试物A 可以注射使用；若受试物管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，则受试物A 不宜注射使用。 【实验结论】 略。 【讨论】 略。