色谱分析综合体
一．选择题
1．在色谱分析中，用于定量的参数是 ( B )
A 保留时间调整保留值 C 峰面积 D 半峰宽
2．塔板理论不能用于 ( D )
A 塔板数计算B 塔板高度计算C 解释色谱流出曲线的形状解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关
3．在气-固色谱分析中, 色谱柱内装入的固定相为 ( D )
A 一般固体物质B 载体 C 载体+固定液固体吸附剂
4．当载气线速越小，范式方程中，分子扩散项B 越大，所以应选下列气体中哪一种
作载气最有利？ ( D )
A H 2 B He C Ar N 2
5．试指出下述说法中, 哪一种是错误的? ( C )
A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可以进行定量分析
C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度体现了组分在柱中的运动情况
6．为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是： ( C )
A 苯 B 正庚烷 C 正构烷烃 D 正丁烷和丁二烯
7．试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（ C ）
A N 2 B H 2 C O 2 D He
8．试指出下列说法中，哪一个是错误的？（ A ）
A 固定液是气相色谱法固定相 B N 2、H 2等是气相色谱流动相
C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法是一个分离效能高，分析速度快的分析方法
9．在气-液色谱法中, 首先流出色谱柱的组分是 ( A )
A 溶解能力小 B 吸附能力小C 溶解能力大D 吸附能力大
10．根据范第姆特议程式，指出下面哪种说法是正确的？ （ A ） A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时，流速最小 D 最佳塔板高度时，流速最大
二．填空题
1．按流动相的物态可将色谱法分为 气相色谱法和 液相色谱法 。前者的流动相的 气体，后者的流动相为 液体 。
2．气相色谱法多用高沸点的 有机 化合物涂渍在惰性载体上作为固定相，一般只要在450 ℃以下，有 1.5 至10 Kp a 的蒸气压且稳定性好的 有机和无机化合物都可用气相色谱法进行分离。
3．气相色谱仪由如下五个系统构成：气路系统、进样系统、分离系统、温控系统和检测记录系统。
4．气相色谱常用的检测器有 热导检测器 ，氢火焰检测器 ， 电子捕获检测器 和 火焰光度检测器 。
三、简答题
1、组分A 、B 在某气液色谱柱上的分配系数分别为495和467。试问在分离时哪个组分先流出色谱柱。
答：根据分配系数的定义：
c s 分配系数小的组分先流出色谱柱，因此B 先流出色谱柱。
c g K =
2、为什么说分离度R 可以作为色谱柱的总分离效能指标？
答：由
R =t R (2) -t R (1)
(W b (1) +W b (2) ) 2=2(t R (2) -t R (1) ) W b (1) +W b (2) 及R =n eff
4⋅' ' t R (2) -t R (1)
t R (2) =n eff 4⋅r 2, 1-1 可知
r 2, 1R 值越大，相邻两组分分离越
好。而R 值的大小则与两组分保留值和峰的宽度有关。对于某一色谱柱来说，两组分保留值差别的大小主要取决于固定液的热力学性质，反映了柱选择性的好坏；而色谱峰的宽窄则主要由色谱过程的动力学因素决定，反映了柱效能的高低。因此R 实际上综合考虑了色谱过程的热力学和动力学性质，故可将其作为色谱柱的总分离效能指标。
3、气相色谱定性的依据是什么？主要有哪些定性方法？ 答：不同组分由于其结构不同，与固定相的作用同，因而流出柱的时间不相同。
4、如何选择气液色谱固定液？ 答：依据相似相溶原则选择固定液。
5、气相色谱定量的依据是什么？为么要引入定量校正因子？有哪些主要的定量方法？各适于什么情况？
答：色谱定量的依据是： 在一定的色谱条件下，进入检测器的被测组分的质量m i 与检测器产生的响应信号（峰面积A i 或峰高h i ）成正比，即：
m i =f i ⋅A i 引入定量校正因子的原因：因为A i 的大小和组分的
性质有关，因此，同一检测器对不同组分具有不同的响应值，故相同质量的不同物质通过检测器时，产生的峰面积不等，因而不能直接应用峰面积计算组分的含量。为此，引入“定量校正因子”以校正峰面积，使之能真实反映组分含量。 归一化法：应用该方法的前提条件是试样中各组分必须全部流出色谱柱，并在色谱图上都出现色谱峰。
外标法：即所谓校准曲线法（A －c 曲线）。外标法简便，不需要校正因子，但进样量要求十分准确，操作条件也需严格控制。适用于日常控制分析和大量同类样品的分析。
内标法将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据被测物和内标物的质量及其在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的含量。内标法准确，操作条件要求不严。
四、计算题
1、在一根长3m 的色谱柱上，分析某试样时，得两个组分的调整保留时间分别为13min 及16min ，后者的峰底宽度为1min ，计算：
1）该色谱柱的有效塔板数； 2）两组分的相对保留值；3）如欲使两组分的分离度R ＝1.5，需要有效塔板数为多少？此时应使用多长的色谱柱？ 解：n eff t ' R 2t ' R 2L 16==5. 54() =16() =16⨯() 2=4096H eff W 1/2W b 1 t '16R (2) ==1. 23t '13R (1)
r 2, 1r 2, 1=若使R=1.5，柱效能为 n eff =16∙R 2⋅( 1. 232) =16∙1. 52∙() =1029r 2, 1-11. 23-1
此时对应的柱长为：
1029L =4096⨯3. 0=0. 75(m )
2、丙烯和丁烯的混合物进入气相色谱柱后测得：空气、丙烯、丁烯保留时间分别为0.5，3.5，4.8min ，其相应的峰宽分别为0.2，0.8，1.0min 。计算（1）丁
