HPLC法同时测定鲜鱼腥草不同部位8个活性成分的含量

中圄善幸｝夫擎学报

５１６

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈｍｒｎａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

２００７，３８（６）：５１６—５１８

ＨＰＬＣ法同时测定鲜鱼腥草不同部位８个活性成分的含量

孟

江１，周毅生１，赵中振２，董小萍３。

（１广东药学院中药学院，广东５１０００６；２香港浸会大学中医药学院，香港；３成都中医药大学药学院，成都６１００８１）

摘要

目的：同时测定鲜鱼腥草不同药用部位８个活性成分的含量。方法：ＡｌｈｉｍａＣ，。柱（７．５

ｍｌＴＩＸ４．６

ｆｉｌｍ，５舯），流

动相：０．２％的冰乙酸溶液（Ａ），乙腈（Ｂ），梯度洗脱：０～２０ｍｉｎ，５％～２０％Ｂ：２０～４０ｍｉｎ．２０％～２０．５％Ｂ；４０～５０ｍｉｎ，２０．５％

～３５％Ｂ；５０～９０

ｍｉｎ，３５％～９０％Ｂ；流速：０．６ｍＬ／ｍＪｎ；检测波长：２８０肿１。结果：表明不同药用部位含量不同。结论：该法简

便、准确、分离效果好，适用于鱼腥草的质量控制。

关键词

鲜鱼腥草；ＨＰＬＣ；不同部位；含量测定

中图分类号Ｒ９１７；Ｒ２８４．１

文献标识码Ａ

文章编号１０００—５０４８（２００－Ｉ）０６—０５１６—０３

ＳｉｍｕＩｔａｎｅｏｕｓ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ

ｅｉｇｈｔ

ｂｉｏａｃｔｉｖｅ

ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ

ｉｎ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆｆｒｅｓｈＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａｂｙＨＰＬＣ

ＭＥＮＧ４

Ｊｉａｎ９１，ＺＨＯＵＹｉ－ｓｈｅｎ９１，ＺＨＡＯＺｈｏｎｇ－ｚｈｅｎ２，ＤＯＮＧＸｉａｏ．ｐｉｎ９３

７

Ｓｃｈｏｏｌ

ｏｆＴｒａｄｉｔ幻ｎａｌ

Ｃｈｉｎｅｓｅ

Ｍｅｄ瑟ｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ

Ｐｈｅｕｔｉｃａｌ

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６；

２Ｓｃｈｏｏｌ

ｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ

Ｂａｐｔ蠡ｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ；

３ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００８１，Ｃｈｉｎａ

Ａｂｓｔｒａｃｔ

Ａｉｍ：Ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｔｈｅｅｉｇｈｔｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｐａｒｔｓ

ｏｆｆｒｅｓｈＨｏｕｔｔｕｙｎｉａ

ｃｏｒｄａｔａｂｙＨＰＩＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｔ｝ｌｅｅｉｇｈｔｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｏｎａＡｌｈｉｍａ

Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ．，ｎＩｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆ（Ａ）０．２％ａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｎｄ（Ｂ）ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｕｓｉｎｇａ

ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍ

ｗｈｉｃｈｗａｓｓｅｔ

ｔｏ

２０％（Ｂ）ｉｎ０～２０ｍｉｎ，２０％～２０．５％（Ｂ）ｉｎ２０～４０ｍｉｎ，２０．５％．３５％（Ｂ）ｉｎ４０～５０ｍｉｎ，ａｎｄ

３５％～９０％（Ｂ）ｉｎ５０～９０ｍｉｎ．７ｎｅｆｌｏｗ

ｒａｔｅ

ｗａｓ

０．６ｍｌＪｍｉｎ

ｍａｄｔｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎ对ｈｗａｓ２８０ｎｍ．

Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｔｈｅｅｉｇｈｔｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＨ．ｃｏｒｄａｔａｗｅｒｅｆｏｕｎｄｔｏｂｅｖａｒｉｅｄ．

Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ．ｄｅｖｅｌｏｐｅｄｍｅｔｈｏｄｉＳｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｍｔｅ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ，ａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｆｏｒ山ｅｑｕａｌｉｗｃｏｎｔｒｏｌｏｆＨ．ｃｏｒｄａｔａ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ｆｒｅｓｈＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａ：ＨＰＬＣ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔ

ｎｉｓ

ｓｔｕｄｙ

ｗａｓ

ｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＦａｃｕｌｔｙＲｅｓｅａｒｃｈＧｒａｎｔ，ＨｏｎｇＫｏｎｇＢａｐｔｉｓｔ

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＦＲＧ／０３—０４／Ｕ一３９）

鲜鱼腥草为三白草科（Ｓａｕｍｒａｅｅａｅ）蕺菜属植物解ｂ’４１；另外也有以总黄酮、槲皮素、绿原酸为指标

蕺菜（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ

ｃｏｒｄａｔａ

Ｔｈｕｎｂ．）的新鲜全草…，具

来控制质量ｂ刮。但这些方法不具有专属性，且单有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋的功效。主要用一组分也不能完全客观的反映鱼腥草的质量。

于肺脓疡、痰热咳嗽、热痢热淋、痈疮肿毒１２。。鱼腥现代药理研究表明鱼腥草中的黄酮类化合物草及其制剂广泛应用于临床。国内外关于鱼腥草具有抗肿瘤、抗氧化、抗诱变和清除自由基等功能；质量分析研究很多，《中华人民共和国药典》（２００５生物碱类具有显著的抗血小板聚集及细胞毒等作年版）以甲基正壬酮为标准品用薄层色谱法来定性用；绿原酸具有解热和抗菌等作用。因此本文建立

控制鱼腥草的质量；也有以挥发油的总量或浸出物

同时测定鱼腥草中酚类、黄酮类、生物碱类的８个的量为指标，但挥发油成分不稳定，易氧化分

成分含量的方法，以期为鱼腥草及其制剂的质量控

收稿日期２００７．１０—０８’通讯作者Ｔｅｌ：０２８—８８８４８３８８Ｅ－ｍａｉｌ：ｊ９５７９ｃＬｘｐ＠１６３．ｃｏｎ

．基金项目

香港浸会大学基金资助项目（ＦＲＧ／０３—０４／１Ｉ．３９）

万　

方数据

第６期

孟江等：ＨＰＬＣ法同时测定鲜鱼腥草不同部位８个活性成分的含量

５１７

制和合理有效的开发提供科学依据。

１材料１．１

仪器

Ａｇｉｌｅｎｔ１１００

ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪（美国安捷

伦科技公司），色谱数据处理由Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作站

完成。Ｍｉｌｌｉ—Ｑ纯净水发生器（美国密理博公司）；１８７５ＨＴＡＧ超声波提取器（美国思博明公司）；ＡＢ２０４一Ｎ电子分析天平（梅特勒一托利多公司）。

１．２试剂

甲醇（分析纯），冰乙酸、乙腈（色谱纯）均由德国默克公司提供。．

化学对照品：绿原酸（１），槲皮素一３一ｏ－ｇ－ｏ一半乳

糖一７．Ｏ－ｆｉ－Ｄ一葡萄糖苷（２），槲皮素一３．Ｏ－（一Ｄ，鼠李糖

一７一Ｏ－』８－Ｄ．葡萄糖苷（３），芸香苷（４），金丝桃苷（５），

槲皮苷（６），胡椒内酰胺（７），金线吊乌龟二酮碱Ｂ

（８）均由本实验室分离纯化得到，其纯度达到９６％以上，分离纯化及结构鉴定已另文发表睛’９ｊ。

ｌ，３药材

鲜鱼腥草药材采白广东肇庆。经香港浸会大学赵中振教授鉴定为三白草科蕺菜属植物Ｈｏｕｔ—

ｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａＴｈｕｎｂ．。

２方法与结果

２．１色谱条件

色谱柱：ＡｌｌｔｉｍａＣ∽５脚，７．５

ｍｍ×４．６

ｍｍ（保护柱）加４．６

ｍｍ×１５０

ｎ瑚（分析柱）。柱温：室温；

流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ；流动相：０．２％冰乙酸溶液（Ａ）和乙腈（Ｂ），梯度洗脱：０～２０

