牛人工授精技术规程（DB37/T 306-2002）
1 范围
本标准规定了冷配站所具备的必要设备、发情鉴定、精液、解冻、输精和妊娠检查技术的一般原则。
本标准适用于牛冷配站的冷冻精液输精和人工授精 技术人员。 2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T4143 牛冷冻精液
3 定义
本标准采用下列定义。
3.1 发情
母牛发育到一定年龄，表现出周期性性生理活动。
3.2 产后发情
母牛产犊后第一次发情。
3.3 发情周期
母牛性成熟后，每隔一定时间发情一次，这种有规律的性生理活动周期为发情周期。
4 必要设备
冷配站应具备的必要设备见表1。
表1 冷配站的必要设备
必要设备及用品 名称 数量
贮精设备 液氮罐101。
液氮罐301。
冰箱。 １个
１个
1台
输精设备 输精架。
输精枪（管）、解冻缸（杯）、乳胶手套、围裙、胶靴等。 1台 若干
精液检查器具 普通显微镜。
载玻片、盖玻片、血球计数器、记数计等。 1台
若干
消毒设备 干燥箱。消毒锅。电炉、酒精灯。 1台。1台。若干 玻璃器皿 注射器、试管、滴管、漏斗、玻璃瓶、玻璃棒、烧杯等。 若干
必要的药品、化学试剂 消毒用酒精、来苏尔、治疗不孕的药品、冲洗子宫的药品、配制颗粒冻精解冻液用的试剂等。 若干
其它用品 纱布、棉花、天平、药品橱、洗涤架、污物桶、长柄镊子、瓶刷、搪瓷盘、滤纸、毛巾、肥皂、卫生纸等。若干 若干
5 发情鉴定
5.1 发情期
母牛常年发情，发情周期18d~24d，发情持续期20h~36h，产后第一次发情10d~40d。
5.2 发情表现
5.2.1 发情初期
母牛鸣叫不安，食欲开始减退，想爬跨它牛，但拒绝公牛爬跨，外阴轻微红肿，阴道粘膜充血，流出稀薄透明液体。直肠检查子宫变软，卵巢有一侧增大，在卵巢上有卵泡，无弹性。此期维持10 h左右，不能输精。
5.2.2 发情中期
母牛极度不安，食欲停止，性欲旺盛，求配心切，爬跨它牛，外阴部明显肿胀，流出粘液增多。直肠检查子宫松软，卵泡体积增大，直径1.0㎝~1.5㎝，突出于卵巢表面，弹性强，有波动感。此期约维持8h~12h，输精偏早。
5.2.3 发情末期
母牛性欲减退，不再爬跨它牛，由不安转为安静，外阴部肿胀减退，粘液变稠，呈黄白色。直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，波动很明显，呈熟葡萄状，有一触即破感觉。此期约维持8h~10h，为最佳输精时期。
5.3 鉴定方法
发情鉴定采用外部观察和直肠触摸卵泡相结合，以直肠检查卵泡
发良程度为主要依据。直肠触摸子宫、卵巢，判断其长短、粗细、质地。顺序是：手戴乳胶手套，涂以滑润剂，五指并拢伸入肛门，清除宿粪后，手掌伸平，掌心向下，在骨盆底的正中有一长而稍扁的棒状物为子宫颈。顺着子宫颈向前伸进，可摸到子宫角间沟，沟的两旁各有一条向前弯曲的圆筒状物，是左右子宫角，沿着子宫角大弯向下侧面摸，可摸到扁圆、柔软而有弹性的卵巢。用手指触摸卵巢表面的卵泡发育程度，以确定是否输精。
6 精液解冻
6.1 细管冻精
用长柄镊子从贮藏罐中取出细管后，直接放入38℃~40℃温水中解冻，全部融化后取出，擦干水，用专用剪刀剪开不带棉塞的一端，把有棉塞一端装在输精推杆上，套上外保护套备用。
6.2 解冻液的制备
解冻液制备执行GB/T4143。
6.3 颗粒冻精解冻
取试管一支，加1ml解冻液，放入40℃温水中预热，取出一粒颗冻精投入试管中，不断摇动至接近融化时取出，镜检合格后吸入输精管中备用。
7 输精
7.1 输精方法
采用直肠把握输精法。输精前应先将待配母牛保定于配种架中，用温肥皂水将阴门附近的粪便、污物冲洗干净，然后用温水冲洗，