烯在这个柱上的分配比是多少？（2）丙烯和丁烯的分离度是多少？ 解：k = 2(t R (2) -t R (1) ) 2(4. 8-3. 5) m s t '4. 8-0. 5=R ==8. 6R ===1. 44m g t 00. 5W b (2) +W b (1) 1. 0+0. 8
3、化合物A 与正二十四烷及正二十五烷相混合注入色谱柱试验，测得的调整保留时间为：A 10.20min；n －C 24H 50 9.18min；n －C 25H 52 11.56min。计算化合物A 的保留指数（I A ）。
lg t '
R (i ) -lg t ' R (n ) I i =100⨯(n +) lg t '
R (n +1) -lg t ' R (n )
=100⨯[24+lg 10. 2-lg 9. 18) =2445. 7lg 11. 56-lg 9. 18
4、对只含有乙醇、正庚烷、苯和乙酸乙酯的某化合物进行色谱分析，其测定数据如下：
计算各组分的质量分数。
解：用归一化法
w i =
m i m i ⨯100%=⨯100% m m 1+m 2+ +m i + +m n
A i ⋅f i ' =⨯10%0=A 1⋅f 1' +A 2⋅f 2' + +A i ⋅f i ' +A n ⋅f n ' A i ⋅f i ' n ⨯10%0∑A i ⋅f i '
i =1
∑A ⋅f i
1n ' i =5. 0⨯0. 64+9. 0⨯0. 7+4. 0⨯0. 78+7. 0⨯0. 79=18. 15
A i ⋅f i ' ⨯100%＝
'
i w 乙醇=∑A ⋅f i
i =1n 5. 0⨯0. 64苯和乙酸乙酯的质量分数⨯100%=17. 6%同理正庚烷、18. 15
分别为34.7% 、 17.2% 、30.5%。
5、用甲醇作内标，称取0.0573g 甲醇和5.8690g 环氧丙烷试样，混合后进行色谱分析，测得甲醇和水的峰面积分别为164mm 2和186mm 2，校正因子分别为0.59和0.56。 计算环氧丙烷中水的质量分数。
解： m 水＝'⋅A 水f 水⨯m '⋅A 甲f 甲 甲
m 水w ⨯100＝水m 试'⋅A 水f 水⨯m '⋅A 甲f 甲m 试甲0. 56⨯186⨯0. 0573 ＝⨯100=1. 05⨯1005. 8690
1、液相色谱有几种类型 ? 它们的保留机理是什么 ? 在这些类型的应用中 , 最适宜分离的物质是什么 ?
解 : 液相色谱有以下几种类型 : 液 - 液分配色谱 ; 液 - 固吸附色谱 ; 化学键合色谱 ; 离子交换色谱 ; 离子对色谱 ; 空间排阻色谱等 . 液 - 固吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的 . 最适宜分离的物质为中等相对分子质量的油溶性试样，凡是能够用薄层色谱分离的物质均可用此法分离。其中 ; 液 - 液分配色谱的保留机理是通过组分在固定相和流动相间的多次分配进行分离的。可以分离各种无机、有机化合物。 2、在ODS 固定相上，以甲醇为流动相，某组分的分配容量k1=1.2，如以乙腈为
流动相，其k 增加还是减少? 为什么?
解：据题意为反相色谱体系。k 值增加，在反相色谱体系中，流动相由甲醇变为乙腈，溶剂极性参数由5.1变为5.8，增加了，但组分在流动相中的溶解度反而
减小，所以k 值增大。由1.2增大为2.24。
3、在反相色谱中，流动相从40%（V/V）甲醇—水改变为60%（V/V）甲醇—水，
问组分的调整保留值将改变多少? 为什么? （P ’甲醇=5.1，P ’水=5.1）
提示：对于由溶剂A 和B 组成的二元混合溶剂，其极性可表示为
Pab ‘=a P a’ b P b’
式中a 和b 分别为溶剂A 和B 在混合溶剂中的分数。
解：在40%配比时，混合溶剂的极性为 P1’ =0.46×5.1 0.6×10.2=8.16 在60%配比时，混合溶剂的极性为 P2’ =0.6×5.1 0.4×10.2=7.14
P2’= P2’- P2’=7.14-8.16= -1.02
根据反相色谱体系∴在反相色谱中，流动相的极性变弱（P ’由8.16变为7.14），溶剂强度增加，洗脱能力增加，因而使组分的调整保留时间减少到原来的1/3.2。
4、某色谱体系采用25%三氯甲烷/正己烷为流动相，发现组分分离不十分理想，想通过改变流动相的选择性来改善分离选择性，选用乙醚/正己烷为流动相，问
乙醚/正己烷的比例为多少? （P ’ CHCl3=5.1，P ’乙醚=5.1）
提示：流动相选择性的改变是通过保持溶剂强度不变时改变流动相组成来实现的，
改变前流动相A/B和改变后的流动相A/C的组成有下列关系：
解：25%的CHCl3/正己烷与37%乙醚/正己烷的溶剂强度相等，但对样品的分离
选锋性不同。
填空：
1. 氢火焰离子化检测器和热导池检测器分别属于_质量型__和___浓度__型检测器。气相色谱仪的心脏是_色谱柱___。
2. 固定液一般是按照__相似相溶___原理选择；在用极性固定液分离极性组分时，分子间作用力主要是__诱导力____，极性愈大，保留时间就愈___长__。
3. 固定液通常是高沸点的有机化合物，这主要是为了保证固定液在使用温度下有____较好的热稳定性____，防止___发生不可逆的化学反应____。
4. 用于气液色谱的担体主要分为____白色担体___、___红色担体___两类。
5. 与填充柱相比，毛细管色谱柱的相比β较大，有利于实现快速分析。但其柱容量_较小_。
6. 在HPLC 仪中，为了克服流动相流经色谱柱时受到的阻力，要安装_耐高压的六通阀___。
7. 气相色谱分析中，载气仅起输送作用；而液相色谱分析中，流动相还要直接参加__实际的分配过程__，要想提高高效液相色谱的柱效，最有效的途径是__使用小粒径填料_。
8. 欲分离位置异构体化合物，宜采用的高效液相色谱的分离模式是__梯度洗脱___。
9、色谱法中，将填入玻璃管内静止不动的一相称为固定相，自上而下运动的一相称为流动相，装有固定相的柱子称为色谱柱。
10、液相色谱检测器一般可用紫外可见分光光度检测器，荧光检测器；气相色谱检测器可用热导检测器，氢火焰离子检测器，电子俘获检测器等。
色谱学分析基础：
1、色谱定性的方法都有哪些？
答、(1) 用保留时间定性(2) 用相对值保留定性(3) 用保留指数定性(4)用化学反应配合色谱定性 (5)用不同类型的检测器定性⑹色谱和各种光谱或波谱联用
2、内标法定量分析时，内标物选择应满足那些条件？
答：①试样中不含有该物质②与被测组分性质比较接近③不与试样发生化学反应④出峰位置应位于被测组分接近，且无组分峰影响
气相色谱
6. 对载体和固定液的要求分别是什么?
