研究报告
SD S 2PA GE 电泳对小分子多肽的分析
杨联萍 孔祥平 易学瑞
(广州空军医院 510602)
摘要 对一些小分子多肽进行电泳分析时, 在固定、染色、脱色过程中极易扩散丢失; 即使用常规尿素2SD S 2PA GE 系统测定寡肽分子量, 银染色后小于8kD a 的标准品也无着色带显示。我们实践摸索出提高分离胶的浓度和交联度, 制成20%T , 6%C 和15%T , 3%C 的梯度胶, 胶中不加尿素, 且不需银染均可见小分子多肽着色带的方法。关键词 小分子多肽 凝胶浓度 交联度 SD S 电泳技术首先在1976年由Shap iro 建立, 1969年由W eber 和O sbom 进一步完善[1]。它是生化工作者常用的分析技术之一。但对一些小分子多肽的电泳分析时, 电泳、染色、带显示, S 2], , 即使采用银染色法小于8kD a 的标准品也无着色带显示。作者经实践, 提高凝胶浓度和交联度将分离胶制成20%T , 6%C , 和15%T , 3%C 的梯度胶, 2kD 小分子肽均可见着色带, 同时以单组分标准分子量作参照, 其结果增加了待检物结果的可信性。其方法详细报导如下, 以利同行参考应用。
实验材料及方法
1 材料
111 Phar m acia L KB M u lti D rive XL 半自动
49. 5%T , 6%C 49. 5%T , 3%C
表1 S D S -PAGE T (M pH 8. 98. 258. 25
SD S (%
)
丙烯酰胺2双丙烯酰胺混合液
49. 5%T , 3%C 49. 5%T , 6%C
0. 3. 0
0. 1
—
0. 10. 3
—双丙烯酰胺W V
1. 53. 0
丙烯酰胺
W V 4846. 5
212 制胶采用B I ORAD 垂直电泳附件模具,
制成0175mm 厚凝胶, 分离胶分别制成20%T , 6%C 和15%T , 3%C 的梯度胶。制配方见表2。
表2 制各凝胶配方
20%T, 6%C(m l )
4. 0
15%T, 3%C(m l )
8%T, 3%C(m l )
—
3. 033. 3
—
1. 53. 33
—
3. 331. 071. 560. 0200. 002
电泳仪。
112 分子量标准Phar m acia 公司品, 胰岛素B 链sigm en 公司出品。
113 脑灵素, 促肝细胞生长素(pH GF ) , 心肌肽素, 由本单位研制产品。2 方法
211 试剂, 见表1。
凝胶缓冲液 甘油
H 2O 10%过硫酸胺
—
3. 630. 0200. 002
—
5. 060. 060. 003
四甲基乙二胺
213 电泳:恒电压, 先60V 1h 后升电压到90V 1h 。
49
214 染色:电泳完毕, 胶置于0125%马斯亮蓝R 250的甲醇∶水∶冰乙酸(5∶5∶1) 染色液过
结果与讨论
采用尿素—SD S 2PA GE 测定寡肽分子量方法对低分子量标准品分析, 仅有3条着色带, 小于8kD a 的标准品无着色带显示。我们提高凝胶浓度和凝胶交联度, 将分离胶制成20%T , 3%C 和15%T , 3%
C 两个梯度, 标准品可有5条着色带。图1:1125kD 带着色浅, 虽然成相不清但在湿胶状态时肉眼仍可见着色带, 不影响标准曲线的制作。图2标准曲线相关系数r =-0195, 从曲线查及各样品的分子量:心肌肽素11859D a ; 7220D a ; H GF 7200D a 促脑康7210D a ; 胰岛素B 链31, 56kD (其实际分子量为3149kD ) 这是因为小肽的固有电荷及其构象
夜。
215 脱色:胶置含1215%异丙醇的10%醋酸
中扩散脱色直至背景清晰
。
图 1
1、71分子量标准; 21心肌肽素; 31pH GF ; 41促脑康;
61胰
岛素B 链
对泳动率有更大的影响, 似值。图2 分子量标准曲线 r =0. 95
对小分子多肽分析时, 即低分子量标准混合品6kD 以下的组份常常着色带浅。我们以单50
组份低分子量胰岛素B 链作参照, 其结果与实际分子量标准基本相符, 从而证明该方法的准确性和待检物结果的可信性。
参考文献
[1]郭尧君, SD S 电泳技术的实验考虑及最新进展, 生物化
学与生物物理进展1991, 18(1)
[2]BD , 哈密斯D 利克伍德蛋白质的凝胶电泳实践方法 [3]A nalytical , B i ochem istry 166, 368-H er m ann , Scaagger and Gebhardvontagow
379(1987)
Ana lysi ng Peptides of L ow W e ights M olecular with
S D S -polyacrylam ide Gel Electrophoresis Yang L ianp ing Kong X ianp ing Y i Xueru i
(Fo rle Ho sp ital Guangzhou 510602)
Abstract SD S 2PA GE is p articu larly m o lecu lar u sefu l fo r the analysis of m u lti 2com ponen t p ep tides , bu t the low w eigh ts p ep tides is easy to diffu se du ring fix ing , stain , deslain ing , B y u sing no r m al u rea 2SD S 2PA GE system w ith silver slain w stain ing band of m o lecu lar w eigh ts below 8kD , H ere w e describe one h stain ing band sen sitivity by rising the concen trati on the separati on gels .
