146
２００8年11月第２9卷第11期
食品研究与开发
食品保鲜
迁西板栗贮藏过程中致腐微生物的
分离鉴定研究
李德茂，陈利梅
（聊城大学农学院食品系，山东聊城２５２０５９）
摘要：用筛选细菌和真菌的培养基，从霉变的迁西板栗中分离出12个属的真菌，1个属的细菌。选择致病菌分离率无伤接种的方法只有青霉属具有致病力，但致病力较低，只有10.6%；达到10%的微生物进行致病性研究。结果表明，
无伤接种法所选择的微生物都具有致病性，致病力都在69%以上。关键词：迁西板栗；致病微生物；分离鉴定；致病力
ISOLATION AND IDENTIFICATION OF THE PATHOGENIC MICRO-ORGANISM IN ROTTED CHESTNUT FROM
QIANXI COUNTY LI De-mao, CHEN Li-mei
(FoodScience Department, Institute of Agriculture, Liaocheng University, Liaocheng 252059, Shandong, China) Abstract:There were 12genera of fungi and 1genus of bacterium isolated from rotted chestnut using culture medium for isolating fungi and bacteria. The isolated microorganisms, which isolating rate was higher than 10%,were chosen for the pathogenic power research. The inoculation tests showed that all the microorganisms could infect the injured chestnut (thepathogenic power were all higher than 69%)and only the Penicillium spp. could infect both injured and non-injured chestnut.
Key words:chestnut; pathogenic microorganism; isolation and identification; pathogenic power 迁西板栗是河北省的特色农产品，有2000多年的栽培历史。迁西板栗营养丰富，果仁富含蛋白质、碳水化合物、膳食纤维、胡萝卜素及对人体有益的多种微量V E 和铁、钙含量最高，利于人元素和氨基酸，其中V C 、体的指标居各地板栗之首。另外，板栗还有重要的药用价值，《本草纲目》记载“栗，厚肠胃，补肾气，令人耐。栗子对腰脚软弱、胃气不足等有显著疗效，具有养饥”
胃、健脾、补肝、强身的作用。迁西板栗一直出口东南亚等地区及日本等国家，而且在国内的许多大中型城市销售。但是，迁西板栗在贮存销售过程中变质腐烂，这也是所有地区板栗的通病，造成了巨大的损失。
目前，对于板栗腐烂的原因有较多的报道[1-6]，致病微生物不尽相同，但是腐烂的原因主要是微生物入侵导致的。我们分离鉴定了迁西板栗贮藏过程中腐烂的栗仁中存在的微生物，并作了复染试验，希望研究能够为降低迁西板栗在贮藏过程中的腐烂损失作出指导。
作者简介：李德茂（１９７８－），男（汉），讲师，博士，研究方向：食品生物技术。
1材料与方法
1.1材料、试剂和培养基
试验所用迁西板栗产自迁西县漆棵岭村。试验所用试剂均为国产分析纯试剂。
筛选细菌用的培养基：牛肉膏蛋白胨培养基[7]。培养基灭菌后加入50U/mL的制霉菌素。
筛选真菌用的培养基：马铃薯培养基[7]，培养基灭菌后加入30U/mL青霉素。1.2方法
1.2.1腐变迁西板栗的筛选
挑取在外观霉变或在水中能够漂浮的迁西板栗，用清水清洗干净表面的浮尘后，在75%乙醇中浸泡5min ，然后用无菌水浸泡冲去乙醇。1.2.2致腐微生物的分离
细菌分离方法：在无菌条件下，用刀片切取腐变的栗仁1mm 3～5mm 3的方形组织块，置经消毒灭菌的研钵中加无菌水2mL ，研磨，静置20min ，取研磨后的上清液1mL 稀释于100mL 蒸馏水中摇匀，于细菌筛选
食品保鲜
培养基中划线30℃培养。
食品研究与开发
表2
２００8年11月第２9卷第11期
147
以确定微生物的致病力。
微生物的致病力试验结果
真菌分离方法：切片、研磨和稀释方法同上。将稀释好的栗仁液体于真菌筛选培养基上划线28℃培养。1.2.3致病微生物致病力的鉴定
将分离出来的细菌和真菌接种于带壳的栗果上，接种方法是刺伤外壳（有伤接种）和在表面用接种环接对照用无菌种（无伤接种），每个处理接种20个栗果，水处理。接种后将栗果置于经高压灭菌的牛皮纸袋中，常温下观察20d 后检查致腐结果。1.2.4致病菌的鉴定
致病细菌的鉴定参考文献[8]。致病真菌的鉴定参考文献[9]。2结果与分析2.1腐烂板栗症状
腐烂板栗的症状主要有2种情况，一种是从种仁内部开始腐烂，另外一种为从种仁表面开始腐烂。从种仁内部开始腐烂的板栗致病微生物可能是在生长过程中侵入的，而从种仁表面开始腐烂的致病微生物可能是在生长过程中侵入，也有可能是在贮藏过程中侵入的。2.2致腐微生物的分离与鉴定
从300粒腐败的迁西板栗中共分离到真菌12个属，细菌一个属。见表1。其中分离率（＞10%）较高的有：毛霉属、青霉属、壳梭孢属、镰刀酶属、曲霉属、疫酶属和短梗霉属。
表1
分离到的微生物的鉴定结果与分离率
致病微生物
Table 2The results of the pathogenic power of the micro-organism
接种方式
发病率/%
Pathogenic microorganism Inoculation test 有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种
Pathogenic power/%
73.7079.2069.110.687.9069.3082.5087.40
毛霉
Mucorales 短梗霉属
Aureobasidium 青霉属
Penicillium 壳梭孢属
Fusicoccum 镰刀菌属
Fusarium 曲霉
Aspergillus 疫霉
Phytophthora
由表2知，当进行内部接种时，所选的微生物都能侵染到种仁，并能导致种仁腐烂。而进行外部接种时，只有青霉属的真菌能够侵染种仁并致病。3
结论与讨论
我们从腐败的板栗中分离到了真菌12个属，细菌一个属。板栗腐烂的症状主要有两种情况：一种是从种致仁内部开始腐烂，另外一种是从种仁外部开始腐烂。病微生物的复染试验表明，无伤板栗贮藏过程中致病微生物的侵染性比较低，而有伤的板栗微生物侵染的机会比较大。因此在板栗的贮藏和运输过程中一定主要保护好板栗外壳，防止受伤，这是防止板栗霉变的一个有效方法。
试验中分离到腐败菌种与报道的菌种有一部分不同，这可能是因为迁西板栗的生长和贮藏环境与报道所分离到的13个属的菌种需要进一的板栗不同所致。步鉴定到种。参考文献：
[1]
Washington W S ，Allen A D ，Dooley L B. Preliminary studies on Phomopsis castanea and other organisms associated with healthy and rotted chestnut fruit in storage[J].Australasian Plant Pathology ，1997，26（1）：37-43[2]
Overy D P ，Seifert K A ，Savard M E ，et al. Spoilage fungi and their mycotoxins in commercially marketed chestnuts [J].International Jour －nal of Food Microbiology ，2003，88：69-77
[3]Wright W R. Storage decays of domestically grown chestnuts [J].Plant
Disease Reporter ，1960，44：820-825
Table 1The identification results of the isolated micro-organism
and its isolating rate
分离到的微生物鉴定结果
分离率/%
The isolated icrobiology
真菌Fungi
毛霉炭疽菌短梗霉属链格孢属刺盘孢属青霉属壳梭孢属丝核菌属葡萄孢属镰刀菌属曲霉木霉疫霉
细菌Bacteria
假单胞杆菌属
Isolation rate/%
28.29.210.34.23.837.520.32.24.915.613.25.313.92.6
2.3致病微生物的致病力
选择了分离率大于10%的微生物做了复染试验
148
２００8年11月第２9卷第11期
食品研究与开发
食品保鲜
果蔬保鲜膜的保鲜机理与研究进展
周晓媛，蔡佑星，邓靖，龚慧芳，赵德坚，唐文评（湖南工业大学包装与印刷学院，湖南株洲412008）
摘要：综述果蔬保鲜膜的保鲜机理，介绍果蔬保鲜膜先后出现的硅窗调气薄膜、微孔果蔬保鲜膜、可食性果蔬保鲜
膜、抗菌保鲜膜的主要性能、特点及其应用现状，并简要分析果蔬保鲜膜今后的发展趋势。关键词：保鲜膜；硅窗膜；微孔膜；可食性膜；抗菌膜
ADVANCE AND MECHANISM OF PRESERVATIVE FILM FOR FRUIT AND VEGETABLE ZHOU Xiao-yuan, CAI You-xing, DENG Jing, GONG Hui-fang, ZHAO De-jian, TANG Wen-ping
（Hunan University of Technology, Zhuzhou 412008, Hunan, China ）
Abstract:The mechanism of preservative film for fruitsand vegetables was summarized. Main performance, char －acteristic and application of silicon gum film window, microporous film ，edible cling film and antibacterial film were presented .The developing tendency of preservative film was suggested.
