L I SH I Z HE N MED I C I N E AND MATER I A ME D I CA RESEARCH 2009VOL . 20NO. 2
时珍国医国药2009年第20卷第2
期
紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量
孔繁晟, 严春艳
1
13
, 贲永光, 李坤平, 罗佳波
112
(1. 广东药学院药科学院, 广东广州 510006; 2. 南方医科大学, 广东广州 510515)
摘要:目的建立云南红豆杉枝叶中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法, 检测波长为272n m 。结果总
黄酮检测浓度在12～28μg/ml (r =0. 9992) 范围内与吸光度线性关系良好, 平均加样回收率为96. 04%, RSD 为2. 7%。结论该方法用于云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量测定, 方法稳定, 结果准确、可靠。关键词:紫外分光光度法; 红豆杉; 总黄酮
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:100820805(2009) 0220471201
D eterm i n a ti on of Tot a l Fl avono i ds i n Branches and L eaves of Taxus Yunnanensis by Ul 2trav i olet Spectrophoto m etry
, B I Y ong 2guang , L I K un 2p ing , LUO J ia 2bo
(1. Guangdong Phar m acolog ical U niversity, Guangzhou 510006, Ch 2. Key L abora D rugs, South M edica l U niversity, Guangzhou 510515, China )
Abstract:O bjecti ve To establish a method for the deter m inati on of t in of yunnanen 2
sis . M ethods The assay was perf or med by s pectr ophot ometric a The linear detecti on concentrati on range of t otal flavonoids was in () , average recovery was 96. 04%, RSD =
K ONG F an 2sheng , Y AN C hun 2yan
113112
2. 7%.Conclusi on The method is and f or the deter m inati on of t otal flavonoids in bran 2ches and leaves of .
Key U s T otal flavonoids
红豆杉(Taxus ) (Taxaceae ) 的常绿乔木, 共11种, , 我国有4种和1个变种[1]。紫杉属植物中含有的主要抗癌活性成分是以紫杉醇为主的二萜类化合物。随着研究的不断深入, 黄酮类化合物也显示出了良好的抗癌效果[2, 3]。据报道, 红豆杉中也有着多种黄酮类成分[4, 5], 故研究红豆杉中的黄酮类成分对保护稀有树种红豆杉, 提高其资源利用率有着积极意义, 但有关红豆杉总黄酮含量测定目前尚未见准确报道。本研究用紫外分光光度法对红豆杉中的总黄酮进行测定, 并进行了方法学的考察, 以期为红豆杉中黄酮类化合物的开发和利用提供科学依据。1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪; HP UV -8453型可见紫外分光光度计; Sart orius Cp3245型天平; K Q -500DE 型医用数控超声仪; DHG -9140A 电热恒温鼓风干燥箱; LABOROT A 4000旋转蒸发仪, LG 10-2. 4A 离心机。
金松双黄酮对照品(自制, HP LC 纯度>95%) ; 甲醇为色谱纯。其余试剂均为分析纯。药材为云南红豆杉(Taxus yunnanen 2sis Cheng et L. K . Fu ) 的枝叶采自云南大理云龙县, 经南方医科大学生药学教研室鉴定。2 方法与结果2. 1 对照品溶液的配制金松双黄酮为红豆杉中生理活性较好的黄酮类成分, 故以此作为总黄酮测定中的对照品较具有代表性。精密称取干燥至恒重的金松双黄酮2mg, 置50m l 容量瓶中, 加甲醇30m l, 超声振荡使溶解, 放冷至室温, 甲醇定容至刻度, 摇匀, 得浓度为40μg/ml 的对照品储备液。2. 2 供试品溶液的配制准确称取红豆杉药材粉末1g, 加石油
收稿日期:2007201210; 修订日期:2008212220
基金项目:广东药学院人才引进科研启动基金项目(No . 43540158)
作者简介:孔繁晟(19762) , 男(汉族) , 云南昆明人, 现任广东药学院药科学院主管药师, 硕士学位, 主要从事中药药剂、制药工程研究工作. 3
通讯作者简介:严春艳(19782) , 女(满族) , 吉林公主岭人, 现任广东药学院药科学院讲师, 博士学位, 主要从事天然产物活性成分研究工作.
