限制酶切割及电泳的题目 江西东乡 刘春荣
1.现有一长度为3000碱基对(bp)的线性DNA分子，用限制性核酸内切酶酶切后，进行凝胶电泳，使降解产物分开。用酶H单独酶切，结果如图l。用酶B单独酶切，结果如图2。用酶H和酶B同时酶切，结果如图3。该DNA分子的结构及其酶切图谱是 （ ）
2.在DNA 测序工作中，需要将某些限制性内切酶的限制位点在 DNA上定位，使其成为 DNA 分子中的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个 4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA 分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。
据此构建这两种限制性内切酶在该DNA分子上的“限制酶图
谱”如乙图，请判断正确的标示是（ ）
A. 2.8 B. Hind Ⅲ C. 0.3 D. BamHⅠ
3.现有一长度为1000碱基对（bp）的DNA分子，用限制性核
酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，用KpnI单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子，用EcoRI、KpnI同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是的（ ）
4.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是（ ）
A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
5.细菌蛋白质在极端环境条件下可通过肽链之间的二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因分子量不同而以电泳方式分离。下列左图是一个分析细菌蛋白的电泳结果图，“-”代表没加还原剂，“+”代表加有还原剂，还原剂可打断二硫键，“M”代表已知分子量的蛋白质，右侧数字代表蛋白质或多肽的相对分子量。根据左侧结果，下列哪个图案最能代表该细菌原本的多肽结构（注意：“一”代表二硫键）（ ）
6、已知正常的β珠蛋白基因(以βA表示)经MstⅡ限制酶切割后可得到长度为1.15 kb和0.2 kb的两个片段(其中0.2 kb的片段通常无法检测到)，异常的β珠蛋白基因(以βS表示)由于突变恰好在MstⅡ限制酶切割点上，因而失去了该酶切位点，经MstⅡ限制酶处理后只能形成一个1.35 kb的DNA片段，如图1；现用MstⅡ限制酶对编号为1、2、3的三份样品进行处理，并进行DNA电泳，结果如图2，则1、2、3号样品的基因型分别是(以βA、βS表示相关的基因)
SSASAAAAASSSA．ββ、ββ、ββ B．ββ、ββ、ββ
ASSSAAASAASSC．ββ、ββ、ββ D．ββ、ββ、ββ
7、下表为几种限制酶识别的序列和切割的位点。如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。现用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是［ ］
A．1 为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
B．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
C．1 为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ
D．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ
8．Mst Ⅱ是一种限制性内切酶，它总是在CCTGAGG的碱基序列中切断DNA。图中显示了用Mst Ⅱ处理后的正常β－血红蛋白基因片段。镰刀型细胞贫血症的根本原因是β－血红蛋白基因突变。下列有关叙述中，错误的是( )
A．在起初的正常β－血红蛋白基因
中有3个CCTGAGG序列
B．若β－血红蛋白基因某一处
CCTGAGG突变为CCTCCTG，则用
Mst Ⅱ处理该基因后产生3个DNA片段
C．将Mst Ⅱ酶用于镰刀型细胞贫血症的基因诊断，若产生3个DNA片段，则β－血红蛋白基因正常
D．将Mst Ⅱ酶用于镰刀型细胞贫血症的基因诊断，若产生4个DNA片段，则β－血红蛋白基因正常
9、下面是4种限制酶所识别的DNA分子序列和剪切位点图（↓表示剪切点、切出的断面为黏性末端）。请指出下列哪组表达正确［ ］
限制酶1：—↓GATC— 限制酶2：—CATG↓—
限制酶3：—G↓GATCC— 限制酶4：—CCGC↓GG—
A．限制酶1和3剪出的黏性末端相同
B．在使用限制酶的同时还需要解旋酶
C．限制酶1、2、4识别的序列都是由4个脱氧核苷酸组成
D．限制酶1和2切出的DNA片段可通过DNA连接酶拼接
10、限制性核酸内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切,不同的限制性核酸内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现用3种不同的限制性核酸内切酶对一6.2 kb (千碱基对)大小的线状DNA进行剪切后,用凝胶电泳分离各核酸片段,实验结果见下表。 请问:3种不同的限制性核酸内切酶在此DNA片段上的切点位置是图中的
