全血质量控制
国家强制标准《全血成分质量血要求》
全血是指将一定量人的血液，采集到含一定量保养液的采血袋内所制成的血液制剂。它除了可作为一种临床上直接输注的血液制剂，也是其它所有种类的血液制剂制备的最初原料。因此它的质量是保证血液制剂质量的基础。储存期间, 全血内各种成分受储存环境和时间等因素的影响，必然会发生不同程度的变化。
全血理化性质变化（2-8℃保存）
一 全血容量 1. 质量标准确定
血液制剂的容量能够直接或间接代表血液制剂中主要成分的量。因此，以全血为最初原料制备的各类成分血中的主要成分的量也决定于全血的容量。根据《全血成分血质量要求》的制订原则，统一的血液制剂规格可以为临床治疗输注剂量提供可靠的参考依据。因此，标准规定了全血的容量：
保养液为ACD-B 的全血的容量有两种规格： 250ml±10％ 500ml ±10％
保养液为CPD 、CPDA-1 的全血的容量有两种规格: 228ml±10％ 456ml ±10％
2. 质量控制实验方法
通常采用称重法来间接的确定全血的容量。具体实验步骤如下： （1）比重测定
① 标记两个空管，分别称出空管重量W1、W2。
② 用移液管移取全血1ml ，分别加入试管中，称重W3、W4。 ③ 用W3- W1、W4- W2得出1ml 全血的重量W 。 ④ 用下列公式计算全血的比重
（2）容量确定
用计量合格的电子称逐个称重, 并做好原始记录, 根据公式计算
二 全血血细胞比容 1. 质量标准确定
血细胞比容是指一定量抗凝血中的红细胞体积总数与定量全血体积之比，因此在全血容量确定的前提下，它能更加准确的确定全血中红细胞的数量。由于全血的血细胞比容与正常人群中血细胞比容的正常值范围和全血保养液的种类有关，因此93年版的卫生部《血站基本标准》中依据这两个条件，规定了全血的血细胞比容如下： 全血保养液为ACD －B 时，血细胞比容30.30 全血保养液为CPD 、CPDA-1时，血细胞比容30.35
2. 质量控制实验方法 （1）毛细管法
[原 理]:将定量的抗凝血液用一定的速度和时间离心沉淀后，观察压实红细胞和上层血浆体积的比值（L/L）。 [操 作]
1. 将检品血袋摇匀。
2. 使用虹吸法把检品充进毛细管内。 3. 毛细管一端用橡皮泥封口。
4. 将毛细管置于Heamofuge A型离心机上12000r/min 离心5分钟。 5. 用刻度盘查出血细胞比容。 （2）血细胞分析仪检测法
[原理]:目前，血细胞分析仪的检测原理大致分为两类，即电阻抗法与光散射法。电阻抗法是通过测量悬浮于电解质溶液中的红细胞通过某一孔时产生的电阻变化而感知红细胞的数量和大小。红细胞比容是通过如下公式计算得出： HCT（%）=RBC*MCV/10
光散射法通过测量经过特殊液体稀释且经戊二醛固定的球型红细胞通过测试区时被激光照射后产生的信号变化来来测定红细胞的总数与单个体积。从原理上讲，光散射法比电阻抗法测得的血细胞比容更准确。 [操 作]
按仪器说明执行。
三 全血pH 值 1. 质量标准确定
根据文献，美国血库联合会的研究资料认为保存期全血的pH 值为6.7-7.0(ACD)，6.8-7.2(CPD)，6.8-7.4(CPDA-1)；日本红十字的数据为6.72-7.08(ACD)，6.73-7.22(CPD)；上述两者的研究结果是一致的。我国93年版卫生部《血站基本标准》规定为6.6-6.9。 标准撰写组98年2月进行的血站标准采用情况调查得到的反馈信息为:
陕西血站建议为6.6-7.2, 天津血站建议为≥6.6, 武汉血站建议为6.8-7.1,
北京血液中心95年-98年测定的191份标本的结果(仪器每年计量) ，100%标本pH 在6.6-7.0之间，93%标本在6.67-6.99之间。 上述信息表明93年版的卫生部《血站基本标准》中关于全血的pH 的规定不合理。血细胞的功能主要与pH 低限有关，因此，pH 下限标准是质控的关键。根据已有的文献，制订了标准范围如下： 全血保养液为ACD －B 时，pH 为6.6—7.0； 全血保养液为CPD 时 ， pH为 6.7—7.2； 全血保养液为CPDA-1时 ，pH 为 6.8—7.4
2. 质量控制实验方法
测定溶液pH 值的方法很多，如电势法，酸碱指示剂和pH 试纸测定。用电势法可以准确测定容液的pH 值。 【注意事项】
（1）检测pH 值时, 一旦血液从血袋中取出，应立即进行检测，以防止全血标本在空气中暴露时间过长而CO2逸出, 导致测定的pH 偏高。 （2）标化电极系统所用的缓冲液pH 值应与测定的pH 值尽量接近，如果标准缓冲液pH 值与测定的pH 值相差2个pH 单位以上，将引起误差。标准缓冲液用后即弃去，不得再返回瓶中，以防污染。 （3）玻璃电极初次使用时，应将玻璃膜侵在蒸馏水中数小时或过夜，以稳定其不对称电位。
（4）温度对血液pH 的影响很大。因此，测定时pH 电极要保持恒温，温度变动只允许在±0.1℃。非室温保存的标本一般在测定前应在室温放置平衡，以免与pH 电极温差过大影响测定的稳定性；如果标定与测定时的溶液温度不同，则应用仪器上的温度补偿旋钮补偿之。 四 全血钾离子浓度、钠离子浓度 1. 质量标准的确定
根据文献，美国、欧洲的血液标准对此两个指标无明确规定。日本研究数据为：
保养液为ACD ：[K+]21天=21mmol/L，[K+]28天=25mmol/L
[Na+]1天=172mmol/L， [Na+]21天=146mmol/L，[Na+]28天=143mmol/L
保养液为CPD:[K+]21天=27mmol/L，[K+]28天=29mmol/L [Na+]1天=175mmol/L， [Na+]21天=152mmol/L，[Na+]28天=147mmol/L
美国关于全血钾离子浓度、钠离子浓度的数据为： 保养液为CPD:[K+]21天=21mmol/L
保养液为CPDA-1:[K+]35天=36mmol/L(红细胞) ；[K+]35天=27.3mmol/L(全血)[Na+]35天=104mmol/L(红细胞) 澳大利亚某一个血液中心的内部操作规程中规定为： [K+]
93年版的卫生部《血站基本标准》中的规定为： [K+]
从反馈的征询意见看，各血站、专家的意见不统一。为此，标准制订参考上述资料, 制订不同保养液的全血的[K+]、[Na+]的标准为： 全血保养液为ACD －B 时，钾离子浓度≤21mmol/L 全血保养液为CPD 时 ，钾离子浓度≤27mmol/L； 全血保养液为CPDA-1时 ，钾离子浓度≤27.3mmol/L 全血保养液为ACD-B 时，钠离子浓度≥146mmol/L； 全血保养液为CPD 时，钠离子浓度≥152mmol/L； 全血保养液为CPDA-1时，钠离子浓度≥104mmol/L
2. 质量控制实验方法
血浆[Na+]、[K+]测定技术主要包括三类：火焰光度法、离子选择电极法和比色法。
火焰光度法是当前临床化学实验室广泛采用的方法，仪器的自动化程度和精密度不断提高。目前国产火焰光度计多属非内标型；国外产品多为内标型，用锂或铯作内标。限定型号、试剂来源及操作程序的火焰光度法被选为钠、钾测定的参比方法。火焰光度法的缺点在于压缩机声音噪杂；所用燃料为易燃物，有一定的潜在危险；高脂血症、高蛋白血症的血清会出现假性低钠〔钾〕现象。