醚25m l, 超声提取30m in, 抽滤, 重复提取1次, 滤液弃去。药渣挥干石油醚残液, 加甲醇25m l, 超声提取30m in, 抽滤, 重复两次, 滤液合并浓缩, 置10m l 容量瓶中, 加甲醇定容至刻度, 摇匀。2. 3 最大吸收波长的选择取对照品溶液和提取溶液进行波长扫描(图1～2) , 对照品与供试品溶液在272n m 附近处吸收较强, 故选择272n m 作为测定波长
。
图1
对照品紫外扫描光谱
图2 提取液紫外扫描光谱
2. 4 标准曲线的绘制精密量取金松双黄酮对照品溶液0. 0,
3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0, 7. 0m l, 分别置于10m l 容量瓶中, 甲醇定容至刻度。用紫外-可见分光光度计于272n m 处测定吸光度值, 以吸光度(A ) 对浓度(C ) 进行线性回归, 得回归方程:
C =1. 55+29. 16A , r =0. 9992, 在12～28μg/ml 范围内线性关系良好。2. 5 精密度实验取金松双黄酮对照品溶液5m l 5份, 在272n m 处测吸光度, 吸光度平均值为0. 5766, RSD 为0. 82%, 表明该仪器精密度良好。2. 6 重复性实验精密称取药材样品1g 共5份, 按照“2. 2”项
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时珍国医国药2009年第20卷第2期
L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2009VOL. 20NO. 2
下条件平行实验, 依法处理, 在272n m 处测定吸光度。结果, 平
均含量为5. 14%, RSD =2. 08%。结果表明, 本方法重现性良好。2. 7 加样回收率实验称取已知含量的药材约0. 2g 共5份, 于60℃干燥至恒重, 精密称重, 置50m l 磨口锥形瓶中, 加入金松双黄酮对照品10mg, 按照“2. 2”项依法处理, 测定272n m 处吸光值, 以相应试剂为空白, 按对照品的回归方程进行计算处理, 回收率平均值为96. 04%, RSD 为2. 7%。结果见表1。
分的提取效果最优。3. 2 对照品的选择经文献检索, 至今没有发现测定云南红豆杉总黄酮含量的报道, 在以前的实验工作中, 曾经以芦丁作为测定总黄酮的对照品, 芦丁的最大吸收波长在500n m 左右, 但红豆杉中没有发现有芦丁成分的报道。经测定云南红豆杉样品的最大吸收波长在272n m 处, 而金松双黄酮在272n m 处也有最大吸收波长, 故选择内源性化合物金松双黄酮作为测定云南红豆杉总黄酮的对照品更为合理。
表1 加样回收率实验结果
3. 3 样品的选择红豆杉中有多种抗癌成分, 其中以紫杉醇为
取样量真实量测得量回收量加入量回收率平均回收RSD
编号主的二萜类成分效果最为显著, 云南红豆杉是红豆杉树种中含紫(%) (%) m /mgm /mgm /mgm /mgm /mg率(%)
杉醇等抗癌成分比较高的树种, 但含量也仅ppm 级的含量[6], 且120510. 5420. 169. 6410. 0096. 2
220310. 4320. 019. 5810. 0095. 8红豆杉的生长速度特别缓慢, 资源较少, 故用可再生的枝叶作为320110. 3319. 969. 6310. 0096. 396. 42. 7
材料, 在提取紫杉醇为主的抗癌活性成分的同时也开发如黄酮类420010. 2819. 859. 5710. 0095. 7
等有效成分, 这样既可以保护资源, 又提高了资源的利用率, 甚至开发出的新产品可以降低紫杉醇的昂贵价格及使用时的不良反
2. 8 稳定性实验取“2. 5”项下5号样品, 于0, 10, 30, 60, 90,
应, 这有待同行的共同努力。
120m in, 测定吸光值, 平均值为0. 5758, RSD 为3. 03%, 表明样
本实验方法操作简单易行, , 为红豆杉中黄酮
品在120m in 内稳定性良好。
2. 9 测定结果取3个编号的红豆杉样品各3份, 分别按“2. 2”
项下的方法配制成供试品溶液, 再各准确吸取0. 3m l 于25m l 容:量瓶中, 甲醇定容至刻度, 摇匀, 272n m 测定其中总黄酮含量。
[, . 结果见表2。
表2 编号
1
2, 1999, 2(10) :199. [] waii S, Tomono Y, Katase E, et al . B i oscience B i otechnol ogy and B i o 2
[3[4[5[6
chem istry[J ].1999, 63(5) :896.
