生物——选修1：生物技术实践 (每题15分)
1、回答下列关于生物技术实践的问题：
（1）传统发酵技术中，利用微生物发酵生产特定的产物，很多都是中华民族的传统食品。
请将下列微生物与对应的发酵产物联系起来：
①乳酸菌 ②根瘤菌 ③蓝藻 ④醋酸菌 ⑤毛霉 ⑥酵母菌 ⑦大肠杆菌 ⑧曲霉 制作果酒、果醋、腐乳、泡菜对应的微生物依次是 （填相应序号）；其中泡菜制作的原理是（用反应式表
示）： 。
（2）在培养基的配制过程中，具有如下步骤：①溶化 ②调pH ③加棉塞 ④包扎 ⑤分
装 ⑥称量正确的顺序为 ；倒平板操作中，平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是 。
（3）菊花的组织培养中要求无菌操作的目的是 ，在愈伤
组织形成过程中常用的培养基是MS培养基，并且需要添加 ；愈伤组织分化成根和芽，再由芽发育成叶和茎，这一过程称为__________，此过程 （填“需要”或“不需要”）光照。
2、（1）下面是某地农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程：
请填写a～c所表示的内容。 a． b． c． 。
（2）该过程中的启动关键在于培养基中所加生长素和细胞分裂素的浓度、以及 和 。
（3）实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基，配制母液时，需要将 浓缩100倍。
（4）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入____________指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入________________染料，培养几种菌后，培养基中出现现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。
（5）醋酸杆菌是生产苹果醋必用的菌种，可以从食醋中分离得到纯化的醋酸杆菌。扩大培养醋酸杆菌时，一般采用平板倒置培养，原因是 。
（6）在传统发酵技术中,果醋的制作往往在果酒制作基础上进行,请用相关反应式表示： 。
3、请分析回答下列有关生物技术实践的问题：
（1）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基时，倒平板操作的步骤是：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出 ；右手拿锥形瓶，将 迅速通过火焰；用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的________倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖；等待平板冷却
后，将平板倒过来放置，使在上。
（2）植物的组织培养除需营养和激素外，______、 、 等外界条件也很重要。
（3）制作果酒用的酵母菌属于兼性厌氧型微生物的依据是： 。
（4）用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目的
是： ；过滤萃取液的目的是： 。
4、（15分）下图表示葡萄酒酿制的简单过程，请据图分析：
（1）从上图可知，甲图是为了使酵母菌进行 ，以增加酵母
菌的数量，乙图是为了使酵母菌 获得葡萄酒。最后，可以用
__________试剂检验是否有酒精生成。整个酿制过程一般将温度控制在
18-25℃,原因是_________________。
（2）甲图中葡萄汁和白糖的混合液为酵母菌提供的营养成分有
__________________。为防止发酵液被污染，对使用的器具要
并晾干，并用___________消毒。
（3）从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌时, 最常用的接种方法有_________和__________两
种。接种后，培养基上会出现一些分别由一个酵母菌繁殖而成的菌落,在生态学上,这些
菌落被称为______________。
（4）工业生产上为提高葡萄出汁率并使果汁变得澄清，生产中常需用到____________。为
了能反复利用酵母菌,需要将纯化后并经过繁殖培育得到的酵母菌与海藻酸钠溶液混
合制成“凝胶珠”，这是使用___________法来固定酵母细胞.