ｍｉｎ，５％～２０％Ｂ；２０～４０

ｍｉｎ，２０％～２０．５％Ｂ；４０～５０ｍｉｎ，２０．５％～３５％Ｂ；

５０～９０

ｍｉｎ，３５％～９０％Ｂ；检测波长：２８０ｎｍ；进样

量：１０弘Ｌｏ

２．２标准曲线的制备

分别精密称取各标准品适量，制成每毫升含

０．２

ｍｇ的甲醇溶液。取８个不同浓度的对照品溶

液分别进样ｌＯ皿，按上述色谱条件测定峰面积。

结果以进样浓度（Ｃ）为横坐标，以峰面积值（Ａ）为纵坐标进行线性回归，得到８个标准品的回归方程，结果见表１。

２．３样品溶液的制备

精密称取各样品粉末０．５ｇ，置５０ｍＬ量瓶中，

加７０％甲醇至刻度，摇匀，超声３０ｍｉｎ，室温放置

万　

方数据３０

ｒａｉｎ，过滤。取滤液２ｍＬ，０．２牲ｍ微孔滤膜滤过，

进样１０止。

Ｔａｂ．１

Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｆｏｒｍｅｔｈｏｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

１：Ｃｈｌｏｒｏｇｅ『Ｉｆｉｃａｃｉｄ；２：Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３一口口一Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一７－ＤｐＤ—ｇｌｕｃｏ—

ｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ；３：Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ

３—０一ｆ—ｂｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ～７一ｏ－ｇ－Ｄ・ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏ—

ｓｉｄｅ；４：Ｒｎｔｉｎ；￥：Ｈｙｐｅｆｉｎ；６：Ｑｕｅｍｉｔｆｉｎ；７：ＰｉｐｅｒｏｌａｃｔａｍＡ；８：Ｃｅｐｈａｒａｄｉｏｎｅ

Ｂ

２．４精密度试验

取鱼腥草的同一供试品溶液，连续进样５次，按“２．１”项下条件测定含量。结果各标准品含量的ＲＳＤ均小于２．６７％，表明精密度良好。２．５稳定性试验

取鱼腥草的同一供试品溶液，在前述色谱条件

下分别在０，２，４，８，２４ｈ进样１０曲，按上述色谱条件测定含量，各标准品含量的ＲＳＤ均小于３．０ｌ％。结果表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。２．６重复性试验

取鱼腥草的同一供试品重复提取５份，按上述

色谱条件测定含量，结果各标准品含量的ＲＳＤ均

小于２．９７％，表明重复性良好。

２．７回收率试验

取已知含量的鱼腥草药材０．５ｇ，精密称定，分别精密加入对照品适量，按供试品项下方法制备，测定各标准品的含量，计算回收率，结果见表２。

Ｔａｂ．２

Ｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｔｈｅｅｉｇｈｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ｎ＝３）

２．８样品测定

精密称取各样品Ｏ．５ｇ，按“２．３”项下方法制备供

５１８

中阅善科天誊学报

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｎＰｌｕｚｒｍａｃｅｕｔｉｃ甜Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

第３８卷

薹兰蓄雾≥鬈霁霎墓羹慧霎兰３鬻磊詈１，’３讨论

通过回归方程计算含量，结果见表，色谱图见图。

。

”“

Ｔａｂ．３

Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ

ｅｉ曲ｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓ

ｉｎｄ＿ｆｆｅｒｅｎｌｐａｒｔｓｏｆＨ．ｃｏｒｄａｔａ

ＮＤ：ｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄ

Ｂ

一止一ｉ

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１０

２０

３０

４０５０

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７０

ｔ／ｍｉｎ

Ｆｉｇ．１

ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＨ．ａｎｄｍｉｘｅｄｓｔａｎｄａｒｄ

ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ

Ａ：Ｍｉｘｅｄｓｔａｎｄａｒｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ；Ｂ：Ｈｅｒｂ：Ｃ：Ｌｅａｆ；Ｄ：Ｓｔｅｍ；Ｅ：Ｒｏｏｔ１：Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ

ａｃｉｄ；２：Ｑｕｅｒｅｅｔｉｎ

３－口ｐＤ－列ａｃｔｏｐ卿ｙｔ－７一ＤｐＤ－ｇｌｕｃｏ—

ｐｙｒａｎｅｓｉｄｅ；３：Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３－Ｏ－（一Ｌ－ｒｈａｎｍｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一７一Ｄ肛Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏ－ｓｉｄｅ；４：Ｒｕｔｉｎ；５：Ｈｙｐｅｒｉｎ；６：Ｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ；７：Ｐｉｐｅｒｏｌａｃ。ｔａｍＡ；８：Ｃｅｐｈａｒａｄｉｏｎｅ

Ｂ

万　

方数据１）本文首次建立了ＨＰＩＥ同时测定鲜鱼腥草８个活性成分含量的方法，该方法简便、快速、灵敏，可用于鱼腥草的质量控制。不同部位鲜鱼腥草各成分的含量不同，叶中各成分含量均最高，其次是全草，茎次之，根中含成分最少且含量最低。

２）８个成分分别为酚类、生物碱和黄酮类化合物，为此本文分别考察了提取溶剂（甲醇、乙醇、水）、提取方法（回流提取、超声）、提取时问（２０，３０，

６０

ｍａｎ）和提取溶剂浓度（３０％、５０％、７０％、９０％甲

醇）对含量测定的影响。结果显示：７０％甲醇超声

提取３０ｍｉｎ，８个标准品含量均较高，峰形好且分离的较好，且提取方便、效率高。

参考文献

［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｍ］．北京：化学

工业出版社，２００５：１５５．

［２］李爽（“ｓ），于庆海（ＹｕＱＨ），金佩珂（ＪｉｎＰＫ）．鱼腥草的有

效成分、药理作用及ｌ临床应用的研究进展［Ｊ］，沈阳药科大学学报（ＪＳｈｅｎｙａｎｇ斜ｍｎｎＵｎｉｖ），１９９７，１４（２）：１４４—１４７．

［３］聂仁强（ＮｉｅＲＱ），李泉森（ⅡＱｓ），冉启文（ＲａｎＱＷ）．不同产地

鱼腥草的比较［Ｊ］．中国新医药（Ｃｈｉｎａ

Ｎｅｗ

Ｍｅｄ），２００３，２（２）：

７１．

［４］曾

志（Ｚｅｎｇ

Ｚ），石建功（啪ＪＧ），曾和平（Ｚｅｎｇ

Ｉ口）．有机质谱

学在中药鱼腥草研究中的应用［Ｊ］．分析化学（ＣｈｉｎＪＡｎａｌＣｈｅｍ），２００３，３１（４）：３９９—４０４．

［５］谭萍（ＴａｎＰ），李煜（ｂＹ）．黔产野生鱼腥草总黄酮含量

的测定［Ｊ］．江苏中医药（ＪｉａｎｇｓｎＪＴｒａｄｉｔＣｈｉｎＭｅｄ），２００５，２６

（４）：４０．

［６］刘文尧（ｕｕｗＹ），梁爱君（ｉＪａｎｇＡＪ），白

皓（ＢａｄＨ）．高效液

相色谱法测定鱼腥草中槲皮素的含量［Ｊ］．解放军药学学报（ＰｈａｒｍＪＣｈｉｎＰＩＡ），１９９９，１５（６）：４０—４１．

［７］黎小伟（ＬｅｉＸＷ），叶小强（ＹｅＸＱ）．ＨＰＬＣ测定复方鱼腥草片

中绿原酸的含量［Ｊ］中成药（ＣｈｉｎＴｒａｄｉｔ

Ｐａｔ

Ｍｅｄ），２００３，２５

（】）：６６—６７．

［８］孟ｉＴ＿（ＭｅｎｇＪ），董小萍（Ｄｏｎｇ

ｘＰ），㈣（Ｚｈａｏ

ＺＺ），等．鲜

鱼腥草的黄酮类化合物研究［Ｊ］．中国中药杂志（ＣｈｉｎａＪＣｈｉｎ

ＭａｔｅｒＭｅｄ）。２００６，３１（１６）：ｌ３３５—１

３３７．

［９］孟｛＿Ｉ（ＭｅｎｇＪ），董小萍（ＤｏｎｇｘＰ），赵中振（盈ａ０ＺＺ）．鲜鱼腥

草酚类化合物的研究［Ｊ］．中国中药杂志（ＣｈｉｎａＪＣｈｉｎＭａｔｅｒ

—

Ｍｅｄ），２００７，３２（１０）：９２９—９３１．

HPLC法同时测定鲜鱼腥草不同部位8个活性成分的含量

作者：作者单位：

孟江， 周毅生， 赵中振， 董小萍， MENG Jiang， ZHOU Yi-sheng， ZHAO Zhong-zhen， DONG Xiao-ping