答：载体要求:①具有化学惰性②好的热稳定性③有一定的机械强度④有适当的比表面，表面无深沟，以便是固定液成为均匀的薄膜，要有较大的空隙率，以便减小柱压降。对固定液的要求：应对被分离试样中的各组分具有不同的溶解能力，较好的热稳定性，并且不与被分离组分发生不可逆的化学反应。
固定液的选择原则：①“相似相容”原则，②固定液和被分离物分子之间的特殊作用力，③利用混合物固定液④利用协同效应选择固定液
10．假设一个未知油剂样品，请设计一种气象色谱分析方法，并概述分析过程。
液相色谱：
11、正相HPLC 与反相HPLC 的主要不同之处什么？各适合分离什么物质？
答：正相HPLC 是指以亲水性的填料做固定相，以疏水性溶剂或混合物做流动相的液相色谱，主要用于分离醇类，类脂代化合物、磷脂类化合物，脂肪酸以及其他化合物。
反相HPLC 是指以强疏水性的填料作固定相，以可以和水混合的有机溶
剂做流动相的液相色谱，主要用于分离生物大分子、卤化物和肽及蛋白质，含卢芳烃，小分子的核酸、核苷酸、多环芳烃等；
12、何为梯度洗脱？什么情况下采用梯度洗脱？
答：梯度洗脱就是有两种（或两种以上）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程度连续的改变，以改变流动相的配比和极性。
适合:①具有较宽K 范围的样品，及所有的组分的色谱峰的K 值不能在0.5-20之间②大分子样品，相对分子质量大于1000的，尤其是生物样品③样品中含有高保留时间的干扰成分，在一次分析中如不把他洗脱出去，就会污染色谱柱，并影响下一次分析。④即使在使用等度时也可以使用梯度洗脱选择流动相的比例。
3、液相色谱中最常用的检测器是什么检测器，它适合那些物质的检测？
答：最常用的是紫外可见分光光度检测器，适合在可见或紫外光区有吸收物质的检测；
4、某组分在ODS 柱上, 以80％甲醇作流动相时的保留时间为10min, 如果用60％甲醇作流动相，组分的保留时间是增加，还是减小？如果将80％甲醇换成80％异丙醇后，又会怎样变化呢？并请作出解释。
5、高效液相色谱法的特点 答:特点在于高分离性能、高灵敏度、高分析速度、可以自动化运行
6、在一定条件下，两个组分的保留时间分别为12.2s 和12.8s ，计算分离度。t 4⨯12. 2W =4==0. 81333600(已知n=3600) t 4⨯12. 8=0. 8533解： W =4=
2⨯(12. 8-12. 2) R ==0. 720. 8533+0. 8133分离度：
22⎛R 2⎫⎛1. 5⎫L 2= 0. 72⎪⎪⨯1=4. 34m R ⎪⎪⨯L 1= ⎝⎭⎝1⎭
7、在一定条件下，两个组分的调整保留时间分别为85秒和100秒，要达到完全分离，即R =1.5 。计算需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板高度为0.1 cm，柱长是多少？
解：r 21= 100 / 85 = 1.18
n 有效 = 16R 2 [r 21 / (r 21 —1) ]2 = 16×1.52 ×(1.18 / 0.18 ) 2 = 1547（块）
L 有效 = n 有效·H 有效 = 1547×0.1 = 155 cm
即柱长为1.55米时，两组分可以得到完全分离。
色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 色谱法：当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。
一、单项选择题 b 1R 1b 2R 2
1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（ ）。 A 、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法 2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离。
A 、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器
3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？
A 、0.5μm B、0.45μm C、0.6μm D、0.55μm
4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？
A 、改变流动相的种类或柱子 B、改变固定相的种类或柱长 C、改变固定相的种类和流动相的种类D 、改变填料的粒度和柱长
5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（ ）
A 、甲醇/水（83/17） B、甲醇/水（57/43） C、正庚烷/异丙醇（93/7）
D 、乙腈/水（1.5/98.5）
6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（ ）检测器不能使用梯度洗脱。
A 、紫外检测器 B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器
7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（ ）范围内。
A 、10～30cm B、 20～50m C 、1～2m D、2～5m 8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（ ）
A 、组分与流动相 B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相D 、组分与组分
9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（ ）的操作
A 、改变柱长 B、改变填料粒度C 、改变流动相或固定相种类D 、改变流动相的流速
10. 液相色谱中通用型检测器是（ ）
A 、紫外吸收检测器 B、示差折光检测器 C、热导池检测器 D、氢焰检测器
11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器
A 、荧光检测器 B、示差折光检测器 C、电导检测器 D、吸收检测器
12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（ ）
