实验十一 应用薄层色谱法检识中药制剂
（一）目的要求
学习中药制剂的鉴别方法，通过实验要求：
1．掌握薄层色谱法的操作技术及分离原理。
2．掌握中药制剂鉴别的一般程序及定性检识的原理。
3．熟悉检识其所含化学成分的方法与实验技术。
（二）实验原理
本实验是根据中药制剂牛黄解毒片中的主要成分或特征成分的性质，选用适当的溶剂和方法对试样进行预处理，尽量排除干扰物质，达到提高待测成分或特征成分的相对浓度，以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱清晰度，实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量。
（三）实验内容
牛黄解毒片为包衣片。处方为：牛黄50g ，雄黄50g ，石膏200g ，大黄200g ，黄芩150g ，桔梗100g ，冰片25g ，甘草50g 。以上八味药，雄黄水飞或粉碎成极细粉；大黄粉碎成细粉；牛黄、冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包衣即得。
1．牛黄的鉴别
（1）供试液制备；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml 氯仿研磨，滤过，再用10ml 氯仿浸洗滤渣，合并滤液，浓缩至1ml 为供试液。
（2）对照液制备：①取胆酸0.001g 溶于1ml 氯仿中，作为对照品溶液。②取缺牛黄的模拟牛黄解毒片（相当于10片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶G-CMC-Na
样 品：牛黄解毒片供试液
对照品：胆酸对照液
模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（6∶32∶1∶1）
显色剂：喷雾5％磷钼酸乙酸溶液，110℃加热10分钟
2．冰片的鉴别
（1）供试液制备：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml 甲醇-氯仿（1∶1），室温下浸渍30min ，时加振摇，滤过，滤液使成5ml ，作为供试液。
（2）对照液制备：①取冰片适量，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解，制成1ml 含4mg 的溶液。②取缺冰片的模拟牛黄解毒片（相当于2片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶G
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：冰片对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：石油醚-醋酸乙酯-苯（18∶2∶4）
显色剂：喷雾5％磷钼酸乙醇溶液，110℃加热显色
3．大黄的鉴别
（1）供试液制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml 甲醇回流提取15分钟，冷后滤过，滤液使成5ml ，作为供试液。
（2）对照液制备：①取1g 大黄药材，同供试液制备法制成对照液。②分别取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加乙醇溶解成1ml 对照品溶液。③取缺大黄的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶CMC-Na
试 样：牛黄解毒片供试液、
对照品：大黄药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液
大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照液
展开剂：石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层溶液
显色剂：显色前后置日光及紫外光（365nm ）下观察，再喷雾0.5％醋酸镁乙醇溶液显色。
4．黄芩的鉴别
（1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml 甲醇回流提取15分钟，放冷后滤过，滤液使成5ml ，作为供试液。
（2）对照液的制备：①取1g 黄芩，同供试液制备法处理，得对照液。②取黄芩苷对照品适量，加乙醇溶液1ml 含1mg 的对照品溶液。③取缺黄芩的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶CMC-Na
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：黄芩药材对照液，黄芩苷对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）
显色剂：喷雾1％三氯化铁乙醇溶液
5．甘草的鉴别
（1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研细，加乙醚20ml ，回流提取1小时，滤过，残渣挥干乙醚，加入甲醇20ml 加热回流1小时，放冷后滤过，滤液浓缩至2ml 为供试液。
（2）对照液制备：①取甘草药材1g ，剪细，同供试液制备法处理，得对照液；②取缺甘草的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
方法一 薄层板：硅胶CMC-Na
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：甘草对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：先用苯-氯仿-甲醇（10∶10∶1）展开至前沿，取出晾干，
再以苯-氯仿-甲醇（5∶5∶1）作第二次展开。
显色剂：在紫外灯（365nm ）下检视
方法二 薄层板：硅胶G 加1％氢氧化钠溶液铺板，晾干
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：甘草药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（30∶2∶2∶4）
显色剂：喷雾10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，显蓝色斑点
（四）思考题
1．薄层色谱鉴别中药制剂时，通常要制备一系列的对照液，为什么？
2．制备阴性对照液对薄层色谱鉴别中药制剂有什么意义？
3．制备冰片供试液，为什么要在低温或室温条件下操作，对色谱鉴别有什么影响？
4．大黄中5种主要游离蒽醌成分展开后其R f 值为什么不同？请阐明理由。
实验十一 应用薄层色谱法检识中药制剂