5、下列是对土壤微生物开展探究恬动的三个案例，请在相应的空白处作答。
（1）案例I：探究落叶在土壤微生物的作用下是否发生腐烂（分解）。
设计思路：
对实验组土壤应该进行__________处理，尽可能排除__________的作用。
（2）案侧II：探究土壤微生物对淀粉的分解作用。
实验步骤：
①将取自农田的土壤制成土壤浸出液，放在烧杯中静置一段时间。
②另取两只烧杯，编号为A、B，放入等量的淀粉糊。在A烧杯中加入30 mL土壤浸出
液，B烧杯中加入__________。
③在室温条件下放置7天后，从A烧杯中取
20 mL溶液，分别加入A1和A2两支试管
各10 mL；从B烧杯中取20 mL溶液，分别加入B1和B2两支试管各10mL。
④在A1和B1中加入碘液；在A2和B2中加入__________，并进行__________处理。
⑤观察各试管的__________，记录实验结果。
（3）案例III：探究土壤微生物中是否含有分解纤维素的细菌的实验过程中，应将土壤浸出
液接种在以__________为唯一碳源的培养基上，并用__________（试剂）加以鉴别
6、同学们为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：
（1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，细菌合成的 将尿素分解为 ，pH升高使指示剂变
为 色。
（2）培养基中加入尿素的目的是筛选 ， 这种培养基属于 培养基。
（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 和 ，实验中需要振荡培养，原因是 。
（4）转为固体培养基时，常采用 或 接种，获得 菌落后继续筛选。
（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行 处理后，才能倒掉。 7、生物技术的迅速发展，给社会带来了巨大的经济效益，受到社会的广泛重视，请问答下列生物技术方面的问题：
(1) DNA提取时，可以利用DNA在浓度为_____NaCl溶液中溶解度小而析出的特性。为
了纯化提取的DNA，向DNA滤液中加入嫩肉粉，目的是________________，DNA鉴定时，可以使用________试剂并在沸水中加热产生蓝色沉淀。
(2) 绿茶是一种不经发酵制成的茶。在制作绿茶的工艺中，有一道工序是迅速将温度提高
到70℃左右，目的是_______ _____，从而保持茶叶鲜绿的颜色。由于原料的焦糊，从茶籽中提取茶油一般采用 法
(3) 微生物培养过程中，获得纯培养物的关键是_ ，其中对培养皿进行
灭菌常用的方法是______ ____ 。
(4)欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入 制成选择
培养基进行分离。血红蛋白的提取方法可以采用____________，该方法主要是利用血红
蛋白与其他物质的_____________不同的特性将它们分开，洗涤红细胞的目的是____
__ ___。
8、下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：
（1）植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和具体采用哪种方法要根据
植物原料的特点来决定。玫瑰精油适合用 提取。蒸馏时收集的蒸馏液（是、不是）纯的玫瑰精油，原因是。向该蒸馏液中加入
NaCl的作用是。加入无水硫酸钠的作用
是 。
（2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提
取量的主要因素有蒸馏时间和 。当原料量等其他条件
一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是 。
（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会原因是____ 。
（4）密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度 的地方，目的是。 （5）某植物花中精油的相对含量随花的不同生长发育时期的变化趋势如图所示。提取
精油时采摘花的最合适时间为 天左右。
9、下图为胡萝卜素粗品鉴定装置示意图，请回答胡萝卜粗提取和鉴定的相关问题。
（1）乙醇和丙酮作为萃取剂属于 。
（2）萃取的效率主要取决于_ ，同时也受原料颗粒的大小、紧密程度、含
水量、萃取的温度和时间等条件的影响。
（3）通过 加热，β一胡萝卜素溶解在萃取液中，经 得到萃
取液，再经过 后，可得到纯净的β一胡萝卜素。
（4）提取的胡萝卜素可通过 法进行鉴定，在鉴定过程中需要在A、D处用 对照。
（5）图中①的作用是 ，⑤为 ，⑥为 ，常用 。
10、研究发现紫草素和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如
图所示。
请回答： 抑菌试验 （1）配制诱导愈伤组织的固体培养基，分装后要进行 ；接种前，要对紫草
茎切块进行消毒处理，用于消毒处理的药剂和时间都应根据所选材料分别对待，原因
是 。
（2）用于离体培养的茎切块，接种培养3－4后发现少数培养基被污染，若是在材料附
近的培养基中出现白、黑或绿等不同颜色疏松，成绒毛状菌落，则可判断属于 （选细菌∕真菌）污染，此时 （能、不能）打开培养瓶，如何继续操作 。
（3）紫草素易溶于水溶性（亲水性）有机溶剂，从培养物干粉中提取紫草素宜选用 法，操作时宜采用 加热。
（4）筛选乳酸菌A时可选用 或 接种。
（5）可用金黄色葡萄球菌来分别检验紫草素和乳酸菌素抑菌特性，抑菌实验时，在长满