(上接第28页)
[13]R adfo rd S , D , N et al . J B i ochem ,
1989, 264:767775.
[18]Dw ivedi P P , Gibbs M D , Saw l D J et al . A pp l ～93M icrobi o l B i o techno l , 1996, 45:86
[19]Beguin P , M illet J , A ubert J P . FE M S M icrobi o l ～528. L ett , 1992, 100:523
[20]R ao M , W ebster D A . B i o techno l L ett , 1995,
17:589～592.
[14]Feij V N , D rummond M H . FE M S M icrobi o l ～170. L ett , 1992, 94:165
[15]L i X L , Chen H Z , Jungdah l L G et al . A pp l ～635. Environ M icrobi o l , 1997, 63:628
[16]L ee Y , L ow e S E , H enrissat B et al . J Bacteri o l ,
1993, 175:5890～5898.
[21]M o rean A , Gutierrz S , V elasco J et al . B i ochem ～295. J , 1994, 302:291
[22]Rao M , Khadikar S, Bam divadekar K R et al . ～775. B i ochem J , 1996, 316:771
[17]Fontes L M G , H azlewood G P , M o rag E et al . ～158. B i ochem J , 1995, 307:151
Functiona l D o ma i n s of Xylana ses
L iu R u itian Q u Y inbo
(State Key L abo rato ry of M icrobi o l T echno logy , Shandon U niversity , J inan 250100)
Abstract M o st xylanases are com po sed of m any dom ain s , w h ich are catalytic dom ain , cellu lo se 2b inding dom ain , xylan 2b inding dom ain , linker , rep eated sequence , ther m o stab ilitising dom ain , cellu lo som e 2dock ing dom ain and o ther noncatalytic dom ain . Every dom ain has its ow n functi on and the dom ain s from differen t xylanases show som e hom o logy o r none .
Key words : Xylanase , structu re , dom ain
51
研究报告
SD S 2PA GE 电泳对小分子多肽的分析
杨联萍 孔祥平 易学瑞
(广州空军医院 510602)
摘要 对一些小分子多肽进行电泳分析时, 在固定、染色、脱色过程中极易扩散丢失; 即使用常规尿素2SD S 2PA GE 系统测定寡肽分子量, 银染色后小于8kD a 的标准品也无着色带显示。我们实践摸索出提高分离胶的浓度和交联度, 制成20%T , 6%C 和15%T , 3%C 的梯度胶, 胶中不加尿素, 且不需银染均可见小分子多肽着色带的方法。关键词 小分子多肽 凝胶浓度 交联度 SD S 电泳技术首先在1976年由Shap iro 建立, 1969年由W eber 和O sbom 进一步完善[1]。它是生化工作者常用的分析技术之一。但对一些小分子多肽的电泳分析时, 电泳、染色、带显示, S 2], , 即使采用银染色法小于8kD a 的标准品也无着色带显示。作者经实践, 提高凝胶浓度和交联度将分离胶制成20%T , 6%C , 和15%T , 3%C 的梯度胶, 2kD 小分子肽均可见着色带, 同时以单组分标准分子量作参照, 其结果增加了待检物结果的可信性。其方法详细报导如下, 以利同行参考应用。
实验材料及方法
1 材料
111 Phar m acia L KB M u lti D rive XL 半自动
49. 5%T , 6%C 49. 5%T , 3%C
表1 S D S -PAGE T (M pH 8. 98. 258. 25
SD S (%
)
丙烯酰胺2双丙烯酰胺混合液
49. 5%T , 3%C 49. 5%T , 6%C
0. 3. 0
0. 1
—
0. 10. 3
—双丙烯酰胺W V
1. 53. 0
丙烯酰胺
W V 4846. 5
212 制胶采用B I ORAD 垂直电泳附件模具,
制成0175mm 厚凝胶, 分离胶分别制成20%T , 6%C 和15%T , 3%C 的梯度胶。制配方见表2。
表2 制各凝胶配方
20%T, 6%C(m l )
4. 0
15%T, 3%C(m l )
8%T, 3%C(m l )
—
3. 033. 3
—
1. 53. 33
—
3. 331. 071. 560. 0200. 002
电泳仪。
112 分子量标准Phar m acia 公司品, 胰岛素B 链sigm en 公司出品。
113 脑灵素, 促肝细胞生长素(pH GF ) , 心肌肽素, 由本单位研制产品。2 方法
211 试剂, 见表1。
凝胶缓冲液 甘油
H 2O 10%过硫酸胺
—
3. 630. 0200. 002
—
5. 060. 060. 003
四甲基乙二胺
213 电泳:恒电压, 先60V 1h 后升电压到90V 1h 。
49
214 染色:电泳完毕, 胶置于0125%马斯亮蓝R 250的甲醇∶水∶冰乙酸(5∶5∶1) 染色液过
结果与讨论
采用尿素—SD S 2PA GE 测定寡肽分子量方法对低分子量标准品分析, 仅有3条着色带, 小于8kD a 的标准品无着色带显示。我们提高凝胶浓度和凝胶交联度, 将分离胶制成20%T , 3%C 和15%T , 3%
