一、方法验证依据
参照《GB 5009.11－2014食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定》，制定总砷含量测定方法验证的作业指导书。 二、方法验证条件 2.1 仪器及配套设备
1.1 PF6-3原子荧光光度计，配砷（As）空心阴极灯。 1.2 电子天平：感量为0.1mg 1.3 马弗炉
1.4 标准溶液：砷（As）标准溶液，浓度1.0mg/mL。 2.2 试剂及配制 硝酸：优级纯
硼氢化钾：分析纯 氢氧化钾：分析纯 盐酸：优级纯 硫酸：优级纯 硝酸镁：分析纯 氧化镁：分析纯 抗坏血酸
硫脲+抗坏血酸溶液：称取10.0g硫脲，加约80ml水，加热溶解，待冷却后加入10.0g抗坏血酸，稀释至100ml.现用现配。
硝酸镁溶液（150g/L）：称取15.0g硝酸镁，溶于水并稀释至100ml. 盐酸溶液（1+1）：量取100ml盐酸，缓缓倒入100ml水中，混匀。 硫酸溶液（1+9）：量取100ml硫酸，缓缓倒入900ml水中，混匀。 硝酸溶液（5+95）：量取5ml,缓缓倒入95ml水中，混匀。
硼氢化钾溶液（15g/L）：称取15.0g硼氢化钾，溶于5.0g/L的氢氧化钾溶液中，并稀释至1000ml,混匀，现用现配。
1 / 5
2.3 标准溶液配制
准确吸取1.00mL砷标准溶液（1.0mg/mL）于100mL容量瓶中，用硝酸溶液（2+98）稀释定容至刻度，即为10mg/L标准使用液；按照稀释办法，依次获得100μg/L、10μg/L的标准使用液。 2．环境条件
（1）环境温度：（10--35）℃。 （2）相对湿度：≤85%。
（3）电源：电压为（220±22）V，频率（50±1）Hz，并具有良好的接地。 （4）仪器应置于水平无振动的工作台上，操作时不得有摇动现象。
（5）场所应通风良好，不得有强光直射，仪器周围无强磁场，电场或振动源干扰，无强气流干扰。 三、方法验证项目
检测要求，方法验证内容为： 1．基线稳定性； 2．测量重复性； 3．加标回收率 四、分析步骤 4.1试样的预处理
4.1.1 在采样和制备过程中，应注意不使试样污染。
4.1.2 粮食、豆类等样品去杂物后粉碎均匀，装入洁净聚乙烯瓶中，密封保存备用。 4.1.3 蔬菜、水果、鱼类、肉类及蛋类等新鲜样品，洗净晾干，取可食用部分匀浆，装入洁净聚乙烯瓶中，密封，于4℃冰箱冷藏备用 4.2 试样的消解
4.2.1 干法灰化
称取样品1.0g左右，置于50ml坩埚中，同时做两份空白。加150g/L硝酸镁10mL混匀，低热蒸干，将1g氧化镁覆盖在干渣上，于电炉上炭化至无黑烟，移入550℃马弗炉灰化4h,
2 / 5
取出放冷，小心加入盐酸溶液（1+1）10ml,以中和氧化镁并溶解灰分，转入25ml容量瓶或比色管中加入硫脲+抗坏血酸溶液2ml,另用硫酸溶液（1+9）分次洗涤坩埚合并洗涤液至25ml，刻度，混匀，放置30min,待测。同时做空白试验。 4.3 仪器条件
负高压：280v；砷空心阴极灯电流：50mA； 载气流速：300mL/min；屏蔽气流速：300mL/min； 测量方式：荧光强度；读数方式：峰面积。 4.4 标准曲线的制作
使用原子荧光光度计自动配置标准曲线，标准系列使用液浓度，配置成浓度1.0µg/L、2.0µg/L、4.0µg/L、8.0µg/L、10.0µg/L；测定好仪器的最佳条件，连续用2%的硝酸溶液进样，待读数稳定以后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。 4.5 试样溶液的测定
相同条件下，将样品溶液分别引入仪器进行测定。根据回归方程计算出样品中砷元素的浓度。计算方法参照公式（1） 4.6 加标回收率
在试样中根据试样砷含量的1--2倍加入砷标样，进行试样处理，处理后的试样溶液按照上述最佳条件进行测量，测量结果计算加标样的回收率，计算方法参照公式（2）。 4.7 方法检出限
将仪器各参数调整至正常状态，分别对砷标准溶液的每一个浓度点分别进行三次重复测定，取平均值后，按线性回归法求出工作曲线斜率（b），即为仪器的灵敏度。
在相同的条件下，对空白溶液 (或浓度三倍于检出限的溶液) 进行11次吸光度测量，并求出其标准偏差(sA)。
2 n I0i−I0 i=1
SA=
式中： I0i-------单次测量值 I0-------测量平均值
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按下式计算仪器测砷的方法检出限QL：