] 马 波, 李梦龙, 周在德, 等. 黄酮体化合物抗肿瘤活性的量子化学研究[J ].化学研究与应用, 2002, 14(2) :149. ] 官 智, 苏镜娱, 曾陇梅, 等. 红豆杉中的非紫杉烷类化合物[J ].热带亚热带植物学报, 2000, 8(2) :182. ] 徐彩霞, 梁敬钰. 美丽红豆杉的化学研究进展[J ].海峡药学, 2003, 15(2) :3. ] 王达明, 周 云, 张裕农, 等. 不同生长类型云南红豆杉林木枝叶的紫杉烷含量测定[J ].西部林业科学, 2007, 26(3) 30.
样品均值
5. 05() 5. 01
RSD
(%) 3. 61
1. 1. 3 讨论3. 1 样品前处理方法选择为了准确测定样品, 故对提取方法及提取时间分别进行了考察。实验结果表明, 在所考察的回流提取法、超声提取法、连续回流提取法中, 采用超声提取法对有效成
(临床报道(
合欢乐冲剂治疗抑郁症的临床研究
陈书存, 张小斌
1
2
(1. 陕西省商洛市中医医院 726000; 2. 商洛学院, 陕西商洛 726000)
摘要:目的观察合欢乐冲剂治疗抑郁症的临床疗效。方法收集抑郁症病例76例, 随机分为两组。治疗组38例, 服用
合欢乐冲剂治疗; 对照组38例, 口服蒲郁胶囊治疗。两组均在治疗前、治疗后第2周末、4周末、6周末时分别用汉密尔顿
抑郁量表HAMD 进行评分比较。结果两组疗效治疗前与治疗后比较, 具有显著性差异(P 0. 05) , 对痊愈患者停药后半年随访比较有显著性差异(P
中医药治疗; 合欢乐冲剂; 蒲郁胶囊关键词:抑郁症;
中图分类号:R277. 7 文献标识码:B 文章编号:100820805(2009) 0220472202 随着社会竞争加剧, 生活节奏加快, 人们工作和学习的压力越来越大, 抑郁症已成为一种危害人类身心健康的常见病。世界卫生组织(WHO ) 公布的最新调查结果显示, 全世界抑郁症发病率约为3. 1%, 当前全球的抑郁症患者有3. 4亿左右, 抑郁症在
世界上常见的疾病中排第4位, 在今后20年抑郁症将会上升为全球第二大常见疾病。该病是以显著而持久的心境低落为特点, 常表现为情感低落, 精力减退, 兴趣丧失,
睡眠障碍, 有的可伴有精神症状如幻觉、妄想等临床表现。目前国际上对抑郁症的治疗是使用抗抑郁剂和心理干预综合治疗, 对于抑郁症的治疗药物主要依靠化学合成, 但由于长期服用此类药物会出现严重的毒副作
收稿日期:2007212210; 修订日期:2008212220
作者简介:陈书存(19662) , 男(汉族) , 陕西商洛人, 现为商洛市中医医院用, 影响患者治疗的依从性, 甚至被迫中止治疗, 因此, 从天然药
物中寻找理想的抗抑郁药, 愈来愈引起研究者的关注[1, 2]。笔者内科副主任医师, 学士学位, 主要从事心脑血管疾病的临床和教学工作.
