GMP管理文件
一、目 的：建立硫酸链霉素检验的标准操作规程，保证正确操作。
二、依 据：《中国兽药典》（2005年版一部） 。
三、适用范围：适用于硫酸链霉素的检验。
四、责 任 者：QC检验员
五、正 文：
1．质量标准：（见硫酸链霉素质量标准）。
2．试剂：
2.01 乙醇 2.02 氯仿
2.03 氢氧化钠试液 2.04 0.1％8-羟基喹啉的乙醇溶液 2.05 次溴酸钠试液 2.06 硫酸铁铵溶液
2.07 氯化钡试液 2.08 盐酸
2.09 醋酸铅试液 2.10 氢氧化钠试液
2.11 五氧化二磷 2.12 氯化钠注射液
2.13 硫酸 2.14 甲醇
2.15 0.2%1,3-萘二酚乙醇溶液 2.16 20%硫酸溶液
2.17 鲎试剂 2.18 细菌内毒素工作标准品
2.19 氯化钡滴定液(0.1mol/L)（见滴定液标准操作规程）
2.20 酞紫指示液（见指示液标准操作规程）
2.21 乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.1mol/L)（见滴定液标准操作规程）
2.22细菌内毒素检查用水
2.13 0.9％无菌氯化钠溶液(以上试液、溶液均见试液、标准液、溶液配制标准操作规程)
3．仪器与用具
3.01 酸度计 3.02 薄膜过滤器
3.03 干燥箱 3.04 平皿
3.05 电子天平 3.06 培养箱
3.07 微生物自动测量分析仪 3.08 回流装置
3.09 硅胶G薄层板 3.10 恒温水浴锅
4.1 性状
本品为白色或类白色的粉末；无臭或几乎无臭，味微苦；有引湿性。
本品在水中易溶，在乙醇或三氯甲烷中不溶。则判定该项合格。
4.2 鉴别：
4.2.1取本品约0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1％ 8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至约15℃，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色。
4.2.2取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液〔取硫酸铁铵0.1g，加0.5mol/L硫酸溶液5ml使溶解〕0.5ml，即显紫红色。
4. 2. 3本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
4.2.4本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（详见一般鉴别试验标准操作规程）。
4.2.5结果判定：上述四项均呈正反应，则判定该项合格。
4.3 检查
4.3.1酸度 取本品，加水制成每1ml中含20万单位的溶液，照PH值测定法测定（详见PH值测定法标准操作规程），PH值应为4.5-7.0，则判定该项合格。
4.3.2溶液的澄清度与颜色 取本品5份，各1.5g分别加水5ml使溶解，溶 液应澄清无色；如显浑浊，与2号浊度标准液（详见溶液的澄清度检查标准操作规程）比较，均不得更浓；如显色，与各色5号标准比色液（详见溶液的颜色检查法标准操作规程第一法）比较，均不得更深，则判定该项合格。
4.3.3硫酸盐 取本品0.25g,精密称定,置碘量瓶中,加水100ml使溶解,用氨试液调节PH值至11,精密加入氯化钡滴定液(0.1mol/L)10ml与酞紫指示液5滴,用乙滴定,注意保持滴定过程中的PH值为11,滴定至紫色开始消褪,加乙醇50ml,继续滴定至紫蓝色消失,并将滴定结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液(0.1mol/L)相当于9.606mg的硫酸盐（SO4）。本品含硫酸盐按干燥品计算应为18.0%～21.5%。则判定该项合格。
4.3.4 链霉素B 取本品0.25g,精密称定,置回流瓶中,加入5ml新鲜配制的硫酸-甲醇溶液(3:97)溶解,加热回流1小时,放冷,用甲醇冲洗冷凝管,合并冲洗液,并用甲醇定量稀释成每1ml中含10mg的溶液,作为供试品溶液。精密称取甘露糖对照品约36mg，置回流瓶中，同法处理后定量制成每1ml中含72ug的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（详见薄层色谱法标准操作规程）试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸-甲醇（50：25：25）为展开剂，展开，晾干，喷以新鲜配制的显色剂（取0.2%1,3-萘二酚乙醇溶液与20%硫酸溶液等体积混合,即得）,在110℃加热数分钟显色,供试品溶液所显链霉素B斑点的颜色与对照溶液的主斑点比较,不得更深(3.0%)。则判定该项合格