离子选择电极〔1SE 〕法又称膜电极法，是一种电位分析法。离子计是测量电极电动势的高输入阻抗毫伏计。电极是关键部件。膜电极只对离子活度起效应。离子活度等于离子浓度与活度系数的乘积，它受物理和化学的多种作用力的影响。膜电极法分直接式与间接式两种。直接式血清不经稀释直接测定，间接式血清经稀释后测定。间接式给出与火焰法类同的结果；直接式可避免假性低钠现象。但离子选择电极法是目前使用最为广泛的方法。
最早使用的钠比色法、钾钠比浊法，只需基本的实验仪器，适用于基层医疗单位, 现已基本淘汰。酶法和冠醚比色法是近几年发展起来新的比色法。酶法将被测离子作为酶联反应系统的激活剂或成分，根据反应速度与被测离子浓度成正比的原理，测定被测离子浓度。该方法特异性、精确度和准确度均好，可以在自动生化分析仪上进行，但对技术要求较高、成本高、试剂有效期短，不适用于血站的质量控制工
作的推广使用。冠醚比色法是利用大环类化合物〔如冠醚〕可以与钾钠离子特异性地结合成水溶性复合物被用于钾钠比色测定， 但方法尚不完善、简单、经济。 五 全血血浆血红蛋白 1. 标准的确定
全血在储存时，除了由于代谢造成极少的红细胞死亡溶血释放游离血红蛋白外，不当的储存条件如保养液异常、温度、剧烈振荡以及出现凝块也会使红细胞溶血，最终导致全血血浆血红蛋白异常升高。 日本红十字会的血库标准中指出：保养液为ACD 时，血浆血红蛋白21天=0.29g/L，血浆血红蛋白28天=0.47g/L；保养液为CPD 时，血浆血红蛋白21天=0.26g/L，血浆血红蛋白28天=0.35g/L。 澳大利亚血液中心的内部操作规程为：保养液为ACD-B 配方时，血浆血红蛋白
93年版的卫生部《血站基本标准》中规定的全血中的血浆血红蛋白
根据98年2月起草小组进行的标准采用情况调查结果，对血浆血红蛋白反馈的信息是陕西血液中心认为血浆血红蛋白
依据不应取消。因此，对标准在执行中遇到的疑问的解决，应在明确溯源的前提下，以参比方法的检测结果为论证依据，确定标准的要求。 美国、欧洲的血液标准除采用过程控制指标即储存条件来控制全血质量，虽未对全血血浆血红蛋白作明确规定，但采用了溶血率这一指标。由于溶血率指标在用于质控检测时需要对比数据，可操作性差，因此制订该标准时采用了直接检测的方法。根据欧盟的标准即储存期末每个保养液为CPDA-1的单位血的溶血率小于0.8%，，换算出血浆血红蛋白＝0.72 g/L。同时参考日本、澳大利亚的标准制订了血浆血红蛋白的标准：
全血保养液为ACD-B 时，血浆血红蛋白≤0.29g/L； 全血保养液为CPD 时，血浆血红蛋白≤0.26g/L； 全血保养液为CPDA-1时，血浆血红蛋白≤0.72g/L 2. 质量控制实验方法 方法一 [原理]
血红蛋白具有过氧化物酶的作用，使过氧化物分解产生新生氧，氧化联苯胺成蓝色或绿色衍生物，吸收峰在630nm ；加强酸后（pH=1.5），呈黄色，吸收峰在510nm 。 [实验步骤]
（1）取两支玻璃试管分别标记标准管和空白管。 （2）每个样品做两支测定管。 （3）按照下表加入试剂。
[计算公式]
方法二
[原理]
苯息丁在酸化过氧化氢的溶液内和血红蛋白作用，生成一系列绿-蓝-红紫色反应，用光电比色计与已知浓度的血红蛋白进行比色，并计算其浓度。
[实验步骤]
（1）取两支玻璃试管分别标记标准管和空白管。
（2）每个样品做两支测定管。
（3）按照下表加入试剂。
[计算公式]
测定管读数
血浆游离血红蛋白=---------------------
标准管读数′20mg%
