第22卷第7期2007年4月 J A ppl C lin Pedia tr, V ol . 22N o . 7, A pr . 2007
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・实验研究・・论著・
大鼠心肌缺血再灌注模型的改进及心电图判断指标
刘艳伟, 刘水平, 成建定, 陈玉川
1
1
1
2
(1. 中山大学中山医学院法医病理教研室, 广州510080; 2. 广东省警官学院, 广州510230)
摘要:目的 改进心肌缺血再灌注模型的制备, 研究大鼠心肌缺血再灌注的心电图特点和损伤心肌超微结构改变, 确定判断模
型成功的心电图标准。方法 制备幼年雄性S D 大鼠心肌缺血再灌注模型, 气管切开, 开胸, 结扎时将一硅胶管与冠状动脉一起结扎, 结扎30m in 后再灌注; 观测记录心电图改变, 制作常规电镜切片, 观察超微结构改变。结果 造模成功率90%; 心电图:QRS 波群增高是判断结扎完全的标准; 心肌酶水平升高显著; 超微结构破坏明显。结论 该方法有效建立心肌缺血再灌注模型, 提出心电图判断标准; 心肌超微结构损害明显。实用儿科临床杂志, 2007, 22(7) :525-527
关键词:心肌再灌注, 缺血; 心电图; 超微结构; 大鼠中图分类号:R725. 4 文献标志码:A 文章编号:1003-515X (2007) 07-0525-03
I m prove m en t of M ethods of M ak i n g M yocard i a l Ischem i a -Reperfusi on M odel and Effects on Electrocard i o 2gram and Ultra structure of M yocard i u m i n Ra ts
L I U Yan -w ei 1, L I U Shui -ping 1, CHENG J ian -ding 1, CHEN Yu -chuan 2
(1. Depart m ent of Forensic Pathol ogy, Zhongshan School of Medicine, Sun Yat -Sen University, Guangzhou China; 2. the Police Officer College of Guangdong Pr ovince, Guangzhou 510230, China )
Abstract:O bjecti ve To i m p r ove the methods of making myocardial ia -on of electr ocar 2di ogra m and ultrastructure of myocardium in rats . M ethods The chest of thr ough f s pace was opened, and the left cor onary artery was tied with a silicagel tube, after 30m t . of ocardi ogra m were observed and re 2corded . After reperfusi on, the levels of AST, LDH, and CK -MB sa mp les of the infarct areas were exa m ined by trans m issi on electr onic m icr oscope . Results The 90of t otal rats ischem ia reperfusi on model successfully . I n my 2ocardial ische m ia reperfusi on rats:the QRS of ia -on rats was much higher than that of contr ol gr oup; the level of cardiac enzy mes increased; and cells