4.3.5干燥失重 取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过6.0％(详见干燥失重测定法标准操作规程)。
计算公式如下:
干燥失重%=(W1－W2)/(W1－W0)×100%
式中：W1为瓶+供试品的重量（g）；W2为瓶+供试品干燥后的重量（g）；
W0为瓶干燥后的重量（g）。
4.3.6 异常毒性 取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含2600单位的溶液，依法检查（详见异常毒性检查法操作规程），按静脉注射法给药，观察24小时，则判定该项合格。
4.3.7细菌内毒素 取本品，依法检查（详见细菌内毒素检查标准操作规程），每1000链霉素单位中含内毒素的量应小于0.25EU。则判定该项合格。
4.3.8无菌 取本品，用适宜溶剂溶解，转移至不少于500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，用薄膜过滤法处理后，依法检查（详见无菌检查法标准操作规程），应符合规定。另取装量10ml的0.5%葡萄糖肉汤培养基6管，分别加入每1ml中含2万单位的溶液0.25～0.5ml,3管在30～35℃培养,另3管在20～25℃培养,则判定该项合格。
4.4 含量测定 精密称取本品适量，加灭菌水制成每1ml中约含1000单位的溶液,照抗生素微生物检定法（详见效价测定法标准操作规程）测定。1000链霉素单位相当于1mg的C21H39N7O12。
4.4.2 计算公式
P=log-1[T2+T1-S2-S1 ×I]×100%
T2+S2-T1-S1
式中P为供试品效价（标示量或估计效价的百分数）；
S2为标准品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
S1为标准品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
T2为供试品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
T1为供试品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
I为高、低浓度剂量之比的对数值，2：1时，I=0.301,4:1时，I=0.602。 结果判定：按干燥品计算，每1mg的效价不得少于720链霉素单位。相对偏差不大于±2%，则判定该项合格。
GMP管理文件
一、目 的：建立硫酸链霉素检验的标准操作规程，保证正确操作。
二、依 据：《中国兽药典》（2005年版一部） 。
三、适用范围：适用于硫酸链霉素的检验。
四、责 任 者：QC检验员
五、正 文：
1．质量标准：（见硫酸链霉素质量标准）。
2．试剂：
2.01 乙醇 2.02 氯仿
2.03 氢氧化钠试液 2.04 0.1％8-羟基喹啉的乙醇溶液 2.05 次溴酸钠试液 2.06 硫酸铁铵溶液
2.07 氯化钡试液 2.08 盐酸
2.09 醋酸铅试液 2.10 氢氧化钠试液
2.11 五氧化二磷 2.12 氯化钠注射液
2.13 硫酸 2.14 甲醇
2.15 0.2%1,3-萘二酚乙醇溶液 2.16 20%硫酸溶液
2.17 鲎试剂 2.18 细菌内毒素工作标准品
2.19 氯化钡滴定液(0.1mol/L)（见滴定液标准操作规程）
2.20 酞紫指示液（见指示液标准操作规程）
2.21 乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.1mol/L)（见滴定液标准操作规程）
2.22细菌内毒素检查用水
2.13 0.9％无菌氯化钠溶液(以上试液、溶液均见试液、标准液、溶液配制标准操作规程)
3．仪器与用具
3.01 酸度计 3.02 薄膜过滤器
3.03 干燥箱 3.04 平皿
3.05 电子天平 3.06 培养箱
3.07 微生物自动测量分析仪 3.08 回流装置
3.09 硅胶G薄层板 3.10 恒温水浴锅
4.1 性状
本品为白色或类白色的粉末；无臭或几乎无臭，味微苦；有引湿性。
本品在水中易溶，在乙醇或三氯甲烷中不溶。则判定该项合格。
4.2 鉴别：
4.2.1取本品约0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1％ 8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至约15℃，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色。
4.2.2取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液〔取硫酸铁铵0.1g，加0.5mol/L硫酸溶液5ml使溶解〕0.5ml，即显紫红色。