全血质量控制
国家强制标准《全血成分质量血要求》
全血是指将一定量人的血液，采集到含一定量保养液的采血袋内所制成的血液制剂。它除了可作为一种临床上直接输注的血液制剂，也是其它所有种类的血液制剂制备的最初原料。因此它的质量是保证血液制剂质量的基础。储存期间, 全血内各种成分受储存环境和时间等因素的影响，必然会发生不同程度的变化。
全血理化性质变化（2-8℃保存）
一 全血容量 1. 质量标准确定
血液制剂的容量能够直接或间接代表血液制剂中主要成分的量。因此，以全血为最初原料制备的各类成分血中的主要成分的量也决定于全血的容量。根据《全血成分血质量要求》的制订原则，统一的血液制剂规格可以为临床治疗输注剂量提供可靠的参考依据。因此，标准规定了全血的容量：
保养液为ACD-B 的全血的容量有两种规格： 250ml±10％ 500ml ±10％
保养液为CPD 、CPDA-1 的全血的容量有两种规格: 228ml±10％ 456ml ±10％
2. 质量控制实验方法
通常采用称重法来间接的确定全血的容量。具体实验步骤如下： （1）比重测定
① 标记两个空管，分别称出空管重量W1、W2。
② 用移液管移取全血1ml ，分别加入试管中，称重W3、W4。 ③ 用W3- W1、W4- W2得出1ml 全血的重量W 。 ④ 用下列公式计算全血的比重
（2）容量确定
用计量合格的电子称逐个称重, 并做好原始记录, 根据公式计算
二 全血血细胞比容 1. 质量标准确定
血细胞比容是指一定量抗凝血中的红细胞体积总数与定量全血体积之比，因此在全血容量确定的前提下，它能更加准确的确定全血中红细胞的数量。由于全血的血细胞比容与正常人群中血细胞比容的正常值范围和全血保养液的种类有关，因此93年版的卫生部《血站基本标准》中依据这两个条件，规定了全血的血细胞比容如下： 全血保养液为ACD －B 时，血细胞比容30.30 全血保养液为CPD 、CPDA-1时，血细胞比容30.35
2. 质量控制实验方法 （1）毛细管法
[原 理]:将定量的抗凝血液用一定的速度和时间离心沉淀后，观察压实红细胞和上层血浆体积的比值（L/L）。 [操 作]
1. 将检品血袋摇匀。
2. 使用虹吸法把检品充进毛细管内。 3. 毛细管一端用橡皮泥封口。
4. 将毛细管置于Heamofuge A型离心机上12000r/min 离心5分钟。 5. 用刻度盘查出血细胞比容。 （2）血细胞分析仪检测法
[原理]:目前，血细胞分析仪的检测原理大致分为两类，即电阻抗法与光散射法。电阻抗法是通过测量悬浮于电解质溶液中的红细胞通过某一孔时产生的电阻变化而感知红细胞的数量和大小。红细胞比容是通过如下公式计算得出： HCT（%）=RBC*MCV/10
光散射法通过测量经过特殊液体稀释且经戊二醛固定的球型红细胞通过测试区时被激光照射后产生的信号变化来来测定红细胞的总数与单个体积。从原理上讲，光散射法比电阻抗法测得的血细胞比容更准确。 [操 作]
按仪器说明执行。
三 全血pH 值 1. 质量标准确定
根据文献，美国血库联合会的研究资料认为保存期全血的pH 值为6.7-7.0(ACD)，6.8-7.2(CPD)，6.8-7.4(CPDA-1)；日本红十字的数据为6.72-7.08(ACD)，6.73-7.22(CPD)；上述两者的研究结果是一致的。我国93年版卫生部《血站基本标准》规定为6.6-6.9。 标准撰写组98年2月进行的血站标准采用情况调查得到的反馈信息为:
陕西血站建议为6.6-7.2, 天津血站建议为≥6.6, 武汉血站建议为6.8-7.1,