ultrastructure was damaged seri ously . Conclusi on s The i m p r ove ment of modus operandi is . on can cause evident da mage of myocardial and vascular endothelial cells ultrastructure in rats, and da mage of is than vascular endothelial cells . J Appl C li n Ped i a tr, 2007, 22(7) :525-527
Key words:on, ischem ia; electr ocardi ogra m; ultrastructure; rat
先天性心脏病(先心病) 是胎儿时期心脏血管发育异常而致的畸形疾病。我国每年有13万以上先心病患儿出生, 7岁以下儿童中先心病人数达54万
[1]
吸比为2:1, 予呼气末持续正压呼吸。3. 胸骨左侧约0. 5c m 处, 第三、四肋间切口; 钝性分离至肋间隙, 剪断第三、四肋, 暴露胸腔, 破心包膜, 小拉钩牵拉胸壁, 使心脏充分暴露; 在左心耳和肺动脉圆锥间找到与左冠状动脉伴行的冠状静脉, 在左心耳下方2mm 处以520无损伤缝合针穿线, 进针深度为1. 0～115mm, 宽度为2～3mm, 适应5m in; 结扎前于冠状静脉处放置硅胶管, 连同硅胶管(1. 5～2. 0mm ) 一起结扎冠状动脉前降支(假手术组仅穿线不结扎) 。4. 以同步心电图QRS 波群增高、增宽、ST 段抬高为结扎成功标志。排出胸腔气体, 关闭胸腔。于结扎成功30m in 后, 剪断结扎线, 拔除硅胶管。再灌注120m in 。5. 再灌注结束后自下腔静脉取血2mL, 检测AST 、LDH 、CK 2MB 。6. 取出心脏, 洗净血迹, 置于-20℃冰箱1h, 切片1mm, 置于0. 01g/LTTC 磷酸盐缓冲液中(pH
714) , 避光37℃水浴10m in 。7. 取梗死区行常规HE 切片、
, 其主要治疗方式为手
[2]
术治疗。缺血再灌注损伤是影响疗效的主要原因之一, 而
缺血再灌注动物模型是常用的实验研究平台。大鼠以其冠状动脉侧支循环少、心肌梗死出现早、心律失常发生率高、重复性, 稳定性好, 费用低廉而成为制作心肌缺血再灌注模型的首选实验动物。为此, 2006年4～6月作者对模型制备方法
[3]
进行改进, 且对其心电图及超微结构的改变进行研究。
材料与方法
一、材料 60只5～6周健康雄性Sp rage 2Da wley 大鼠,
体质量120～150g (中山大学中山医学院动物实验中心提供) 。分为假手术组、再灌120m in 组。200g/L乌拉坦; 氯化三苯基四氮唑(TT C ) , 心肌酶谱试剂盒。小动物呼吸机DH -150(浙江大学医学仪器厂) ; 生物机能实验系统B i o Lab -420(泰盟科技有限公司) ; 日立7170A 全自动生化分析仪; H -600
电镜切片。
三、统计学处理 采用SPSS 13. 0软件处理, 组间比较采用t 检验。
结 果
一、模型制备情况 制备心肌缺血再灌注模型共30只, 成功27只, 成功率为90%。
二、心电图改变 见图1。假手术组心电图无明显改变; 手术组结扎冠脉时均出现QRS 波群增高; 出现ST 段抬高16只; 出现并ST 段倒置2只; 仅出现ST 段抬高2只; 再灌注后
QRS 波群降低, ST 段下降, 出现室性期前收缩(VP B ) , 室性心
透射电镜; 520无损伤缝合针; 自制气管插管; 0. 8mm 硅胶管。
二、方法 1. 采用200g/L乌拉坦0. 5mL /100g, 腹腔注射。仰卧位固定于鼠板, 连接生物机能实验系统, 记录心电图。2. 气管切开, 放入气管插管(由一次性塑料滴管制成) , 连接小动物呼吸机, 潮气量5mL /100g, 频率60～80次/min, 呼
收稿日期:2007-02-27。
基金项目:国家自然科学基金项目资助(30500581) ; 广东省自然科学基金项目资助(05300606, 1053001685)