A 、提高柱温 B、降低板高 C、降低流动相流速 D、减小填料粒度
13. 在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（ b ）
A 、改变固定相种类 B、改变流动相流速 C、改变流动相配比 D、改变流动相种类
14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（ ）
A 、紫外吸收检测器 B、红外检测器 C、差示折光检测 D、电导检测器
15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（ ）
A 、恒温箱 B、进样装置 C、程序升温 D、梯度淋洗装置
16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（ ）
A 、贮液器 B、输液泵 C、检测器 D、温控装置
17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（ ）水
A ．国标规定的一级、二级去离子水 B．国标规定的三级水 C．不含有机物的蒸馏水 D．无铅(无重金属) 水
18. 高效液相色谱仪与普通紫外－可见分光光度计完全不同的部件是（ a）
A 、流通池 B、光源 C、分光系统 D、检测系统
19. 下列哪种是高效液相色谱仪的通用检测器
A 、紫外检测器 B、荧光检测器 C、安培检测器 D、蒸发光散射检测器
20. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括 A 、贮液器 B、高压输液泵 C、过滤器 D、梯度洗脱装置 E、进样器
二、判断题：
1. 液相色谱分析时，增大流动相流速有利于提高柱效能。x
2. 高效液相色谱流动相过滤效果不好，可引起色谱柱堵塞。v
3. 高效液相色谱分析的应用范围比气相色谱分析的大。v
4. 反相键合相色谱柱长期不用时必须保证柱内充满甲醇流动相。
5. 高效液相色谱分析中，使用示差折光检测器时，可以进行梯度洗脱。
6. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是减小填料粒度。
7. 在液相色谱中，范第姆特方程中的涡流扩散项对柱效的影响可以忽略。
8. 由于高效液相色谱流动相系统的压力非常高，因此只能采取阀进样。
9. 高效液相色谱仪的色谱柱可以不用恒温箱，一般可在室温下操作。
10. 高效液相色谱中，色谱柱前面的预置柱会降低柱效。
11. 液相色谱中，化学键合固定相的分离机理是典型的液－液分配过程。
12. 高效液相色谱分析中，固定相极性大于流动相极性称为正相色谱法。
13. 高效液相色谱分析不能分析沸点高，热稳定性差，相对分子量大于400的有机物。
14. 在液相色谱法中，约70－80％的分析任务是由反相键合相色谱法来完成的。
15. 在高效液相色谱仪使用过程中，所有溶剂在使用前必须脱气。
16. 填充好的色谱柱在安装到仪器上时是没有前后方向差异的。
17. 保护柱是在安装在进样环与分析柱之间的，对分析柱起保护作用，内装有与分析柱不同固定相。
18. 检测器、泵和色谱柱是组成高效液相色谱仪的三大关键部件。
19. 紫外－可见光检测器是利用某些溶质在受紫外光激发后，能发射可见光的性质来进行检测的。
20. 应用光电二极管阵列检测器可以获得具有三维空间的立体色谱光谱图。
三、简答题
1. 为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气？
2. 高效液相色谱有哪几种定量方法，其中哪种是比较精确的定量方法，并简述之。
参考答案
一、选择题 1.D 2.C 3.B 4.C 5.A 6.D 7.A 8.C 9.C 10.B 11.A
12.D 13.B 14.B 15.D 16.B 17.A 18.A 19.D 20.E
二、判断题 1.× 2.√ 3.√ 4.√ 5.× 6.√ 7.× 8.× 9.√ 10.√
11. × 12.√ 13.× 14.√ 15.√ 16.× 17.× 18.√ 19.× 20.√
三、简答题
1. 高效液相色谱仪所用溶剂在放入贮液罐之前必须经过0.45μm 滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。所有溶剂在上机使用前必须脱气；因为色谱住是带压力操作的，检测器是在常压下工作。若流动相中所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作，这在梯度洗脱时尤其突出。
2. 高效液相色谱的定量方法与气相色谱定量方法类似，主要有归一化法、外标法和内标法。其中内标法是比较精确的定量方法。它是将已知量的内标物加到已知量的试样中，在进行色谱测定后，待测组分峰面积和内标物峰面积之比等于待测组分的质量与内标物质量之比，求出待测组分的质量，进而求出待测组分的含量
第二十章高效液相色谱法
思考题和习题
3．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？
正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。
反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。
11．什么叫梯度洗脱？它与GC 的程序升温有何异同？
在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提。是改进液相色谱分离的重要手段。
梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH 或离子强度，而后者改变的温度。程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段。
13．常用的HPLC 定量分析方法是什么？哪些方法需要用校正因子校正峰面积？哪些方法可以不用校正因子？
常用的HPLC 定量分析方法有：
外标法：外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法等
内标法：内标工作曲线法、内标一点法、内标二点法、内标对比法等
使用内标和外标标准曲线法时，可以不必测定校正因子，其它方法须要用校正因子校正峰面积
色谱分析综合体
一．选择题