北京血液中心95年-98年测定的191份标本的结果(仪器每年计量) ，100%标本pH 在6.6-7.0之间，93%标本在6.67-6.99之间。 上述信息表明93年版的卫生部《血站基本标准》中关于全血的pH 的规定不合理。血细胞的功能主要与pH 低限有关，因此，pH 下限标准是质控的关键。根据已有的文献，制订了标准范围如下： 全血保养液为ACD －B 时，pH 为6.6—7.0； 全血保养液为CPD 时 ， pH为 6.7—7.2； 全血保养液为CPDA-1时 ，pH 为 6.8—7.4
2. 质量控制实验方法
测定溶液pH 值的方法很多，如电势法，酸碱指示剂和pH 试纸测定。用电势法可以准确测定容液的pH 值。 【注意事项】
（1）检测pH 值时, 一旦血液从血袋中取出，应立即进行检测，以防止全血标本在空气中暴露时间过长而CO2逸出, 导致测定的pH 偏高。 （2）标化电极系统所用的缓冲液pH 值应与测定的pH 值尽量接近，如果标准缓冲液pH 值与测定的pH 值相差2个pH 单位以上，将引起误差。标准缓冲液用后即弃去，不得再返回瓶中，以防污染。 （3）玻璃电极初次使用时，应将玻璃膜侵在蒸馏水中数小时或过夜，以稳定其不对称电位。
（4）温度对血液pH 的影响很大。因此，测定时pH 电极要保持恒温，温度变动只允许在±0.1℃。非室温保存的标本一般在测定前应在室温放置平衡，以免与pH 电极温差过大影响测定的稳定性；如果标定与测定时的溶液温度不同，则应用仪器上的温度补偿旋钮补偿之。 四 全血钾离子浓度、钠离子浓度 1. 质量标准的确定
根据文献，美国、欧洲的血液标准对此两个指标无明确规定。日本研究数据为：
保养液为ACD ：[K+]21天=21mmol/L，[K+]28天=25mmol/L
[Na+]1天=172mmol/L， [Na+]21天=146mmol/L，[Na+]28天=143mmol/L
保养液为CPD:[K+]21天=27mmol/L，[K+]28天=29mmol/L [Na+]1天=175mmol/L， [Na+]21天=152mmol/L，[Na+]28天=147mmol/L
美国关于全血钾离子浓度、钠离子浓度的数据为： 保养液为CPD:[K+]21天=21mmol/L
保养液为CPDA-1:[K+]35天=36mmol/L(红细胞) ；[K+]35天=27.3mmol/L(全血)[Na+]35天=104mmol/L(红细胞) 澳大利亚某一个血液中心的内部操作规程中规定为： [K+]
93年版的卫生部《血站基本标准》中的规定为： [K+]
从反馈的征询意见看，各血站、专家的意见不统一。为此，标准制订参考上述资料, 制订不同保养液的全血的[K+]、[Na+]的标准为： 全血保养液为ACD －B 时，钾离子浓度≤21mmol/L 全血保养液为CPD 时 ，钾离子浓度≤27mmol/L； 全血保养液为CPDA-1时 ，钾离子浓度≤27.3mmol/L 全血保养液为ACD-B 时，钠离子浓度≥146mmol/L； 全血保养液为CPD 时，钠离子浓度≥152mmol/L； 全血保养液为CPDA-1时，钠离子浓度≥104mmol/L
2. 质量控制实验方法
血浆[Na+]、[K+]测定技术主要包括三类：火焰光度法、离子选择电极法和比色法。
火焰光度法是当前临床化学实验室广泛采用的方法，仪器的自动化程度和精密度不断提高。目前国产火焰光度计多属非内标型；国外产品多为内标型，用锂或铯作内标。限定型号、试剂来源及操作程序的火焰光度法被选为钠、钾测定的参比方法。火焰光度法的缺点在于压缩机声音噪杂；所用燃料为易燃物，有一定的潜在危险；高脂血症、高蛋白血症的血清会出现假性低钠〔钾〕现象。