Key words:preservative film; silicon gum film window; microporous film; edible cling film; antibacterial film
果蔬保鲜是一种以果蔬生理活动为基础的调理采摘后果蔬的实用技术。保鲜即是果蔬提供适宜的贮藏环境，适度维持果蔬的生命活动，延缓衰老过程，保持香味和外观，达到果蔬产品淡季不淡、旺季果蔬鲜度、
不烂。目前贮存和保鲜的方法主要低温冷藏、气调、辐化学杀菌和保鲜膜包装等[1]，但因前3种投资大而照、
不适合中国国情，尚不能普及。而化学制剂多少会给果蔬造成污染，对人体带来毒害，相比较而言，保鲜膜包装方法具有成本低、操作简单、适用面广、效果明显等透湿优点, 已被广泛使用。保鲜膜目前存在有透气性、性差，杀菌不理想的问题，针对上述问题，人们展开了对保鲜膜的研究，并取得了一定的成果。
基金项目：湖南省教育厅基金项目（０７Ｃ２８８）
作者简介：周晓媛（１９６９－），女（汉），副教授，硕士，主要从事食品科学与食品包装科技的教学与研究工作。[4]
Wells J M ，Payne J A. Toxigenic Aspergillus and Pencillium isolates from weevil-damaged chestnuts [J].Applied Microbiology ，1975，30：536-540[5]
王海霞，刘正坪，朱晓清，等. 板栗贮藏期致腐病原真菌种类鉴定及其侵染特性[J].北京农学院学报，2006，21（4）：33-36[6]吴光金，易润华. 板栗致腐微生物种群鉴定[J].中南林学院学报，
2000，20（4）：58-61
1果蔬的保鲜机理
1）尽量减缓果蔬的呼吸强度使其处于“冬眠”状态，必须控制好贮藏环境中二氧化碳和氧气的浓度，使其既能够保证果蔬进行呼吸，维持其生命的延续，又要控制和减缓其呼吸强度。一般二氧化碳的浓度控制在10%以下时能抑制呼吸强度，过高会造成呼吸障碍，甚至中毒。氧气浓度在1%以下为缺氧，一般控制在2%~10%时可减缓果蔬的呼吸[2]。
2）及时排除果蔬贮藏过程中产生的乙烯、乙醇、乙醛等气体。防止它们增强果蔬的呼吸作用，加速果蔬的衰老和腐烂[2]。
3）减少水分的蒸发，使果蔬处于水饱和气体环境中。一般果蔬采摘后贮藏的相对适宜湿度为70%~95%，相对湿度小于70%时果蔬会大量失水、皱皮萎蔫并易受真菌浸染而腐烂，相对湿度大于95%时，
[7]李阜棣，喻子牛，何绍江. 农业微生物学实验技术[M].北京：中国
农业出版社，1996:305[8][9]
东秀珠. 常见细菌系统鉴定手册[M].北京：科学出版社，2001：349-398
魏景超. 真菌鉴定手册[M]. 上海：上海科学技术出版社，1979：28-91
收稿日期：2007-12-27
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２００8年11月第２9卷第11期
食品研究与开发
食品保鲜
迁西板栗贮藏过程中致腐微生物的
分离鉴定研究
李德茂，陈利梅
（聊城大学农学院食品系，山东聊城２５２０５９）
摘要：用筛选细菌和真菌的培养基，从霉变的迁西板栗中分离出12个属的真菌，1个属的细菌。选择致病菌分离率无伤接种的方法只有青霉属具有致病力，但致病力较低，只有10.6%；达到10%的微生物进行致病性研究。结果表明，
无伤接种法所选择的微生物都具有致病性，致病力都在69%以上。关键词：迁西板栗；致病微生物；分离鉴定；致病力
ISOLATION AND IDENTIFICATION OF THE PATHOGENIC MICRO-ORGANISM IN ROTTED CHESTNUT FROM
QIANXI COUNTY LI De-mao, CHEN Li-mei
(FoodScience Department, Institute of Agriculture, Liaocheng University, Liaocheng 252059, Shandong, China) Abstract:There were 12genera of fungi and 1genus of bacterium isolated from rotted chestnut using culture medium for isolating fungi and bacteria. The isolated microorganisms, which isolating rate was higher than 10%,were chosen for the pathogenic power research. The inoculation tests showed that all the microorganisms could infect the injured chestnut (thepathogenic power were all higher than 69%)and only the Penicillium spp. could infect both injured and non-injured chestnut.