1．在色谱分析中，用于定量的参数是 ( B )
A 保留时间调整保留值 C 峰面积 D 半峰宽
2．塔板理论不能用于 ( D )
A 塔板数计算B 塔板高度计算C 解释色谱流出曲线的形状解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关
3．在气-固色谱分析中, 色谱柱内装入的固定相为 ( D )
A 一般固体物质B 载体 C 载体+固定液固体吸附剂
4．当载气线速越小，范式方程中，分子扩散项B 越大，所以应选下列气体中哪一种
作载气最有利？ ( D )
A H 2 B He C Ar N 2
5．试指出下述说法中, 哪一种是错误的? ( C )
A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可以进行定量分析
C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度体现了组分在柱中的运动情况
6．为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是： ( C )
A 苯 B 正庚烷 C 正构烷烃 D 正丁烷和丁二烯
7．试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（ C ）
A N 2 B H 2 C O 2 D He
8．试指出下列说法中，哪一个是错误的？（ A ）
A 固定液是气相色谱法固定相 B N 2、H 2等是气相色谱流动相
C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法是一个分离效能高，分析速度快的分析方法
9．在气-液色谱法中, 首先流出色谱柱的组分是 ( A )
A 溶解能力小 B 吸附能力小C 溶解能力大D 吸附能力大
10．根据范第姆特议程式，指出下面哪种说法是正确的？ （ A ） A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时，流速最小 D 最佳塔板高度时，流速最大
二．填空题
1．按流动相的物态可将色谱法分为 气相色谱法和 液相色谱法 。前者的流动相的 气体，后者的流动相为 液体 。
2．气相色谱法多用高沸点的 有机 化合物涂渍在惰性载体上作为固定相，一般只要在450 ℃以下，有 1.5 至10 Kp a 的蒸气压且稳定性好的 有机和无机化合物都可用气相色谱法进行分离。
3．气相色谱仪由如下五个系统构成：气路系统、进样系统、分离系统、温控系统和检测记录系统。
4．气相色谱常用的检测器有 热导检测器 ，氢火焰检测器 ， 电子捕获检测器 和 火焰光度检测器 。
三、简答题
1、组分A 、B 在某气液色谱柱上的分配系数分别为495和467。试问在分离时哪个组分先流出色谱柱。
答：根据分配系数的定义：
c s 分配系数小的组分先流出色谱柱，因此B 先流出色谱柱。
c g K =
2、为什么说分离度R 可以作为色谱柱的总分离效能指标？
答：由
R =t R (2) -t R (1)
(W b (1) +W b (2) ) 2=2(t R (2) -t R (1) ) W b (1) +W b (2) 及R =n eff
4⋅' ' t R (2) -t R (1)
t R (2) =n eff 4⋅r 2, 1-1 可知
r 2, 1R 值越大，相邻两组分分离越
好。而R 值的大小则与两组分保留值和峰的宽度有关。对于某一色谱柱来说，两组分保留值差别的大小主要取决于固定液的热力学性质，反映了柱选择性的好坏；而色谱峰的宽窄则主要由色谱过程的动力学因素决定，反映了柱效能的高低。因此R 实际上综合考虑了色谱过程的热力学和动力学性质，故可将其作为色谱柱的总分离效能指标。
3、气相色谱定性的依据是什么？主要有哪些定性方法？ 答：不同组分由于其结构不同，与固定相的作用同，因而流出柱的时间不相同。
4、如何选择气液色谱固定液？ 答：依据相似相溶原则选择固定液。
5、气相色谱定量的依据是什么？为么要引入定量校正因子？有哪些主要的定量方法？各适于什么情况？
答：色谱定量的依据是： 在一定的色谱条件下，进入检测器的被测组分的质量m i 与检测器产生的响应信号（峰面积A i 或峰高h i ）成正比，即：
m i =f i ⋅A i 引入定量校正因子的原因：因为A i 的大小和组分的
性质有关，因此，同一检测器对不同组分具有不同的响应值，故相同质量的不同物质通过检测器时，产生的峰面积不等，因而不能直接应用峰面积计算组分的含量。为此，引入“定量校正因子”以校正峰面积，使之能真实反映组分含量。 归一化法：应用该方法的前提条件是试样中各组分必须全部流出色谱柱，并在色谱图上都出现色谱峰。
外标法：即所谓校准曲线法（A －c 曲线）。外标法简便，不需要校正因子，但进样量要求十分准确，操作条件也需严格控制。适用于日常控制分析和大量同类样品的分析。
内标法将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据被测物和内标物的质量及其在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的含量。内标法准确，操作条件要求不严。
四、计算题
1、在一根长3m 的色谱柱上，分析某试样时，得两个组分的调整保留时间分别为13min 及16min ，后者的峰底宽度为1min ，计算：
1）该色谱柱的有效塔板数； 2）两组分的相对保留值；3）如欲使两组分的分离度R ＝1.5，需要有效塔板数为多少？此时应使用多长的色谱柱？ 解：n eff t ' R 2t ' R 2L 16==5. 54() =16() =16⨯() 2=4096H eff W 1/2W b 1 t '16R (2) ==1. 23t '13R (1)
r 2, 1r 2, 1=若使R=1.5，柱效能为 n eff =16∙R 2⋅( 1. 232) =16∙1. 52∙() =1029r 2, 1-11. 23-1
此时对应的柱长为：
1029L =4096⨯3. 0=0. 75(m )
2、丙烯和丁烯的混合物进入气相色谱柱后测得：空气、丙烯、丁烯保留时间分别为0.5，3.5，4.8min ，其相应的峰宽分别为0.2，0.8，1.0min 。计算（1）丁
烯在这个柱上的分配比是多少？（2）丙烯和丁烯的分离度是多少？ 解：k = 2(t R (2) -t R (1) ) 2(4. 8-3. 5) m s t '4. 8-0. 5=R ==8. 6R ===1. 44m g t 00. 5W b (2) +W b (1) 1. 0+0. 8