作者简介:刘艳伟, 男, 博士生, 研究方向为心源性猝死。
动过速(VT ) 。
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图1 心电图 1A:正常心电图; 1B:结扎后QRS 波幅增高; 1C:结扎后ST 段增高; 1D :结扎后ST 段倒置, 室性期前收缩
三、TT C 染色 梗死区呈灰白色。
四、心肌酶变化 见表1。
表1 缺血再灌注与假手术组大鼠心肌酶水平比较( x ±s , U /L) 组别
再灌注120m in 组
假手术组
n
注120m in 组:梗死区部分毛细血管明显扩张, 充血部分心肌细胞肿胀, 呈肌浆溶解状态 见图2、3。
六、心肌超微结构病理变化 见图4～7。再灌注
120m in 组:肌丝片状溶解、胞核肿胀、异染色质边集、肌原纤
AST
379±59213±42
CK 2MB
2312±3341298±312
30
30
LDH 2428±6541358±623
维形成异常收缩带; 线粒体弥散性肿胀, 部分线粒体嵴断裂, 溶解, 缺失甚至空泡化; 内质网扩张, 空泡化; 闰盘肿胀; 微血管内皮细胞出现核固缩。 与假手术组比较t (LDH ) =6. 484, t (AST ) =12. 554, t (CK 2MB ) =
121151 P a
五、常规病理切片 假手术组未见明显病理变化; 再灌
图2 , 图3, 肌浆溶解 图4 肌丝片状溶解, 线粒体肿胀 图5 内质网扩张、空泡化 图6 闰盘扩张, 7 , 论
本实验观察并记录了结扎前后及再灌注的心电图变化, 检查了心肌酶变化情况, 并采用TT C 染色, 心肌酶谱和电镜检查作为造模成功标志。本研究对模型制作的改进重点在于:以将足够柔软硅胶管和大鼠左冠状动脉结扎在一起的方法代替传统的缺血再灌注装置, 使手术时间缩短, 便于操作, 减少手术对大鼠损害; 由于硅胶管存在, 用力结扎冠状动脉时, 保证冠状动脉不被缝合线切断; 再灌注时易于剪断结扎线。另外, 麻醉药乌拉坦安全范围广, 剂量易掌握, 对重要脏器影响少, 其他麻醉药则易造成呼吸道阻塞或心律失常心肌坏死程度的特异血清指标映细胞损伤最直观指标
[6]
[5]
[4]
大收缩带, 带间的肌丝破坏、线粒体移位。糖原颗粒减少或消失也是判定心肌缺血再灌注细胞损伤最敏感指征
[9]
。缺
血再灌注后, 微血管内皮细胞超微结构也相应受到一定损伤, 如内皮细胞肿胀, 核染色质边集, 线粒体增大, 吞饮小泡减少, 应力纤维分散不成束, 梗死灶内的小动、静脉和毛细血管内皮细胞发生变性、断裂和分离等。但其损伤程度相对心肌纤维轻的多, 其原因可能是内皮细胞不如心肌细胞对缺血、缺氧更敏感。本实验对缺血再灌心肌细胞超微病理观察也与上述结果相似, 说明造模成功。
制备大鼠心肌缺血再灌注模型的关键在于结扎完全, 对于冠状动脉结扎完全的心电图标准有不同看法, 有些研究把
ST 段抬高作为判断冠状动脉结扎完全的心电图标准
[10]
。
心肌酶谱是反映心肌损伤的血清标准, CK 2MB 则是反映
。本组鼠的酶谱各项指标,
尤其是CK 2MB 比人类高得多。心肌细胞超微结构改变是反
。心肌缺血30～40m in 再复流灌
注时, 已遭受缺血性损害心肌细胞发生剧烈变化。本组缺血已导致细胞损伤, 再灌注后, 肌膜肿胀、破损, 肌膜下积液, 大部分肌原纤维及线粒体溶解, 核周大量积液, 微血管内皮肿胀, 表明细胞损伤加重, 即发生再灌注损伤。组织中水分和钙离子、钠离子和氯离子等经破损的细胞膜进入细胞内, 水分主要聚集于肌膜下区, 致使细胞明显肿胀。线粒体是反映心肌细胞损伤的敏感指标, 线粒体弥散性肿胀, 膜破裂, 嵴溶解、缺失、空泡化, 是缺氧造成的损伤
[7]
, 而
在本实验中, 经TTC 染色, 心肌酶谱和电镜检查确认造模成功大鼠中, 均出现QRS 波群的明显改变, 并出现ST 段改变大鼠占59. 25%, 并出现心律不齐大鼠占7. 40%; 而未造模成功的大鼠中, 出现单纯ST 段抬高者占66. 66%。提示单纯ST 段抬高可能是由结扎时损伤心肌所致。说明ST 段改变和心律不齐不能作为判断冠状动脉完全结扎和再通的主要心电图指标, QRS 波群的改变则更为敏感准确。
