一、 名词解释
1. 气溶胶（aerosol）
液体或固体悬浮于气体介质中
粒径一般为0.001-100μm的固态或液态微小粒子形成的稳定的分散体系
2.实验室生物安全
指在从事病原微生物实验活动的实验室中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害，对环境的污染和对公众的危害，为了保证试验研究的科学性还要保护被试验因子免受污染。（课本第1页）
1． 简述实验室生物安全的重要意义。
1. 开展病原微生物研究的需要
2. 生物防护（国防）的需要
3. 传染病预防与控制的需要
4. 动物防疫工作的需要
5. 出入境检验检疫工作的需要
6. 医院感染控制的需要
2． 试述我国微生物实验室生物安全有哪些相关的法律法规？ 1. 《中华人民共和国传染病防治法》
2. 《病原微生物实验室生物安全管理条例》
3. 《人间传染的病原微生物名录》
4. 《医疗废物管理条例》
5. 《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）
6. 《生物安全实验室建设技术规范》（GB50346-2011）
7. 《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）
8. 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》
3． 试述微生物菌毒种及样本的运输与保藏方法。
一、 运输
1. 感染性物质运输的三重包装体系
内层容器：将样品采用防水、防漏的内层容器包装并贴上指示内容物的标签
中层包装：内层容器和中层容器间应放置足量的吸水性材料
外层包装：硬质
2. 托运人培训
如果不采用路运,而采用航空,则按照国家民用航空总局批准培训中介空运咨询服务有限公司承运
3. 运输审批
3.1申请资料
3.1.1.填写样本运输申请表；
3.1.2 法人资格证明材料（复印件）；
3.1.3 接收样本单位同意接收的证明文件;
3.1.4 容器或包装材料的批准文号、合格证书（复印件）
或者高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输容
器或包装材料承诺书；
3.1.5 其它有关资料。
4. 专人护送
4.1运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本，应当有专人护送，护送人员不得少于两人；
4.2申请单位应当对护送人员进行相关的生物安全知识培训；
4.3在护送过程中采取相应的防护措施。
5.运输后续工作
《规定》第十六条在运输结束后，申请单位应当将运输情况向原批准部门书面报告。
二、保藏方法（请大家自己发挥）
1.保藏机构：实验室在相关实验活动结束后，应及时将病原微生物菌（毒）种和样本就地销毁或送交保藏机构保管。
2.保藏管理：
帐目（总帐和分类帐）和实际库存相符；
有进出和操作记录：
编号（唯一标示号）来源；名称（种名和株名）；保存方法和保存日期；批号或代次；分发。
4． 生物安全实验室根据安全等级不同可分为几个类型？（四类） 一级生物安全防护水平（BSL－1）
★适合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、对实验室
工作人员和环境危害性最小的生物因子的工作。
★许多通常与人类疾病不相关的病原微生物是条件致病性的。
★对于在体内已经繁殖多代的疫苗株不要简单地认为是无毒的。
二级生物安全防护水平（BSL－2）
★适用于操作我国的第三类（少量二类）危害的致病微生物。
★适合于从未知病原的人身上取血、体液和组织。
三级生物安全防护水平（BSL－3）
★适用于操作我国第二类（个别第一类）病原微生物。
四级生物安全防护水平（BSL－4）
★适用于操作我国第一类病原微生物。另外，与四级生物安全防护水平的微生物具有相近的或一致的抗原关系的微生物也应该在该防护水平进行研究。
★我国尚未发现或已经灭绝的微生物
5．如何建设一个生物安全二级实验室？
在满足BSL－1实验室设施的基础上，增加以下内容：
★门应能够自动关闭，有可视窗。
★有适当的火灾报警器
★不需特殊的通风设备。但在计划安装新的设备时，应当考虑要设置通风系统，使空气向内流动而不发生循环。如果没有通风系统，那么实验室窗户应当能够打开，同时要安装防虫的纱窗。
★实验室所在建筑内配备高压蒸汽灭菌器。
★实验室内使用专门的工作服；戴乳胶手套。
★有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。
★实验室出口有黑暗中可明确辨认的标识。
★应在实验室内配备生物安全柜。
简略版：可自动关闭门、生物安全标识、可靠的电力供应和应急照明、专用个人防护设施（一级防护）、生物安全柜、高压蒸气灭菌器
补充;BSL-1的设施要求
★应为安全运行
以及清洁和维护
提供充足的空
间。
