细菌运动观察（一）
关键词：细菌 金黄色葡萄球菌 假单胞菌 假单胞菌 单宁酸 三氯化铁 试剂 北京标准物质网
一、实验目的和要求
(1)学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征。
(2)学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。
二、基本原理
鞭毛是细菌的运动“器官”。细菌是否具有鞭毛、鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0．01～0．02pm．所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜或倒置生物显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用扫描电子显微镜或者环境扫描电子显微镜观察(但观察到的是死体)。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛。必须用鞭毛染色法。 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的莱弗氏(Leifson)染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛。观察细菌的运动性可用压滴法和悬滴法。观察时，要适当减弱光强度以增加反差。若光线太强，细菌和周围的液体难以区分。
三、实验材料与设备
1．菌种
苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、假单胞菌(Pseudomonas sp．)、金黄色葡萄球菌(S．aureus)。假单胞菌属(Pseudomonas) 革兰氏阴性耗氧γ-变形菌纲的一个属，属于假单胞菌科(Pseudomonadaceae)。
2．染色剂
硝酸银鞭毛染色液、莱弗氏(Leifson)鞭毛染色液、0．01％亚甲蓝水溶液。硝酸银鞭毛染色液(制法参照GB／T 4789．28 —2013)：甲液成分为单宁酸8g、FeCl。1．6g、蒸馏水100mL、15％甲醛溶液2mL、NaOH(1％)1mL，冰箱内可以保存3～7d，延长保存期会产生沉淀，但用滤纸除去沉淀后，仍能使用；乙液成分为AgNO32g，蒸馏水100mL，乙液配制方法：待AgNO3溶解后，取出10mL备用，
向其余的90mLAgNO3溶液中滴人NH4OH，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加
NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止；再将备用的10mL AgNO3溶液慢慢地滴入，出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到
摇动后仍旱现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。乙液宜现配现用，冰箱内保存通常一周内仍可使用。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
莱弗氏鞭毛染色液：A液成分为碱性复红1．2g、95％乙醇100mL，B液成分为单宁酸3g、蒸馏水100mL，C液成分为NaCl 1．5g、蒸馏水100mL。临用前将
A、B、C液等量混合均匀后使用。三种溶液在室温下可保存几周；若分别置冰箱保存，可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。
所用试剂应满足但不限于LY／T 1300—2005《工业单宁酸》、LY／T 1640—2005《药用单宁酸》、LY／T 1642—2005《单宁酸分析试验方法》、HG／T 3474—2000《化学试剂 三氯化铁》，氢氧化铵可参考GB／T 631—2007《化学试剂 氨水》。
3．仪器或其他用具
载玻片、盖玻片、凹载玻片(凹玻片)、无菌水、凡士林或真空硅胶、光学显微镜等。
来源：北京标准物质网
细菌运动观察（一）
关键词：细菌 金黄色葡萄球菌 假单胞菌 假单胞菌 单宁酸 三氯化铁 试剂 北京标准物质网
一、实验目的和要求
(1)学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征。
(2)学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。
二、基本原理
鞭毛是细菌的运动“器官”。细菌是否具有鞭毛、鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0．01～0．02pm．所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜或倒置生物显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用扫描电子显微镜或者环境扫描电子显微镜观察(但观察到的是死体)。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛。必须用鞭毛染色法。 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的莱弗氏(Leifson)染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛。观察细菌的运动性可用压滴法和悬滴法。观察时，要适当减弱光强度以增加反差。若光线太强，细菌和周围的液体难以区分。
三、实验材料与设备
1．菌种
苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、假单胞菌(Pseudomonas sp．)、金黄色葡萄球菌(S．aureus)。假单胞菌属(Pseudomonas) 革兰氏阴性耗氧γ-变形菌纲的一个属，属于假单胞菌科(Pseudomonadaceae)。
2．染色剂
硝酸银鞭毛染色液、莱弗氏(Leifson)鞭毛染色液、0．01％亚甲蓝水溶液。硝酸银鞭毛染色液(制法参照GB／T 4789．28 —2013)：甲液成分为单宁酸8g、FeCl。1．6g、蒸馏水100mL、15％甲醛溶液2mL、NaOH(1％)1mL，冰箱内可以保存3～7d，延长保存期会产生沉淀，但用滤纸除去沉淀后，仍能使用；乙液成分为AgNO32g，蒸馏水100mL，乙液配制方法：待AgNO3溶解后，取出10mL备用，
向其余的90mLAgNO3溶液中滴人NH4OH，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加
NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止；再将备用的10mL AgNO3溶液慢慢地滴入，出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到
摇动后仍旱现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。乙液宜现配现用，冰箱内保存通常一周内仍可使用。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
莱弗氏鞭毛染色液：A液成分为碱性复红1．2g、95％乙醇100mL，B液成分为单宁酸3g、蒸馏水100mL，C液成分为NaCl 1．5g、蒸馏水100mL。临用前将
A、B、C液等量混合均匀后使用。三种溶液在室温下可保存几周；若分别置冰箱保存，可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。
所用试剂应满足但不限于LY／T 1300—2005《工业单宁酸》、LY／T 1640—2005《药用单宁酸》、LY／T 1642—2005《单宁酸分析试验方法》、HG／T 3474—2000《化学试剂 三氯化铁》，氢氧化铵可参考GB／T 631—2007《化学试剂 氨水》。
3．仪器或其他用具
载玻片、盖玻片、凹载玻片(凹玻片)、无菌水、凡士林或真空硅胶、光学显微镜等。
来源：北京标准物质网