可溶性蛋白含量测定法(考马斯亮蓝染色法)

可溶性蛋白含量测定(考马斯亮蓝染色法)

1. 试剂配制

(1) 考马斯亮蓝溶液配制:称取100 mg考马斯亮蓝,溶于50ml 90%乙醇中,加入100ml 85%(W/V)磷酸,再用蒸馏水定容到1L。贮于棕色瓶中,常温下可保存一个月。

90% 乙醇配制:95%乙醇和75%乙醇按3:1体积比混合配制,即95%乙醇37.5ml,75%乙醇12.5ml或取45ml无水乙醇直接定容至50ml。

(2) 100 g/ml 牛血清蛋白(BSA)标准溶液:称取10mg BSA,用质量分数为0.9%的氯化钠溶解,并定容至100 ml即为100 g/ml。 2. 标准曲线绘制

取6支具塞试管,按下表加入试剂,摇匀,向各管中加入5ml考马斯亮蓝试剂,5min左右,以0号试管为空白对照,在595nm下比色测定吸光度,以蛋白质含量为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3. 样品测定

(1) 样品提取:取鲜样2g,加2ml蒸馏水研磨成匀浆后,移到离心管中,然后用6ml蒸馏水分次洗涤研钵,完全转移至离心管后,放置0.5-1小时以充分提取,然后4000r/min离心20min,弃去沉淀,上清液转移至容量瓶,以蒸馏水定容至10ml,待测。 (2) 吸取样品提取液1.0ml(视蛋白质含量适当稀释),放入带塞试管中(每个样品重复两次),加入5ml考马斯亮蓝试剂,摇匀,放置2min待反应完成,在595nm下比色,测定吸光度,并通过标准曲线查蛋白质含量。 4. 蛋白质含量计算

可溶性蛋白含量(mg/g)=(C·VT)/(1000VS·WF) C—查标准曲线值,g; VT—提取液总体积,ml; WF—样品鲜重,g; VS—测定时加样量,ml

可溶性蛋白含量测定(考马斯亮蓝染色法)

1. 试剂配制

(1) 考马斯亮蓝溶液配制:称取100 mg考马斯亮蓝,溶于50ml 90%乙醇中,加入100ml 85%(W/V)磷酸,再用蒸馏水定容到1L。贮于棕色瓶中,常温下可保存一个月。

90% 乙醇配制:95%乙醇和75%乙醇按3:1体积比混合配制,即95%乙醇37.5ml,75%乙醇12.5ml或取45ml无水乙醇直接定容至50ml。

(2) 100 g/ml 牛血清蛋白(BSA)标准溶液:称取10mg BSA,用质量分数为0.9%的氯化钠溶解,并定容至100 ml即为100 g/ml。 2. 标准曲线绘制

取6支具塞试管,按下表加入试剂,摇匀,向各管中加入5ml考马斯亮蓝试剂,5min左右,以0号试管为空白对照,在595nm下比色测定吸光度,以蛋白质含量为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3. 样品测定

(1) 样品提取:取鲜样2g,加2ml蒸馏水研磨成匀浆后,移到离心管中,然后用6ml蒸馏水分次洗涤研钵,完全转移至离心管后,放置0.5-1小时以充分提取,然后4000r/min离心20min,弃去沉淀,上清液转移至容量瓶,以蒸馏水定容至10ml,待测。 (2) 吸取样品提取液1.0ml(视蛋白质含量适当稀释),放入带塞试管中(每个样品重复两次),加入5ml考马斯亮蓝试剂,摇匀,放置2min待反应完成,在595nm下比色,测定吸光度,并通过标准曲线查蛋白质含量。 4. 蛋白质含量计算

可溶性蛋白含量(mg/g)=(C·VT)/(1000VS·WF) C—查标准曲线值,g; VT—提取液总体积,ml; WF—样品鲜重,g; VS—测定时加样量,ml


相关文章

  • 实验二 绿豆芽的蛋白质含量测定
  • 龙志敏 [1**********]1 09制药一班 实验二 绿豆芽的蛋白质含量测定 (考马斯亮蓝G-250比色法) 一.实验目的 1.了解考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理,掌握其测定方法. 2.熟练掌握分光光度计的使用技术. 二.实验原理 ...查看


  • 考马斯亮蓝法测蛋白质含量
  • 作业指导书 标题:考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的检验方法 修改记录 标题:考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的检验方法(第0次修改) 第 1 页 共3页 1.目的 1.学习一种蛋白质染色测定的方法 2.掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的基本原理和方法 ...查看


  • 实验28 植物体内可溶性蛋白质含量的测定
  • 实验28 植物体内可溶性蛋白质含量的测定 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类,测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标.在研究每一种酶的作用时,常以比活(酶活力单位/mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度.因此,测定植物体内可溶 ...查看


  • 可溶性蛋白质含量测定
  • 考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质含量 一.原理 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种.该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前 ...查看


  • 实验三蛋白质含量的测定
  • 实验三 蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法) 实验时间:2012年9月17日 星期一 一 实验目的 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类,测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标.在研究每一种酶的作用时,常以比活(酶活力单位/mg蛋 ...查看


  • 考马斯亮蓝染色液
  • 考马斯亮蓝染色液(常规法)的详细信息 考马斯亮蓝染色液(常规法) 规格:250ml 500ml 公司提取试剂盒不同样本提取DNA一次时间:15-30min, 并且可以适用于配备仪器大批量提取使用.同系列产品: 大鼠可溶性CD30配体(sCD ...查看


  • 生物化学实验报告
  • 2012年生物化学实验B 姓 名:学 号:实验时间:实验分组:组内成员: 任课教师:实验报告 XXXX 2012年11月17日 摘要 本实验通过从小牛肠中通过刮去,离心,析出等方式提取小牛肠碱性磷酸酶,再通过SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质 ...查看


  • 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量定
  • 实验二 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量 一.目的 学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法. 二.原理 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法 ...查看


  • 生物化学实验指导-首都师范大学
  • 生物秀-专心做生物! www.bbioo.com 生物秀论坛-专注于生命科学! www.bbioo.com/bbs/ 首都师范大学 生命科学学院 生物化学及分子生物学系 2004 年 8 月 目 录 实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 ...查看


热门内容