本研究改进大鼠心肌缺血再灌注模型的制作方法, 达到了简单易行、成功率高的效果, 并提出了心电图判断指标, 利于判断模型制作的成功与否。
参考文献:
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creases apop t otic cardi omyocyte death and myocardial angi otensin -con 2verting enzy me gene exp ressi on in ische m ia -reperfusi on injured myo 2
。心肌缺血一定时间
后, 予血流再灌注, 虽然心肌得到氧的供应, 但增加氧自由基的形成, 也加重钙离子的超载, 从而触发了心肌细胞凋亡的始发环节及核酸内切酶激活途径
[8]
。钙离子是肌原纤维收
缩的必要条件, 但钙离子水平增高, 使细胞内钙离子超载, 促使已松弛的肌原纤维异常收缩, 使几个肌节合并成一个异常
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(本文编辑:张耀东)
(上接第497页) 离心管(EP 管) 中低温保存, 用于腹泻轮所需营养物质相对也较多, 给胃肠道造成负担大, 消化功能会经常处于紧张状态, 易导致消化功能紊乱, 故消化不良引起的腹泻也占一定比例。在调查中发现, RV 秋冬季节感染率有明显上升趋势, 符合众多报道
[6～]
状病毒(RV ) 检测。根据细菌培养情况, 用接种针挑取少许
SS 培养基上的可疑菌落, 穿刺接种于三糖铁培养基进一步鉴
定; 用接种环取少许伊红美蓝培养基上的可疑菌落, 分别与致病性大肠杆菌诊断血清、沙门菌属诊断血清、志贺菌属诊断血清进玻片凝集试验进行鉴定, 确定血清分型, 严格按标准试剂要求进行。31RV 检测:使用RV 抗原检测试剂盒, 采取一步法进行酶联免疫吸附反应(EL I S A ) 试验, 检测RV 抗原。方法均按照试剂说明进行。
结 果
一、腹泻162837d ～0. 5岁46. 7%0. . 27. 5%(448例) 、1～3岁21. 6%(352例) ～54. 1%(67例) 。
, 应引起重视。
本组130, 既不是消化不良, , , 阴:1. ; 有一些患儿2. 与粪标本新鲜程度:由于志贺菌属对酸特别敏感, 粪标本超过
3. 由于标本中病原菌在使用的SS 培
养基与伊红美蓝培养基中不生长而漏诊。4. 导致腹泻的病原体可能为使用检测范围外的; 因为导致腹泻除以上病原体外, 还有厌氧菌、腺病毒、星状病毒、杯状病毒、冠状病毒等。可见在以后的腹泻病原学研究工作中, 为确保更多的病原体都能够尽可能被检测到, 明确腹泻病因, 需要选择更多的培养基和病毒检测手法。
参考文献:
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(本文编辑:李建华)
二、豫北地区婴幼儿腹泻病原学调查结果 11腹泻1
628例患儿的病因构成:RV65. 6%(1068例) ; 细菌感染13. 6%(221例) , 消化不良12. 8%(209例) ; 其他8. 0%(130
例) 。2. 引起腹泻的221株病原菌:志贺菌属49. 3%(109例) , 鼠伤寒沙门菌16. 7%(37例) 、肠致病型大肠埃希菌
(EPEC ) 1217%(28例) , 奇异变形杆菌9. 5%(21例) 、猪霍
乱沙门菌5. 0%(11例) , 肠出血型大肠埃希菌3. 6%(8例) 、普通变形杆菌3. 2%(7例) 。
讨 论
婴幼儿腹泻已成为世界性的急待解决的公共卫生问题。作者本次对豫北地区婴幼儿腹泻病原学进行调查研究。本组发病年龄多在2岁以内, 随着年龄增加发病率有明显降低趋势。故2岁以下儿童是婴幼儿腹泻的高危人群。本组细菌感染占婴幼儿腹泻13. 6%, 感染率低于文献多数报道道
[2～4][2～4]
; RV 感染占65. 6%, 感染率明显高于国内多数报; 说明豫北地区婴幼儿腹泻主要为RV 感染。调查RV