Key words:chestnut; pathogenic microorganism; isolation and identification; pathogenic power 迁西板栗是河北省的特色农产品，有2000多年的栽培历史。迁西板栗营养丰富，果仁富含蛋白质、碳水化合物、膳食纤维、胡萝卜素及对人体有益的多种微量V E 和铁、钙含量最高，利于人元素和氨基酸，其中V C 、体的指标居各地板栗之首。另外，板栗还有重要的药用价值，《本草纲目》记载“栗，厚肠胃，补肾气，令人耐。栗子对腰脚软弱、胃气不足等有显著疗效，具有养饥”
胃、健脾、补肝、强身的作用。迁西板栗一直出口东南亚等地区及日本等国家，而且在国内的许多大中型城市销售。但是，迁西板栗在贮存销售过程中变质腐烂，这也是所有地区板栗的通病，造成了巨大的损失。
目前，对于板栗腐烂的原因有较多的报道[1-6]，致病微生物不尽相同，但是腐烂的原因主要是微生物入侵导致的。我们分离鉴定了迁西板栗贮藏过程中腐烂的栗仁中存在的微生物，并作了复染试验，希望研究能够为降低迁西板栗在贮藏过程中的腐烂损失作出指导。
作者简介：李德茂（１９７８－），男（汉），讲师，博士，研究方向：食品生物技术。
1材料与方法
1.1材料、试剂和培养基
试验所用迁西板栗产自迁西县漆棵岭村。试验所用试剂均为国产分析纯试剂。
筛选细菌用的培养基：牛肉膏蛋白胨培养基[7]。培养基灭菌后加入50U/mL的制霉菌素。
筛选真菌用的培养基：马铃薯培养基[7]，培养基灭菌后加入30U/mL青霉素。1.2方法
1.2.1腐变迁西板栗的筛选
挑取在外观霉变或在水中能够漂浮的迁西板栗，用清水清洗干净表面的浮尘后，在75%乙醇中浸泡5min ，然后用无菌水浸泡冲去乙醇。1.2.2致腐微生物的分离
细菌分离方法：在无菌条件下，用刀片切取腐变的栗仁1mm 3～5mm 3的方形组织块，置经消毒灭菌的研钵中加无菌水2mL ，研磨，静置20min ，取研磨后的上清液1mL 稀释于100mL 蒸馏水中摇匀，于细菌筛选
食品保鲜
培养基中划线30℃培养。
食品研究与开发
表2
２００8年11月第２9卷第11期
147
以确定微生物的致病力。
微生物的致病力试验结果
真菌分离方法：切片、研磨和稀释方法同上。将稀释好的栗仁液体于真菌筛选培养基上划线28℃培养。1.2.3致病微生物致病力的鉴定
将分离出来的细菌和真菌接种于带壳的栗果上，接种方法是刺伤外壳（有伤接种）和在表面用接种环接对照用无菌种（无伤接种），每个处理接种20个栗果，水处理。接种后将栗果置于经高压灭菌的牛皮纸袋中，常温下观察20d 后检查致腐结果。1.2.4致病菌的鉴定
致病细菌的鉴定参考文献[8]。致病真菌的鉴定参考文献[9]。2结果与分析2.1腐烂板栗症状
腐烂板栗的症状主要有2种情况，一种是从种仁内部开始腐烂，另外一种为从种仁表面开始腐烂。从种仁内部开始腐烂的板栗致病微生物可能是在生长过程中侵入的，而从种仁表面开始腐烂的致病微生物可能是在生长过程中侵入，也有可能是在贮藏过程中侵入的。2.2致腐微生物的分离与鉴定
从300粒腐败的迁西板栗中共分离到真菌12个属，细菌一个属。见表1。其中分离率（＞10%）较高的有：毛霉属、青霉属、壳梭孢属、镰刀酶属、曲霉属、疫酶属和短梗霉属。
表1
分离到的微生物的鉴定结果与分离率
致病微生物
Table 2The results of the pathogenic power of the micro-organism
接种方式
发病率/%
Pathogenic microorganism Inoculation test 有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种有伤接种无伤接种
Pathogenic power/%
73.7079.2069.110.687.9069.3082.5087.40
毛霉
Mucorales 短梗霉属
