细胞爬片
细胞爬片
【玻片的准备】
1. 爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片； 2．将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍，放在饭盒或者培养皿中烘干后进行高压消毒再烘干。
4.多聚赖氨酸处理玻片，以使细胞与玻片结合更牢。
【细胞爬片】
1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。
2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。
3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可。
4. 待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。
5. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，我一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。
【细胞爬片的固定】
1.细胞爬片取出后，一般用PBS洗x2遍，然后再做固定。
2.室温固定15分钟后，弃去固定液，PBS洗3x3min，洗尽液体。
3.将表面液体吹干，入-20℃保存
以下为常用的固定液
（1）. 多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。 主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，
室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存
（2）. 甲醛(福尔马林)应用最广缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
（3）. 冷丙酮可用于一般的免疫组化染色。
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（4）. 95％乙醇，可用于免疫组化。优点：穿透性强、抗原性保存较好。缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度
细胞爬片
细胞爬片
【玻片的准备】
1. 爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片； 2．将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍，放在饭盒或者培养皿中烘干后进行高压消毒再烘干。
4.多聚赖氨酸处理玻片，以使细胞与玻片结合更牢。
【细胞爬片】
1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。
2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。
3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可。
4. 待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。
5. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，我一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。
【细胞爬片的固定】
1.细胞爬片取出后，一般用PBS洗x2遍，然后再做固定。
2.室温固定15分钟后，弃去固定液，PBS洗3x3min，洗尽液体。
3.将表面液体吹干，入-20℃保存
以下为常用的固定液
（1）. 多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。 主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，
室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存
（2）. 甲醛(福尔马林)应用最广缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
（3）. 冷丙酮可用于一般的免疫组化染色。
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（4）. 95％乙醇，可用于免疫组化。优点：穿透性强、抗原性保存较好。缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度