QL(K=3)＝3SA/S(μg/ml)
五、结果分析
1. 试样中总砷含量按下式计算：
X=
式中：
（C−C0）×V×1000m×1000×1000
---------------公式（1）
X---试样中砷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;
C---试样被测液中砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）; C0---试样空白消化液中的砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）; V---试样消化液总体积，单位为毫升（mL）; M---试样质量，单位为克（g）或毫升（mL）； 计算结果保留两位有效数字。 2. 加标回收率按下式计算：
C1×0.025−m1×X
m0
X1=
式中：
×100%-----------公式（2）
X1 ------加标样品的回收率，单位为（%）。
C1 ---加标样品被测液中砷的 测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL） X ---试样中砷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）; m1 ---加标试验的称样质量，单位为克（g） m0 ---加标量，单位为（µg）；
六、方法验证结果的判定 6.1基线稳定性
基线的相关系数≥0.99 6.2 测定总砷的重复性 (RSD)
测量重复性≤3%；
4 / 5
加标回收率的区间为80-120% 6.4 方法检出限 方法检出限≤0.010mg/kg 七、 结果的处理
7.1 方法验证符合6条中各项要求为正常，允许继续使用。
7.2 方法验证结果任何1项不符合6条要求为不正常，不正常方法需停止使用，经仪器调试、方法改进后再次验证正常后使用。
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一、方法验证依据
参照《GB 5009.11－2014食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定》，制定总砷含量测定方法验证的作业指导书。 二、方法验证条件 2.1 仪器及配套设备
1.1 PF6-3原子荧光光度计，配砷（As）空心阴极灯。 1.2 电子天平：感量为0.1mg 1.3 马弗炉
1.4 标准溶液：砷（As）标准溶液，浓度1.0mg/mL。 2.2 试剂及配制 硝酸：优级纯
硼氢化钾：分析纯 氢氧化钾：分析纯 盐酸：优级纯 硫酸：优级纯 硝酸镁：分析纯 氧化镁：分析纯 抗坏血酸
硫脲+抗坏血酸溶液：称取10.0g硫脲，加约80ml水，加热溶解，待冷却后加入10.0g抗坏血酸，稀释至100ml.现用现配。
硝酸镁溶液（150g/L）：称取15.0g硝酸镁，溶于水并稀释至100ml. 盐酸溶液（1+1）：量取100ml盐酸，缓缓倒入100ml水中，混匀。 硫酸溶液（1+9）：量取100ml硫酸，缓缓倒入900ml水中，混匀。 硝酸溶液（5+95）：量取5ml,缓缓倒入95ml水中，混匀。
硼氢化钾溶液（15g/L）：称取15.0g硼氢化钾，溶于5.0g/L的氢氧化钾溶液中，并稀释至1000ml,混匀，现用现配。
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2.3 标准溶液配制
准确吸取1.00mL砷标准溶液（1.0mg/mL）于100mL容量瓶中，用硝酸溶液（2+98）稀释定容至刻度，即为10mg/L标准使用液；按照稀释办法，依次获得100μg/L、10μg/L的标准使用液。 2．环境条件
（1）环境温度：（10--35）℃。 （2）相对湿度：≤85%。
（3）电源：电压为（220±22）V，频率（50±1）Hz，并具有良好的接地。 （4）仪器应置于水平无振动的工作台上，操作时不得有摇动现象。
（5）场所应通风良好，不得有强光直射，仪器周围无强磁场，电场或振动源干扰，无强气流干扰。 三、方法验证项目
检测要求，方法验证内容为： 1．基线稳定性； 2．测量重复性； 3．加标回收率 四、分析步骤 4.1试样的预处理
4.1.1 在采样和制备过程中，应注意不使试样污染。
4.1.2 粮食、豆类等样品去杂物后粉碎均匀，装入洁净聚乙烯瓶中，密封保存备用。 4.1.3 蔬菜、水果、鱼类、肉类及蛋类等新鲜样品，洗净晾干，取可食用部分匀浆，装入洁净聚乙烯瓶中，密封，于4℃冰箱冷藏备用 4.2 试样的消解