感染率年平均65. 6%, 已接近众多报道RV 高感染率秋冬季节80%结果。细菌感染以志贺菌属和沙门菌属为主要病原菌, 志贺菌检出率高于多数报道, 沙门菌感染较Nels on 等报道11%高, 比Vargas 等
[3]
[2]
的24%明显偏低, 其次是肠致病
, 变形杆菌属感染率较低。婴
性大肠埃希菌1217%。国外一些报道儿童腹泻中致病性大肠埃希菌检出率高达35%
[3, 5]
幼儿由于消化酶活性较差, 加上消化系统发育还不成熟, 神经系统对消化道调节功能也较差, 而婴幼儿生长发育又快,
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摘要:目的 改进心肌缺血再灌注模型的制备, 研究大鼠心肌缺血再灌注的心电图特点和损伤心肌超微结构改变, 确定判断模
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关键词:心肌再灌注, 缺血; 心电图; 超微结构; 大鼠中图分类号:R725. 4 文献标志码:A 文章编号:1003-515X (2007) 07-0525-03
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(1. Depart m ent of Forensic Pathol ogy, Zhongshan School of Medicine, Sun Yat -Sen University, Guangzhou China; 2. the Police Officer College of Guangdong Pr ovince, Guangzhou 510230, China )
Abstract:O bjecti ve To i m p r ove the methods of making myocardial ia -on of electr ocar 2di ogra m and ultrastructure of myocardium in rats . M ethods The chest of thr ough f s pace was opened, and the left cor onary artery was tied with a silicagel tube, after 30m t . of ocardi ogra m were observed and re 2corded . After reperfusi on, the levels of AST, LDH, and CK -MB sa mp les of the infarct areas were exa m ined by trans m issi on electr onic m icr oscope . Results The 90of t otal rats ischem ia reperfusi on model successfully . I n my 2ocardial ische m ia reperfusi on rats:the QRS of ia -on rats was much higher than that of contr ol gr oup; the level of cardiac enzy mes increased; and cells ultrastructure was damaged seri ously . Conclusi on s The i m p r ove ment of modus operandi is . on can cause evident da mage of myocardial and vascular endothelial cells ultrastructure in rats, and da mage of is than vascular endothelial cells . J Appl C li n Ped i a tr, 2007, 22(7) :525-527
Key words:on, ischem ia; electr ocardi ogra m; ultrastructure; rat