3、化合物A 与正二十四烷及正二十五烷相混合注入色谱柱试验，测得的调整保留时间为：A 10.20min；n －C 24H 50 9.18min；n －C 25H 52 11.56min。计算化合物A 的保留指数（I A ）。
lg t '
R (i ) -lg t ' R (n ) I i =100⨯(n +) lg t '
R (n +1) -lg t ' R (n )
=100⨯[24+lg 10. 2-lg 9. 18) =2445. 7lg 11. 56-lg 9. 18
4、对只含有乙醇、正庚烷、苯和乙酸乙酯的某化合物进行色谱分析，其测定数据如下：
计算各组分的质量分数。
解：用归一化法
w i =
m i m i ⨯100%=⨯100% m m 1+m 2+ +m i + +m n
A i ⋅f i ' =⨯10%0=A 1⋅f 1' +A 2⋅f 2' + +A i ⋅f i ' +A n ⋅f n ' A i ⋅f i ' n ⨯10%0∑A i ⋅f i '
i =1
∑A ⋅f i
1n ' i =5. 0⨯0. 64+9. 0⨯0. 7+4. 0⨯0. 78+7. 0⨯0. 79=18. 15
A i ⋅f i ' ⨯100%＝
'
i w 乙醇=∑A ⋅f i
i =1n 5. 0⨯0. 64苯和乙酸乙酯的质量分数⨯100%=17. 6%同理正庚烷、18. 15
分别为34.7% 、 17.2% 、30.5%。
5、用甲醇作内标，称取0.0573g 甲醇和5.8690g 环氧丙烷试样，混合后进行色谱分析，测得甲醇和水的峰面积分别为164mm 2和186mm 2，校正因子分别为0.59和0.56。 计算环氧丙烷中水的质量分数。
解： m 水＝'⋅A 水f 水⨯m '⋅A 甲f 甲 甲
m 水w ⨯100＝水m 试'⋅A 水f 水⨯m '⋅A 甲f 甲m 试甲0. 56⨯186⨯0. 0573 ＝⨯100=1. 05⨯1005. 8690
1、液相色谱有几种类型 ? 它们的保留机理是什么 ? 在这些类型的应用中 , 最适宜分离的物质是什么 ?
解 : 液相色谱有以下几种类型 : 液 - 液分配色谱 ; 液 - 固吸附色谱 ; 化学键合色谱 ; 离子交换色谱 ; 离子对色谱 ; 空间排阻色谱等 . 液 - 固吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的 . 最适宜分离的物质为中等相对分子质量的油溶性试样，凡是能够用薄层色谱分离的物质均可用此法分离。其中 ; 液 - 液分配色谱的保留机理是通过组分在固定相和流动相间的多次分配进行分离的。可以分离各种无机、有机化合物。 2、在ODS 固定相上，以甲醇为流动相，某组分的分配容量k1=1.2，如以乙腈为
流动相，其k 增加还是减少? 为什么?
解：据题意为反相色谱体系。k 值增加，在反相色谱体系中，流动相由甲醇变为乙腈，溶剂极性参数由5.1变为5.8，增加了，但组分在流动相中的溶解度反而
减小，所以k 值增大。由1.2增大为2.24。
3、在反相色谱中，流动相从40%（V/V）甲醇—水改变为60%（V/V）甲醇—水，
问组分的调整保留值将改变多少? 为什么? （P ’甲醇=5.1，P ’水=5.1）
提示：对于由溶剂A 和B 组成的二元混合溶剂，其极性可表示为
Pab ‘=a P a’ b P b’
式中a 和b 分别为溶剂A 和B 在混合溶剂中的分数。
解：在40%配比时，混合溶剂的极性为 P1’ =0.46×5.1 0.6×10.2=8.16 在60%配比时，混合溶剂的极性为 P2’ =0.6×5.1 0.4×10.2=7.14
P2’= P2’- P2’=7.14-8.16= -1.02
根据反相色谱体系∴在反相色谱中，流动相的极性变弱（P ’由8.16变为7.14），溶剂强度增加，洗脱能力增加，因而使组分的调整保留时间减少到原来的1/3.2。
4、某色谱体系采用25%三氯甲烷/正己烷为流动相，发现组分分离不十分理想，想通过改变流动相的选择性来改善分离选择性，选用乙醚/正己烷为流动相，问
乙醚/正己烷的比例为多少? （P ’ CHCl3=5.1，P ’乙醚=5.1）
提示：流动相选择性的改变是通过保持溶剂强度不变时改变流动相组成来实现的，
改变前流动相A/B和改变后的流动相A/C的组成有下列关系：
解：25%的CHCl3/正己烷与37%乙醚/正己烷的溶剂强度相等，但对样品的分离
选锋性不同。
填空：
1. 氢火焰离子化检测器和热导池检测器分别属于_质量型__和___浓度__型检测器。气相色谱仪的心脏是_色谱柱___。
2. 固定液一般是按照__相似相溶___原理选择；在用极性固定液分离极性组分时，分子间作用力主要是__诱导力____，极性愈大，保留时间就愈___长__。
3. 固定液通常是高沸点的有机化合物，这主要是为了保证固定液在使用温度下有____较好的热稳定性____，防止___发生不可逆的化学反应____。
4. 用于气液色谱的担体主要分为____白色担体___、___红色担体___两类。
5. 与填充柱相比，毛细管色谱柱的相比β较大，有利于实现快速分析。但其柱容量_较小_。
6. 在HPLC 仪中，为了克服流动相流经色谱柱时受到的阻力，要安装_耐高压的六通阀___。
7. 气相色谱分析中，载气仅起输送作用；而液相色谱分析中，流动相还要直接参加__实际的分配过程__，要想提高高效液相色谱的柱效，最有效的途径是__使用小粒径填料_。
8. 欲分离位置异构体化合物，宜采用的高效液相色谱的分离模式是__梯度洗脱___。
9、色谱法中，将填入玻璃管内静止不动的一相称为固定相，自上而下运动的一相称为流动相，装有固定相的柱子称为色谱柱。
10、液相色谱检测器一般可用紫外可见分光光度检测器，荧光检测器；气相色谱检测器可用热导检测器，氢火焰离子检测器，电子俘获检测器等。
色谱学分析基础：
1、色谱定性的方法都有哪些？
答、(1) 用保留时间定性(2) 用相对值保留定性(3) 用保留指数定性(4)用化学反应配合色谱定性 (5)用不同类型的检测器定性⑹色谱和各种光谱或波谱联用
2、内标法定量分析时，内标物选择应满足那些条件？
答：①试样中不含有该物质②与被测组分性质比较接近③不与试样发生化学反应④出峰位置应位于被测组分接近，且无组分峰影响
气相色谱
6. 对载体和固定液的要求分别是什么?