11、右图甲表示某DNA分子经限制酶（EcoRⅠ）完全酶切后的片段电泳结果，若改变条件使其酶切不充分就有可能获得如右图乙所示的电泳结果（Kb即千个碱基对）。下列有关叙述中，正确的是（ ）
A．该DNA分子全长为32Kb
B．该DNA分子中含有9个限制酶（EcoRⅠ）酶切位点
C．适当增加限制酶（EcoRⅠ）浓度，可得到图乙的结果
D．适当缩短反应时间，可得到图乙的结果
1、解析：由于分子共3000bp，所以用酶H单独酶切，结果得1000bp和2000bp，说明酶H只有一个切点。用酶B单独酶切，结果得400bp、600bp、2000bp，共3000bp，说明酶B有两个切点。用酶H和1酶B同时酶切，结果得400bp、600bp、1400bp三种，400+600+1400=2400bp，而该DNA分子有3000bp，所以可能还有一个600bp。对照条件，图A符合要求。图B
中用酶
B单独切结果为400bp、600bp、1400bp，与题不符；图C中用酶B单独切结果为400bp、1200bp、1400bp，与题不符；图D酶H有两个切点，酶B只有一个切点，与题不符。
答案：A
2、解析：注意图中的数字表示的是长度。也就是说，在电泳时，1.2kb长度的连出现在1.2kb数字位置，2.8kb长度的连出现在2.8kb数字位置，即这条链被切成两段，分别是1.2kb和2.8kb. 答案：C 3、答案：D 4、A
5、解析：本题是有关多肽结构的判断。从左图可以看出该多肽的分子量大约是130，打断二硫键后的片段中，较小的片段分子量大约是30，较大的片段分子量大约是70。由此可以判断打断二硫键后的片段中有两个较小的片段、一个较大的片段，所以选项B是正确的。答案B
6、[答案] A [解析] 由于0.2 kb的DNA片段通常无法检测到，而电泳结果显示经过MstⅡ限制酶处理的样品2中有两个不同大小的DNA片段，应该一个是1.35 kb的DNA片段，另外一个是
1.15 kb的DNA片段；DNA的片段越小，那么其在电泳场中的移动速度越快，这样样品1的是1.35 kb的DNA片段，样品3的是1.15 kb的DNA片段，因此1、2、3号样品的基因型分别是βSβS、βAβS、βAβA。
7、B 8、C 9、A 10答案:D 11、答案D
由一道习题引发的思考
征军 （兴化市文正实验学校 225700）
习题：在DNA 测序工作中，需要将某些限制性内切酶的限制位点在 DNA上定位，使其成为 DNA 分子中的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个 4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA 分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。
据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA 分子上的限制位点数目是以下哪一组？（ ）
A．HindⅢ1个，BamHⅠ2个 B．HindⅢ2个，BamHⅠ3个C．HindⅢ2个，BamHⅠ1个
D．HindⅢ和BamHⅠ各有2个
分析：此题是一道信息题，解决此类题目首先应强化学生的心理，信息题一般是高起点，低落点，看到此类题目首先要自信，再用具体知识解决。
此题借用分子生物学的基本手段考查学生对限制性核酸内切酶的理解和运用，重点是对酶切位点的认识。题目已经明确是4kb线性DNA 分子，限制酶 HindⅢ切割会产生2.8kb和1.2kb两个片段，所以应该是一个酶切位点；限制酶BamHⅠ切割会产生1.8kb、1.3kb和0.9kb三个片段，同理应该是两个酶切位点(如下图)。答案应选A。
———————H———— ———B—————B————
2.8kb 1.2kb （注：不好确定顺序，3种情况）
思考：可以进一步确定两种酶切位点的顺序。根据题意用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解DNA 分子会产生1.8kb、1.0kb、0.9kb和0.3kb四个片段，数值对比发现
限制酶 HindⅢ酶切位点应在限制酶BamHⅠ切割后的1.3kb区段中，同时考虑限制酶 HindⅢ切割会产生2.8kb和1.2kb两个片段，数值排列分析后酶切位点的顺序如下图：
————————B——————H———B—————
1.8kb 1.0kb 0.3kb 0.9kb
反思：近几年基因工程的工具酶是考查的热点，有加大难度的趋势，此题可进一步延伸变式， 如下：
1． 用限制酶HindⅢ降解一个 4kb大小的环形DNA 分子，会产生2.8kb和1.2kb两个片
段，说明
2． 用限制酶BamHⅠ降解一个 4kb大小的环形DNA 分子，会产生1.8kb、1.3kb和0.9kb
三个片段，说明
3． 用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个 4kb大小的环形DNA 分子，
会产生1.8kb、1.0kb、0.7kb、0.2 kb和0.3kb四个片段，确定酶切位点在环性DNA 分子的顺序并标明具体数值。
答案：1. 环性DNA 分子有限制酶HindⅢ的2个酶切位点
2. 环性DNA 分子有限制酶BamHⅠ3个酶切位点
3.
