1、血涂片制备
将一滴血液滴在干净的载玻片上,用另一张载玻片边缘与其接触,呈30°角拉回与血液接触。当血液蔓延至接近玻片的宽度时,将玻片平稳快速地向前推出。将玻片在空中轻轻会动,快速风干。
2、血涂片染色
采用瑞氏染色法。本法的特点是将固定和染色合并在一起进行,手续简便,染色时间短,对白细胞特异性颗粒着色较好,但对核的着色略差。
瑞氏染料是由酸性染料伊红(使细胞的碱性成分染成红色,如血红蛋白和嗜酸性颗粒)和碱性染料亚甲蓝(使细胞的酸性成分染成蓝色,如白细胞)组成的复合染料。
(1)用蜡笔在血膜两头划线,以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上。
(2)用瑞氏染液3~5滴覆盖整个血膜,固定细胞0.5~1分钟。
(3)滴加等量或稍多的缓冲液(pH6.4~6.8的磷酸盐缓冲液,其作用是使染色环境维持在弱酸性,达到最佳的染色效果),用吸球将其与染液吸匀,或者摇动玻片染色5~10分钟。
(4)慢慢摇动玻片,然后用流动水从玻片的一侧冲去染液,待血片自然干燥后(或用滤纸吸干),即可镜检。
3、染色效果
正常情况:血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下,成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚,并显示出各种细胞特有的色彩,细胞核染紫红色,核染色质结构清楚。
附:瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm或1g
甲醇(AR) 500ml或600ml
1)先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。
2)再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。
3)存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳。
1、血涂片制备
将一滴血液滴在干净的载玻片上,用另一张载玻片边缘与其接触,呈30°角拉回与血液接触。当血液蔓延至接近玻片的宽度时,将玻片平稳快速地向前推出。将玻片在空中轻轻会动,快速风干。
2、血涂片染色
采用瑞氏染色法。本法的特点是将固定和染色合并在一起进行,手续简便,染色时间短,对白细胞特异性颗粒着色较好,但对核的着色略差。
瑞氏染料是由酸性染料伊红(使细胞的碱性成分染成红色,如血红蛋白和嗜酸性颗粒)和碱性染料亚甲蓝(使细胞的酸性成分染成蓝色,如白细胞)组成的复合染料。
(1)用蜡笔在血膜两头划线,以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上。
(2)用瑞氏染液3~5滴覆盖整个血膜,固定细胞0.5~1分钟。
(3)滴加等量或稍多的缓冲液(pH6.4~6.8的磷酸盐缓冲液,其作用是使染色环境维持在弱酸性,达到最佳的染色效果),用吸球将其与染液吸匀,或者摇动玻片染色5~10分钟。
(4)慢慢摇动玻片,然后用流动水从玻片的一侧冲去染液,待血片自然干燥后(或用滤纸吸干),即可镜检。
3、染色效果
正常情况:血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下,成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚,并显示出各种细胞特有的色彩,细胞核染紫红色,核染色质结构清楚。
附:瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm或1g
甲醇(AR) 500ml或600ml
1)先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。
2)再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。
3)存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳。