药用广藿香挥发油提取物专属性鉴别方法研究

第35卷第17期2010年9月

Vo l 35, Iss u e 17Sep te mb er , 2010

药用广藿香挥发油提取物专属性鉴别方法研究

程雪宁, 张宏武, 杨立伟, 林志蓉, 邹忠梅, 喻长远

(1 北京化工大学生命科学与技术学院, 北京100029; 2 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所, 北京100193;

3 广东省药检所, 广州广东510180)

[摘要] 目的:建立广藿香油专属性鉴别方法。方法:采用气相色谱法, 以百秋李醇和广藿香酮为对照品, 建立气相色谱指纹图谱。结果:气相色谱指纹图谱, 12批样品的相似度好, 可用于广藿香油的特征鉴别。结论:气相色谱指纹图谱可用于广藿香挥发油的专属性鉴别。

[关键词] 广藿香; 广藿香油; 专属性鉴别方法; 气相色谱; 指纹图谱

1

2

3

3

2*

1*

广藿香Pogoste m on cabli n (B lanco ) Benth 为常用中药之一, 具有芳香化浊、开胃止呕, 发表解暑之功效

[1]

1 材料

Ag ilent 6890GC 气相色谱仪, A gilent FI D 检测器, A g ilent DB 5GC 色谱柱(0 25mm #30m, 0 25 m ), AT201型电子天平[1/10万, 梅特勒 托利多仪器(上海) 有限公司]。

纯氮气, 正己烷(色谱纯), 百秋李醇对照品(中国药品生物制品检定所, 98%, 批号110772 200404), 广藿香酮对照品(自制, 纯度98%) 。

广藿香油样品S11和S12按 中国药典 2005年版挥发油测定甲法制备, 药材采自广东高要; 样品S1 S10分别来自6家制药公司, 批号分别为070316, 080116, 080306, 070401, 071201, 080303, 080322, 080422, 081001, 090108。2 方法和结果

2 1 气相色谱指纹图谱的测定

2 1 1 色谱条件 Ag il e nt DB 5GC 色谱柱(0 25mm #30m , 0 25 m ); 载气为高纯氮气(N2), 进样量1 L , 分流比10∃1, 检测器温度280%, 气化室温度250%, 柱前压8 77Pa , 尾吹气流量30 0mL &m i n , 氢气流量40 0mL &m in , 空气流量450mL &m i n ; 升温程序初温80%, 保持2m i n , 以5%&m i n 升温至200%, 保持2m i n , 再以8%&m i n 升温至280%, 保持5m i n 。2 1 2 供试品溶液制备 精密称定广藿香挥发油提取物0 1g 置于10mL 的量瓶中, 用正己烷定容作为供试品溶液。

2 1 3 对照品溶液的制备 取百秋李醇对照品适量, 加正己烷配制成每1mL 含2m g 的溶液, 作为对照品溶液。

-1

-1

-1

-1-1

。除了配方使用外, 广藿香还是30余种中成药

如! 藿香正气丸(水) ∀、! 抗病毒口服液∀和! 藿胆

[2]

丸∀等的重要组成药物。其挥发性成分广藿香油(patchou li o il) 由水蒸气蒸馏而得, 是抗菌的有效成分

[3]

, 此外广藿香油还可以作为化妆品、定香剂和

[4]

杀虫剂等的生产配料。广藿香油作为提取物首次收载于2005年版 中国药典 , 并规定百秋李醇(patchou li a lcoho l) 含量不得少于26%。但是, 广藿香油中还含有广藿香酮(pogostone ) 、丁香烯(car yophyllene) 、广藿香烯(patchoulene) 、愈创木烯(guaiene) 等

[5 6]

, 据文献报道广藿香酮对白色念珠

菌、新型隐球菌、黑根霉菌等具有明显的抑制作用, 对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌等细菌亦具

[7]

