２００６。ＶｏＬ２７．ＮＯ．３
食品孺究与群发
检测分析
＿：＝一ｎｏ
用牛津杯法测定益生菌的抑菌活力（１华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州５１０６４０；型簖瓢墅ｄ蛸蝴蛋白质工程研发中心，广东广州５１１３６４０）
摘要：益生茵的一个重要性质是对病原茵的抑菌活力，本文用琼脂扩散法的牛津杯法评价益生菌的抑茵活力。为得到准确和重复性好的结果，要从几个方面注意。在下述条件下，可以得到清晰可见的抑茵圈：牛津杯中的加液量为０．２５ｍＬ，指示菌茵悬液的细菌浓度为ｌ拶ＣＦＵ／ｍＬ，在３－４℃冰箱预先扩散２４ｈ。关键词：益生菌；牛津拓法；抑菌圈直径
刘冬梅１，李理２，杨晓泉２，梁世中１
叩砸ＲＩ吸Ｍ姐卫０Ｎ０Ｆ７Ⅱ琅ＡＮｒ：口ＭＩＣＲ０８ＩＡＬＡＣ］［Ｉ、仰Ｙ０ＦＰＲＯＢＩ吲口『ＣＢＹ０Ｘ阳ＲＤＰＩＡＴＥ
ＵＵＤｏｎｇ—ｍｅｉ１，ＬＩＬｉ２．ＹＡＮＧＸｉａｏ—ｑｕａｎ２，ＵＡＮＧＳｈｉ—ｚｈｏｎ９１
ＡＳＳＡＹ趴驾ⅡＭ
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ＣｅｎｔｅｒｏｆＦｏｏｄＰｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｏｕｔｈ
Ｃｈｉｎａ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｒｏｐｅｒｔｙｏｆｔｈｅｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｔｒａｉｎｓｉｓｔｈｅｉｒａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｔｈｅａｇａｒｗｅｌｌｄｉｆｆｕｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｆｏｒｄｅｃｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｂｉｏｔ—ｉｅ．Ｔｏｏｂｔａｉｎ
ａｎ
ｅｘａｃｔ
ａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅｒｅｓｕｌｔｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ．ａｃｏｕｐｌｅｏｆｅｆｆｅｃｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｓｗｅｒｅ
ｚｏｎｅｓ
ｅ－
ｖａｌｕａｔｅｄ．Ａｃｌｅａｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ａｓ
ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｏｎ—
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｔｒａｉｎｉＳ１０５ＣＦＵ／ｍＬ．ａｎｄｔｈｅｌｏａｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙｉｎＯｘｆｏｒｄｐｌａｔｅｉＳ０．２５ｍＬ，ｈｏｌｄｉｎｇｔｈｅｐｌａｔｅｓａｔ３～４ｏＣｆｏｒ２４ｈｉｎｏｒｄｅｒ
ｔｏ
ｐｒｅｄｉｆｆｕｓｅａｎｄｔｏｄｉｃｔａｔｅ
ｚｏｎｅ
ｓｉｚｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ；Ｏｘｆｏｒｄｐｌａｔｅ；ｔｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｚｏｎｅ
益生菌在人体肠道达到一定数量时，可以抑制
肠道中及自然界中某些有害微生物的生长，益生菌
干酪乳杆菌鼠李糖亚种，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｓｐ．Ｒｈａｍｎｏｓｕｓ
Ｃａｓｅｉ
６０１３，由中国工业微生物菌种保
的一个重要性质是对病原菌的抑菌活力［１ｊ，测定益生菌的抑菌活力可用牛津杯法（也叫管碟法），此方
法是国内外测定抗生素效价通用方法，也是各国药典规定的方法［２剖，在进行抑菌活力测定时，如果不
藏中心提供。
１．１．５益生菌菌悬液
从益生菌６０１３斜面培养基上取一环至益生菌最适液体培养基ＭＲＳ［４］中，在最适温度３７℃下，静