先天性心脏病(先心病) 是胎儿时期心脏血管发育异常而致的畸形疾病。我国每年有13万以上先心病患儿出生, 7岁以下儿童中先心病人数达54万
[1]
吸比为2:1, 予呼气末持续正压呼吸。3. 胸骨左侧约0. 5c m 处, 第三、四肋间切口; 钝性分离至肋间隙, 剪断第三、四肋, 暴露胸腔, 破心包膜, 小拉钩牵拉胸壁, 使心脏充分暴露; 在左心耳和肺动脉圆锥间找到与左冠状动脉伴行的冠状静脉, 在左心耳下方2mm 处以520无损伤缝合针穿线, 进针深度为1. 0～115mm, 宽度为2～3mm, 适应5m in; 结扎前于冠状静脉处放置硅胶管, 连同硅胶管(1. 5～2. 0mm ) 一起结扎冠状动脉前降支(假手术组仅穿线不结扎) 。4. 以同步心电图QRS 波群增高、增宽、ST 段抬高为结扎成功标志。排出胸腔气体, 关闭胸腔。于结扎成功30m in 后, 剪断结扎线, 拔除硅胶管。再灌注120m in 。5. 再灌注结束后自下腔静脉取血2mL, 检测AST 、LDH 、CK 2MB 。6. 取出心脏, 洗净血迹, 置于-20℃冰箱1h, 切片1mm, 置于0. 01g/LTTC 磷酸盐缓冲液中(pH
714) , 避光37℃水浴10m in 。7. 取梗死区行常规HE 切片、
, 其主要治疗方式为手
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术治疗。缺血再灌注损伤是影响疗效的主要原因之一, 而
缺血再灌注动物模型是常用的实验研究平台。大鼠以其冠状动脉侧支循环少、心肌梗死出现早、心律失常发生率高、重复性, 稳定性好, 费用低廉而成为制作心肌缺血再灌注模型的首选实验动物。为此, 2006年4～6月作者对模型制备方法
[3]
进行改进, 且对其心电图及超微结构的改变进行研究。
材料与方法
一、材料 60只5～6周健康雄性Sp rage 2Da wley 大鼠,
体质量120～150g (中山大学中山医学院动物实验中心提供) 。分为假手术组、再灌120m in 组。200g/L乌拉坦; 氯化三苯基四氮唑(TT C ) , 心肌酶谱试剂盒。小动物呼吸机DH -150(浙江大学医学仪器厂) ; 生物机能实验系统B i o Lab -420(泰盟科技有限公司) ; 日立7170A 全自动生化分析仪; H -600
电镜切片。
三、统计学处理 采用SPSS 13. 0软件处理, 组间比较采用t 检验。
结 果
一、模型制备情况 制备心肌缺血再灌注模型共30只, 成功27只, 成功率为90%。
二、心电图改变 见图1。假手术组心电图无明显改变; 手术组结扎冠脉时均出现QRS 波群增高; 出现ST 段抬高16只; 出现并ST 段倒置2只; 仅出现ST 段抬高2只; 再灌注后
QRS 波群降低, ST 段下降, 出现室性期前收缩(VP B ) , 室性心
透射电镜; 520无损伤缝合针; 自制气管插管; 0. 8mm 硅胶管。
二、方法 1. 采用200g/L乌拉坦0. 5mL /100g, 腹腔注射。仰卧位固定于鼠板, 连接生物机能实验系统, 记录心电图。2. 气管切开, 放入气管插管(由一次性塑料滴管制成) , 连接小动物呼吸机, 潮气量5mL /100g, 频率60～80次/min, 呼
收稿日期:2007-02-27。
基金项目:国家自然科学基金项目资助(30500581) ; 广东省自然科学基金项目资助(05300606, 1053001685)
作者简介:刘艳伟, 男, 博士生, 研究方向为心源性猝死。
动过速(VT ) 。
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第22卷第7期2007年4月 J A ppl C lin Pedia tr, V ol . 22N o . 7, A pr . 2007
图1 心电图 1A:正常心电图; 1B:结扎后QRS 波幅增高; 1C:结扎后ST 段增高; 1D :结扎后ST 段倒置, 室性期前收缩
三、TT C 染色 梗死区呈灰白色。
四、心肌酶变化 见表1。