孟江,周毅生,MENG Jiang,ZHOU Yi-sheng(广东药学院中药学院,广东,510006)， 赵中振,ZHAO Zhong-zhen(香港浸会大学中医药学院,香港)， 董小萍,DONG Xiao-ping(成都中医药大学药学院,成都,610081)

中国药科大学学报

JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY2007,38(6)

刊名：英文刊名：年，卷(期)：

参考文献(9条)

1. 孟江;董小萍;赵中振 鲜鱼腥草酚类化合物的研究[期刊论文]-中国中药杂志 2007(10)2. 孟江;董小萍;赵中振 鲜鱼腥草的黄酮类化合物研究[期刊论文]-中国中药杂志 2006(16)3. 黎小伟;叶小强 HPLC测定复方鱼腥草片中绿原酸的含量[期刊论文]-中成药 2003(01)

4. 刘文尧;梁爱君;白皓 高效液相色谱法测定鱼腥草中槲皮素的含量[期刊论文]-解放军药学学报 1999(06)5. 谭萍;李煜 黔产野生鱼腥草总黄酮含量的测定[期刊论文]-江苏中医药 2005(04)

6. 曾志;石建功;曾和平 有机质谱学在中药鱼腥草研究中的应用[期刊论文]-分析化学 2003(04)7. 聂仁强;李泉森;冉启文 不同产地鱼腥草的比较[期刊论文]-中国新医药 2003(02)

8. 李爽;于庆海;金佩珂 鱼腥草的有效成分、药理作用及临床应用的研究进展[期刊论文]-沈阳药科大学学报1997(02)

9. 国家药典委员会 中华人民共和国药典(一部) 2005

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgyaokdxxb200706008.aspx

中圄善幸｝夫擎学报

５１６

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈｍｒｎａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

２００７，３８（６）：５１６—５１８

ＨＰＬＣ法同时测定鲜鱼腥草不同部位８个活性成分的含量

孟

江１，周毅生１，赵中振２，董小萍３。

（１广东药学院中药学院，广东５１０００６；２香港浸会大学中医药学院，香港；３成都中医药大学药学院，成都６１００８１）

摘要

目的：同时测定鲜鱼腥草不同药用部位８个活性成分的含量。方法：ＡｌｈｉｍａＣ，。柱（７．５

ｍｌＴＩＸ４．６

ｆｉｌｍ，５舯），流

动相：０．２％的冰乙酸溶液（Ａ），乙腈（Ｂ），梯度洗脱：０～２０ｍｉｎ，５％～２０％Ｂ：２０～４０ｍｉｎ．２０％～２０．５％Ｂ；４０～５０ｍｉｎ，２０．５％

～３５％Ｂ；５０～９０

ｍｉｎ，３５％～９０％Ｂ；流速：０．６ｍＬ／ｍＪｎ；检测波长：２８０肿１。结果：表明不同药用部位含量不同。结论：该法简

便、准确、分离效果好，适用于鱼腥草的质量控制。

关键词

鲜鱼腥草；ＨＰＬＣ；不同部位；含量测定

中图分类号Ｒ９１７；Ｒ２８４．１

文献标识码Ａ

文章编号１０００—５０４８（２００－Ｉ）０６—０５１６—０３

ＳｉｍｕＩｔａｎｅｏｕｓ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ

ｅｉｇｈｔ

ｂｉｏａｃｔｉｖｅ

ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ

ｉｎ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆｆｒｅｓｈＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａｂｙＨＰＬＣ

ＭＥＮＧ４

Ｊｉａｎ９１，ＺＨＯＵＹｉ－ｓｈｅｎ９１，ＺＨＡＯＺｈｏｎｇ－ｚｈｅｎ２，ＤＯＮＧＸｉａｏ．ｐｉｎ９３

７

Ｓｃｈｏｏｌ

ｏｆＴｒａｄｉｔ幻ｎａｌ

Ｃｈｉｎｅｓｅ

Ｍｅｄ瑟ｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ

Ｐｈｅｕｔｉｃａｌ

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６；

２Ｓｃｈｏｏｌ

ｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ

Ｂａｐｔ蠡ｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ；

３ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００８１，Ｃｈｉｎａ

Ａｂｓｔｒａｃｔ

Ａｉｍ：Ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｔｈｅｅｉｇｈｔｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｐａｒｔｓ

ｏｆｆｒｅｓｈＨｏｕｔｔｕｙｎｉａ

ｃｏｒｄａｔａｂｙＨＰＩＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｔ｝ｌｅｅｉｇｈｔｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｏｎａＡｌｈｉｍａ

Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ．，ｎＩｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆ（Ａ）０．２％ａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｎｄ（Ｂ）ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｕｓｉｎｇａ

ｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍ

ｗｈｉｃｈｗａｓｓｅｔ

ｔｏ

２０％（Ｂ）ｉｎ０～２０ｍｉｎ，２０％～２０．５％（Ｂ）ｉｎ２０～４０ｍｉｎ，２０．５％．３５％（Ｂ）ｉｎ４０～５０ｍｉｎ，ａｎｄ

３５％～９０％（Ｂ）ｉｎ５０～９０ｍｉｎ．７ｎｅｆｌｏｗ

ｒａｔｅ

ｗａｓ

０．６ｍｌＪｍｉｎ

ｍａｄｔｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎ对ｈｗａｓ２８０ｎｍ．

Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｔｈｅｅｉｇｈｔｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＨ．ｃｏｒｄａｔａｗｅｒｅｆｏｕｎｄｔｏｂｅｖａｒｉｅｄ．

Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ．ｄｅｖｅｌｏｐｅｄｍｅｔｈｏｄｉＳｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｍｔｅ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ，ａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｆｏｒ山ｅｑｕａｌｉｗｃｏｎｔｒｏｌｏｆＨ．ｃｏｒｄａｔａ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ｆｒｅｓｈＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａ：ＨＰＬＣ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔ

ｎｉｓ

ｓｔｕｄｙ

ｗａｓ

ｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＦａｃｕｌｔｙＲｅｓｅａｒｃｈＧｒａｎｔ，ＨｏｎｇＫｏｎｇＢａｐｔｉｓｔ

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＦＲＧ／０３—０４／Ｕ一３９）

鲜鱼腥草为三白草科（Ｓａｕｍｒａｅｅａｅ）蕺菜属植物解ｂ’４１；另外也有以总黄酮、槲皮素、绿原酸为指标

蕺菜（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ

ｃｏｒｄａｔａ

Ｔｈｕｎｂ．）的新鲜全草…，具

来控制质量ｂ刮。但这些方法不具有专属性，且单有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋的功效。主要用一组分也不能完全客观的反映鱼腥草的质量。

于肺脓疡、痰热咳嗽、热痢热淋、痈疮肿毒１２。。鱼腥现代药理研究表明鱼腥草中的黄酮类化合物草及其制剂广泛应用于临床。国内外关于鱼腥草具有抗肿瘤、抗氧化、抗诱变和清除自由基等功能；质量分析研究很多，《中华人民共和国药典》（２００５生物碱类具有显著的抗血小板聚集及细胞毒等作年版）以甲基正壬酮为标准品用薄层色谱法来定性用；绿原酸具有解热和抗菌等作用。因此本文建立