止培养２４ｈ，于９０－９５ｏＣ中灭菌１５ｍｉｎ，然后在
８０００
能正确使用该法，很易使抑菌圈不清晰或无抑菌圈出现，作者从多次重复试验中得出一些经验，以供读者参考。
１试验材料与方法１．１实验材料１．１．１指示菌
金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ
ｒｐｍ条件下离心２０ｍｉｎ，取上清液做抑菌试验
１．１．６器材
牛津杯内径（６．０＋０．１）ｍｍ，外径（７．８±０．１）ｍｍ，高（１０．０±Ｏ．１）ｍｍ；检测专用培养ｚｔ（内径９０ｍｍ，高１６－
１７
ｍｍ）；索尼数码相机，型号Ｓｏｎｙ
ＤＳＣ—Ｔ１；ＰＹＸ一
１９０Ｓ—Ａ生化培养箱（科力电器）；ＣＲ２２Ｇ冷冻高速离心机（Ｈｉｔａｃｈｉ）１，２实验方法
２５９２３，由广东省微生物研究所提供。
１．１．２指示菌培养基
肉汤培养基，在高压灭菌釜中，用０．１ＭＰａ压力灭菌２０ｒａｉｎ；固体培养基中加入２．０％的琼脂。１．１．３指示菌菌悬液
１．２．１检测平板的制备
将肉汤培养基加入琼脂后，溶解均匀，在高压灭菌釜中，用０．１ＭＰａ压力灭菌２０ｍｉｎ，并冷却至
６０℃左右，用吸管准确量取２０ｍＬ该培养基，加入
金黄色葡萄球菌原菌种接种于肉汤培养基中，于３７℃摇瓶培养２４ｈ，用无菌生理盐水稀释成各种
浓度的菌悬液。１．１．４益生菌
作者简介：刘冬梅（１９７１一），女，工程师，华南理工大学生物科学与工程学院在读博士研究生，研究方向：微生物工程。
内径一致并预先水平放置的培养皿内，凝固后并使
培养皿中水份干燥透，取０．４ｍＬ的指示菌菌悬液在
平板上均匀涂布，涂布后以平板无可见水滴为准，
此时的平板立刻进行抑菌试验。１．２．２指示菌菌悬液的涂布
万方数据
检测分析
食品研究与并发
２００６．ｖｏ｜．２７．ＮＯ．３
１１１．＝＝．
吸取一定浓度的指示菌菌悬液０．４ｍＬ至１．２．１液、１０≈倍稀释液效果好，１０。倍稀释液的菌悬液细
的平板上，用无菌玻耙涂布均匀，并用镊子将无菌胞浓度为１０５
ＣＦＵ／ｍＬ。
的牛津杯轻轻放入培养皿中，在水平放置的平皿中
均匀地放置３只牛津杯。１．２．３加入益生菌菌悬液
吸取一定浓度的益生菌菌悬液０．２５ｍＬ至１．２．２
的牛津杯中，注意不要将菌悬液溢出牛津杯外。
１．２．４菌液扩散及指示菌的培养
图２指示菌菌悬液浓度对抑菌圈直径的影响。左、中、将加入益生菌菌悬液的平皿放置３～４℃冰箱右分别为１０４、１０’３、１０。４稀释度
扩散２４ｈ和不扩散处理，然后指示菌在最适生长温２．４结论与讨论：为了得到清晰抑菌圈，牛津杯中
度３７℃中培养２４ｈ，拍照。的加液量为０．２５ｍＬ、在３～４℃中扩散２４ｈ，指示
２结果与讨论
菌菌悬液用１０≈倍稀释，使菌悬液细胞浓度为１０５２．１牛津杯加液量的影响
ＣＦＵ／ｍＬ。该种方法是利用益生菌培养上清液在琼对于大多数抗生素测定，都需要把牛津杯加脂培养基内的扩散作用，产生对指示菌的抑菌圈。
满，虽然牛津杯加液量越大，所形成的抑菌圈直径
当牛津杯内加入含有抑菌物质的上清液后，抑菌就越大，但作者在多次试验中发现，若加满牛津杯，物质就随溶剂向培养基内呈球形扩散，将培养基
很容易使液体从中溢出，影响试验，同时扩散２４ｈ平板置培养箱中培养，指示菌开始繁殖，抑菌物后牛津杯内仍有少量的残留溶液，因此作者认为质在琼脂培养基中的浓度，随离开牛津杯的距离
１０．２ｍＬ的加液量比较合适，而且每次重复效果好。
增大而降低，当扩散到一定时间后，这是琼脂培
２．２平板预先扩散处理的影响
养基中抑菌物质的浓度恰好高于该抑菌物质对指从图１可以看出在冰箱中扩散２４ｈ比不扩散
示菌的最低抑菌浓度，指示菌的繁殖被抑制而呈
的抑菌效果明显增加，使得三个抑菌圈之间重叠，
现出透明的抑菌圈，在抑菌圈的边缘处，琼脂培
可能有两个原因：第一，冰箱放置一夜，使菌液充分养基中所舍抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该扩散到培养基中；第二，由于冰箱温度为３～４℃，在种指示菌的最低抑菌浓度。进行该试验时，要在
一定程度上抑制了指示菌的生长繁殖，而此对抑菌
相同的条件下进行，这样才能较准确对比抑菌物作用有正向协同效果。
质的抑菌效果。参考文献：
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℃冰箱预扩散２４ｈ。右图无扩散