Aureobasidium 青霉属
Penicillium 壳梭孢属
Fusicoccum 镰刀菌属
Fusarium 曲霉
Aspergillus 疫霉
Phytophthora
由表2知，当进行内部接种时，所选的微生物都能侵染到种仁，并能导致种仁腐烂。而进行外部接种时，只有青霉属的真菌能够侵染种仁并致病。3
结论与讨论
我们从腐败的板栗中分离到了真菌12个属，细菌一个属。板栗腐烂的症状主要有两种情况：一种是从种致仁内部开始腐烂，另外一种是从种仁外部开始腐烂。病微生物的复染试验表明，无伤板栗贮藏过程中致病微生物的侵染性比较低，而有伤的板栗微生物侵染的机会比较大。因此在板栗的贮藏和运输过程中一定主要保护好板栗外壳，防止受伤，这是防止板栗霉变的一个有效方法。
试验中分离到腐败菌种与报道的菌种有一部分不同，这可能是因为迁西板栗的生长和贮藏环境与报道所分离到的13个属的菌种需要进一的板栗不同所致。步鉴定到种。参考文献：
[1]
Washington W S ，Allen A D ，Dooley L B. Preliminary studies on Phomopsis castanea and other organisms associated with healthy and rotted chestnut fruit in storage[J].Australasian Plant Pathology ，1997，26（1）：37-43[2]
Overy D P ，Seifert K A ，Savard M E ，et al. Spoilage fungi and their mycotoxins in commercially marketed chestnuts [J].International Jour －nal of Food Microbiology ，2003，88：69-77
[3]Wright W R. Storage decays of domestically grown chestnuts [J].Plant
Disease Reporter ，1960，44：820-825
Table 1The identification results of the isolated micro-organism
and its isolating rate
分离到的微生物鉴定结果
分离率/%
The isolated icrobiology
真菌Fungi
毛霉炭疽菌短梗霉属链格孢属刺盘孢属青霉属壳梭孢属丝核菌属葡萄孢属镰刀菌属曲霉木霉疫霉
细菌Bacteria
假单胞杆菌属
Isolation rate/%
28.29.210.34.23.837.520.32.24.915.613.25.313.92.6
2.3致病微生物的致病力
选择了分离率大于10%的微生物做了复染试验
148
２００8年11月第２9卷第11期
食品研究与开发
食品保鲜
果蔬保鲜膜的保鲜机理与研究进展
周晓媛，蔡佑星，邓靖，龚慧芳，赵德坚，唐文评（湖南工业大学包装与印刷学院，湖南株洲412008）
摘要：综述果蔬保鲜膜的保鲜机理，介绍果蔬保鲜膜先后出现的硅窗调气薄膜、微孔果蔬保鲜膜、可食性果蔬保鲜
膜、抗菌保鲜膜的主要性能、特点及其应用现状，并简要分析果蔬保鲜膜今后的发展趋势。关键词：保鲜膜；硅窗膜；微孔膜；可食性膜；抗菌膜
ADVANCE AND MECHANISM OF PRESERVATIVE FILM FOR FRUIT AND VEGETABLE ZHOU Xiao-yuan, CAI You-xing, DENG Jing, GONG Hui-fang, ZHAO De-jian, TANG Wen-ping
（Hunan University of Technology, Zhuzhou 412008, Hunan, China ）
Abstract:The mechanism of preservative film for fruitsand vegetables was summarized. Main performance, char －acteristic and application of silicon gum film window, microporous film ，edible cling film and antibacterial film were presented .The developing tendency of preservative film was suggested.