控制鱼腥草的质量；也有以挥发油的总量或浸出物

同时测定鱼腥草中酚类、黄酮类、生物碱类的８个的量为指标，但挥发油成分不稳定，易氧化分

成分含量的方法，以期为鱼腥草及其制剂的质量控

收稿日期２００７．１０—０８’通讯作者Ｔｅｌ：０２８—８８８４８３８８Ｅ－ｍａｉｌ：ｊ９５７９ｃＬｘｐ＠１６３．ｃｏｎ

．基金项目

香港浸会大学基金资助项目（ＦＲＧ／０３—０４／１Ｉ．３９）

万　

方数据

第６期

孟江等：ＨＰＬＣ法同时测定鲜鱼腥草不同部位８个活性成分的含量

５１７

制和合理有效的开发提供科学依据。

１材料１．１

仪器

Ａｇｉｌｅｎｔ１１００

ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪（美国安捷

伦科技公司），色谱数据处理由Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作站

完成。Ｍｉｌｌｉ—Ｑ纯净水发生器（美国密理博公司）；１８７５ＨＴＡＧ超声波提取器（美国思博明公司）；ＡＢ２０４一Ｎ电子分析天平（梅特勒一托利多公司）。

１．２试剂

甲醇（分析纯），冰乙酸、乙腈（色谱纯）均由德国默克公司提供。．

化学对照品：绿原酸（１），槲皮素一３一ｏ－ｇ－ｏ一半乳

糖一７．Ｏ－ｆｉ－Ｄ一葡萄糖苷（２），槲皮素一３．Ｏ－（一Ｄ，鼠李糖

一７一Ｏ－』８－Ｄ．葡萄糖苷（３），芸香苷（４），金丝桃苷（５），

槲皮苷（６），胡椒内酰胺（７），金线吊乌龟二酮碱Ｂ

（８）均由本实验室分离纯化得到，其纯度达到９６％以上，分离纯化及结构鉴定已另文发表睛’９ｊ。

ｌ，３药材

鲜鱼腥草药材采白广东肇庆。经香港浸会大学赵中振教授鉴定为三白草科蕺菜属植物Ｈｏｕｔ—

ｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａＴｈｕｎｂ．。

２方法与结果

２．１色谱条件

色谱柱：ＡｌｌｔｉｍａＣ∽５脚，７．５

ｍｍ×４．６

ｍｍ（保护柱）加４．６

ｍｍ×１５０

ｎ瑚（分析柱）。柱温：室温；

流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ；流动相：０．２％冰乙酸溶液（Ａ）和乙腈（Ｂ），梯度洗脱：０～２０

ｍｉｎ，５％～２０％Ｂ；２０～４０

ｍｉｎ，２０％～２０．５％Ｂ；４０～５０ｍｉｎ，２０．５％～３５％Ｂ；

５０～９０

ｍｉｎ，３５％～９０％Ｂ；检测波长：２８０ｎｍ；进样

量：１０弘Ｌｏ

２．２标准曲线的制备

分别精密称取各标准品适量，制成每毫升含

０．２

ｍｇ的甲醇溶液。取８个不同浓度的对照品溶

液分别进样ｌＯ皿，按上述色谱条件测定峰面积。

结果以进样浓度（Ｃ）为横坐标，以峰面积值（Ａ）为纵坐标进行线性回归，得到８个标准品的回归方程，结果见表１。

２．３样品溶液的制备

精密称取各样品粉末０．５ｇ，置５０ｍＬ量瓶中，

加７０％甲醇至刻度，摇匀，超声３０ｍｉｎ，室温放置

万　

方数据３０

ｒａｉｎ，过滤。取滤液２ｍＬ，０．２牲ｍ微孔滤膜滤过，

进样１０止。

Ｔａｂ．１

Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｆｏｒｍｅｔｈｏｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

１：Ｃｈｌｏｒｏｇｅ『Ｉｆｉｃａｃｉｄ；２：Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３一口口一Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一７－ＤｐＤ—ｇｌｕｃｏ—

ｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ；３：Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ

３—０一ｆ—ｂｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ～７一ｏ－ｇ－Ｄ・ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏ—

ｓｉｄｅ；４：Ｒｎｔｉｎ；￥：Ｈｙｐｅｆｉｎ；６：Ｑｕｅｍｉｔｆｉｎ；７：ＰｉｐｅｒｏｌａｃｔａｍＡ；８：Ｃｅｐｈａｒａｄｉｏｎｅ

Ｂ

２．４精密度试验

取鱼腥草的同一供试品溶液，连续进样５次，按“２．１”项下条件测定含量。结果各标准品含量的ＲＳＤ均小于２．６７％，表明精密度良好。２．５稳定性试验

取鱼腥草的同一供试品溶液，在前述色谱条件

下分别在０，２，４，８，２４ｈ进样１０曲，按上述色谱条件测定含量，各标准品含量的ＲＳＤ均小于３．０ｌ％。结果表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。２．６重复性试验