有抑制作用, 是很好的药物成分, 且已有研究表明广藿香酮含量高的药材, 与传统方法评价优质广藿香药材结果相吻合, 表明广藿香酮也是评价广藿

[8]

香及广藿香油质量的重要指标, 但缺乏相应的鉴别方法。本文利用气相指纹图谱方法, 建立了广藿香油的专属性鉴别方法, 为广藿香油的质量评价提供了科学依据。

[稿件编号] [1**********]

[基金项目] 中国药典 2010年版一部标准研究课题(TS 24); 国家科技支撑计划项目(2007BAI27B06) [通信作者] 163. co m

*

邹忠梅, Te:l (010) 62899756, E m ai :l z m z ou@i m p

l ad ac cn ; *喻长远, Te:l (010) 62899756, E m ai:l ch engxuen ing2003@

第35卷第17期2010年9月

Vo l 35, Iss u e 17Sep te mb er , 2010

2 1 4 精密度试验 取同一份广藿香油供试品溶

液连续进样6次, 比较共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积, 各共有指纹峰的相对保留时间RSD

2 1 6 重复性试验 取同一批广藿香油样品6份按供试品溶液制备方法分别制备, 比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积, 相对保留时间RSD

。

2 1 8 指纹图谱相似性评价 以百秋李醇为参照

物, 测定并记录12批样品色谱图, 见图2。

图2 12批广藿香油气相色谱图

根据12批广藿香挥发油提取物样品的共有性和各色谱峰相对保留时间的一致性, 共确定了12个共有峰。t R =47 94m i n 的峰为百秋李醇, 其面积较稳定, 且分离度好, 设为参照峰S , 将各共有色谱峰保留时间和峰面积与同一图谱中参照峰的保留时间和峰面积相比, 其比值为各共有峰的相对保留时间和相对峰面积, 见表1。可以看出, 相对含量较高的组分除11号峰外, 还有1, 5, 6, 7, 9号峰。

采用国家药典委员会! 中药色谱指纹图谱相似性评价系统A ∀对所得的广藿香油提取物GC 指纹图谱全谱进行相似度计算, 结果表明, 12批广藿香油提取物相似度均超过了0 9。3 讨论

广藿香油提取物GC 指纹图谱中可以分离出30

A 对照品; B 供试品; 11 百缺里醇。

图1 百秋里醇气相色谱峰

多个主要峰, 经比较12批样品的指纹图谱后, 从中选定12个共有峰作为可以构成广藿香油提取物指

表1 12批广藿香油气相指纹图谱特征峰的相对保留时间和相对峰面积

No 1

[1**********]112

相对保留时间0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 1. [***********][***********]

0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. S[***********][***********]0

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0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. 相对峰面积

S[***********][***********]0

0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. S[***********][***********]7

0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. S[***********][***********]0

S100. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. [***********][***********]

S110. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. [***********][***********]

0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. S[***********][***********]17

均值0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. [***********][***********]

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第35卷第17期2010年9月

Vo l 35, Iss u e 17Sep te mb er , 2010

纹图谱的稳定特征峰, 标准指纹图谱见图2, 为易于

辨认和分析, 可将指纹图谱分为3个区, 主峰区(∋区):出现6个特征峰(1~6号峰), 均达到基线分离, 其中有4个主峰, 最强峰为5号峰, 其次1, 4, 6号峰为次强峰, 从时间上看该6个峰占了指纹图谱的前半段。特征峰区((区):该区有5个特征峰(7~11号峰), 其图谱的特征性很直观, 第7号峰与它周围的小峰连接紧密, 未完全分离, 构成了形似佛手瓜的! 五指峰∀峰群。指纹区() ):在图谱上位于特征峰区以后, 主要为一些细小的指纹峰, 广藿香酮在该区(12号峰), 但是不同的样品含量有很大的差别。

