蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法
20% （W/V） Glucose
配制量100ml
配制方法:
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
0.5 M EDTA （pH8.0）
配制量1 L
配制方法:
1. 称取186.1 g Na2EDTA•2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH 调节pH 值至8.0（约20 g NaOH）。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
注意：pH 值至8.0时，EDTA 才能完全溶解。
1 M DTT
配制量50ml
配制方法:
1. 称取7.71g DTT，加入到100ml 烧杯中。
2. 加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况 0.22um 滤膜过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
30%丙烯酰胺（29：1）
配制量1 L
配制方法:
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
Acrylamide 290g
Bisacrylamide 10g
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45um 滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具 有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎 操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,
0.5%（W/V）SDS
配制量 1 L
配制方法：
1．称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2．取下列溶液，加入烧杯中。
Tris 15.1g
Glycine 94g
SDS 5g
3. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
4×SDS-蛋白上样缓冲液
组份浓度
Tris-HCl （pH6.8） 200mM
SDS 8%
溴酚蓝 0.4%
甘油 40%
巯基乙醇 4%
配制量 10ml
配制方法：
1. 量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。
Tris-HCl （pH6.8） 2ml
SDS 0.8
溴酚蓝 40mg
甘油 4ml
2. 加去离子水溶解后定容至10 ml。
3. 小份（500 ml/份）分装后，于室温保存。
4. 使用前将20ul 的β-巯基乙醇加到每小份中。
注意：加入β-巯基乙醇的上样缓冲液可在室温下保存一个月左右。 此缓冲液可以用DTT 替代β-巯基乙醇。10ml 上样缓冲液中加 入0.617mgDTT, 溶解后分分装，可-20℃保存一年。使用时
30ul 样品加入10ul Loading Buffer 混匀，沸水浴5-10分钟，冷 却却可上样。
电转缓冲液（western 转膜用）
组份浓度 0.25 M Tris, 2.5 M Glycine, 0.37%SDS
配制量 1L
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于15ml 离心管中。
Tris 3.0g
Glycine 14.4g
10%SDS 3.7ml
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至800 ml后，加入200 ml的甲醇。
4. 室温保存。
注意：对于本公司所产10×电转缓冲液（D1060），使用时，取100ml 10×电转缓冲液，加入700ml 去离子水, 加入200ml 甲醇，混匀 即可。
TBST 缓冲液（western 洗膜用）
组份浓度 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl
0.05%（V/V）Tween 20
配制量 1L
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于1L 离心管中。
NaCl 8.8g
1 M Tris-HCl （pH7.6） 20ml
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加入0.5-1.0ml Tween 20后充分混匀。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，4℃保存。
常规SDS 聚丙烯酰胺凝胶配制方法
试剂 分离胶8% 分离胶10% 分离胶12% 浓缩胶4%
配制量 10ml 10ml 10ml 5ml
30%丙烯酰胺 2.67ml 3.33ml 4.0ml 0.67ml
1.5mol/LTris（pH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml -
1.0mol/LTris（pH6.8） - - - 0.625ml
10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ul
ddH2O 4.6ml 4.0ml 3.3ml 3.6ml
TEMED 10ul 10ul 10ul 5ul
10%过硫酸氨 100ul 100ul 100ul 50ul
注意：TEMED 和10%过硫酸氨最后加，在加入前需混匀前面所加 试剂。10%过硫酸氨在4℃有效期为一周，TEMED 易挥发，使用
后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放 37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1ml ddH2O封上层，胶凝
固后可见到分界线。灌浓缩胶时，先倾去水层，再用吸纸吸干。 灌浓缩胶后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中（让电泳 液漫过加样孔），轻轻的拨出梳子，可防加样孔变型。 考马斯亮蓝染色液
组份浓度 0.1%考马斯亮R-250, 25%异丙醇,
10%冰醋酸
配制量 1 L
配制方法：
1. 称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。
2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。
4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。
5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。
考马斯亮蓝染色脱色液
组份浓度 10%（V/V）醋酸, 5%（V/V）乙醇
配制量 1 L
配制方法:
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
冰乙酸 100ml
乙醇 50ml