答：载体要求:①具有化学惰性②好的热稳定性③有一定的机械强度④有适当的比表面，表面无深沟，以便是固定液成为均匀的薄膜，要有较大的空隙率，以便减小柱压降。对固定液的要求：应对被分离试样中的各组分具有不同的溶解能力，较好的热稳定性，并且不与被分离组分发生不可逆的化学反应。
固定液的选择原则：①“相似相容”原则，②固定液和被分离物分子之间的特殊作用力，③利用混合物固定液④利用协同效应选择固定液
10．假设一个未知油剂样品，请设计一种气象色谱分析方法，并概述分析过程。
液相色谱：
11、正相HPLC 与反相HPLC 的主要不同之处什么？各适合分离什么物质？
答：正相HPLC 是指以亲水性的填料做固定相，以疏水性溶剂或混合物做流动相的液相色谱，主要用于分离醇类，类脂代化合物、磷脂类化合物，脂肪酸以及其他化合物。
反相HPLC 是指以强疏水性的填料作固定相，以可以和水混合的有机溶
剂做流动相的液相色谱，主要用于分离生物大分子、卤化物和肽及蛋白质，含卢芳烃，小分子的核酸、核苷酸、多环芳烃等；
12、何为梯度洗脱？什么情况下采用梯度洗脱？
答：梯度洗脱就是有两种（或两种以上）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程度连续的改变，以改变流动相的配比和极性。
适合:①具有较宽K 范围的样品，及所有的组分的色谱峰的K 值不能在0.5-20之间②大分子样品，相对分子质量大于1000的，尤其是生物样品③样品中含有高保留时间的干扰成分，在一次分析中如不把他洗脱出去，就会污染色谱柱，并影响下一次分析。④即使在使用等度时也可以使用梯度洗脱选择流动相的比例。
3、液相色谱中最常用的检测器是什么检测器，它适合那些物质的检测？
答：最常用的是紫外可见分光光度检测器，适合在可见或紫外光区有吸收物质的检测；
4、某组分在ODS 柱上, 以80％甲醇作流动相时的保留时间为10min, 如果用60％甲醇作流动相，组分的保留时间是增加，还是减小？如果将80％甲醇换成80％异丙醇后，又会怎样变化呢？并请作出解释。
5、高效液相色谱法的特点 答:特点在于高分离性能、高灵敏度、高分析速度、可以自动化运行
6、在一定条件下，两个组分的保留时间分别为12.2s 和12.8s ，计算分离度。t 4⨯12. 2W =4==0. 81333600(已知n=3600) t 4⨯12. 8=0. 8533解： W =4=
2⨯(12. 8-12. 2) R ==0. 720. 8533+0. 8133分离度：
22⎛R 2⎫⎛1. 5⎫L 2= 0. 72⎪⎪⨯1=4. 34m R ⎪⎪⨯L 1= ⎝⎭⎝1⎭
7、在一定条件下，两个组分的调整保留时间分别为85秒和100秒，要达到完全分离，即R =1.5 。计算需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板高度为0.1 cm，柱长是多少？
解：r 21= 100 / 85 = 1.18
n 有效 = 16R 2 [r 21 / (r 21 —1) ]2 = 16×1.52 ×(1.18 / 0.18 ) 2 = 1547（块）
L 有效 = n 有效·H 有效 = 1547×0.1 = 155 cm
即柱长为1.55米时，两组分可以得到完全分离。
色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 色谱法：当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。
一、单项选择题 b 1R 1b 2R 2
1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（ ）。 A 、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法 2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离。
A 、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器
3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？
A 、0.5μm B、0.45μm C、0.6μm D、0.55μm
4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？
A 、改变流动相的种类或柱子 B、改变固定相的种类或柱长 C、改变固定相的种类和流动相的种类D 、改变填料的粒度和柱长
5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（ ）
A 、甲醇/水（83/17） B、甲醇/水（57/43） C、正庚烷/异丙醇（93/7）
D 、乙腈/水（1.5/98.5）
6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（ ）检测器不能使用梯度洗脱。
A 、紫外检测器 B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器
7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（ ）范围内。
A 、10～30cm B、 20～50m C 、1～2m D、2～5m 8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（ ）
A 、组分与流动相 B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相D 、组分与组分
9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（ ）的操作
A 、改变柱长 B、改变填料粒度C 、改变流动相或固定相种类D 、改变流动相的流速
10. 液相色谱中通用型检测器是（ ）
A 、紫外吸收检测器 B、示差折光检测器 C、热导池检测器 D、氢焰检测器
11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器
A 、荧光检测器 B、示差折光检测器 C、电导检测器 D、吸收检测器
12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（ ）