表1 缺血再灌注与假手术组大鼠心肌酶水平比较( x ±s , U /L) 组别
再灌注120m in 组
假手术组
n
注120m in 组:梗死区部分毛细血管明显扩张, 充血部分心肌细胞肿胀, 呈肌浆溶解状态 见图2、3。
六、心肌超微结构病理变化 见图4～7。再灌注
120m in 组:肌丝片状溶解、胞核肿胀、异染色质边集、肌原纤
AST
379±59213±42
CK 2MB
2312±3341298±312
30
30
LDH 2428±6541358±623
维形成异常收缩带; 线粒体弥散性肿胀, 部分线粒体嵴断裂, 溶解, 缺失甚至空泡化; 内质网扩张, 空泡化; 闰盘肿胀; 微血管内皮细胞出现核固缩。 与假手术组比较t (LDH ) =6. 484, t (AST ) =12. 554, t (CK 2MB ) =
121151 P a
五、常规病理切片 假手术组未见明显病理变化; 再灌
图2 , 图3, 肌浆溶解 图4 肌丝片状溶解, 线粒体肿胀 图5 内质网扩张、空泡化 图6 闰盘扩张, 7 , 论
本实验观察并记录了结扎前后及再灌注的心电图变化, 检查了心肌酶变化情况, 并采用TT C 染色, 心肌酶谱和电镜检查作为造模成功标志。本研究对模型制作的改进重点在于:以将足够柔软硅胶管和大鼠左冠状动脉结扎在一起的方法代替传统的缺血再灌注装置, 使手术时间缩短, 便于操作, 减少手术对大鼠损害; 由于硅胶管存在, 用力结扎冠状动脉时, 保证冠状动脉不被缝合线切断; 再灌注时易于剪断结扎线。另外, 麻醉药乌拉坦安全范围广, 剂量易掌握, 对重要脏器影响少, 其他麻醉药则易造成呼吸道阻塞或心律失常心肌坏死程度的特异血清指标映细胞损伤最直观指标
[6]
[5]
[4]
大收缩带, 带间的肌丝破坏、线粒体移位。糖原颗粒减少或消失也是判定心肌缺血再灌注细胞损伤最敏感指征
[9]
。缺
血再灌注后, 微血管内皮细胞超微结构也相应受到一定损伤, 如内皮细胞肿胀, 核染色质边集, 线粒体增大, 吞饮小泡减少, 应力纤维分散不成束, 梗死灶内的小动、静脉和毛细血管内皮细胞发生变性、断裂和分离等。但其损伤程度相对心肌纤维轻的多, 其原因可能是内皮细胞不如心肌细胞对缺血、缺氧更敏感。本实验对缺血再灌心肌细胞超微病理观察也与上述结果相似, 说明造模成功。
制备大鼠心肌缺血再灌注模型的关键在于结扎完全, 对于冠状动脉结扎完全的心电图标准有不同看法, 有些研究把
ST 段抬高作为判断冠状动脉结扎完全的心电图标准
[10]
。
心肌酶谱是反映心肌损伤的血清标准, CK 2MB 则是反映
。本组鼠的酶谱各项指标,
尤其是CK 2MB 比人类高得多。心肌细胞超微结构改变是反
。心肌缺血30～40m in 再复流灌
注时, 已遭受缺血性损害心肌细胞发生剧烈变化。本组缺血已导致细胞损伤, 再灌注后, 肌膜肿胀、破损, 肌膜下积液, 大部分肌原纤维及线粒体溶解, 核周大量积液, 微血管内皮肿胀, 表明细胞损伤加重, 即发生再灌注损伤。组织中水分和钙离子、钠离子和氯离子等经破损的细胞膜进入细胞内, 水分主要聚集于肌膜下区, 致使细胞明显肿胀。线粒体是反映心肌细胞损伤的敏感指标, 线粒体弥散性肿胀, 膜破裂, 嵴溶解、缺失、空泡化, 是缺氧造成的损伤
[7]
, 而
在本实验中, 经TTC 染色, 心肌酶谱和电镜检查确认造模成功大鼠中, 均出现QRS 波群的明显改变, 并出现ST 段改变大鼠占59. 25%, 并出现心律不齐大鼠占7. 40%; 而未造模成功的大鼠中, 出现单纯ST 段抬高者占66. 66%。提示单纯ST 段抬高可能是由结扎时损伤心肌所致。说明ST 段改变和心律不齐不能作为判断冠状动脉完全结扎和再通的主要心电图指标, QRS 波群的改变则更为敏感准确。
本研究改进大鼠心肌缺血再灌注模型的制作方法, 达到了简单易行、成功率高的效果, 并提出了心电图判断指标, 利于判断模型制作的成功与否。
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creases apop t otic cardi omyocyte death and myocardial angi otensin -con 2verting enzy me gene exp ressi on in ische m ia -reperfusi on injured myo 2