本研究在测试条件方面经过大量的实验摸索, 通过系列方法学考察建立了广藿香油GC 色谱特征指纹图谱, 方法简单, 可操作性强, 从相似度分析12批样品相似度很接近, 可用于广藿香油提取物的鉴别; 同时广藿香药材中含有多种萜类和酮类成分

[7, 9]

息, 以便能从整体上把握其特征, 从而保证鉴别的可

靠性, 由于不同的色谱柱所获得的色谱图可能不同, 反映出来的特征也不完全一样, 因此本实验选用OV 1701, H P 25和Ag ilent DB 5气相色谱柱, 结果Ag il e ntDB 5色谱柱提供的色谱峰最多, 故选择Ag i lent D B 5GC 弹性石英毛细管柱。

[参考文献]

[1] 中国药典 一部[S].2005:172

[2] 肖翔林, 龙膺西. 近年来广藿香的研究概况[J].中药材, 2004,

27(6):456

[3] 苏镜娱, 张广文, 李核, 等. 广藿香精油化学成分分析与抗菌活

性研究(∋) [J]. 中草药, 2001, 32(3):204

[4] 李锦开, 李振江. 中国木本药材广东特产药材. [M]. 北京:中

国医药科技出版社, 1994:380

[5] 张广文, 蓝文键, 苏镜娱, 等. 广藿香精油化学成分分析及其抗

菌活性(() [J] 中草药, 2002, 33(3):210

[6] 曾志, 谭丽贤, 蒙绍金, 等. 广藿香化学成分和指纹图谱研究

[J]. 分析化学, 2006, 9(34):1249

[7] 杜一民, 陈汝筑, 胡本荣. 广藿香的化学成分及其药理作用研

究进展[J].中药新药与临床药理, 1998, 9(4):238

[8] 李薇, 魏刚, 潘超美, 等. 广藿香药材挥发油及主要成分含量影

响因素的考察[J ].中国中药杂志, 2004, 29(1):28 [9]

Itoka w a H, Suto K , T akeya K S t ud i es on a novel cou m aroyl gl u coside of ap i gen i n and on other flavon oi ds is olat ed fro m pat chouli (lab i atae) [J] Che m Phar m Bul, l 1981, 29(1):254

, 在相同的色谱条件下, 这些成分的色谱峰顺

序和相对保留时间在一定的时间范围内是固定的, 因此可以很好的鉴别广藿香油的真伪优劣, 为广藿

香药材的质量控制提供了科学依据, 也为含广藿香油制剂制定指纹图谱奠定基础。

作为中药色谱指纹谱, 其测定的方法不仅要简单、准确, 同时要尽可能多地反映出药品的内在信

Identificati on m ethod w ith si gn ificant specificity of

volatile oil of Pogoste mon cabli n

CHENG Xueni ng 1, 2, Z HANG H ongw u 2, YANG L i w ei 3, L I N Z hirong 3,

ZOU Z hongm ei 2*, YU Changyuan 1*

(1 Institute of L i fe Science and B iotechnology, Beijing Uni versity of Che m ical T echno logy, B eijing 100029, Ch i na ;

2 Institute of M e d ici nal P lant D evelopm ent , Ch i nese A cade my of M edical Sciences ﹠Pek ing

Union M e d ical Co llege , B eij i ng 100093, China; 3 Guangdong Institute for D rug C ontro l , Guangzhou 510180, Ch i na) [Abstract] O bjective :T o dev elop an i dentifica ti on m ethod w ith sign ifi cant spec ifi c ity f o r patchou li o i. l M e thod :The fi nge r pr i nt was per f o r m ed by gas chroma t og raphy w it h pa tchou li alcoho l and pogostone as che m i ca l m arkers . R esult :T he s i m il ar ity o f 12sa m ples w ere h i gher t han 0. 9and it can be used to i dentify the charac teristics of patchouli o i. l Con clusi on :T he GC fi ngerpri nt can be used for i den tificati on of patchouli o i. l