用卫生纸擦干。输精员将手指甲剪短磨光，手臂套上乳胶手套，涂上一层润滑剂，五指并拢成锥形，插入直肠，排出粪便。隔着直肠壁握住子宫颈管。左手臂稍微下压，使阴门开张。右手持输精管（枪），由阴门缓缓插入，开始先稍向上斜插，避开尿道口，然后再向下平插至子宫颈口，将输精管前端深入子宫颈口内3㎝~4㎝（约2~3个皱壁），将输精管（枪）稍微后拉即可输精，输精后缓慢拔出输精管（枪）。
7.2 注意事项
7.2.1 冻精在38℃~40℃温度下进行镜检，镜检活力0.3以下者不予输精。
7.2.2 直肠检查或输精，母牛努责、肠道形成空洞时，不要硬性抓捏。
7.2.3 冬季输精要防止低温对解冻后精液的冷打击。
7.2.4 输精器严格消毒，每头牛每次用一支，不能重复使用，防止污染。
7.2.5 解冻后要立即输精，精液存放不应超过1h。
7.2.6 输清后要记录配种情况（包括公牛品种、公牛号、母牛号、冻精活力、输精时间、母牛发情状况等）。
8 妊娠检查
8.1 方法
采用直肠检查法。不仅能确定是否妊娠，还可大致确定其妊娠时间和胎儿的活动情况，在配种20d~60d 和90d时各检查一次，即
可准确判定母牛是否怀孕。直肠检查判断的依据：在怀孕初期，要以卵巢、子宫角的形状、质地的变化为主；当胚胎下沉不易触摸时，以卵巢位臵及子宫中动脉的妊娠脉搏为主。
8.2 步骤
先摸到子宫颈，再将中指向前滑动，寻找角间沟，然后将手向前、向下、再向后，分别触摸两个子宫角及卵巢。
8.3 怀孕症状
母牛怀孕后不同时期生殖器官会有不同的变化。
8.3.1 怀孕20d~25d，孕角侧卵巢比另一侧卵巢大，并有黄体，子宫角粗细无变化，但子宫壁较厚，并有弹性。
8.3.2 怀孕60d ，孕角大小为空角的两倍左右波动感明显，角间沟变得宽平，子宫向腹腔下垂，但依然能摸到整个子宫。
8.3.3 怀孕90d，孕侧子宫角变大，直径10㎝~15㎝，波动明显，角间沟消失，有时可触摸到绿豆大小的子叶。
牛人工授精技术规程（DB37/T 306-2002）
1 范围
本标准规定了冷配站所具备的必要设备、发情鉴定、精液、解冻、输精和妊娠检查技术的一般原则。
本标准适用于牛冷配站的冷冻精液输精和人工授精 技术人员。 2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T4143 牛冷冻精液
3 定义
本标准采用下列定义。
3.1 发情
母牛发育到一定年龄，表现出周期性性生理活动。
3.2 产后发情
母牛产犊后第一次发情。
3.3 发情周期
母牛性成熟后，每隔一定时间发情一次，这种有规律的性生理活动周期为发情周期。
4 必要设备
冷配站应具备的必要设备见表1。
表1 冷配站的必要设备
必要设备及用品 名称 数量
贮精设备 液氮罐101。
液氮罐301。
冰箱。 １个
１个
1台
输精设备 输精架。
输精枪（管）、解冻缸（杯）、乳胶手套、围裙、胶靴等。 1台 若干
精液检查器具 普通显微镜。
载玻片、盖玻片、血球计数器、记数计等。 1台
若干
消毒设备 干燥箱。消毒锅。电炉、酒精灯。 1台。1台。若干 玻璃器皿 注射器、试管、滴管、漏斗、玻璃瓶、玻璃棒、烧杯等。 若干
必要的药品、化学试剂 消毒用酒精、来苏尔、治疗不孕的药品、冲洗子宫的药品、配制颗粒冻精解冻液用的试剂等。 若干
其它用品 纱布、棉花、天平、药品橱、洗涤架、污物桶、长柄镊子、瓶刷、搪瓷盘、滤纸、毛巾、肥皂、卫生纸等。若干 若干
5 发情鉴定
5.1 发情期
母牛常年发情，发情周期18d~24d，发情持续期20h~36h，产后第一次发情10d~40d。
5.2 发情表现
5.2.1 发情初期
母牛鸣叫不安，食欲开始减退，想爬跨它牛，但拒绝公牛爬跨，外阴轻微红肿，阴道粘膜充血，流出稀薄透明液体。直肠检查子宫变软，卵巢有一侧增大，在卵巢上有卵泡，无弹性。此期维持10 h左右，不能输精。