（一）目的要求
学习中药制剂的鉴别方法，通过实验要求：
1．掌握薄层色谱法的操作技术及分离原理。
2．掌握中药制剂鉴别的一般程序及定性检识的原理。
3．熟悉检识其所含化学成分的方法与实验技术。
（二）实验原理
本实验是根据中药制剂牛黄解毒片中的主要成分或特征成分的性质，选用适当的溶剂和方法对试样进行预处理，尽量排除干扰物质，达到提高待测成分或特征成分的相对浓度，以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱清晰度，实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量。
（三）实验内容
牛黄解毒片为包衣片。处方为：牛黄50g ，雄黄50g ，石膏200g ，大黄200g ，黄芩150g ，桔梗100g ，冰片25g ，甘草50g 。以上八味药，雄黄水飞或粉碎成极细粉；大黄粉碎成细粉；牛黄、冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包衣即得。
1．牛黄的鉴别
（1）供试液制备；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml 氯仿研磨，滤过，再用10ml 氯仿浸洗滤渣，合并滤液，浓缩至1ml 为供试液。
（2）对照液制备：①取胆酸0.001g 溶于1ml 氯仿中，作为对照品溶液。②取缺牛黄的模拟牛黄解毒片（相当于10片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶G-CMC-Na
样 品：牛黄解毒片供试液
对照品：胆酸对照液
模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（6∶32∶1∶1）
显色剂：喷雾5％磷钼酸乙酸溶液，110℃加热10分钟
2．冰片的鉴别
（1）供试液制备：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml 甲醇-氯仿（1∶1），室温下浸渍30min ，时加振摇，滤过，滤液使成5ml ，作为供试液。
（2）对照液制备：①取冰片适量，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解，制成1ml 含4mg 的溶液。②取缺冰片的模拟牛黄解毒片（相当于2片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶G
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：冰片对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：石油醚-醋酸乙酯-苯（18∶2∶4）
显色剂：喷雾5％磷钼酸乙醇溶液，110℃加热显色
3．大黄的鉴别
（1）供试液制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml 甲醇回流提取15分钟，冷后滤过，滤液使成5ml ，作为供试液。
（2）对照液制备：①取1g 大黄药材，同供试液制备法制成对照液。②分别取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加乙醇溶解成1ml 对照品溶液。③取缺大黄的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶CMC-Na
试 样：牛黄解毒片供试液、
对照品：大黄药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液
大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照液
展开剂：石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层溶液
显色剂：显色前后置日光及紫外光（365nm ）下观察，再喷雾0.5％醋酸镁乙醇溶液显色。
4．黄芩的鉴别
（1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml 甲醇回流提取15分钟，放冷后滤过，滤液使成5ml ，作为供试液。
（2）对照液的制备：①取1g 黄芩，同供试液制备法处理，得对照液。②取黄芩苷对照品适量，加乙醇溶液1ml 含1mg 的对照品溶液。③取缺黄芩的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
薄层板：硅胶CMC-Na
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：黄芩药材对照液，黄芩苷对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）
显色剂：喷雾1％三氯化铁乙醇溶液
5．甘草的鉴别
（1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研细，加乙醚20ml ，回流提取1小时，滤过，残渣挥干乙醚，加入甲醇20ml 加热回流1小时，放冷后滤过，滤液浓缩至2ml 为供试液。
（2）对照液制备：①取甘草药材1g ，剪细，同供试液制备法处理，得对照液；②取缺甘草的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。
（3）薄层色谱检识
方法一 薄层板：硅胶CMC-Na
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：甘草对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：先用苯-氯仿-甲醇（10∶10∶1）展开至前沿，取出晾干，
再以苯-氯仿-甲醇（5∶5∶1）作第二次展开。
显色剂：在紫外灯（365nm ）下检视
方法二 薄层板：硅胶G 加1％氢氧化钠溶液铺板，晾干
试 样：牛黄解毒片供试液
对照品：甘草药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液
展开剂：醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（30∶2∶2∶4）
显色剂：喷雾10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，显蓝色斑点
（四）思考题
1．薄层色谱鉴别中药制剂时，通常要制备一系列的对照液，为什么？
2．制备阴性对照液对薄层色谱鉴别中药制剂有什么意义？
3．制备冰片供试液，为什么要在低温或室温条件下操作，对色谱鉴别有什么影响？
4．大黄中5种主要游离蒽醌成分展开后其R f 值为什么不同？请阐明理由。