[K ey words] Pogo ste mon cablin ; pa tchou l y oi; l i den tificati on m e t hod w it h sign ificant spec ific ity ; GC ;

fingerpri n t

do:i 10. 4268/cjc mm 20101711

[责任编辑 周驰]

第35卷第17期2010年9月

Vo l 35, Iss u e 17Sep te mb er , 2010

药用广藿香挥发油提取物专属性鉴别方法研究

程雪宁, 张宏武, 杨立伟, 林志蓉, 邹忠梅, 喻长远

(1 北京化工大学生命科学与技术学院, 北京100029; 2 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所, 北京100193;

3 广东省药检所, 广州广东510180)

[摘要] 目的:建立广藿香油专属性鉴别方法。方法:采用气相色谱法, 以百秋李醇和广藿香酮为对照品, 建立气相色谱指纹图谱。结果:气相色谱指纹图谱, 12批样品的相似度好, 可用于广藿香油的特征鉴别。结论:气相色谱指纹图谱可用于广藿香挥发油的专属性鉴别。

[关键词] 广藿香; 广藿香油; 专属性鉴别方法; 气相色谱; 指纹图谱

1

2

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1*

广藿香Pogoste m on cabli n (B lanco ) Benth 为常用中药之一, 具有芳香化浊、开胃止呕, 发表解暑之功效

[1]

1 材料

Ag ilent 6890GC 气相色谱仪, A gilent FI D 检测器, A g ilent DB 5GC 色谱柱(0 25mm #30m, 0 25 m ), AT201型电子天平[1/10万, 梅特勒 托利多仪器(上海) 有限公司]。

纯氮气, 正己烷(色谱纯), 百秋李醇对照品(中国药品生物制品检定所, 98%, 批号110772 200404), 广藿香酮对照品(自制, 纯度98%) 。

广藿香油样品S11和S12按 中国药典 2005年版挥发油测定甲法制备, 药材采自广东高要; 样品S1 S10分别来自6家制药公司, 批号分别为070316, 080116, 080306, 070401, 071201, 080303, 080322, 080422, 081001, 090108。2 方法和结果

2 1 气相色谱指纹图谱的测定

2 1 1 色谱条件 Ag il e nt DB 5GC 色谱柱(0 25mm #30m , 0 25 m ); 载气为高纯氮气(N2), 进样量1 L , 分流比10∃1, 检测器温度280%, 气化室温度250%, 柱前压8 77Pa , 尾吹气流量30 0mL &m i n , 氢气流量40 0mL &m in , 空气流量450mL &m i n ; 升温程序初温80%, 保持2m i n , 以5%&m i n 升温至200%, 保持2m i n , 再以8%&m i n 升温至280%, 保持5m i n 。2 1 2 供试品溶液制备 精密称定广藿香挥发油提取物0 1g 置于10mL 的量瓶中, 用正己烷定容作为供试品溶液。

2 1 3 对照品溶液的制备 取百秋李醇对照品适量, 加正己烷配制成每1mL 含2m g 的溶液, 作为对照品溶液。

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。除了配方使用外, 广藿香还是30余种中成药

如! 藿香正气丸(水) ∀、! 抗病毒口服液∀和! 藿胆

[2]

丸∀等的重要组成药物。其挥发性成分广藿香油(patchou li o il) 由水蒸气蒸馏而得, 是抗菌的有效成分

[3]

, 此外广藿香油还可以作为化妆品、定香剂和

[4]

杀虫剂等的生产配料。广藿香油作为提取物首次收载于2005年版 中国药典 , 并规定百秋李醇(patchou li a lcoho l) 含量不得少于26%。但是, 广藿香油中还含有广藿香酮(pogostone ) 、丁香烯(car yophyllene) 、广藿香烯(patchoulene) 、愈创木烯(guaiene) 等

[5 6]

, 据文献报道广藿香酮对白色念珠

菌、新型隐球菌、黑根霉菌等具有明显的抑制作用, 对金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌等细菌亦具