限制酶切割及电泳的题目 江西东乡 刘春荣
1.现有一长度为3000碱基对(bp)的线性DNA分子，用限制性核酸内切酶酶切后，进行凝胶电泳，使降解产物分开。用酶H单独酶切，结果如图l。用酶B单独酶切，结果如图2。用酶H和酶B同时酶切，结果如图3。该DNA分子的结构及其酶切图谱是 （ ）
2.在DNA 测序工作中，需要将某些限制性内切酶的限制位点在 DNA上定位，使其成为 DNA 分子中的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个 4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA 分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。
据此构建这两种限制性内切酶在该DNA分子上的“限制酶图
谱”如乙图，请判断正确的标示是（ ）
A. 2.8 B. Hind Ⅲ C. 0.3 D. BamHⅠ
3.现有一长度为1000碱基对（bp）的DNA分子，用限制性核
酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，用KpnI单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子，用EcoRI、KpnI同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是的（ ）
4.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是（ ）
A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
5.细菌蛋白质在极端环境条件下可通过肽链之间的二硫键维持稳定。已知不同的多肽产物可因分子量不同而以电泳方式分离。下列左图是一个分析细菌蛋白的电泳结果图，“-”代表没加还原剂，“+”代表加有还原剂，还原剂可打断二硫键，“M”代表已知分子量的蛋白质，右侧数字代表蛋白质或多肽的相对分子量。根据左侧结果，下列哪个图案最能代表该细菌原本的多肽结构（注意：“一”代表二硫键）（ ）
6、已知正常的β珠蛋白基因(以βA表示)经MstⅡ限制酶切割后可得到长度为1.15 kb和0.2 kb的两个片段(其中0.2 kb的片段通常无法检测到)，异常的β珠蛋白基因(以βS表示)由于突变恰好在MstⅡ限制酶切割点上，因而失去了该酶切位点，经MstⅡ限制酶处理后只能形成一个1.35 kb的DNA片段，如图1；现用MstⅡ限制酶对编号为1、2、3的三份样品进行处理，并进行DNA电泳，结果如图2，则1、2、3号样品的基因型分别是(以βA、βS表示相关的基因)
SSASAAAAASSSA．ββ、ββ、ββ B．ββ、ββ、ββ
ASSSAAASAASSC．ββ、ββ、ββ D．ββ、ββ、ββ
7、下表为几种限制酶识别的序列和切割的位点。如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点。现用BamHⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是［ ］
A．1 为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
B．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
C．1 为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ
D．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ
8．Mst Ⅱ是一种限制性内切酶，它总是在CCTGAGG的碱基序列中切断DNA。图中显示了用Mst Ⅱ处理后的正常β－血红蛋白基因片段。镰刀型细胞贫血症的根本原因是β－血红蛋白基因突变。下列有关叙述中，错误的是( )
A．在起初的正常β－血红蛋白基因
中有3个CCTGAGG序列
B．若β－血红蛋白基因某一处
CCTGAGG突变为CCTCCTG，则用
Mst Ⅱ处理该基因后产生3个DNA片段
C．将Mst Ⅱ酶用于镰刀型细胞贫血症的基因诊断，若产生3个DNA片段，则β－血红蛋白基因正常
D．将Mst Ⅱ酶用于镰刀型细胞贫血症的基因诊断，若产生4个DNA片段，则β－血红蛋白基因正常
9、下面是4种限制酶所识别的DNA分子序列和剪切位点图（↓表示剪切点、切出的断面为黏性末端）。请指出下列哪组表达正确［ ］
限制酶1：—↓GATC— 限制酶2：—CATG↓—
限制酶3：—G↓GATCC— 限制酶4：—CCGC↓GG—
A．限制酶1和3剪出的黏性末端相同
B．在使用限制酶的同时还需要解旋酶
C．限制酶1、2、4识别的序列都是由4个脱氧核苷酸组成
D．限制酶1和2切出的DNA片段可通过DNA连接酶拼接
10、限制性核酸内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切,不同的限制性核酸内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现用3种不同的限制性核酸内切酶对一6.2 kb (千碱基对)大小的线状DNA进行剪切后,用凝胶电泳分离各核酸片段,实验结果见下表。 请问:3种不同的限制性核酸内切酶在此DNA片段上的切点位置是图中的
