实验一 血糖的测定
一、实验目的
1. 掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理和方法。 2. 了解糖含量测定的其它方法。 二、实验设备及材料 1. 所需试剂:
（1）葡萄糖标准校准液：（2）磷酸氢二钠（3）磷酸二氢钠（3）葡萄糖氧化酶（4）过氧化物酶（5）4-氨基安替比林（6）NaCl （7）蒸馏水（8）苯酚 2. 仪器
1） 岛津分光光度计（UV-2550）2） 比色杯3） 试管及试管架4） 能精确分配20ul 到2ml 容积的移液枪5） 能维持37±1℃的水浴锅6） 定时器7） 振荡器8） 镜头纸 三、实验原理、内容、步骤
1. 原理：葡萄糖在葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和显色剂在过氧化物酶存在下反应形成一个有颜色的产物。500nm 检测生成的醌亚胺颜色，对照标准可计算出葡萄糖的含量。
葡萄糖氧化酶
葡萄糖+O2十H2O ――――――→葡萄糖酸+H202 过氧化物酶
H2O2 + 4-氨基安替比林+酚―――—→醌亚胺+4H20
2. 基本试剂配制
（1）100mmo1/L,pH7.5的磷酸缓冲液，2-8℃保存，有效期6个月。 3. 实验试剂配制
R1：磷酸盐-苯酚缓冲液：溶解苯酚到（1）液中，使苯酚浓度达到l0mmol/L，2-8℃保存，有效期6个月。购自国药集团。
R2：指示剂-酶混合液：溶解葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林到（1）液中，使葡萄糖氧化酶达到16000U/L，过氧化物酶达到1000U/L，4-氨基安替比林达到2.0mmol/L ，2-8℃保存，有效期6个月。购自国药集团。 4. 实验步骤
（1）分光光度计应当在测定前一个小时打开；启动软件，待机器自检完成后，选择“标准曲线”模式，设定500nm 。
（2）取试管3只，按下表取相应的试剂和样品液，混匀，置37℃水浴10分钟以上。
（3）以空白管校零，读取各管的吸光度A 。 四、实验记录、数据处理与分析 1. 记录（列表） 2、计算
GLU 浓度(mmol/L)=(测定A/校准A) *校准物浓度
问题：
常用糖含量测定的其它方法有哪几种？
实验三 溶菌酶活力测定
实验目的
1. 熟悉用菌悬液测定溶菌酶活力的原理和方法。 2. 学习计算酶活力。 二、实验设备及材料 1. 所需试剂:
（1）干菌粉: 2-8℃干燥保存，有效期6个月。购自南京建成公司。 （2）磷酸氢二钠（3）磷酸二氢钠
（3）溶菌酶结晶样品（来自鸡蛋）:粉剂2mg×1支，2-8℃干燥保存，有效期6个月。购自南京建成公司。（4）蒸馏水 2. 仪器
1） 岛津分光光度计（UV-2550）2） 比色杯3） 试管及试管架，18 mm×150 mm 4） 能精确分配20ul 到2ml 容积的移液枪5） 能维持37±1℃的水浴锅6）定时器 7）振荡器8）镜头纸 9）匀浆管 三、实验原理、内容、步骤
1. 原理：溶菌酶作用于粘多糖，使其糖苷键水解，因此可以溶解以粘多糖为主要成分的细菌细胞壁。在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上粘多糖使细菌裂解而浓度降低，菌悬液透明度增加。透明度增加的程度与溶菌酶的活力成正比，故可以根据浊度变化来推测溶菌酶的含量。因此，利用测定530毫微米波长下，菌悬液在该酶作用后透光度增加，以此表示溶菌酶的活力。 2. 基本试剂配制
（1）0.1M,pH6.2的磷酸缓冲液（菌粉溶剂）,2-8℃保存，有效期6个月。 3. 实验试剂配制 （1）底物的配制:
称取干菌粉5毫克，加人少量0.1M,pH6.2的磷酸缓冲液，在匀浆器内研磨3分钟，倾出，稀释到20毫升（0.25mg 菌/ml），此时菌悬液在530毫微米波长下的透光度读数应在20-30％范围内。