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时珍国医国药2009年第20卷第2
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紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量
孔繁晟, 严春艳
1
13
, 贲永光, 李坤平, 罗佳波
112
(1. 广东药学院药科学院, 广东广州 510006; 2. 南方医科大学, 广东广州 510515)
摘要:目的建立云南红豆杉枝叶中总黄酮含量的测定方法。方法采用紫外分光光度法, 检测波长为272n m 。结果总
黄酮检测浓度在12～28μg/ml (r =0. 9992) 范围内与吸光度线性关系良好, 平均加样回收率为96. 04%, RSD 为2. 7%。结论该方法用于云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量测定, 方法稳定, 结果准确、可靠。关键词:紫外分光光度法; 红豆杉; 总黄酮
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:100820805(2009) 0220471201
D eterm i n a ti on of Tot a l Fl avono i ds i n Branches and L eaves of Taxus Yunnanensis by Ul 2trav i olet Spectrophoto m etry
, B I Y ong 2guang , L I K un 2p ing , LUO J ia 2bo
(1. Guangdong Phar m acolog ical U niversity, Guangzhou 510006, Ch 2. Key L abora D rugs, South M edica l U niversity, Guangzhou 510515, China )
Abstract:O bjecti ve To establish a method for the deter m inati on of t in of yunnanen 2
sis . M ethods The assay was perf or med by s pectr ophot ometric a The linear detecti on concentrati on range of t otal flavonoids was in () , average recovery was 96. 04%, RSD =
K ONG F an 2sheng , Y AN C hun 2yan
113112
2. 7%.Conclusi on The method is and f or the deter m inati on of t otal flavonoids in bran 2ches and leaves of .
Key U s T otal flavonoids
红豆杉(Taxus ) (Taxaceae ) 的常绿乔木, 共11种, , 我国有4种和1个变种[1]。紫杉属植物中含有的主要抗癌活性成分是以紫杉醇为主的二萜类化合物。随着研究的不断深入, 黄酮类化合物也显示出了良好的抗癌效果[2, 3]。据报道, 红豆杉中也有着多种黄酮类成分[4, 5], 故研究红豆杉中的黄酮类成分对保护稀有树种红豆杉, 提高其资源利用率有着积极意义, 但有关红豆杉总黄酮含量测定目前尚未见准确报道。本研究用紫外分光光度法对红豆杉中的总黄酮进行测定, 并进行了方法学的考察, 以期为红豆杉中黄酮类化合物的开发和利用提供科学依据。1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪; HP UV -8453型可见紫外分光光度计; Sart orius Cp3245型天平; K Q -500DE 型医用数控超声仪; DHG -9140A 电热恒温鼓风干燥箱; LABOROT A 4000旋转蒸发仪, LG 10-2. 4A 离心机。
金松双黄酮对照品(自制, HP LC 纯度>95%) ; 甲醇为色谱纯。其余试剂均为分析纯。药材为云南红豆杉(Taxus yunnanen 2sis Cheng et L. K . Fu ) 的枝叶采自云南大理云龙县, 经南方医科大学生药学教研室鉴定。2 方法与结果2. 1 对照品溶液的配制金松双黄酮为红豆杉中生理活性较好的黄酮类成分, 故以此作为总黄酮测定中的对照品较具有代表性。精密称取干燥至恒重的金松双黄酮2mg, 置50m l 容量瓶中, 加甲醇30m l, 超声振荡使溶解, 放冷至室温, 甲醇定容至刻度, 摇匀, 得浓度为40μg/ml 的对照品储备液。2. 2 供试品溶液的配制准确称取红豆杉药材粉末1g, 加石油
收稿日期:2007201210; 修订日期:2008212220
基金项目:广东药学院人才引进科研启动基金项目(No . 43540158)
作者简介:孔繁晟(19762) , 男(汉族) , 云南昆明人, 现任广东药学院药科学院主管药师, 硕士学位, 主要从事中药药剂、制药工程研究工作. 3
通讯作者简介:严春艳(19782) , 女(满族) , 吉林公主岭人, 现任广东药学院药科学院讲师, 博士学位, 主要从事天然产物活性成分研究工作.