2. 加去离子水定溶至1L ，搅拌均匀。室温保存。
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法
20% （W/V） Glucose
配制量100ml
配制方法:
1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
0.5 M EDTA （pH8.0）
配制量1 L
配制方法:
1. 称取186.1 g Na2EDTA•2H2O，置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH 调节pH 值至8.0（约20 g NaOH）。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
注意：pH 值至8.0时，EDTA 才能完全溶解。
1 M DTT
配制量50ml
配制方法:
1. 称取7.71g DTT，加入到100ml 烧杯中。
2. 加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况 0.22um 滤膜过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
30%丙烯酰胺（29：1）
配制量1 L
配制方法:
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
Acrylamide 290g
Bisacrylamide 10g
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45um 滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具 有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎 操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,
0.5%（W/V）SDS
配制量 1 L
配制方法：
1．称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2．取下列溶液，加入烧杯中。
Tris 15.1g
Glycine 94g
SDS 5g
3. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
4×SDS-蛋白上样缓冲液
组份浓度
Tris-HCl （pH6.8） 200mM
SDS 8%
溴酚蓝 0.4%
甘油 40%
巯基乙醇 4%
配制量 10ml
配制方法：
1. 量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。
Tris-HCl （pH6.8） 2ml
SDS 0.8
溴酚蓝 40mg
甘油 4ml
2. 加去离子水溶解后定容至10 ml。
3. 小份（500 ml/份）分装后，于室温保存。
4. 使用前将20ul 的β-巯基乙醇加到每小份中。
注意：加入β-巯基乙醇的上样缓冲液可在室温下保存一个月左右。 此缓冲液可以用DTT 替代β-巯基乙醇。10ml 上样缓冲液中加 入0.617mgDTT, 溶解后分分装，可-20℃保存一年。使用时
30ul 样品加入10ul Loading Buffer 混匀，沸水浴5-10分钟，冷 却却可上样。
电转缓冲液（western 转膜用）
组份浓度 0.25 M Tris, 2.5 M Glycine, 0.37%SDS
配制量 1L
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于15ml 离心管中。
Tris 3.0g
Glycine 14.4g
10%SDS 3.7ml
2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至800 ml后，加入200 ml的甲醇。
4. 室温保存。
注意：对于本公司所产10×电转缓冲液（D1060），使用时，取100ml 10×电转缓冲液，加入700ml 去离子水, 加入200ml 甲醇，混匀 即可。
TBST 缓冲液（western 洗膜用）
组份浓度 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl
0.05%（V/V）Tween 20
配制量 1L
配制方法：
1. 称量下列试剂，置于1L 离心管中。
NaCl 8.8g
1 M Tris-HCl （pH7.6） 20ml
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加入0.5-1.0ml Tween 20后充分混匀。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，4℃保存。
常规SDS 聚丙烯酰胺凝胶配制方法
试剂 分离胶8% 分离胶10% 分离胶12% 浓缩胶4%
配制量 10ml 10ml 10ml 5ml
30%丙烯酰胺 2.67ml 3.33ml 4.0ml 0.67ml
1.5mol/LTris（pH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml -
1.0mol/LTris（pH6.8） - - - 0.625ml
10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ul
ddH2O 4.6ml 4.0ml 3.3ml 3.6ml
TEMED 10ul 10ul 10ul 5ul
10%过硫酸氨 100ul 100ul 100ul 50ul
注意：TEMED 和10%过硫酸氨最后加，在加入前需混匀前面所加 试剂。10%过硫酸氨在4℃有效期为一周，TEMED 易挥发，使用
后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放 37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1ml ddH2O封上层，胶凝
固后可见到分界线。灌浓缩胶时，先倾去水层，再用吸纸吸干。 灌浓缩胶后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中（让电泳 液漫过加样孔），轻轻的拨出梳子，可防加样孔变型。 考马斯亮蓝染色液
组份浓度 0.1%考马斯亮R-250, 25%异丙醇,
10%冰醋酸
配制量 1 L
配制方法：
1. 称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。
2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。
4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。
5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。
考马斯亮蓝染色脱色液
组份浓度 10%（V/V）醋酸, 5%（V/V）乙醇
配制量 1 L
配制方法:
1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
冰乙酸 100ml
乙醇 50ml
2. 加去离子水定溶至1L ，搅拌均匀。室温保存。