（2）酶液（标准品）的配制:
酶的贮存液:准确称取2毫克溶菌酶结晶样品，准确加0.1M,pH6.2的磷酸缓冲液1.0m1配成2mg/ml的标准品贮备液。2-8℃保存，可保存7-10天。
酶的应用液:临用前再将酶的贮存液稀释200倍（贮备液:蒸馏水=1：199），使达到10微克/毫升（即200U/ml）。需多少配多少。2-8℃保存，可保存7-10天。 4. 实验步骤
（1）分光光度计应当在测定前一个小时打开；启动软件，待机器自检完成后，选择“动力学”模式，设定530nm ，每2秒读一次值，共反应2分钟。25℃室温。
（2）将配制好的应用菌液、酶应用液放入37℃水浴箱中预温5分钟以上，使菌液、标准液及检测样本的温度达到37℃。
（3）取试管2只，放到37℃水浴箱中，在试管中各加应用菌液2ml 继续水浴。
（4）取2只1cm 光径的比色皿，用底物液调零，然后倒掉测定杯；将37℃水浴箱中预温试管里的2m1应用菌液加入测定杯中，然后快速迅速倒入酶应用液0.2ml 。过30秒左右启动Start 按钮，机器每2秒自动记录O.D 值。
注意:用同一比色皿每检测一个样本后均要用蒸馏水冲洗干净，才可以再放第二个样本或溶菌酶标准品应用液。
四、实验记录、数据处理与分析 1. 记录（列表） 2、酶活力的计算
（打印出图粘贴：以Time 为横坐标，测定样本和酶标准样的ABS 值为纵坐标在EXCEl 软件中做散点图，然后选中图线，点击右键选择趋势线格式，点击类型选择线性，点击选项选择自动设置、显示公式和显示R2值。） 活力单位的定义是:37℃,pH6.2，波长于530毫微米时，每分钟引起菌悬液透光度上升0.02％的酶量为1个酶活力单位。
每毫克的酶活力单位数则依下式计算:
直线部分透光度增加%
u/毫克酶=
酶样品的微克数x 测定的时间(分) ×0.02%
实验一 血糖的测定
一、实验目的
1. 掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理和方法。 2. 了解糖含量测定的其它方法。 二、实验设备及材料 1. 所需试剂:
（1）葡萄糖标准校准液：（2）磷酸氢二钠（3）磷酸二氢钠（3）葡萄糖氧化酶（4）过氧化物酶（5）4-氨基安替比林（6）NaCl （7）蒸馏水（8）苯酚 2. 仪器
1） 岛津分光光度计（UV-2550）2） 比色杯3） 试管及试管架4） 能精确分配20ul 到2ml 容积的移液枪5） 能维持37±1℃的水浴锅6） 定时器7） 振荡器8） 镜头纸 三、实验原理、内容、步骤
1. 原理：葡萄糖在葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和显色剂在过氧化物酶存在下反应形成一个有颜色的产物。500nm 检测生成的醌亚胺颜色，对照标准可计算出葡萄糖的含量。
葡萄糖氧化酶
葡萄糖+O2十H2O ――――――→葡萄糖酸+H202 过氧化物酶
H2O2 + 4-氨基安替比林+酚―――—→醌亚胺+4H20
2. 基本试剂配制
（1）100mmo1/L,pH7.5的磷酸缓冲液，2-8℃保存，有效期6个月。 3. 实验试剂配制
R1：磷酸盐-苯酚缓冲液：溶解苯酚到（1）液中，使苯酚浓度达到l0mmol/L，2-8℃保存，有效期6个月。购自国药集团。
R2：指示剂-酶混合液：溶解葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林到（1）液中，使葡萄糖氧化酶达到16000U/L，过氧化物酶达到1000U/L，4-氨基安替比林达到2.0mmol/L ，2-8℃保存，有效期6个月。购自国药集团。 4. 实验步骤
（1）分光光度计应当在测定前一个小时打开；启动软件，待机器自检完成后，选择“标准曲线”模式，设定500nm 。