醚25m l, 超声提取30m in, 抽滤, 重复提取1次, 滤液弃去。药渣挥干石油醚残液, 加甲醇25m l, 超声提取30m in, 抽滤, 重复两次, 滤液合并浓缩, 置10m l 容量瓶中, 加甲醇定容至刻度, 摇匀。2. 3 最大吸收波长的选择取对照品溶液和提取溶液进行波长扫描(图1～2) , 对照品与供试品溶液在272n m 附近处吸收较强, 故选择272n m 作为测定波长
。
图1
对照品紫外扫描光谱
图2 提取液紫外扫描光谱
2. 4 标准曲线的绘制精密量取金松双黄酮对照品溶液0. 0,
3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0, 7. 0m l, 分别置于10m l 容量瓶中, 甲醇定容至刻度。用紫外-可见分光光度计于272n m 处测定吸光度值, 以吸光度(A ) 对浓度(C ) 进行线性回归, 得回归方程:
C =1. 55+29. 16A , r =0. 9992, 在12～28μg/ml 范围内线性关系良好。2. 5 精密度实验取金松双黄酮对照品溶液5m l 5份, 在272n m 处测吸光度, 吸光度平均值为0. 5766, RSD 为0. 82%, 表明该仪器精密度良好。2. 6 重复性实验精密称取药材样品1g 共5份, 按照“2. 2”项
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时珍国医国药2009年第20卷第2期
L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2009VOL. 20NO. 2
下条件平行实验, 依法处理, 在272n m 处测定吸光度。结果, 平
均含量为5. 14%, RSD =2. 08%。结果表明, 本方法重现性良好。2. 7 加样回收率实验称取已知含量的药材约0. 2g 共5份, 于60℃干燥至恒重, 精密称重, 置50m l 磨口锥形瓶中, 加入金松双黄酮对照品10mg, 按照“2. 2”项依法处理, 测定272n m 处吸光值, 以相应试剂为空白, 按对照品的回归方程进行计算处理, 回收率平均值为96. 04%, RSD 为2. 7%。结果见表1。
分的提取效果最优。3. 2 对照品的选择经文献检索, 至今没有发现测定云南红豆杉总黄酮含量的报道, 在以前的实验工作中, 曾经以芦丁作为测定总黄酮的对照品, 芦丁的最大吸收波长在500n m 左右, 但红豆杉中没有发现有芦丁成分的报道。经测定云南红豆杉样品的最大吸收波长在272n m 处, 而金松双黄酮在272n m 处也有最大吸收波长, 故选择内源性化合物金松双黄酮作为测定云南红豆杉总黄酮的对照品更为合理。
表1 加样回收率实验结果
3. 3 样品的选择红豆杉中有多种抗癌成分, 其中以紫杉醇为
取样量真实量测得量回收量加入量回收率平均回收RSD
编号主的二萜类成分效果最为显著, 云南红豆杉是红豆杉树种中含紫(%) (%) m /mgm /mgm /mgm /mgm /mg率(%)
杉醇等抗癌成分比较高的树种, 但含量也仅ppm 级的含量[6], 且120510. 5420. 169. 6410. 0096. 2
220310. 4320. 019. 5810. 0095. 8红豆杉的生长速度特别缓慢, 资源较少, 故用可再生的枝叶作为320110. 3319. 969. 6310. 0096. 396. 42. 7
材料, 在提取紫杉醇为主的抗癌活性成分的同时也开发如黄酮类420010. 2819. 859. 5710. 0095. 7
等有效成分, 这样既可以保护资源, 又提高了资源的利用率, 甚至开发出的新产品可以降低紫杉醇的昂贵价格及使用时的不良反
2. 8 稳定性实验取“2. 5”项下5号样品, 于0, 10, 30, 60, 90,
应, 这有待同行的共同努力。
120m in, 测定吸光值, 平均值为0. 5758, RSD 为3. 03%, 表明样
本实验方法操作简单易行, , 为红豆杉中黄酮
品在120m in 内稳定性良好。
2. 9 测定结果取3个编号的红豆杉样品各3份, 分别按“2. 2”
项下的方法配制成供试品溶液, 再各准确吸取0. 3m l 于25m l 容:量瓶中, 甲醇定容至刻度, 摇匀, 272n m 测定其中总黄酮含量。
[, . 结果见表2。
表2 编号
1
2, 1999, 2(10) :199. [] waii S, Tomono Y, Katase E, et al . B i oscience B i otechnol ogy and B i o 2
[3[4[5[6
chem istry[J ].1999, 63(5) :896.