取鱼腥草的同一供试品重复提取５份，按上述

色谱条件测定含量，结果各标准品含量的ＲＳＤ均

小于２．９７％，表明重复性良好。

２．７回收率试验

取已知含量的鱼腥草药材０．５ｇ，精密称定，分别精密加入对照品适量，按供试品项下方法制备，测定各标准品的含量，计算回收率，结果见表２。

Ｔａｂ．２

Ｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｔｈｅｅｉｇｈｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ｎ＝３）

２．８样品测定

精密称取各样品Ｏ．５ｇ，按“２．３”项下方法制备供

５１８

中阅善科天誊学报

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｎＰｌｕｚｒｍａｃｅｕｔｉｃ甜Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

第３８卷

薹兰蓄雾≥鬈霁霎墓羹慧霎兰３鬻磊詈１，’３讨论

通过回归方程计算含量，结果见表，色谱图见图。

。

”“

Ｔａｂ．３

Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ

ｅｉ曲ｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓ

ｉｎｄ＿ｆｆｅｒｅｎｌｐａｒｔｓｏｆＨ．ｃｏｒｄａｔａ

ＮＤ：ｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄ

Ｂ

一止一ｉ

１

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６

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：。—。～—上～。一～

１０

２０

３０

４０５０

６０

７０

ｔ／ｍｉｎ

Ｆｉｇ．１

ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＨ．ａｎｄｍｉｘｅｄｓｔａｎｄａｒｄ

ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ

Ａ：Ｍｉｘｅｄｓｔａｎｄａｒｄｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ；Ｂ：Ｈｅｒｂ：Ｃ：Ｌｅａｆ；Ｄ：Ｓｔｅｍ；Ｅ：Ｒｏｏｔ１：Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ

ａｃｉｄ；２：Ｑｕｅｒｅｅｔｉｎ

３－口ｐＤ－列ａｃｔｏｐ卿ｙｔ－７一ＤｐＤ－ｇｌｕｃｏ—

ｐｙｒａｎｅｓｉｄｅ；３：Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３－Ｏ－（一Ｌ－ｒｈａｎｍｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ一７一Ｄ肛Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏ－ｓｉｄｅ；４：Ｒｕｔｉｎ；５：Ｈｙｐｅｒｉｎ；６：Ｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎ；７：Ｐｉｐｅｒｏｌａｃ。ｔａｍＡ；８：Ｃｅｐｈａｒａｄｉｏｎｅ

Ｂ

万　

方数据１）本文首次建立了ＨＰＩＥ同时测定鲜鱼腥草８个活性成分含量的方法，该方法简便、快速、灵敏，可用于鱼腥草的质量控制。不同部位鲜鱼腥草各成分的含量不同，叶中各成分含量均最高，其次是全草，茎次之，根中含成分最少且含量最低。

２）８个成分分别为酚类、生物碱和黄酮类化合物，为此本文分别考察了提取溶剂（甲醇、乙醇、水）、提取方法（回流提取、超声）、提取时问（２０，３０，

６０

ｍａｎ）和提取溶剂浓度（３０％、５０％、７０％、９０％甲

醇）对含量测定的影响。结果显示：７０％甲醇超声

提取３０ｍｉｎ，８个标准品含量均较高，峰形好且分离的较好，且提取方便、效率高。

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HPLC法同时测定鲜鱼腥草不同部位8个活性成分的含量

作者：作者单位：

孟江， 周毅生， 赵中振， 董小萍， MENG Jiang， ZHOU Yi-sheng， ZHAO Zhong-zhen， DONG Xiao-ping

孟江,周毅生,MENG Jiang,ZHOU Yi-sheng(广东药学院中药学院,广东,510006)， 赵中振,ZHAO Zhong-zhen(香港浸会大学中医药学院,香港)， 董小萍,DONG Xiao-ping(成都中医药大学药学院,成都,610081)

中国药科大学学报

JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY2007,38(6)

刊名：英文刊名：年，卷(期)：

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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgyaokdxxb200706008.aspx