摘要：目的：探讨分析药品无菌检测技术中培养基的灭菌控温技术方法。方法：改造灭菌设备，在培养基内同时插入培养基控温探头及仪器控温探头，同时控制培养基灭菌温度，观察该法与传统的控温方式的热穿透试验效果及Fo值。结果：相较传统控温方式，灭菌控温技术的热穿透试验更好，所得培养基能够满足灭菌要求的Fo值。结论：培养基灭菌控温技术在药品无菌检测技术中使用试验结果更加准确，符合药典要求，可推广使用。 关键词：无菌检测技术；培养基；灭菌控温技术 为了保证药物的安全，避免药物被细菌等感染，灭菌及消毒处理已经在药品的生产中广泛使用。近年来无菌药品在临床广泛使用，无菌药品的生产除去对产品的灭菌外，还包括衣物、器具、清洁工具以及培养基等灭菌步骤。药品进行检验时，培养菌的灭菌与否对药物无菌检测结果有着直接影响，在药品生产中占有重要作用。灭菌控温技术温度可控，穿透力较强，同时效果发挥，相较传统的干热等灭菌办法效果显著，因此在基灭菌的培养中广泛使用。而在进行灭菌时，温度对基灭菌的培养效果产生重要影响。传统的灭菌器均为间接控制，培养基的不能达到灭菌要求的等效灭菌时间值，因此，培养基灭菌成功与否与培养基灭菌时的温度有着直接关联，本文主要对灭菌设备控温方式进行改进，探讨灭菌控温技术的临床价值。 1仪器与材料 DMG-0128型湿热灭菌器（ 生产厂家：连云港千樱医疗设备有限公司） ；HeimsenValt 16多路温度验证系统（生产厂家：上海严复机械科技有限公司）；Palltronic完整性检测仪，PallAB05PFRPV空气过滤器（生产厂家：颇尔过滤器北京有限公司）；美国3M公司生产的3Mcomply00135B-D 实验包。采取我公司自制的营养琼脂培养基（生产批号：110524）；嗜热脂肪芽胞杆菌（生产厂家：上海鸿雁生物科技有限公司）。 1.2方法 1.2.1灭菌程序 营养琼脂培养基灭菌条件参数：灭菌温度121oC，灭菌时间15min，置换次数50次，排气时间2s，间歇时间100s，打印间隔1min。压力设置为2500mba，900s纯化水透过速度在0.33mL/min以内，结果符合厂家合格标准。 1.2.2 本次试验在真空程序下进行，完成真空度后，保持原有压力600s，保证升压速率为10分钟1.3kPa以下。满足GMP验证的标准。 1.2.3 将本次试验准备的专用测试包放置在灭菌腔体内，真空内灭菌，观察内部指示卡条呈现出均匀变色，则说明蒸汽能够快速平稳的进入测试垫板，与检测试剂要求一直。 1.2.4 进行满载热穿透试验时，同时在待灭菌培养基内部防止生物指示剂，完成验证后，取出生物指示剂，将其在58oC内的烘烤箱内培养2天，同时选取未进行灭菌的指示剂作为比较物，放入同一培养箱内共同培养。若指示剂变为紫色则说明灭菌效果完成，说明微生物试验结果符合药典的规定。 1.2.5 在湿热灭菌器腔体内均匀放入12个可移动热电偶探头，选取其中1支作为参照物，冷点设计完成，并完成灭菌后，确认灭菌段，对墙体内的温度均匀度进行验证，以±1oC作为标准，保证满足GMP验证的标准，空载温度分布实验数据， 结果符合验证要求。 1.3热穿透试验 1.3.1装载要求 瓶体液体培养基体积控制在三角烧瓶的2/3体积内，三角烧瓶容积为500ml，下排气方式的灭菌器灭菌腔体内装载容量控制在70%，本次试验中共使用24瓶500ml的三角烧瓶。 1.3.2检测方式 传统检测方法：在培养基三角瓶内放置1-4号探头，探头伸入以没入培养基液体为标准；均匀放置5-12号探头，依照培养基灭菌条件灭菌，温度为121oC，持续15min，试验结果显示，F0值未达到灭菌的要求。 改进后方法： 将设备内部控制程序的温度探头改进为可移动式探头，在进行灭菌时，在培养基瓶内均匀放入12支探头及改进后探头，以没入液面为准，将剩余11支探头分别放置入不同的培养基三角烧瓶内，以没入液面为准，试验结果显示，明显优于传统的检测方式。 