5.2.2 发情中期
母牛极度不安，食欲停止，性欲旺盛，求配心切，爬跨它牛，外阴部明显肿胀，流出粘液增多。直肠检查子宫松软，卵泡体积增大，直径1.0㎝~1.5㎝，突出于卵巢表面，弹性强，有波动感。此期约维持8h~12h，输精偏早。
5.2.3 发情末期
母牛性欲减退，不再爬跨它牛，由不安转为安静，外阴部肿胀减退，粘液变稠，呈黄白色。直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，波动很明显，呈熟葡萄状，有一触即破感觉。此期约维持8h~10h，为最佳输精时期。
5.3 鉴定方法
发情鉴定采用外部观察和直肠触摸卵泡相结合，以直肠检查卵泡
发良程度为主要依据。直肠触摸子宫、卵巢，判断其长短、粗细、质地。顺序是：手戴乳胶手套，涂以滑润剂，五指并拢伸入肛门，清除宿粪后，手掌伸平，掌心向下，在骨盆底的正中有一长而稍扁的棒状物为子宫颈。顺着子宫颈向前伸进，可摸到子宫角间沟，沟的两旁各有一条向前弯曲的圆筒状物，是左右子宫角，沿着子宫角大弯向下侧面摸，可摸到扁圆、柔软而有弹性的卵巢。用手指触摸卵巢表面的卵泡发育程度，以确定是否输精。
6 精液解冻
6.1 细管冻精
用长柄镊子从贮藏罐中取出细管后，直接放入38℃~40℃温水中解冻，全部融化后取出，擦干水，用专用剪刀剪开不带棉塞的一端，把有棉塞一端装在输精推杆上，套上外保护套备用。
6.2 解冻液的制备
解冻液制备执行GB/T4143。
6.3 颗粒冻精解冻
取试管一支，加1ml解冻液，放入40℃温水中预热，取出一粒颗冻精投入试管中，不断摇动至接近融化时取出，镜检合格后吸入输精管中备用。
7 输精
7.1 输精方法
采用直肠把握输精法。输精前应先将待配母牛保定于配种架中，用温肥皂水将阴门附近的粪便、污物冲洗干净，然后用温水冲洗，
用卫生纸擦干。输精员将手指甲剪短磨光，手臂套上乳胶手套，涂上一层润滑剂，五指并拢成锥形，插入直肠，排出粪便。隔着直肠壁握住子宫颈管。左手臂稍微下压，使阴门开张。右手持输精管（枪），由阴门缓缓插入，开始先稍向上斜插，避开尿道口，然后再向下平插至子宫颈口，将输精管前端深入子宫颈口内3㎝~4㎝（约2~3个皱壁），将输精管（枪）稍微后拉即可输精，输精后缓慢拔出输精管（枪）。
7.2 注意事项
7.2.1 冻精在38℃~40℃温度下进行镜检，镜检活力0.3以下者不予输精。
7.2.2 直肠检查或输精，母牛努责、肠道形成空洞时，不要硬性抓捏。
7.2.3 冬季输精要防止低温对解冻后精液的冷打击。
7.2.4 输精器严格消毒，每头牛每次用一支，不能重复使用，防止污染。
7.2.5 解冻后要立即输精，精液存放不应超过1h。
7.2.6 输清后要记录配种情况（包括公牛品种、公牛号、母牛号、冻精活力、输精时间、母牛发情状况等）。
8 妊娠检查
8.1 方法
采用直肠检查法。不仅能确定是否妊娠，还可大致确定其妊娠时间和胎儿的活动情况，在配种20d~60d 和90d时各检查一次，即
可准确判定母牛是否怀孕。直肠检查判断的依据：在怀孕初期，要以卵巢、子宫角的形状、质地的变化为主；当胚胎下沉不易触摸时，以卵巢位臵及子宫中动脉的妊娠脉搏为主。
8.2 步骤
先摸到子宫颈，再将中指向前滑动，寻找角间沟，然后将手向前、向下、再向后，分别触摸两个子宫角及卵巢。
8.3 怀孕症状
母牛怀孕后不同时期生殖器官会有不同的变化。
8.3.1 怀孕20d~25d，孕角侧卵巢比另一侧卵巢大，并有黄体，子宫角粗细无变化，但子宫壁较厚，并有弹性。
8.3.2 怀孕60d ，孕角大小为空角的两倍左右波动感明显，角间沟变得宽平，子宫向腹腔下垂，但依然能摸到整个子宫。
8.3.3 怀孕90d，孕侧子宫角变大，直径10㎝~15㎝，波动明显，角间沟消失，有时可触摸到绿豆大小的子叶。