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ＰＫ，Ｐｒａｓａｄ
Ｊ，ＳｍａｒｔＪ
ｅｔ
ａ１．Ｉｎｖｉｔｒｏａｄｈｅｒｅｎｃｅｐｒｏｐｅｒ—
牛津杯法进行抑菌试验时，控制检测平板中菌
ｔｉｅｓｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＤＲ２０
ａｎｄ
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
悬液的浓度非常重要，过浓则抑菌作用不明显，过
ｌａｃｔｉｓＤＲｌ０ｓｔｒａｉｎｓａｎｄｔｈｅｉｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔ
ａｎ
低则菌体生长稀疏，抑菌圈边缘不清晰，难以准确ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ［Ｊ１．ＩｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆ
测量。图２可以看出１０４倍稀释液比１０４倍稀释
ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，６７：２０７－２１６．
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（上接第１４７页）
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万
方数据
用牛津杯法测定益生菌的抑菌活力
作者：作者单位：
刘冬梅， 李理， 杨晓泉， 梁世中， LIU Dong-mei， LI Li， YANG Xiao-quan， LIANGShi-zhong
刘冬梅,梁世中,LIU Dong-mei,LIANG Shi-zhong(华南理工大学生物科学与工程学院,广东,广州,510640)， 李理,杨晓泉,LI Li,YANG Xiao-quan(华南理工大学植物蛋白质工程研发中心,广东,广州,510640)食品研究与开发
FOOD RESEARCH AND DEVELOPMENT2006,27(3)57次
刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_spyjykf200603044.aspx
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摘要：益生茵的一个重要性质是对病原茵的抑菌活力，本文用琼脂扩散法的牛津杯法评价益生菌的抑茵活力。为得到准确和重复性好的结果，要从几个方面注意。在下述条件下，可以得到清晰可见的抑茵圈：牛津杯中的加液量为０．２５ｍＬ，指示菌茵悬液的细菌浓度为ｌ拶ＣＦＵ／ｍＬ，在３－４℃冰箱预先扩散２４ｈ。关键词：益生菌；牛津拓法；抑菌圈直径
刘冬梅１，李理２，杨晓泉２，梁世中１
叩砸ＲＩ吸Ｍ姐卫０Ｎ０Ｆ７Ⅱ琅ＡＮｒ：口ＭＩＣＲ０８ＩＡＬＡＣ］［Ｉ、仰Ｙ０ＦＰＲＯＢＩ吲口『ＣＢＹ０Ｘ阳ＲＤＰＩＡＴＥ
ＵＵＤｏｎｇ—ｍｅｉ１，ＬＩＬｉ２．ＹＡＮＧＸｉａｏ—ｑｕａｎ２，ＵＡＮＧＳｈｉ—ｚｈｏｎ９１
ＡＳＳＡＹ趴驾ⅡＭ
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ＣｅｎｔｅｒｏｆＦｏｏｄＰｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｏｕｔｈ
Ｃｈｉｎａ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｒｏｐｅｒｔｙｏｆｔｈｅｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｔｒａｉｎｓｉｓｔｈｅｉｒａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｔｈｅａｇａｒｗｅｌｌｄｉｆｆｕｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｆｏｒｄｅｃｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｂｉｏｔ—ｉｅ．Ｔｏｏｂｔａｉｎ
ａｎ
ｅｘａｃｔ
ａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅｒｅｓｕｌｔｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙ．ａｃｏｕｐｌｅｏｆｅｆｆｅｃｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｓｗｅｒｅ
ｚｏｎｅｓ
ｅ－
ｖａｌｕａｔｅｄ．Ａｃｌｅａｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ａｓ
ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｃｏｎ—
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｔｒａｉｎｉＳ１０５ＣＦＵ／ｍＬ．ａｎｄｔｈｅｌｏａｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙｉｎＯｘｆｏｒｄｐｌａｔｅｉＳ０．２５ｍＬ，ｈｏｌｄｉｎｇｔｈｅｐｌａｔｅｓａｔ３～４ｏＣｆｏｒ２４ｈｉｎｏｒｄｅｒ
ｔｏ
ｐｒｅｄｉｆｆｕｓｅａｎｄｔｏｄｉｃｔａｔｅ
ｚｏｎｅ
ｓｉｚｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ；Ｏｘｆｏｒｄｐｌａｔｅ；ｔｈｅｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｚｏｎｅ
益生菌在人体肠道达到一定数量时，可以抑制
肠道中及自然界中某些有害微生物的生长，益生菌
干酪乳杆菌鼠李糖亚种，Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｓｐ．Ｒｈａｍｎｏｓｕｓ
Ｃａｓｅｉ
６０１３，由中国工业微生物菌种保
的一个重要性质是对病原菌的抑菌活力［１ｊ，测定益生菌的抑菌活力可用牛津杯法（也叫管碟法），此方
法是国内外测定抗生素效价通用方法，也是各国药典规定的方法［２剖，在进行抑菌活力测定时，如果不
藏中心提供。
１．１．５益生菌菌悬液
从益生菌６０１３斜面培养基上取一环至益生菌最适液体培养基ＭＲＳ［４］中，在最适温度３７℃下，静
止培养２４ｈ，于９０－９５ｏＣ中灭菌１５ｍｉｎ，然后在
８０００
能正确使用该法，很易使抑菌圈不清晰或无抑菌圈出现，作者从多次重复试验中得出一些经验，以供读者参考。
１试验材料与方法１．１实验材料１．１．１指示菌
金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ
ｒｐｍ条件下离心２０ｍｉｎ，取上清液做抑菌试验
１．１．６器材
牛津杯内径（６．０＋０．１）ｍｍ，外径（７．８±０．１）ｍｍ，高（１０．０±Ｏ．１）ｍｍ；检测专用培养ｚｔ（内径９０ｍｍ，高１６－
１７
ｍｍ）；索尼数码相机，型号Ｓｏｎｙ
ＤＳＣ—Ｔ１；ＰＹＸ一
１９０Ｓ—Ａ生化培养箱（科力电器）；ＣＲ２２Ｇ冷冻高速离心机（Ｈｉｔａｃｈｉ）１，２实验方法
２５９２３，由广东省微生物研究所提供。
１．１．２指示菌培养基
肉汤培养基，在高压灭菌釜中，用０．１ＭＰａ压力灭菌２０ｒａｉｎ；固体培养基中加入２．０％的琼脂。１．１．３指示菌菌悬液
１．２．１检测平板的制备
将肉汤培养基加入琼脂后，溶解均匀，在高压灭菌釜中，用０．１ＭＰａ压力灭菌２０ｍｉｎ，并冷却至
６０℃左右，用吸管准确量取２０ｍＬ该培养基，加入
金黄色葡萄球菌原菌种接种于肉汤培养基中，于３７℃摇瓶培养２４ｈ，用无菌生理盐水稀释成各种
浓度的菌悬液。１．１．４益生菌
作者简介：刘冬梅（１９７１一），女，工程师，华南理工大学生物科学与工程学院在读博士研究生，研究方向：微生物工程。
内径一致并预先水平放置的培养皿内，凝固后并使
培养皿中水份干燥透，取０．４ｍＬ的指示菌菌悬液在
平板上均匀涂布，涂布后以平板无可见水滴为准，
此时的平板立刻进行抑菌试验。１．２．２指示菌菌悬液的涂布
万方数据
检测分析
食品研究与并发
２００６．ｖｏ｜．２７．ＮＯ．３
１１１．＝＝．
吸取一定浓度的指示菌菌悬液０．４ｍＬ至１．２．１液、１０≈倍稀释液效果好，１０。倍稀释液的菌悬液细
的平板上，用无菌玻耙涂布均匀，并用镊子将无菌胞浓度为１０５
ＣＦＵ／ｍＬ。
的牛津杯轻轻放入培养皿中，在水平放置的平皿中
均匀地放置３只牛津杯。１．２．３加入益生菌菌悬液
吸取一定浓度的益生菌菌悬液０．２５ｍＬ至１．２．２