[7]

有抑制作用, 是很好的药物成分, 且已有研究表明广藿香酮含量高的药材, 与传统方法评价优质广藿香药材结果相吻合, 表明广藿香酮也是评价广藿

[8]

香及广藿香油质量的重要指标, 但缺乏相应的鉴别方法。本文利用气相指纹图谱方法, 建立了广藿香油的专属性鉴别方法, 为广藿香油的质量评价提供了科学依据。

[稿件编号] [1**********]

[基金项目] 中国药典 2010年版一部标准研究课题(TS 24); 国家科技支撑计划项目(2007BAI27B06) [通信作者] 163. co m

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邹忠梅, Te:l (010) 62899756, E m ai :l z m z ou@i m p

l ad ac cn ; *喻长远, Te:l (010) 62899756, E m ai:l ch engxuen ing2003@

第35卷第17期2010年9月

Vo l 35, Iss u e 17Sep te mb er , 2010

2 1 4 精密度试验 取同一份广藿香油供试品溶

液连续进样6次, 比较共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积, 各共有指纹峰的相对保留时间RSD

2 1 6 重复性试验 取同一批广藿香油样品6份按供试品溶液制备方法分别制备, 比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积, 相对保留时间RSD

。

2 1 8 指纹图谱相似性评价 以百秋李醇为参照

物, 测定并记录12批样品色谱图, 见图2。

图2 12批广藿香油气相色谱图

根据12批广藿香挥发油提取物样品的共有性和各色谱峰相对保留时间的一致性, 共确定了12个共有峰。t R =47 94m i n 的峰为百秋李醇, 其面积较稳定, 且分离度好, 设为参照峰S , 将各共有色谱峰保留时间和峰面积与同一图谱中参照峰的保留时间和峰面积相比, 其比值为各共有峰的相对保留时间和相对峰面积, 见表1。可以看出, 相对含量较高的组分除11号峰外, 还有1, 5, 6, 7, 9号峰。

采用国家药典委员会! 中药色谱指纹图谱相似性评价系统A ∀对所得的广藿香油提取物GC 指纹图谱全谱进行相似度计算, 结果表明, 12批广藿香油提取物相似度均超过了0 9。3 讨论

广藿香油提取物GC 指纹图谱中可以分离出30

A 对照品; B 供试品; 11 百缺里醇。

图1 百秋里醇气相色谱峰

多个主要峰, 经比较12批样品的指纹图谱后, 从中选定12个共有峰作为可以构成广藿香油提取物指

表1 12批广藿香油气相指纹图谱特征峰的相对保留时间和相对峰面积

No 1

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相对保留时间0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 1. [***********][***********]

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0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 0. S[***********][***********]7

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Vo l 35, Iss u e 17Sep te mb er , 2010

纹图谱的稳定特征峰, 标准指纹图谱见图2, 为易于

辨认和分析, 可将指纹图谱分为3个区, 主峰区(∋区):出现6个特征峰(1~6号峰), 均达到基线分离, 其中有4个主峰, 最强峰为5号峰, 其次1, 4, 6号峰为次强峰, 从时间上看该6个峰占了指纹图谱的前半段。特征峰区((区):该区有5个特征峰(7~11号峰), 其图谱的特征性很直观, 第7号峰与它周围的小峰连接紧密, 未完全分离, 构成了形似佛手瓜的! 五指峰∀峰群。指纹区() ):在图谱上位于特征峰区以后, 主要为一些细小的指纹峰, 广藿香酮在该区(12号峰), 但是不同的样品含量有很大的差别。

本研究在测试条件方面经过大量的实验摸索, 通过系列方法学考察建立了广藿香油GC 色谱特征指纹图谱, 方法简单, 可操作性强, 从相似度分析12批样品相似度很接近, 可用于广藿香油提取物的鉴别; 同时广藿香药材中含有多种萜类和酮类成分