。心肌缺血一定时间
后, 予血流再灌注, 虽然心肌得到氧的供应, 但增加氧自由基的形成, 也加重钙离子的超载, 从而触发了心肌细胞凋亡的始发环节及核酸内切酶激活途径
[8]
。钙离子是肌原纤维收
缩的必要条件, 但钙离子水平增高, 使细胞内钙离子超载, 促使已松弛的肌原纤维异常收缩, 使几个肌节合并成一个异常
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(本文编辑:张耀东)
(上接第497页) 离心管(EP 管) 中低温保存, 用于腹泻轮所需营养物质相对也较多, 给胃肠道造成负担大, 消化功能会经常处于紧张状态, 易导致消化功能紊乱, 故消化不良引起的腹泻也占一定比例。在调查中发现, RV 秋冬季节感染率有明显上升趋势, 符合众多报道
[6～]
状病毒(RV ) 检测。根据细菌培养情况, 用接种针挑取少许
SS 培养基上的可疑菌落, 穿刺接种于三糖铁培养基进一步鉴
定; 用接种环取少许伊红美蓝培养基上的可疑菌落, 分别与致病性大肠杆菌诊断血清、沙门菌属诊断血清、志贺菌属诊断血清进玻片凝集试验进行鉴定, 确定血清分型, 严格按标准试剂要求进行。31RV 检测:使用RV 抗原检测试剂盒, 采取一步法进行酶联免疫吸附反应(EL I S A ) 试验, 检测RV 抗原。方法均按照试剂说明进行。
结 果
一、腹泻162837d ～0. 5岁46. 7%0. . 27. 5%(448例) 、1～3岁21. 6%(352例) ～54. 1%(67例) 。
, 应引起重视。
本组130, 既不是消化不良, , , 阴:1. ; 有一些患儿2. 与粪标本新鲜程度:由于志贺菌属对酸特别敏感, 粪标本超过
3. 由于标本中病原菌在使用的SS 培
养基与伊红美蓝培养基中不生长而漏诊。4. 导致腹泻的病原体可能为使用检测范围外的; 因为导致腹泻除以上病原体外, 还有厌氧菌、腺病毒、星状病毒、杯状病毒、冠状病毒等。可见在以后的腹泻病原学研究工作中, 为确保更多的病原体都能够尽可能被检测到, 明确腹泻病因, 需要选择更多的培养基和病毒检测手法。
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(本文编辑:李建华)
二、豫北地区婴幼儿腹泻病原学调查结果 11腹泻1
628例患儿的病因构成:RV65. 6%(1068例) ; 细菌感染13. 6%(221例) , 消化不良12. 8%(209例) ; 其他8. 0%(130
例) 。2. 引起腹泻的221株病原菌:志贺菌属49. 3%(109例) , 鼠伤寒沙门菌16. 7%(37例) 、肠致病型大肠埃希菌
(EPEC ) 1217%(28例) , 奇异变形杆菌9. 5%(21例) 、猪霍
乱沙门菌5. 0%(11例) , 肠出血型大肠埃希菌3. 6%(8例) 、普通变形杆菌3. 2%(7例) 。
讨 论
婴幼儿腹泻已成为世界性的急待解决的公共卫生问题。作者本次对豫北地区婴幼儿腹泻病原学进行调查研究。本组发病年龄多在2岁以内, 随着年龄增加发病率有明显降低趋势。故2岁以下儿童是婴幼儿腹泻的高危人群。本组细菌感染占婴幼儿腹泻13. 6%, 感染率低于文献多数报道道
[2～4][2～4]
; RV 感染占65. 6%, 感染率明显高于国内多数报; 说明豫北地区婴幼儿腹泻主要为RV 感染。调查RV
感染率年平均65. 6%, 已接近众多报道RV 高感染率秋冬季节80%结果。细菌感染以志贺菌属和沙门菌属为主要病原菌, 志贺菌检出率高于多数报道, 沙门菌感染较Nels on 等报道11%高, 比Vargas 等
[3]
[2]
的24%明显偏低, 其次是肠致病
, 变形杆菌属感染率较低。婴
性大肠埃希菌1217%。国外一些报道儿童腹泻中致病性大肠埃希菌检出率高达35%
[3, 5]
幼儿由于消化酶活性较差, 加上消化系统发育还不成熟, 神经系统对消化道调节功能也较差, 而婴幼儿生长发育又快,