★实验室的工作区域外有存放外衣和私人物品的设备。
★应该有洗手池，最好安装在出口处。
★窗子和门入口处安装防媒介昆虫和啮齿动物的
★实验室的墙壁、天花板和地板应当是光滑、易清洁、不渗水以及耐化学品和消毒剂的腐蚀。地板应当是防滑的，同时应尽可能地避免管线暴露在外。
★实验台应当密封于墙上，不渗水，并可耐消毒剂、酸、碱、有机溶剂的腐蚀并能适度耐热。 ★在实验室内进行操作时均应保证照明，避免不必要的反光和闪光。
6．生物安全柜可分为几个等级？简述其基本原理（请大家自己发挥）。
生物安全柜（BSC）
有三个级别，即Ⅰ级、Ⅱ级(A1、
A2、B1、B2型)和Ⅲ级一共有6种。
Ⅲ级为密闭袖套操作，其余为前开口操作。
所有生物学污染的管道均为负压状态或由负压的管道通风系统包围。
原理（来源百度百科）：
一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样，不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器。所有类型的生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。一级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能对试验品或产品提供保护，目前已较少使用。
二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。 与Ⅰ级生物安全柜一样，Ⅱ级生物安全柜也有气流流入前窗开口，被称作“进气流”，用来防止在微生物操作时可能生成的气溶胶从前窗逃逸。与Ⅰ级生物安全柜不同的是，未经过滤的进气流会在到达工作区域前被进风格栅俘获，因此试验品不会受到外界空气的污染。 Ⅱ级生物安全柜的一个独特之处在于经过HEPA过滤器过滤的垂直层流气流从安全柜顶部吹下，被称作“下沉气流”。下沉气流不断吹过安全柜工作区域，以保护柜中的试验品不被外界尘埃或细菌污染。
三级生物安全柜是为4级实验室生物安全等级而设计的，是目前世界上最高安全防护等级的安全柜。柜体完全气密，100%全排放式，所有气体不参与循环，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golve box)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验。
7．简述正确使用生物安全柜的方法（自由发挥）。
★应安装在实验室内气流流动小，人员走动少，离门和中央空调送风口较远的地方。
★生物安全柜的周围应有一定的空间，与墙壁至少保持30cm的距离，便于清洁环境卫生。 ★注意保洁，每天做完实验后，清除所有废弃物，再用75%酒精
消毒。
★一般滤膜有5-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为50%的时候，需要更换滤膜。 ★在使用前先开机自净，并开启紫外线灭菌灯，确保工作区无污染达到百级状态。★灭菌时应关闭前窗。
★工作时前窗开启高度应小于200mm，区域内气压正常。
★工作台面为304不锈钢，有污染物残时应及时用酒精清理干净，以确保工作台面使用寿命。 ★开启前窗时应注意不使设备受到强烈振动，以保持平板玻璃的完整性。
★由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染，并移出安全柜。
★在每次使用前后，要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭，所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物。在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染。在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。
„„
8．举例说明在生物安全实验室注重操作细节的重要性。（自由发挥）
1.1956年，前苏联的一个实验室曾有9支装有感染了委内瑞拉马脑炎病毒鼠脑的安瓿被打破。由于没采取必要的措施，结果在几天内造成24名工作人员感染；
2.1998年，我国某大城市的某高校在使用大白鼠进行实验时，有两名学生被大白鼠咬伤，还有一些学生在给实验老鼠放血、解剖的过程中，未按照要求戴手套操作，结果在29名实验人员中，有9人感染了流行性出血热；
3.三起严重的实验室SARS病毒感染事件
1.新加坡的实验室sars感染事件
2.中国台湾地区的实验室感染事件
3.中国大陆的实验室感染事件
从以上几起事故中不难看出，发生感染的一个共同原因是工作人员主观上的麻痹大意，没有遵守实验室的安全操作规则和程序，即使具有完善的设备和标准的操作程序也不能杜绝事故的发生，因而加强实验室的安全监督管理是防止此类事件发生的首要任务。
„„
9．消毒灭菌的方法有哪些?