致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定 来比较紫草素和乳酸菌素的抑菌效果。
11、(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、 、灭菌、 ；
(2) 培养基灭菌的常用方法是。如何证明所用培养基已经彻底灭菌？ （2分）。
(3)分解纤维素的微生物可以从土壤中分离获得，分离的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。其中选择培养的目的是 ，选择培养所用的培养基中唯一的碳源是 。鉴别纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是 ，该物质能够与纤维素反应生成 ；如果某个菌落的周围出现了透明圈，说明该种微生物能够 。
(4) 食品安全检测时通常采用大肠杆菌作为致病微生物的指示菌，为测定哪些菌落属于大肠杆菌，可选用 培养基对该菌落进行鉴定，大肠杆菌的菌落在该培养基上呈现 色。
12、伴随着生命科学的新突破，现代生物技术已经广泛地应用于工业、农牧业、医药、环保
等众多领域，产生了巨大的经济和社会效益。请回答下列生物技术方面的问题：
（1）在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是。
（2）在微生物的实验室培养中通常要进行消毒和灭菌的工作，常用的消毒方法有 （写出2种）；灭菌是指用 杀死环境和物体内外 。
（3）某同学在分离土壤微生物的过程中，发现培养基上出现了几种不同的细菌。若在以
尿素为唯一氮源的培养基中培养这几种细菌一段时间后，加入 指示剂，指示
剂变红就可以确定其中含有能够分解尿素的细菌；若在以纤维素为唯一
碳源的培养基中培养这几种细菌一段时间后，加入 染料，培养基中出现透明圈，
就可以确定其中含有纤维素分解菌。上述过程使用的培养基，按功能来分属于 培养基。
（4）右图为提取胡萝卜素的萃取样品通过纸层析鉴定的结果示意图，
请据图回答问题：
I．该图所示的鉴定方法的基线一般距底边。
Ⅱ．A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是
层析谱中，图中②代表的物质是 。
Ⅲ．该层析的目的是 ，而“叶绿体中色素的提取和分离”的实验中层析的目的
是 。
13、生物技术在食品加工中的应用十分广泛，如果酒、果醋的制作就是生活中常见的例子。如图A是果酒和果醋制作的实验流程，图B是一个果酒制果醋的发酵装置。请分析回答：
甲
通入 空气
乙
丙 图B 图A
（1）果醋发酵的微生物是 ，果酒发酵的微生物是 ，这两类微生物在代谢方式上的主要区别是 是好氧生物， 是兼性厌氧型生物。
（2）果醋是在图Ｂ 中产生的，发酵的微生物利用的碳源主要是 。
（3）图Ａ①过程是在图Ｂ中 内进行的，发酵产物酒精要在 （选填:酸/中/碱）性条件下用 来鉴定。
14、 微生物在生产实践中应用广泛，请回答下列有关问题：
（1）从土壤中分离纤维素分解菌，所用的培养基应以 作为唯一碳源。这种培养基属于 培养基(依据用途划分)。
（2）制作葡萄醋的工艺流程如下：
挑选葡萄→冲洗→榨汁→发酵→过滤灭菌。
①在此过程中最关键的步骤是工作： 、 等。
②发酵时温度应控制在，并且要适时是 。
15、农作物秸秆在生产实践中具有多种用途。在特定微生物产生的纤维素酶的催化下，秸秆中的纤维素可被分解为葡萄糖，经发酵后形成乙醇，再加工即可制成燃料乙醇，减少了人类生活对石油资源的依赖。请分析回答：
（1）欲从土壤中分离获取上述特定微生物，可采用稀释涂布法或________法进行接种，所用培养基以纤维素为唯一碳源，目的是只允许能产生________的微生物生长，而其他微生物均不能生长。在培养基中加入适量的刚果红染料，若观察到________即可初步筛选到目的菌。
（2）某研究人员经上述培养获得了三种微生物（甲、乙、丙），现通过如下实验比较三种微 生物所产生纤维素酶的活性大小。
①将甲、乙、丙三种微生物经离心等方法处理后，制成酶浓度相同的纤维素酶提取液，取等体积的三种提取液分别与等量的纤维素悬浮液混合，在相同且适宜的pH和温度条件下放置一段时间。
②利用________试剂检测产物中的葡萄糖，并通过比较颜色深浅程度判断酶活性的大小。 ③实验结果如下：
由表分析，三种微生物产生的纤维素酶活性不同，最可能的原因是________。其中产生酶 活性最强的微生物是________。
（3）通过酶工程可将脂肪酶酶利用酶的固定化技术用于生产实践。从酶的固定方式来看，
吸附法比化学结合法对酶活性影响 ，如果在固定化过程中，是使用海藻酸钠凝胶珠的话，需要用无菌水冲洗，目的是除去 和 。
16、下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径，请据图回答有关问题：
（1）选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素，一般来说选用_________期的
花粉可提高成功率。选择花粉时，一般要通过____________来确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是________。
（2）花药经脱分化是产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中___________的种类及其
浓度配比。
（3）胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于 的细胞排列疏松无规则，是一种
高度液泡化的薄壁细胞。胚状体的结构类似于种子中的 （种皮、胚、胚乳、胚轴）。
（4）无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素。下列各项需要灭菌的是 （填编号）。