A 、提高柱温 B、降低板高 C、降低流动相流速 D、减小填料粒度
13. 在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（ b ）
A 、改变固定相种类 B、改变流动相流速 C、改变流动相配比 D、改变流动相种类
14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（ ）
A 、紫外吸收检测器 B、红外检测器 C、差示折光检测 D、电导检测器
15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（ ）
A 、恒温箱 B、进样装置 C、程序升温 D、梯度淋洗装置
16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（ ）
A 、贮液器 B、输液泵 C、检测器 D、温控装置
17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（ ）水
A ．国标规定的一级、二级去离子水 B．国标规定的三级水 C．不含有机物的蒸馏水 D．无铅(无重金属) 水
18. 高效液相色谱仪与普通紫外－可见分光光度计完全不同的部件是（ a）
A 、流通池 B、光源 C、分光系统 D、检测系统
19. 下列哪种是高效液相色谱仪的通用检测器
A 、紫外检测器 B、荧光检测器 C、安培检测器 D、蒸发光散射检测器
20. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括 A 、贮液器 B、高压输液泵 C、过滤器 D、梯度洗脱装置 E、进样器
二、判断题：
1. 液相色谱分析时，增大流动相流速有利于提高柱效能。x
2. 高效液相色谱流动相过滤效果不好，可引起色谱柱堵塞。v
3. 高效液相色谱分析的应用范围比气相色谱分析的大。v
4. 反相键合相色谱柱长期不用时必须保证柱内充满甲醇流动相。
5. 高效液相色谱分析中，使用示差折光检测器时，可以进行梯度洗脱。
6. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是减小填料粒度。
7. 在液相色谱中，范第姆特方程中的涡流扩散项对柱效的影响可以忽略。
8. 由于高效液相色谱流动相系统的压力非常高，因此只能采取阀进样。
9. 高效液相色谱仪的色谱柱可以不用恒温箱，一般可在室温下操作。
10. 高效液相色谱中，色谱柱前面的预置柱会降低柱效。
11. 液相色谱中，化学键合固定相的分离机理是典型的液－液分配过程。
12. 高效液相色谱分析中，固定相极性大于流动相极性称为正相色谱法。
13. 高效液相色谱分析不能分析沸点高，热稳定性差，相对分子量大于400的有机物。
14. 在液相色谱法中，约70－80％的分析任务是由反相键合相色谱法来完成的。
15. 在高效液相色谱仪使用过程中，所有溶剂在使用前必须脱气。
16. 填充好的色谱柱在安装到仪器上时是没有前后方向差异的。
17. 保护柱是在安装在进样环与分析柱之间的，对分析柱起保护作用，内装有与分析柱不同固定相。
18. 检测器、泵和色谱柱是组成高效液相色谱仪的三大关键部件。
19. 紫外－可见光检测器是利用某些溶质在受紫外光激发后，能发射可见光的性质来进行检测的。
20. 应用光电二极管阵列检测器可以获得具有三维空间的立体色谱光谱图。
三、简答题
1. 为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气？
2. 高效液相色谱有哪几种定量方法，其中哪种是比较精确的定量方法，并简述之。
参考答案
一、选择题 1.D 2.C 3.B 4.C 5.A 6.D 7.A 8.C 9.C 10.B 11.A
12.D 13.B 14.B 15.D 16.B 17.A 18.A 19.D 20.E
二、判断题 1.× 2.√ 3.√ 4.√ 5.× 6.√ 7.× 8.× 9.√ 10.√
11. × 12.√ 13.× 14.√ 15.√ 16.× 17.× 18.√ 19.× 20.√
三、简答题
1. 高效液相色谱仪所用溶剂在放入贮液罐之前必须经过0.45μm 滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。所有溶剂在上机使用前必须脱气；因为色谱住是带压力操作的，检测器是在常压下工作。若流动相中所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作，这在梯度洗脱时尤其突出。
2. 高效液相色谱的定量方法与气相色谱定量方法类似，主要有归一化法、外标法和内标法。其中内标法是比较精确的定量方法。它是将已知量的内标物加到已知量的试样中，在进行色谱测定后，待测组分峰面积和内标物峰面积之比等于待测组分的质量与内标物质量之比，求出待测组分的质量，进而求出待测组分的含量
第二十章高效液相色谱法
思考题和习题
3．什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？
正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。
反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。
11．什么叫梯度洗脱？它与GC 的程序升温有何异同？
在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提。是改进液相色谱分离的重要手段。
梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH 或离子强度，而后者改变的温度。程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段。
13．常用的HPLC 定量分析方法是什么？哪些方法需要用校正因子校正峰面积？哪些方法可以不用校正因子？
常用的HPLC 定量分析方法有：
外标法：外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法等
内标法：内标工作曲线法、内标一点法、内标二点法、内标对比法等
使用内标和外标标准曲线法时，可以不必测定校正因子，其它方法须要用校正因子校正峰面积