4. 2. 3本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
4.2.4本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（详见一般鉴别试验标准操作规程）。
4.2.5结果判定：上述四项均呈正反应，则判定该项合格。
4.3 检查
4.3.1酸度 取本品，加水制成每1ml中含20万单位的溶液，照PH值测定法测定（详见PH值测定法标准操作规程），PH值应为4.5-7.0，则判定该项合格。
4.3.2溶液的澄清度与颜色 取本品5份，各1.5g分别加水5ml使溶解，溶 液应澄清无色；如显浑浊，与2号浊度标准液（详见溶液的澄清度检查标准操作规程）比较，均不得更浓；如显色，与各色5号标准比色液（详见溶液的颜色检查法标准操作规程第一法）比较，均不得更深，则判定该项合格。
4.3.3硫酸盐 取本品0.25g,精密称定,置碘量瓶中,加水100ml使溶解,用氨试液调节PH值至11,精密加入氯化钡滴定液(0.1mol/L)10ml与酞紫指示液5滴,用乙滴定,注意保持滴定过程中的PH值为11,滴定至紫色开始消褪,加乙醇50ml,继续滴定至紫蓝色消失,并将滴定结果用空白试验校正。每1ml氯化钡滴定液(0.1mol/L)相当于9.606mg的硫酸盐（SO4）。本品含硫酸盐按干燥品计算应为18.0%～21.5%。则判定该项合格。
4.3.4 链霉素B 取本品0.25g,精密称定,置回流瓶中,加入5ml新鲜配制的硫酸-甲醇溶液(3:97)溶解,加热回流1小时,放冷,用甲醇冲洗冷凝管,合并冲洗液,并用甲醇定量稀释成每1ml中含10mg的溶液,作为供试品溶液。精密称取甘露糖对照品约36mg，置回流瓶中，同法处理后定量制成每1ml中含72ug的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（详见薄层色谱法标准操作规程）试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸-甲醇（50：25：25）为展开剂，展开，晾干，喷以新鲜配制的显色剂（取0.2%1,3-萘二酚乙醇溶液与20%硫酸溶液等体积混合,即得）,在110℃加热数分钟显色,供试品溶液所显链霉素B斑点的颜色与对照溶液的主斑点比较,不得更深(3.0%)。则判定该项合格
4.3.5干燥失重 取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过6.0％(详见干燥失重测定法标准操作规程)。
计算公式如下:
干燥失重%=(W1－W2)/(W1－W0)×100%
式中：W1为瓶+供试品的重量（g）；W2为瓶+供试品干燥后的重量（g）；
W0为瓶干燥后的重量（g）。
4.3.6 异常毒性 取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含2600单位的溶液，依法检查（详见异常毒性检查法操作规程），按静脉注射法给药，观察24小时，则判定该项合格。
4.3.7细菌内毒素 取本品，依法检查（详见细菌内毒素检查标准操作规程），每1000链霉素单位中含内毒素的量应小于0.25EU。则判定该项合格。
4.3.8无菌 取本品，用适宜溶剂溶解，转移至不少于500ml的0.9%无菌氯化钠溶液中，用薄膜过滤法处理后，依法检查（详见无菌检查法标准操作规程），应符合规定。另取装量10ml的0.5%葡萄糖肉汤培养基6管，分别加入每1ml中含2万单位的溶液0.25～0.5ml,3管在30～35℃培养,另3管在20～25℃培养,则判定该项合格。
4.4 含量测定 精密称取本品适量，加灭菌水制成每1ml中约含1000单位的溶液,照抗生素微生物检定法（详见效价测定法标准操作规程）测定。1000链霉素单位相当于1mg的C21H39N7O12。
4.4.2 计算公式
P=log-1[T2+T1-S2-S1 ×I]×100%
T2+S2-T1-S1
式中P为供试品效价（标示量或估计效价的百分数）；
S2为标准品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
S1为标准品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
T2为供试品高浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
T1为供试品低浓度溶液所致抑菌圈直径（面积）的总和。
I为高、低浓度剂量之比的对数值，2：1时，I=0.301,4:1时，I=0.602。 结果判定：按干燥品计算，每1mg的效价不得少于720链霉素单位。相对偏差不大于±2%，则判定该项合格。