1.化学消毒灭菌
液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢对象：
物体表面、空气和污染物等方式：擦洗、熏蒸和浸泡等
2.物理消毒灭菌
紫外线、高压蒸汽灭菌、焚烧和HEPA过滤除菌等。
10．什么是实验室活动的危害评估？
对某一个特定的操作程序或实验或微生物种类的危险度进行评估，最有效的工具之一就是列出微生物的危险度等级。
11．如何进行实验室活动的危害评估？（自由发挥）
依据《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008），危害程度评估至少包括以下内容;生物因子的种类（已知的、未知的、基因修饰的或未知传染性的生物材料，来源、传染性、致病性、传播途径、在环境中的稳定性、感染剂量、浓度、动物实验数据、预防和治疗。
12．试述《人间传染的病原微生物名录》对实验室活动的危害评估的重要性。（自由发挥）
1.《病原微生物实验室生物安全管理条例》按危害程度对病原体进行分类：四类病原微生物，危害逐级降低；《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008），根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级，危害逐级增强。以上两种分类方法与国际不接轨，在使用过程中易引起混乱，可采用《人间传染的病原微生物名录》的分类方法；
2.《人间传染的病原微生物名录》将380种人间传染病原微生物分为三大类，分别是病毒分类名录，细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体分类名录和真菌分类名录，清晰明了，在实验室活动危害评估中使用方便简单；
3.《人间传染的病原微生物名录》还对人间传染病的病原微生物的中、英文名称、危害程度分类、从事实验活动所需实验室安全级别和运输包装分类等内容做出了明确的规定；
4.《人间传染的病原微生物名录》只是一种指南，仅供参考，是最基本的要求 „„
备注：个人能力有限，疏漏不妥之处望请包涵，也请大家对不妥之处批评指正，共同丰富此套题！
一、 名词解释
1. 气溶胶（aerosol）
液体或固体悬浮于气体介质中
粒径一般为0.001-100μm的固态或液态微小粒子形成的稳定的分散体系
2.实验室生物安全
指在从事病原微生物实验活动的实验室中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害，对环境的污染和对公众的危害，为了保证试验研究的科学性还要保护被试验因子免受污染。（课本第1页）
1． 简述实验室生物安全的重要意义。
1. 开展病原微生物研究的需要
2. 生物防护（国防）的需要
3. 传染病预防与控制的需要
4. 动物防疫工作的需要
5. 出入境检验检疫工作的需要
6. 医院感染控制的需要
2． 试述我国微生物实验室生物安全有哪些相关的法律法规？ 1. 《中华人民共和国传染病防治法》
2. 《病原微生物实验室生物安全管理条例》
3. 《人间传染的病原微生物名录》
4. 《医疗废物管理条例》
5. 《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）
6. 《生物安全实验室建设技术规范》（GB50346-2011）
7. 《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS233-2002）
8. 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》
3． 试述微生物菌毒种及样本的运输与保藏方法。
一、 运输
1. 感染性物质运输的三重包装体系
内层容器：将样品采用防水、防漏的内层容器包装并贴上指示内容物的标签
中层包装：内层容器和中层容器间应放置足量的吸水性材料
外层包装：硬质
2. 托运人培训
如果不采用路运,而采用航空,则按照国家民用航空总局批准培训中介空运咨询服务有限公司承运
3. 运输审批
3.1申请资料
3.1.1.填写样本运输申请表；
3.1.2 法人资格证明材料（复印件）；
3.1.3 接收样本单位同意接收的证明文件;
3.1.4 容器或包装材料的批准文号、合格证书（复印件）
或者高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输容
器或包装材料承诺书；
3.1.5 其它有关资料。
4. 专人护送
4.1运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本，应当有专人护送，护送人员不得少于两人；
4.2申请单位应当对护送人员进行相关的生物安全知识培训；
4.3在护送过程中采取相应的防护措施。