离子选择电极〔1SE 〕法又称膜电极法，是一种电位分析法。离子计是测量电极电动势的高输入阻抗毫伏计。电极是关键部件。膜电极只对离子活度起效应。离子活度等于离子浓度与活度系数的乘积，它受物理和化学的多种作用力的影响。膜电极法分直接式与间接式两种。直接式血清不经稀释直接测定，间接式血清经稀释后测定。间接式给出与火焰法类同的结果；直接式可避免假性低钠现象。但离子选择电极法是目前使用最为广泛的方法。
最早使用的钠比色法、钾钠比浊法，只需基本的实验仪器，适用于基层医疗单位, 现已基本淘汰。酶法和冠醚比色法是近几年发展起来新的比色法。酶法将被测离子作为酶联反应系统的激活剂或成分，根据反应速度与被测离子浓度成正比的原理，测定被测离子浓度。该方法特异性、精确度和准确度均好，可以在自动生化分析仪上进行，但对技术要求较高、成本高、试剂有效期短，不适用于血站的质量控制工
作的推广使用。冠醚比色法是利用大环类化合物〔如冠醚〕可以与钾钠离子特异性地结合成水溶性复合物被用于钾钠比色测定， 但方法尚不完善、简单、经济。 五 全血血浆血红蛋白 1. 标准的确定
全血在储存时，除了由于代谢造成极少的红细胞死亡溶血释放游离血红蛋白外，不当的储存条件如保养液异常、温度、剧烈振荡以及出现凝块也会使红细胞溶血，最终导致全血血浆血红蛋白异常升高。 日本红十字会的血库标准中指出：保养液为ACD 时，血浆血红蛋白21天=0.29g/L，血浆血红蛋白28天=0.47g/L；保养液为CPD 时，血浆血红蛋白21天=0.26g/L，血浆血红蛋白28天=0.35g/L。 澳大利亚血液中心的内部操作规程为：保养液为ACD-B 配方时，血浆血红蛋白
93年版的卫生部《血站基本标准》中规定的全血中的血浆血红蛋白
根据98年2月起草小组进行的标准采用情况调查结果，对血浆血红蛋白反馈的信息是陕西血液中心认为血浆血红蛋白
依据不应取消。因此，对标准在执行中遇到的疑问的解决，应在明确溯源的前提下，以参比方法的检测结果为论证依据，确定标准的要求。 美国、欧洲的血液标准除采用过程控制指标即储存条件来控制全血质量，虽未对全血血浆血红蛋白作明确规定，但采用了溶血率这一指标。由于溶血率指标在用于质控检测时需要对比数据，可操作性差，因此制订该标准时采用了直接检测的方法。根据欧盟的标准即储存期末每个保养液为CPDA-1的单位血的溶血率小于0.8%，，换算出血浆血红蛋白＝0.72 g/L。同时参考日本、澳大利亚的标准制订了血浆血红蛋白的标准：
全血保养液为ACD-B 时，血浆血红蛋白≤0.29g/L； 全血保养液为CPD 时，血浆血红蛋白≤0.26g/L； 全血保养液为CPDA-1时，血浆血红蛋白≤0.72g/L 2. 质量控制实验方法 方法一 [原理]
血红蛋白具有过氧化物酶的作用，使过氧化物分解产生新生氧，氧化联苯胺成蓝色或绿色衍生物，吸收峰在630nm ；加强酸后（pH=1.5），呈黄色，吸收峰在510nm 。 [实验步骤]
（1）取两支玻璃试管分别标记标准管和空白管。 （2）每个样品做两支测定管。 （3）按照下表加入试剂。
[计算公式]
方法二
[原理]
苯息丁在酸化过氧化氢的溶液内和血红蛋白作用，生成一系列绿-蓝-红紫色反应，用光电比色计与已知浓度的血红蛋白进行比色，并计算其浓度。
[实验步骤]
（1）取两支玻璃试管分别标记标准管和空白管。
（2）每个样品做两支测定管。
（3）按照下表加入试剂。
[计算公式]
测定管读数
血浆游离血红蛋白=---------------------
标准管读数′20mg%