4.2.1 干法灰化
称取样品1.0g左右，置于50ml坩埚中，同时做两份空白。加150g/L硝酸镁10mL混匀，低热蒸干，将1g氧化镁覆盖在干渣上，于电炉上炭化至无黑烟，移入550℃马弗炉灰化4h,
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取出放冷，小心加入盐酸溶液（1+1）10ml,以中和氧化镁并溶解灰分，转入25ml容量瓶或比色管中加入硫脲+抗坏血酸溶液2ml,另用硫酸溶液（1+9）分次洗涤坩埚合并洗涤液至25ml，刻度，混匀，放置30min,待测。同时做空白试验。 4.3 仪器条件
负高压：280v；砷空心阴极灯电流：50mA； 载气流速：300mL/min；屏蔽气流速：300mL/min； 测量方式：荧光强度；读数方式：峰面积。 4.4 标准曲线的制作
使用原子荧光光度计自动配置标准曲线，标准系列使用液浓度，配置成浓度1.0µg/L、2.0µg/L、4.0µg/L、8.0µg/L、10.0µg/L；测定好仪器的最佳条件，连续用2%的硝酸溶液进样，待读数稳定以后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。 4.5 试样溶液的测定
相同条件下，将样品溶液分别引入仪器进行测定。根据回归方程计算出样品中砷元素的浓度。计算方法参照公式（1） 4.6 加标回收率
在试样中根据试样砷含量的1--2倍加入砷标样，进行试样处理，处理后的试样溶液按照上述最佳条件进行测量，测量结果计算加标样的回收率，计算方法参照公式（2）。 4.7 方法检出限
将仪器各参数调整至正常状态，分别对砷标准溶液的每一个浓度点分别进行三次重复测定，取平均值后，按线性回归法求出工作曲线斜率（b），即为仪器的灵敏度。
在相同的条件下，对空白溶液 (或浓度三倍于检出限的溶液) 进行11次吸光度测量，并求出其标准偏差(sA)。
2 n I0i−I0 i=1
SA=
式中： I0i-------单次测量值 I0-------测量平均值
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按下式计算仪器测砷的方法检出限QL：
QL(K=3)＝3SA/S(μg/ml)
五、结果分析
1. 试样中总砷含量按下式计算：
X=
式中：
（C−C0）×V×1000m×1000×1000
---------------公式（1）
X---试样中砷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;
C---试样被测液中砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）; C0---试样空白消化液中的砷的测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）; V---试样消化液总体积，单位为毫升（mL）; M---试样质量，单位为克（g）或毫升（mL）； 计算结果保留两位有效数字。 2. 加标回收率按下式计算：
C1×0.025−m1×X
m0
X1=
式中：
×100%-----------公式（2）
X1 ------加标样品的回收率，单位为（%）。
C1 ---加标样品被测液中砷的 测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL） X ---试样中砷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）; m1 ---加标试验的称样质量，单位为克（g） m0 ---加标量，单位为（µg）；
六、方法验证结果的判定 6.1基线稳定性
基线的相关系数≥0.99 6.2 测定总砷的重复性 (RSD)
测量重复性≤3%；
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加标回收率的区间为80-120% 6.4 方法检出限 方法检出限≤0.010mg/kg 七、 结果的处理
7.1 方法验证符合6条中各项要求为正常，允许继续使用。
7.2 方法验证结果任何1项不符合6条要求为不正常，不正常方法需停止使用，经仪器调试、方法改进后再次验证正常后使用。
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