毒理学实验六 传统致畸实验
一、实验目的：
1、具有致畸作用的外来化学物质，接触妊娠母体后，可使处于细胞分化和器官形成早期的胚胎发育受到影响，导致形态、结构和机能的缺陷，引起胎儿出现畸形。
2、通过致畸试验可检测受试物是否具有致畸作用，造成何种畸形以及致畸出现的主要脏器。
3、通过本实验了解致畸试验中妊娠大鼠的处死方法和胎仔畸形的检查方法。
二、实验内容
1．妊娠大鼠的处死 2．活胎仔外形检查 3．胎仔内脏的检查 4．胎仔骨骼的检查 5．胎仔骨骼标本制作
三、试剂和材料
1、试剂：固定液（Bouins 液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸饱和液）75份、甲醛20份、冰醋酸5份。
2、器材： 玻璃标本瓶、解剖器械（手术剪刀、镊子）、手持放大镜、天平（感量0.1g ）、滤纸、透明尺、平皿
3、实验动物：妊娠19～20天的大鼠
四、实验设计
1、动物选择原则 代谢过程：与人接近 胎盘结构：与人相似 妊娠期：短，一致 窝产仔数：多
动物：大鼠、小鼠、兔
2、剂量分组
一般设三个剂量：
高剂量 （不超过1/5-1/3 LD50） 低剂量 （1/100-1/30 LD50） 中剂量 阴性对照组 阳性对照组
五、实验步骤
1、动物受孕及其检查方法 动物交配：雌:雄=1:1同笼
确定受孕：查阴栓，白色蜡状物
查精子，雌鼠阴道分泌物涂片
分组：确定为孕鼠后按照随机区组的方法。将其分配到各实验组和对照组。
2、染毒
给药时间：器官形成期给药，大、小鼠：在受孕第6-15天给药
3、母鼠解剖和胎鼠检查
于大鼠妊娠第20天或小鼠妊娠第18天用乙醚麻醉后颈椎脱臼处死孕鼠，称体重后，立即剖腹暴露子宫检查。
（1）一般检查：:连同胎仔取出子宫。称胎窝总重。取出胎鼠，检查活胎、早死胎、晚死胎、吸收胎。
（2）外观检查：:对活胎仔逐一观察外观有无畸形。记录胎鼠体重、身长、尾长。 （3）骨骼标本制作：:将每窝1/2活胎鼠剥皮后，去除内脏、颈后及肩胛处脂肪，放入茜素红溶液软化染色。
（4）骨骼检查：:检查已制备好的胎鼠骨骼标本 形状、大小、数量、骨化程度
枕骨、脊椎骨、肋骨、胸骨、四肢骨
常见胎鼠骨骼畸形 项目 畸形表现 枕骨 枕骨骨化迟缓 胸骨 缺失、骨节融合 肋骨 多肋、少肋、肋骨融合、分叉肋、波状肋 脊柱 脊柱融合、脊柱裂、脊柱缺失
四肢骨 短小、畸形、多趾、少趾
（5）胎鼠内脏检查：
内脏标本制作：将每窝1/2活胎鼠浸入Bouins 液中固定，1-2周后可进行内脏检查。
沿胸、腹中线和肋下缘水平线作“十”字切口，暴露胸、腹腔内脏，检查主要脏器的位置、数目、大小、形状。（肝、肾、胃、肠、子宫、睾丸）
（6）头部检查头部：
将头部做四个切面进行检查腭裂、鼻道、眼球、脑室。
六、实验原始数据记录及处理
1、试验动物：妊娠19～20天的大鼠 2、受孕日期：2015年11月12日 3、处死日期：2015年12月1日 4、孕鼠体重：332.5g 5、胎窝总重： 56.75 6、胎鼠检查
（1）活胎数： 17 （2）吸收胎： 0
（3）死胎数： 0 （早死 0 晚死 0 ） （4）总计： 17
七、实验总结及注意事项
1、实验总结：
本次课程学习了致畸实验的实验设计方法以及母鼠解剖、活胎仔的外形检查及骨骼标本观察、内脏标本观察。由于实验条件限制，选用了健康的孕大鼠进行实验。总计观察17只胎鼠，全部为活胎均成肉红色，器官外形完整成形，有自然运动，对机械刺激有反应。无吸收胎和死胎。
2、注意事项：
（1）有的吸收胎仅有着床腺附着于子宫系膜上，呈黄白色小结节状，要认真辨认以免漏检。