1.4验证培养基营养成分 选取枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌各1ml，细菌浓度设置为 80cfu/mL，分别放置入4各无菌平皿中，立即将已经进行灭菌营养琼脂培养基及对照培养基各倾注入两个平皿内，每株试验菌各准备2个平皿，摇匀后等待凝固后，在30-35oC内培养，持续2天。结果发现，平均菌落数比较，对照培养基数值在加入菌落数的90%以上，而已经进行灭菌的培养基的数值为对照培养基上的70%以上，满足药典规定标准。 2.讨论 通过本次试验可看出，相同的灭菌试验中，培养菌的灭菌效果与其他物品的灭菌效果有着显著差别，因此在对灭菌程序进行验证时，要依照具体情况，选择合适的灭菌参数，并规范合理科学的灭菌程序，最终经过验证完成。在进行灭菌试验时，要重点对两个方面进行考察，即无菌与活性，要严格制定并执行科学的方案，对传统的规定进行改进，保证培养基溶液的温度能够被直接检测。培养基是微生物生长基质营养成分的保证，本次试验表明，在较热环境下，营养成分会遭受较大破坏，因此可选择下排气式湿热灭菌器，同时要严格依照药典的规定检测培养基的PH值变化，促进培养基的生长。 参考文献： [1]马光磊， 刘权.药品无菌检测中培养基灭菌控温的方法验证[J].海峡药学，2012，24（10）：67-69. [2]谢文，赵宏大，纪绍梅.关于我国药品无菌试验用培养基质量的现状分析及改进建议[J].中国药事，2010，24（1）：67-68. [3]房蕊，鲍英，徐伟东，等.ITS序列分析在药品微生物检验中真菌鉴定与控制中的应用研究[J].药物分析杂志，2011，31（2）：302-305. [4]王绥家， 黄宏星1 关于微生物实验室压力蒸汽灭菌器的若干问题[J]. 海南医学， 2011， 22（13）： 111-1121.
摘要：目的：探讨分析药品无菌检测技术中培养基的灭菌控温技术方法。方法：改造灭菌设备，在培养基内同时插入培养基控温探头及仪器控温探头，同时控制培养基灭菌温度，观察该法与传统的控温方式的热穿透试验效果及Fo值。结果：相较传统控温方式，灭菌控温技术的热穿透试验更好，所得培养基能够满足灭菌要求的Fo值。结论：培养基灭菌控温技术在药品无菌检测技术中使用试验结果更加准确，符合药典要求，可推广使用。 关键词：无菌检测技术；培养基；灭菌控温技术 为了保证药物的安全，避免药物被细菌等感染，灭菌及消毒处理已经在药品的生产中广泛使用。近年来无菌药品在临床广泛使用，无菌药品的生产除去对产品的灭菌外，还包括衣物、器具、清洁工具以及培养基等灭菌步骤。药品进行检验时，培养菌的灭菌与否对药物无菌检测结果有着直接影响，在药品生产中占有重要作用。灭菌控温技术温度可控，穿透力较强，同时效果发挥，相较传统的干热等灭菌办法效果显著，因此在基灭菌的培养中广泛使用。而在进行灭菌时，温度对基灭菌的培养效果产生重要影响。传统的灭菌器均为间接控制，培养基的不能达到灭菌要求的等效灭菌时间值，因此，培养基灭菌成功与否与培养基灭菌时的温度有着直接关联，本文主要对灭菌设备控温方式进行改进，探讨灭菌控温技术的临床价值。 1仪器与材料 DMG-0128型湿热灭菌器（ 生产厂家：连云港千樱医疗设备有限公司） ；HeimsenValt 16多路温度验证系统（生产厂家：上海严复机械科技有限公司）；Palltronic完整性检测仪，PallAB05PFRPV空气过滤器（生产厂家：颇尔过滤器北京有限公司）；美国3M公司生产的3Mcomply00135B-D 实验包。采取我公司自制的营养琼脂培养基（生产批号：110524）；嗜热脂肪芽胞杆菌（生产厂家：上海鸿雁生物科技有限公司）。 1.2方法 1.2.1灭菌程序 营养琼脂培养基灭菌条件参数：灭菌温度121oC，灭菌时间15min，置换次数50次，排气时间2s，间歇时间100s，打印间隔1min。