植物组织中可溶性糖含量的测定
XXX,YYY,ZZZ
(版权所有，仅限个人)
一.实验目的
1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。
2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
二、实验原理：
（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。
（二）测定：蒽酮比色法
五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮比色法
该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。
该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。
三、实验材料：
大白菜Brassicacampestrisssp.
pekinensis
四.实验步骤：
1．标准曲线的绘制
配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。
显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分
钟。
比色：测定A600nm的吸光度值。浓度：ug/mL
吸光度：a00500.1951000.3551500.5152000.689
绘制标准曲线：
．可溶性糖的提取：
称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
3．显色及比色：
吸取上述糖提取液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合之,于沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却，用分光光度计测定其600nm的吸光度值。从标准曲线上查得滤液中所含糖量,然后计算样品中糖的含量。
测得：
白菜叶-------0.270
白菜茎-------0.771
土豆----------0.635
黄瓜----------0.644
莴苣（叶）-0.426
五、样品中含糖量的计算
样品中可溶性糖含量（ug/g）=A*C/W
其中：
A为植物样品糖提取液的体积(ml)
C为提取液的含糖量(µg/ml)
W为植物组织鲜重量(g)
带入标准曲线得：各种植物或组织中可溶性糖含量为
白菜叶-------30.86
白菜茎-------88.12
土豆----------72.57
黄瓜----------73.60
莴苣（叶）-48.68mg/gmg/gmg/gmg/gmg/g
六、思考题：
1．植物组织中糖的测定方法还有很多种举例说明它们的原理和优缺点。
答：还有过碘酸希夫氏反应，原理是糖类物质被过碘酸氧化为醛类，再与希夫试剂结合形成紫红色反应产物。优点是现象明显，可作定性指示；缺点是颜色与浓度不成线性关系，不能准确定量测定。
2．用水提取的糖类有哪些？
答：蔗糖、葡萄糖、核糖等。
3．制作标准曲线时应注意哪些问题？
答：要以蒸馏水调零，计算时各数减去0浓度时示数作为其标准示数。
以计算机处理时，趋势线要将截距设为0。
七、小结：
通过本次实验，我学习了植物组织中可溶性糖的测定方法，了解了可溶性糖在植物物质代谢中的作用。并且通过实验测定了白菜叶中可溶性糖含量。加深了对原理的认识。基本上达到了本次实验的目的与要求。
植物组织中可溶性糖含量的测定
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一.实验目的
1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。
2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
二、实验原理：
（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。
（二）测定：蒽酮比色法
五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮比色法
该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。
该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。
三、实验材料：
大白菜Brassicacampestrisssp.
pekinensis
四.实验步骤：
1．标准曲线的绘制
配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。
显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分
钟。
比色：测定A600nm的吸光度值。浓度：ug/mL
吸光度：a00500.1951000.3551500.5152000.689
绘制标准曲线：
．可溶性糖的提取：
称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
3．显色及比色：
吸取上述糖提取液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合之,于沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却，用分光光度计测定其600nm的吸光度值。从标准曲线上查得滤液中所含糖量,然后计算样品中糖的含量。
测得：
白菜叶-------0.270
白菜茎-------0.771
土豆----------0.635
黄瓜----------0.644
莴苣（叶）-0.426
五、样品中含糖量的计算
样品中可溶性糖含量（ug/g）=A*C/W
其中：
A为植物样品糖提取液的体积(ml)
C为提取液的含糖量(µg/ml)
W为植物组织鲜重量(g)
带入标准曲线得：各种植物或组织中可溶性糖含量为
白菜叶-------30.86
白菜茎-------88.12
土豆----------72.57
黄瓜----------73.60
莴苣（叶）-48.68mg/gmg/gmg/gmg/gmg/g
六、思考题：
1．植物组织中糖的测定方法还有很多种举例说明它们的原理和优缺点。
答：还有过碘酸希夫氏反应，原理是糖类物质被过碘酸氧化为醛类，再与希夫试剂结合形成紫红色反应产物。优点是现象明显，可作定性指示；缺点是颜色与浓度不成线性关系，不能准确定量测定。
2．用水提取的糖类有哪些？
答：蔗糖、葡萄糖、核糖等。
3．制作标准曲线时应注意哪些问题？
答：要以蒸馏水调零，计算时各数减去0浓度时示数作为其标准示数。
以计算机处理时，趋势线要将截距设为0。
七、小结：
通过本次实验，我学习了植物组织中可溶性糖的测定方法，了解了可溶性糖在植物物质代谢中的作用。并且通过实验测定了白菜叶中可溶性糖含量。加深了对原理的认识。基本上达到了本次实验的目的与要求。