11、右图甲表示某DNA分子经限制酶（EcoRⅠ）完全酶切后的片段电泳结果，若改变条件使其酶切不充分就有可能获得如右图乙所示的电泳结果（Kb即千个碱基对）。下列有关叙述中，正确的是（ ）
A．该DNA分子全长为32Kb
B．该DNA分子中含有9个限制酶（EcoRⅠ）酶切位点
C．适当增加限制酶（EcoRⅠ）浓度，可得到图乙的结果
D．适当缩短反应时间，可得到图乙的结果
1、解析：由于分子共3000bp，所以用酶H单独酶切，结果得1000bp和2000bp，说明酶H只有一个切点。用酶B单独酶切，结果得400bp、600bp、2000bp，共3000bp，说明酶B有两个切点。用酶H和1酶B同时酶切，结果得400bp、600bp、1400bp三种，400+600+1400=2400bp，而该DNA分子有3000bp，所以可能还有一个600bp。对照条件，图A符合要求。图B
中用酶
B单独切结果为400bp、600bp、1400bp，与题不符；图C中用酶B单独切结果为400bp、1200bp、1400bp，与题不符；图D酶H有两个切点，酶B只有一个切点，与题不符。
答案：A
2、解析：注意图中的数字表示的是长度。也就是说，在电泳时，1.2kb长度的连出现在1.2kb数字位置，2.8kb长度的连出现在2.8kb数字位置，即这条链被切成两段，分别是1.2kb和2.8kb. 答案：C 3、答案：D 4、A
5、解析：本题是有关多肽结构的判断。从左图可以看出该多肽的分子量大约是130，打断二硫键后的片段中，较小的片段分子量大约是30，较大的片段分子量大约是70。由此可以判断打断二硫键后的片段中有两个较小的片段、一个较大的片段，所以选项B是正确的。答案B
6、[答案] A [解析] 由于0.2 kb的DNA片段通常无法检测到，而电泳结果显示经过MstⅡ限制酶处理的样品2中有两个不同大小的DNA片段，应该一个是1.35 kb的DNA片段，另外一个是
1.15 kb的DNA片段；DNA的片段越小，那么其在电泳场中的移动速度越快，这样样品1的是1.35 kb的DNA片段，样品3的是1.15 kb的DNA片段，因此1、2、3号样品的基因型分别是βSβS、βAβS、βAβA。
7、B 8、C 9、A 10答案:D 11、答案D
由一道习题引发的思考
征军 （兴化市文正实验学校 225700）
习题：在DNA 测序工作中，需要将某些限制性内切酶的限制位点在 DNA上定位，使其成为 DNA 分子中的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个 4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA 分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。
据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA 分子上的限制位点数目是以下哪一组？（ ）
A．HindⅢ1个，BamHⅠ2个 B．HindⅢ2个，BamHⅠ3个C．HindⅢ2个，BamHⅠ1个
D．HindⅢ和BamHⅠ各有2个
分析：此题是一道信息题，解决此类题目首先应强化学生的心理，信息题一般是高起点，低落点，看到此类题目首先要自信，再用具体知识解决。
此题借用分子生物学的基本手段考查学生对限制性核酸内切酶的理解和运用，重点是对酶切位点的认识。题目已经明确是4kb线性DNA 分子，限制酶 HindⅢ切割会产生2.8kb和1.2kb两个片段，所以应该是一个酶切位点；限制酶BamHⅠ切割会产生1.8kb、1.3kb和0.9kb三个片段，同理应该是两个酶切位点(如下图)。答案应选A。
———————H———— ———B—————B————
2.8kb 1.2kb （注：不好确定顺序，3种情况）
思考：可以进一步确定两种酶切位点的顺序。根据题意用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解DNA 分子会产生1.8kb、1.0kb、0.9kb和0.3kb四个片段，数值对比发现
限制酶 HindⅢ酶切位点应在限制酶BamHⅠ切割后的1.3kb区段中，同时考虑限制酶 HindⅢ切割会产生2.8kb和1.2kb两个片段，数值排列分析后酶切位点的顺序如下图：
————————B——————H———B—————
1.8kb 1.0kb 0.3kb 0.9kb
反思：近几年基因工程的工具酶是考查的热点，有加大难度的趋势，此题可进一步延伸变式， 如下：
1． 用限制酶HindⅢ降解一个 4kb大小的环形DNA 分子，会产生2.8kb和1.2kb两个片
段，说明
2． 用限制酶BamHⅠ降解一个 4kb大小的环形DNA 分子，会产生1.8kb、1.3kb和0.9kb
三个片段，说明
3． 用限制酶 HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个 4kb大小的环形DNA 分子，
会产生1.8kb、1.0kb、0.7kb、0.2 kb和0.3kb四个片段，确定酶切位点在环性DNA 分子的顺序并标明具体数值。
答案：1. 环性DNA 分子有限制酶HindⅢ的2个酶切位点
2. 环性DNA 分子有限制酶BamHⅠ3个酶切位点
3.