5.运输后续工作
《规定》第十六条在运输结束后，申请单位应当将运输情况向原批准部门书面报告。
二、保藏方法（请大家自己发挥）
1.保藏机构：实验室在相关实验活动结束后，应及时将病原微生物菌（毒）种和样本就地销毁或送交保藏机构保管。
2.保藏管理：
帐目（总帐和分类帐）和实际库存相符；
有进出和操作记录：
编号（唯一标示号）来源；名称（种名和株名）；保存方法和保存日期；批号或代次；分发。
4． 生物安全实验室根据安全等级不同可分为几个类型？（四类） 一级生物安全防护水平（BSL－1）
★适合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、对实验室
工作人员和环境危害性最小的生物因子的工作。
★许多通常与人类疾病不相关的病原微生物是条件致病性的。
★对于在体内已经繁殖多代的疫苗株不要简单地认为是无毒的。
二级生物安全防护水平（BSL－2）
★适用于操作我国的第三类（少量二类）危害的致病微生物。
★适合于从未知病原的人身上取血、体液和组织。
三级生物安全防护水平（BSL－3）
★适用于操作我国第二类（个别第一类）病原微生物。
四级生物安全防护水平（BSL－4）
★适用于操作我国第一类病原微生物。另外，与四级生物安全防护水平的微生物具有相近的或一致的抗原关系的微生物也应该在该防护水平进行研究。
★我国尚未发现或已经灭绝的微生物
5．如何建设一个生物安全二级实验室？
在满足BSL－1实验室设施的基础上，增加以下内容：
★门应能够自动关闭，有可视窗。
★有适当的火灾报警器
★不需特殊的通风设备。但在计划安装新的设备时，应当考虑要设置通风系统，使空气向内流动而不发生循环。如果没有通风系统，那么实验室窗户应当能够打开，同时要安装防虫的纱窗。
★实验室所在建筑内配备高压蒸汽灭菌器。
★实验室内使用专门的工作服；戴乳胶手套。
★有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。
★实验室出口有黑暗中可明确辨认的标识。
★应在实验室内配备生物安全柜。
简略版：可自动关闭门、生物安全标识、可靠的电力供应和应急照明、专用个人防护设施（一级防护）、生物安全柜、高压蒸气灭菌器
补充;BSL-1的设施要求
★应为安全运行
以及清洁和维护
提供充足的空
间。
★实验室的工作区域外有存放外衣和私人物品的设备。
★应该有洗手池，最好安装在出口处。
★窗子和门入口处安装防媒介昆虫和啮齿动物的
★实验室的墙壁、天花板和地板应当是光滑、易清洁、不渗水以及耐化学品和消毒剂的腐蚀。地板应当是防滑的，同时应尽可能地避免管线暴露在外。
★实验台应当密封于墙上，不渗水，并可耐消毒剂、酸、碱、有机溶剂的腐蚀并能适度耐热。 ★在实验室内进行操作时均应保证照明，避免不必要的反光和闪光。
6．生物安全柜可分为几个等级？简述其基本原理（请大家自己发挥）。
生物安全柜（BSC）
有三个级别，即Ⅰ级、Ⅱ级(A1、
A2、B1、B2型)和Ⅲ级一共有6种。
Ⅲ级为密闭袖套操作，其余为前开口操作。
所有生物学污染的管道均为负压状态或由负压的管道通风系统包围。
原理（来源百度百科）：
一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样，不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器。所有类型的生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。一级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能对试验品或产品提供保护，目前已较少使用。
二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。 与Ⅰ级生物安全柜一样，Ⅱ级生物安全柜也有气流流入前窗开口，被称作“进气流”，用来防止在微生物操作时可能生成的气溶胶从前窗逃逸。与Ⅰ级生物安全柜不同的是，未经过滤的进气流会在到达工作区域前被进风格栅俘获，因此试验品不会受到外界空气的污染。 Ⅱ级生物安全柜的一个独特之处在于经过HEPA过滤器过滤的垂直层流气流从安全柜顶部吹下，被称作“下沉气流”。下沉气流不断吹过安全柜工作区域，以保护柜中的试验品不被外界尘埃或细菌污染。
三级生物安全柜是为4级实验室生物安全等级而设计的，是目前世界上最高安全防护等级的安全柜。柜体完全气密，100%全排放式，所有气体不参与循环，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golve box)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验。
7．简述正确使用生物安全柜的方法（自由发挥）。