的牛津杯中，注意不要将菌悬液溢出牛津杯外。
１．２．４菌液扩散及指示菌的培养
图２指示菌菌悬液浓度对抑菌圈直径的影响。左、中、将加入益生菌菌悬液的平皿放置３～４℃冰箱右分别为１０４、１０’３、１０。４稀释度
扩散２４ｈ和不扩散处理，然后指示菌在最适生长温２．４结论与讨论：为了得到清晰抑菌圈，牛津杯中
度３７℃中培养２４ｈ，拍照。的加液量为０．２５ｍＬ、在３～４℃中扩散２４ｈ，指示
２结果与讨论
菌菌悬液用１０≈倍稀释，使菌悬液细胞浓度为１０５２．１牛津杯加液量的影响
ＣＦＵ／ｍＬ。该种方法是利用益生菌培养上清液在琼对于大多数抗生素测定，都需要把牛津杯加脂培养基内的扩散作用，产生对指示菌的抑菌圈。
满，虽然牛津杯加液量越大，所形成的抑菌圈直径
当牛津杯内加入含有抑菌物质的上清液后，抑菌就越大，但作者在多次试验中发现，若加满牛津杯，物质就随溶剂向培养基内呈球形扩散，将培养基
很容易使液体从中溢出，影响试验，同时扩散２４ｈ平板置培养箱中培养，指示菌开始繁殖，抑菌物后牛津杯内仍有少量的残留溶液，因此作者认为质在琼脂培养基中的浓度，随离开牛津杯的距离
１０．２ｍＬ的加液量比较合适，而且每次重复效果好。
增大而降低，当扩散到一定时间后，这是琼脂培
２．２平板预先扩散处理的影响
养基中抑菌物质的浓度恰好高于该抑菌物质对指从图１可以看出在冰箱中扩散２４ｈ比不扩散
示菌的最低抑菌浓度，指示菌的繁殖被抑制而呈
的抑菌效果明显增加，使得三个抑菌圈之间重叠，
现出透明的抑菌圈，在抑菌圈的边缘处，琼脂培
可能有两个原因：第一，冰箱放置一夜，使菌液充分养基中所舍抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该扩散到培养基中；第二，由于冰箱温度为３～４℃，在种指示菌的最低抑菌浓度。进行该试验时，要在
一定程度上抑制了指示菌的生长繁殖，而此对抑菌
相同的条件下进行，这样才能较准确对比抑菌物作用有正向协同效果。
质的抑菌效果。参考文献：
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℃冰箱预扩散２４ｈ。右图无扩散
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ＰＫ，Ｐｒａｓａｄ
Ｊ，ＳｍａｒｔＪ
ｅｔ
ａ１．Ｉｎｖｉｔｒｏａｄｈｅｒｅｎｃｅｐｒｏｐｅｒ—
牛津杯法进行抑菌试验时，控制检测平板中菌
ｔｉｅｓｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＤＲ２０
ａｎｄ
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
悬液的浓度非常重要，过浓则抑菌作用不明显，过
ｌａｃｔｉｓＤＲｌ０ｓｔｒａｉｎｓａｎｄｔｈｅｉｒａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔ
ａｎ
低则菌体生长稀疏，抑菌圈边缘不清晰，难以准确ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ［Ｊ１．ＩｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆ
测量。图２可以看出１０４倍稀释液比１０４倍稀释
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（上接第１４７页）
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万
方数据
用牛津杯法测定益生菌的抑菌活力
作者：作者单位：
刘冬梅， 李理， 杨晓泉， 梁世中， LIU Dong-mei， LI Li， YANG Xiao-quan， LIANGShi-zhong
刘冬梅,梁世中,LIU Dong-mei,LIANG Shi-zhong(华南理工大学生物科学与工程学院,广东,广州,510640)， 李理,杨晓泉,LI Li,YANG Xiao-quan(华南理工大学植物蛋白质工程研发中心,广东,广州,510640)食品研究与开发
FOOD RESEARCH AND DEVELOPMENT2006,27(3)57次
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