C 两个梯度, 标准品可有5条着色带。图1:1125kD 带着色浅, 虽然成相不清但在湿胶状态时肉眼仍可见着色带, 不影响标准曲线的制作。图2标准曲线相关系数r =-0195, 从曲线查及各样品的分子量:心肌肽素11859D a ; 7220D a ; H GF 7200D a 促脑康7210D a ; 胰岛素B 链31, 56kD (其实际分子量为3149kD ) 这是因为小肽的固有电荷及其构象
夜。
215 脱色:胶置含1215%异丙醇的10%醋酸
中扩散脱色直至背景清晰
。
图 1
1、71分子量标准; 21心肌肽素; 31pH GF ; 41促脑康;
61胰
岛素B 链
对泳动率有更大的影响, 似值。图2 分子量标准曲线 r =0. 95
对小分子多肽分析时, 即低分子量标准混合品6kD 以下的组份常常着色带浅。我们以单50
组份低分子量胰岛素B 链作参照, 其结果与实际分子量标准基本相符, 从而证明该方法的准确性和待检物结果的可信性。
参考文献
[1]郭尧君, SD S 电泳技术的实验考虑及最新进展, 生物化
学与生物物理进展1991, 18(1)
[2]BD , 哈密斯D 利克伍德蛋白质的凝胶电泳实践方法 [3]A nalytical , B i ochem istry 166, 368-H er m ann , Scaagger and Gebhardvontagow
379(1987)
Ana lysi ng Peptides of L ow W e ights M olecular with
S D S -polyacrylam ide Gel Electrophoresis Yang L ianp ing Kong X ianp ing Y i Xueru i
(Fo rle Ho sp ital Guangzhou 510602)
Abstract SD S 2PA GE is p articu larly m o lecu lar u sefu l fo r the analysis of m u lti 2com ponen t p ep tides , bu t the low w eigh ts p ep tides is easy to diffu se du ring fix ing , stain , deslain ing , B y u sing no r m al u rea 2SD S 2PA GE system w ith silver slain w stain ing band of m o lecu lar w eigh ts below 8kD , H ere w e describe one h stain ing band sen sitivity by rising the concen trati on the separati on gels .
(上接第28页)
[13]R adfo rd S , D , N et al . J B i ochem ,
1989, 264:767775.
[18]Dw ivedi P P , Gibbs M D , Saw l D J et al . A pp l ～93M icrobi o l B i o techno l , 1996, 45:86
[19]Beguin P , M illet J , A ubert J P . FE M S M icrobi o l ～528. L ett , 1992, 100:523
[20]R ao M , W ebster D A . B i o techno l L ett , 1995,
17:589～592.
[14]Feij V N , D rummond M H . FE M S M icrobi o l ～170. L ett , 1992, 94:165
[15]L i X L , Chen H Z , Jungdah l L G et al . A pp l ～635. Environ M icrobi o l , 1997, 63:628
[16]L ee Y , L ow e S E , H enrissat B et al . J Bacteri o l ,
1993, 175:5890～5898.
[21]M o rean A , Gutierrz S , V elasco J et al . B i ochem ～295. J , 1994, 302:291
[22]Rao M , Khadikar S, Bam divadekar K R et al . ～775. B i ochem J , 1996, 316:771
[17]Fontes L M G , H azlewood G P , M o rag E et al . ～158. B i ochem J , 1995, 307:151
Functiona l D o ma i n s of Xylana ses
L iu R u itian Q u Y inbo
(State Key L abo rato ry of M icrobi o l T echno logy , Shandon U niversity , J inan 250100)
Abstract M o st xylanases are com po sed of m any dom ain s , w h ich are catalytic dom ain , cellu lo se 2b inding dom ain , xylan 2b inding dom ain , linker , rep eated sequence , ther m o stab ilitising dom ain , cellu lo som e 2dock ing dom ain and o ther noncatalytic dom ain . Every dom ain has its ow n functi on and the dom ain s from differen t xylanases show som e hom o logy o r none .
Key words : Xylanase , structu re , dom ain
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