毒理学实验六 传统致畸实验
一、实验目的：
1、具有致畸作用的外来化学物质，接触妊娠母体后，可使处于细胞分化和器官形成早期的胚胎发育受到影响，导致形态、结构和机能的缺陷，引起胎儿出现畸形。
2、通过致畸试验可检测受试物是否具有致畸作用，造成何种畸形以及致畸出现的主要脏器。
3、通过本实验了解致畸试验中妊娠大鼠的处死方法和胎仔畸形的检查方法。
二、实验内容
1．妊娠大鼠的处死 2．活胎仔外形检查 3．胎仔内脏的检查 4．胎仔骨骼的检查 5．胎仔骨骼标本制作
三、试剂和材料
1、试剂：固定液（Bouins 液）：2,4,6-三硝基酚（苦味酸饱和液）75份、甲醛20份、冰醋酸5份。
2、器材： 玻璃标本瓶、解剖器械（手术剪刀、镊子）、手持放大镜、天平（感量0.1g ）、滤纸、透明尺、平皿
3、实验动物：妊娠19～20天的大鼠
四、实验设计
1、动物选择原则 代谢过程：与人接近 胎盘结构：与人相似 妊娠期：短，一致 窝产仔数：多
动物：大鼠、小鼠、兔
2、剂量分组
一般设三个剂量：
高剂量 （不超过1/5-1/3 LD50） 低剂量 （1/100-1/30 LD50） 中剂量 阴性对照组 阳性对照组
五、实验步骤
1、动物受孕及其检查方法 动物交配：雌:雄=1:1同笼
确定受孕：查阴栓，白色蜡状物
查精子，雌鼠阴道分泌物涂片
分组：确定为孕鼠后按照随机区组的方法。将其分配到各实验组和对照组。
2、染毒
给药时间：器官形成期给药，大、小鼠：在受孕第6-15天给药
3、母鼠解剖和胎鼠检查
于大鼠妊娠第20天或小鼠妊娠第18天用乙醚麻醉后颈椎脱臼处死孕鼠，称体重后，立即剖腹暴露子宫检查。
（1）一般检查：:连同胎仔取出子宫。称胎窝总重。取出胎鼠，检查活胎、早死胎、晚死胎、吸收胎。
（2）外观检查：:对活胎仔逐一观察外观有无畸形。记录胎鼠体重、身长、尾长。 （3）骨骼标本制作：:将每窝1/2活胎鼠剥皮后，去除内脏、颈后及肩胛处脂肪，放入茜素红溶液软化染色。
（4）骨骼检查：:检查已制备好的胎鼠骨骼标本 形状、大小、数量、骨化程度
枕骨、脊椎骨、肋骨、胸骨、四肢骨
常见胎鼠骨骼畸形 项目 畸形表现 枕骨 枕骨骨化迟缓 胸骨 缺失、骨节融合 肋骨 多肋、少肋、肋骨融合、分叉肋、波状肋 脊柱 脊柱融合、脊柱裂、脊柱缺失
四肢骨 短小、畸形、多趾、少趾
（5）胎鼠内脏检查：
内脏标本制作：将每窝1/2活胎鼠浸入Bouins 液中固定，1-2周后可进行内脏检查。
沿胸、腹中线和肋下缘水平线作“十”字切口，暴露胸、腹腔内脏，检查主要脏器的位置、数目、大小、形状。（肝、肾、胃、肠、子宫、睾丸）
（6）头部检查头部：
将头部做四个切面进行检查腭裂、鼻道、眼球、脑室。
六、实验原始数据记录及处理
1、试验动物：妊娠19～20天的大鼠 2、受孕日期：2015年11月12日 3、处死日期：2015年12月1日 4、孕鼠体重：332.5g 5、胎窝总重： 56.75 6、胎鼠检查
（1）活胎数： 17 （2）吸收胎： 0
（3）死胎数： 0 （早死 0 晚死 0 ） （4）总计： 17
七、实验总结及注意事项
1、实验总结：
本次课程学习了致畸实验的实验设计方法以及母鼠解剖、活胎仔的外形检查及骨骼标本观察、内脏标本观察。由于实验条件限制，选用了健康的孕大鼠进行实验。总计观察17只胎鼠，全部为活胎均成肉红色，器官外形完整成形，有自然运动，对机械刺激有反应。无吸收胎和死胎。
2、注意事项：
（1）有的吸收胎仅有着床腺附着于子宫系膜上，呈黄白色小结节状，要认真辨认以免漏检。