Key words:preservative film; silicon gum film window; microporous film; edible cling film; antibacterial film
果蔬保鲜是一种以果蔬生理活动为基础的调理采摘后果蔬的实用技术。保鲜即是果蔬提供适宜的贮藏环境，适度维持果蔬的生命活动，延缓衰老过程，保持香味和外观，达到果蔬产品淡季不淡、旺季果蔬鲜度、
不烂。目前贮存和保鲜的方法主要低温冷藏、气调、辐化学杀菌和保鲜膜包装等[1]，但因前3种投资大而照、
不适合中国国情，尚不能普及。而化学制剂多少会给果蔬造成污染，对人体带来毒害，相比较而言，保鲜膜包装方法具有成本低、操作简单、适用面广、效果明显等透湿优点, 已被广泛使用。保鲜膜目前存在有透气性、性差，杀菌不理想的问题，针对上述问题，人们展开了对保鲜膜的研究，并取得了一定的成果。
基金项目：湖南省教育厅基金项目（０７Ｃ２８８）
作者简介：周晓媛（１９６９－），女（汉），副教授，硕士，主要从事食品科学与食品包装科技的教学与研究工作。[4]
Wells J M ，Payne J A. Toxigenic Aspergillus and Pencillium isolates from weevil-damaged chestnuts [J].Applied Microbiology ，1975，30：536-540[5]
王海霞，刘正坪，朱晓清，等. 板栗贮藏期致腐病原真菌种类鉴定及其侵染特性[J].北京农学院学报，2006，21（4）：33-36[6]吴光金，易润华. 板栗致腐微生物种群鉴定[J].中南林学院学报，
2000，20（4）：58-61
1果蔬的保鲜机理
1）尽量减缓果蔬的呼吸强度使其处于“冬眠”状态，必须控制好贮藏环境中二氧化碳和氧气的浓度，使其既能够保证果蔬进行呼吸，维持其生命的延续，又要控制和减缓其呼吸强度。一般二氧化碳的浓度控制在10%以下时能抑制呼吸强度，过高会造成呼吸障碍，甚至中毒。氧气浓度在1%以下为缺氧，一般控制在2%~10%时可减缓果蔬的呼吸[2]。
2）及时排除果蔬贮藏过程中产生的乙烯、乙醇、乙醛等气体。防止它们增强果蔬的呼吸作用，加速果蔬的衰老和腐烂[2]。
3）减少水分的蒸发，使果蔬处于水饱和气体环境中。一般果蔬采摘后贮藏的相对适宜湿度为70%~95%，相对湿度小于70%时果蔬会大量失水、皱皮萎蔫并易受真菌浸染而腐烂，相对湿度大于95%时，
[7]李阜棣，喻子牛，何绍江. 农业微生物学实验技术[M].北京：中国
农业出版社，1996:305[8][9]
东秀珠. 常见细菌系统鉴定手册[M].北京：科学出版社，2001：349-398
魏景超. 真菌鉴定手册[M]. 上海：上海科学技术出版社，1979：28-91
收稿日期：2007-12-27
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