（2）取试管3只，按下表取相应的试剂和样品液，混匀，置37℃水浴10分钟以上。
（3）以空白管校零，读取各管的吸光度A 。 四、实验记录、数据处理与分析 1. 记录（列表） 2、计算
GLU 浓度(mmol/L)=(测定A/校准A) *校准物浓度
问题：
常用糖含量测定的其它方法有哪几种？
实验三 溶菌酶活力测定
实验目的
1. 熟悉用菌悬液测定溶菌酶活力的原理和方法。 2. 学习计算酶活力。 二、实验设备及材料 1. 所需试剂:
（1）干菌粉: 2-8℃干燥保存，有效期6个月。购自南京建成公司。 （2）磷酸氢二钠（3）磷酸二氢钠
（3）溶菌酶结晶样品（来自鸡蛋）:粉剂2mg×1支，2-8℃干燥保存，有效期6个月。购自南京建成公司。（4）蒸馏水 2. 仪器
1） 岛津分光光度计（UV-2550）2） 比色杯3） 试管及试管架，18 mm×150 mm 4） 能精确分配20ul 到2ml 容积的移液枪5） 能维持37±1℃的水浴锅6）定时器 7）振荡器8）镜头纸 9）匀浆管 三、实验原理、内容、步骤
1. 原理：溶菌酶作用于粘多糖，使其糖苷键水解，因此可以溶解以粘多糖为主要成分的细菌细胞壁。在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上粘多糖使细菌裂解而浓度降低，菌悬液透明度增加。透明度增加的程度与溶菌酶的活力成正比，故可以根据浊度变化来推测溶菌酶的含量。因此，利用测定530毫微米波长下，菌悬液在该酶作用后透光度增加，以此表示溶菌酶的活力。 2. 基本试剂配制
（1）0.1M,pH6.2的磷酸缓冲液（菌粉溶剂）,2-8℃保存，有效期6个月。 3. 实验试剂配制 （1）底物的配制:
称取干菌粉5毫克，加人少量0.1M,pH6.2的磷酸缓冲液，在匀浆器内研磨3分钟，倾出，稀释到20毫升（0.25mg 菌/ml），此时菌悬液在530毫微米波长下的透光度读数应在20-30％范围内。
（2）酶液（标准品）的配制:
酶的贮存液:准确称取2毫克溶菌酶结晶样品，准确加0.1M,pH6.2的磷酸缓冲液1.0m1配成2mg/ml的标准品贮备液。2-8℃保存，可保存7-10天。
酶的应用液:临用前再将酶的贮存液稀释200倍（贮备液:蒸馏水=1：199），使达到10微克/毫升（即200U/ml）。需多少配多少。2-8℃保存，可保存7-10天。 4. 实验步骤
（1）分光光度计应当在测定前一个小时打开；启动软件，待机器自检完成后，选择“动力学”模式，设定530nm ，每2秒读一次值，共反应2分钟。25℃室温。
（2）将配制好的应用菌液、酶应用液放入37℃水浴箱中预温5分钟以上，使菌液、标准液及检测样本的温度达到37℃。
（3）取试管2只，放到37℃水浴箱中，在试管中各加应用菌液2ml 继续水浴。
（4）取2只1cm 光径的比色皿，用底物液调零，然后倒掉测定杯；将37℃水浴箱中预温试管里的2m1应用菌液加入测定杯中，然后快速迅速倒入酶应用液0.2ml 。过30秒左右启动Start 按钮，机器每2秒自动记录O.D 值。
注意:用同一比色皿每检测一个样本后均要用蒸馏水冲洗干净，才可以再放第二个样本或溶菌酶标准品应用液。
四、实验记录、数据处理与分析 1. 记录（列表） 2、酶活力的计算
（打印出图粘贴：以Time 为横坐标，测定样本和酶标准样的ABS 值为纵坐标在EXCEl 软件中做散点图，然后选中图线，点击右键选择趋势线格式，点击类型选择线性，点击选项选择自动设置、显示公式和显示R2值。） 活力单位的定义是:37℃,pH6.2，波长于530毫微米时，每分钟引起菌悬液透光度上升0.02％的酶量为1个酶活力单位。
每毫克的酶活力单位数则依下式计算:
直线部分透光度增加%
u/毫克酶=
酶样品的微克数x 测定的时间(分) ×0.02%