[7, 9]

息, 以便能从整体上把握其特征, 从而保证鉴别的可

靠性, 由于不同的色谱柱所获得的色谱图可能不同, 反映出来的特征也不完全一样, 因此本实验选用OV 1701, H P 25和Ag ilent DB 5气相色谱柱, 结果Ag il e ntDB 5色谱柱提供的色谱峰最多, 故选择Ag i lent D B 5GC 弹性石英毛细管柱。

[参考文献]

[1] 中国药典 一部[S].2005:172

[2] 肖翔林, 龙膺西. 近年来广藿香的研究概况[J].中药材, 2004,

27(6):456

[3] 苏镜娱, 张广文, 李核, 等. 广藿香精油化学成分分析与抗菌活

性研究(∋) [J]. 中草药, 2001, 32(3):204

[4] 李锦开, 李振江. 中国木本药材广东特产药材. [M]. 北京:中

国医药科技出版社, 1994:380

[5] 张广文, 蓝文键, 苏镜娱, 等. 广藿香精油化学成分分析及其抗

菌活性(() [J] 中草药, 2002, 33(3):210

[6] 曾志, 谭丽贤, 蒙绍金, 等. 广藿香化学成分和指纹图谱研究

[J]. 分析化学, 2006, 9(34):1249

[7] 杜一民, 陈汝筑, 胡本荣. 广藿香的化学成分及其药理作用研

究进展[J].中药新药与临床药理, 1998, 9(4):238

[8] 李薇, 魏刚, 潘超美, 等. 广藿香药材挥发油及主要成分含量影

响因素的考察[J ].中国中药杂志, 2004, 29(1):28 [9]

Itoka w a H, Suto K , T akeya K S t ud i es on a novel cou m aroyl gl u coside of ap i gen i n and on other flavon oi ds is olat ed fro m pat chouli (lab i atae) [J] Che m Phar m Bul, l 1981, 29(1):254

, 在相同的色谱条件下, 这些成分的色谱峰顺

序和相对保留时间在一定的时间范围内是固定的, 因此可以很好的鉴别广藿香油的真伪优劣, 为广藿

香药材的质量控制提供了科学依据, 也为含广藿香油制剂制定指纹图谱奠定基础。

作为中药色谱指纹谱, 其测定的方法不仅要简单、准确, 同时要尽可能多地反映出药品的内在信

Identificati on m ethod w ith si gn ificant specificity of

volatile oil of Pogoste mon cabli n

CHENG Xueni ng 1, 2, Z HANG H ongw u 2, YANG L i w ei 3, L I N Z hirong 3,

ZOU Z hongm ei 2*, YU Changyuan 1*

(1 Institute of L i fe Science and B iotechnology, Beijing Uni versity of Che m ical T echno logy, B eijing 100029, Ch i na ;

2 Institute of M e d ici nal P lant D evelopm ent , Ch i nese A cade my of M edical Sciences ﹠Pek ing

Union M e d ical Co llege , B eij i ng 100093, China; 3 Guangdong Institute for D rug C ontro l , Guangzhou 510180, Ch i na) [Abstract] O bjective :T o dev elop an i dentifica ti on m ethod w ith sign ifi cant spec ifi c ity f o r patchou li o i. l M e thod :The fi nge r pr i nt was per f o r m ed by gas chroma t og raphy w it h pa tchou li alcoho l and pogostone as che m i ca l m arkers . R esult :T he s i m il ar ity o f 12sa m ples w ere h i gher t han 0. 9and it can be used to i dentify the charac teristics of patchouli o i. l Con clusi on :T he GC fi ngerpri nt can be used for i den tificati on of patchouli o i. l

[K ey words] Pogo ste mon cablin ; pa tchou l y oi; l i den tificati on m e t hod w it h sign ificant spec ific ity ; GC ;

fingerpri n t

do:i 10. 4268/cjc mm 20101711

[责任编辑 周驰]