] 马 波, 李梦龙, 周在德, 等. 黄酮体化合物抗肿瘤活性的量子化学研究[J ].化学研究与应用, 2002, 14(2) :149. ] 官 智, 苏镜娱, 曾陇梅, 等. 红豆杉中的非紫杉烷类化合物[J ].热带亚热带植物学报, 2000, 8(2) :182. ] 徐彩霞, 梁敬钰. 美丽红豆杉的化学研究进展[J ].海峡药学, 2003, 15(2) :3. ] 王达明, 周 云, 张裕农, 等. 不同生长类型云南红豆杉林木枝叶的紫杉烷含量测定[J ].西部林业科学, 2007, 26(3) 30.
样品均值
5. 05() 5. 01
RSD
(%) 3. 61
1. 1. 3 讨论3. 1 样品前处理方法选择为了准确测定样品, 故对提取方法及提取时间分别进行了考察。实验结果表明, 在所考察的回流提取法、超声提取法、连续回流提取法中, 采用超声提取法对有效成
(临床报道(
合欢乐冲剂治疗抑郁症的临床研究
陈书存, 张小斌
1
2
(1. 陕西省商洛市中医医院 726000; 2. 商洛学院, 陕西商洛 726000)
摘要:目的观察合欢乐冲剂治疗抑郁症的临床疗效。方法收集抑郁症病例76例, 随机分为两组。治疗组38例, 服用
合欢乐冲剂治疗; 对照组38例, 口服蒲郁胶囊治疗。两组均在治疗前、治疗后第2周末、4周末、6周末时分别用汉密尔顿
抑郁量表HAMD 进行评分比较。结果两组疗效治疗前与治疗后比较, 具有显著性差异(P 0. 05) , 对痊愈患者停药后半年随访比较有显著性差异(P
中医药治疗; 合欢乐冲剂; 蒲郁胶囊关键词:抑郁症;
中图分类号:R277. 7 文献标识码:B 文章编号:100820805(2009) 0220472202 随着社会竞争加剧, 生活节奏加快, 人们工作和学习的压力越来越大, 抑郁症已成为一种危害人类身心健康的常见病。世界卫生组织(WHO ) 公布的最新调查结果显示, 全世界抑郁症发病率约为3. 1%, 当前全球的抑郁症患者有3. 4亿左右, 抑郁症在
世界上常见的疾病中排第4位, 在今后20年抑郁症将会上升为全球第二大常见疾病。该病是以显著而持久的心境低落为特点, 常表现为情感低落, 精力减退, 兴趣丧失,
睡眠障碍, 有的可伴有精神症状如幻觉、妄想等临床表现。目前国际上对抑郁症的治疗是使用抗抑郁剂和心理干预综合治疗, 对于抑郁症的治疗药物主要依靠化学合成, 但由于长期服用此类药物会出现严重的毒副作
收稿日期:2007212210; 修订日期:2008212220
作者简介:陈书存(19662) , 男(汉族) , 陕西商洛人, 现为商洛市中医医院用, 影响患者治疗的依从性, 甚至被迫中止治疗, 因此, 从天然药
物中寻找理想的抗抑郁药, 愈来愈引起研究者的关注[1, 2]。笔者内科副主任医师, 学士学位, 主要从事心脑血管疾病的临床和教学工作.
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