压力设置为2500mba，900s纯化水透过速度在0.33mL/min以内，结果符合厂家合格标准。 1.2.2 本次试验在真空程序下进行，完成真空度后，保持原有压力600s，保证升压速率为10分钟1.3kPa以下。满足GMP验证的标准。 1.2.3 将本次试验准备的专用测试包放置在灭菌腔体内，真空内灭菌，观察内部指示卡条呈现出均匀变色，则说明蒸汽能够快速平稳的进入测试垫板，与检测试剂要求一直。 1.2.4 进行满载热穿透试验时，同时在待灭菌培养基内部防止生物指示剂，完成验证后，取出生物指示剂，将其在58oC内的烘烤箱内培养2天，同时选取未进行灭菌的指示剂作为比较物，放入同一培养箱内共同培养。若指示剂变为紫色则说明灭菌效果完成，说明微生物试验结果符合药典的规定。 1.2.5 在湿热灭菌器腔体内均匀放入12个可移动热电偶探头，选取其中1支作为参照物，冷点设计完成，并完成灭菌后，确认灭菌段，对墙体内的温度均匀度进行验证，以±1oC作为标准，保证满足GMP验证的标准，空载温度分布实验数据， 结果符合验证要求。 1.3热穿透试验 1.3.1装载要求 瓶体液体培养基体积控制在三角烧瓶的2/3体积内，三角烧瓶容积为500ml，下排气方式的灭菌器灭菌腔体内装载容量控制在70%，本次试验中共使用24瓶500ml的三角烧瓶。 1.3.2检测方式 传统检测方法：在培养基三角瓶内放置1-4号探头，探头伸入以没入培养基液体为标准；均匀放置5-12号探头，依照培养基灭菌条件灭菌，温度为121oC，持续15min，试验结果显示，F0值未达到灭菌的要求。 改进后方法： 将设备内部控制程序的温度探头改进为可移动式探头，在进行灭菌时，在培养基瓶内均匀放入12支探头及改进后探头，以没入液面为准，将剩余11支探头分别放置入不同的培养基三角烧瓶内，以没入液面为准，试验结果显示，明显优于传统的检测方式。 1.4验证培养基营养成分 选取枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌各1ml，细菌浓度设置为 80cfu/mL，分别放置入4各无菌平皿中，立即将已经进行灭菌营养琼脂培养基及对照培养基各倾注入两个平皿内，每株试验菌各准备2个平皿，摇匀后等待凝固后，在30-35oC内培养，持续2天。结果发现，平均菌落数比较，对照培养基数值在加入菌落数的90%以上，而已经进行灭菌的培养基的数值为对照培养基上的70%以上，满足药典规定标准。 2.讨论 通过本次试验可看出，相同的灭菌试验中，培养菌的灭菌效果与其他物品的灭菌效果有着显著差别，因此在对灭菌程序进行验证时，要依照具体情况，选择合适的灭菌参数，并规范合理科学的灭菌程序，最终经过验证完成。在进行灭菌试验时，要重点对两个方面进行考察，即无菌与活性，要严格制定并执行科学的方案，对传统的规定进行改进，保证培养基溶液的温度能够被直接检测。培养基是微生物生长基质营养成分的保证，本次试验表明，在较热环境下，营养成分会遭受较大破坏，因此可选择下排气式湿热灭菌器，同时要严格依照药典的规定检测培养基的PH值变化，促进培养基的生长。 参考文献： [1]马光磊， 刘权.药品无菌检测中培养基灭菌控温的方法验证[J].海峡药学，2012，24（10）：67-69. [2]谢文，赵宏大，纪绍梅.关于我国药品无菌试验用培养基质量的现状分析及改进建议[J].中国药事，2010，24（1）：67-68. [3]房蕊，鲍英，徐伟东，等.ITS序列分析在药品微生物检验中真菌鉴定与控制中的应用研究[J].药物分析杂志，2011，31（2）：302-305. [4]王绥家， 黄宏星1 关于微生物实验室压力蒸汽灭菌器的若干问题[J]. 海南医学， 2011， 22（13）： 111-1121.