★应安装在实验室内气流流动小，人员走动少，离门和中央空调送风口较远的地方。
★生物安全柜的周围应有一定的空间，与墙壁至少保持30cm的距离，便于清洁环境卫生。 ★注意保洁，每天做完实验后，清除所有废弃物，再用75%酒精
消毒。
★一般滤膜有5-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为50%的时候，需要更换滤膜。 ★在使用前先开机自净，并开启紫外线灭菌灯，确保工作区无污染达到百级状态。★灭菌时应关闭前窗。
★工作时前窗开启高度应小于200mm，区域内气压正常。
★工作台面为304不锈钢，有污染物残时应及时用酒精清理干净，以确保工作台面使用寿命。 ★开启前窗时应注意不使设备受到强烈振动，以保持平板玻璃的完整性。
★由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖，因此在实验结束时，包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染，并移出安全柜。
★在每次使用前后，要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭，所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物。在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染。在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。
„„
8．举例说明在生物安全实验室注重操作细节的重要性。（自由发挥）
1.1956年，前苏联的一个实验室曾有9支装有感染了委内瑞拉马脑炎病毒鼠脑的安瓿被打破。由于没采取必要的措施，结果在几天内造成24名工作人员感染；
2.1998年，我国某大城市的某高校在使用大白鼠进行实验时，有两名学生被大白鼠咬伤，还有一些学生在给实验老鼠放血、解剖的过程中，未按照要求戴手套操作，结果在29名实验人员中，有9人感染了流行性出血热；
3.三起严重的实验室SARS病毒感染事件
1.新加坡的实验室sars感染事件
2.中国台湾地区的实验室感染事件
3.中国大陆的实验室感染事件
从以上几起事故中不难看出，发生感染的一个共同原因是工作人员主观上的麻痹大意，没有遵守实验室的安全操作规则和程序，即使具有完善的设备和标准的操作程序也不能杜绝事故的发生，因而加强实验室的安全监督管理是防止此类事件发生的首要任务。
„„
9．消毒灭菌的方法有哪些?
1.化学消毒灭菌
液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢对象：
物体表面、空气和污染物等方式：擦洗、熏蒸和浸泡等
2.物理消毒灭菌
紫外线、高压蒸汽灭菌、焚烧和HEPA过滤除菌等。
10．什么是实验室活动的危害评估？
对某一个特定的操作程序或实验或微生物种类的危险度进行评估，最有效的工具之一就是列出微生物的危险度等级。
11．如何进行实验室活动的危害评估？（自由发挥）
依据《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008），危害程度评估至少包括以下内容;生物因子的种类（已知的、未知的、基因修饰的或未知传染性的生物材料，来源、传染性、致病性、传播途径、在环境中的稳定性、感染剂量、浓度、动物实验数据、预防和治疗。
12．试述《人间传染的病原微生物名录》对实验室活动的危害评估的重要性。（自由发挥）
1.《病原微生物实验室生物安全管理条例》按危害程度对病原体进行分类：四类病原微生物，危害逐级降低；《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008），根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级，危害逐级增强。以上两种分类方法与国际不接轨，在使用过程中易引起混乱，可采用《人间传染的病原微生物名录》的分类方法；
2.《人间传染的病原微生物名录》将380种人间传染病原微生物分为三大类，分别是病毒分类名录，细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体分类名录和真菌分类名录，清晰明了，在实验室活动危害评估中使用方便简单；
3.《人间传染的病原微生物名录》还对人间传染病的病原微生物的中、英文名称、危害程度分类、从事实验活动所需实验室安全级别和运输包装分类等内容做出了明确的规定；
4.《人间传染的病原微生物名录》只是一种指南，仅供参考，是最基本的要求 „„
备注：个人能力有限，疏漏不妥之处望请包涵，也请大家对不妥之处批评指正，共同丰富此套题！