① 培养基 ②培养皿 ③接种环 ④花蕾 ⑤实验操作者的双手 ⑥三角锥形瓶
17、在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。
（1）如图是利用法进行微生物接种，把聚集的菌种
逐步 分散到培养基的表面。
（2）分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、
MgSO4·7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于培养分解尿素
的细菌，则应除去上述 成分，并加入 ，以补充 源。
（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为106
的培养基中，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233；丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；在三位同学的统计中，只有一位同学的统计是正确的，指出另两位同学的统计为什么不正确。 。
（4）若在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为233，那么每毫升样品中
的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 。
18、胡萝卜营养价值高，被国内外营养专家脊为“小人参”，其中含有丰富的天然胡萝卜素，不溶于水,易溶于有机溶剂.三七是一种名贵中药，其有效成分是三七皂苷,是一种非脂质 有机物,易溶于水。请问答有关问题： (1)为了更容易地榨取胡萝卜汁,提髙澄淸度,溶要加入果胶酶，该酶通常从真菌细胞中提取,筛选真菡细胞时常用的两种接种方法是____，从功能看,所用培养基为_____培养基。
(2)从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是________。采用该方法时需要加热，一般不用酒精灯直接加热而用水浴加热，因为________。而从三七中提取三七皂苷时,提取前应对三七材料用________浸泡，以提髙提取率。
(3)欲大量繁殖脱毒的高品质胡萝卜植株和三七植株，应选择植株的________部分进行组织培养。在配置好的培养基中，除了营养物质之外常常还需要添加________
(4)进行植物组织培养时，由于操作失误，某同学发现培养基上感染了微生物,欲确定其中是否含有纤维素分解菌。把微生物培养在以________为唯一碳源的培养基中，并加入________染料,培养后,培养基中出现透明^，表明其中含有纤维素分解菌。
19、（1）在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是 。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的 。 可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
（2）在腐乳制作时，要加盐腌制，其目的是 。要制作出色香味俱全的腐乳，关键在于 的配制。
（3）在制作腐乳、果醋、泡菜的过程中，需要氧气的是 。
（4）在提取玫瑰精油的实验流程中，向乳化液中加入NaCl的目的是 。
（5）胡萝卜素易溶于有机溶剂中，据此可用 的方法提取。提取的胡萝卜素粗品可通过 进行鉴定。
1、（除标注外，每空2分，共15分）
（1）⑥④⑤① C6H12O6 → 2C3H6O3（乳酸）
（2）⑥①②⑤③④ 防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
（3）避免微生物在培养基上与离体培养的植物组织竞争 植物激素
再分化（1分） 需要
2、（15分，除标注外每空2分）
（1）微生物发酵
（2）过滤（1分） 有机溶剂遇明火易发生爆炸
（3）防止加热时有机溶剂挥发
（4）石油醚 性质和使用量
（5）纸层析法 胡萝卜素溶解在层析液中
3、（1）棉塞 （1分） 瓶口（1分） 培养基（1分） 凝固（1分） 皿盖（1分）
皿底（1分） （2）pH、温度、光照 ；（3分）
（3）酵母菌在有氧、无氧条件下都能生存（2分）
（4）使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度（2分）；除去萃取液中的不溶物（2分）
4、（1）有氧呼吸（1分） 发酵（1分） 重铬酸钾（1分）
这一温度最适合酵母菌生长和繁殖（1分）
（2）碳源、氮源、水、无机盐和生长因子（2分） 清洗干净（1分） 70%酒精（1分） （3）平板划线法（2分） 稀释涂布平板法（2分） 种群（1分）
（4）果胶酶（1分） 包埋（1分）
5（1）灭菌 土壤微生物
（2） 30 mL(等量)蒸馏水(无菌水) （等量的）斐林试剂 水浴加热 颜色变化
（3）纤维素 刚果红
6、（1）酚红 脲酶 氨 红
（2）目的菌 选择 （3）尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气
（4）稀释涂布平板法（2分） 平板划线法（2分） 单
（5）灭菌
6、（1）0.14mol/L 分解蛋白质 二苯胺
（2）通过高温使（氧化）酶失活，防止色素被分解 压榨
（3）无菌技术（或防止外来杂菌干扰）干热灭菌法
（4）（每空2分）有机磷农药 凝胶色谱法 相对分子质量大小 去除杂蛋白 8（15分，除标注外每空1分）
(1) 水溶性萃取剂（2分） (2)萃取剂的性质和使用量（2分）
(3)水浴 过滤 蒸馏 （4）纸层析 标准样品
（5）防止层析液挥发（2分） 样品原点（2分） 溶剂 石油醚
9、（1）高压蒸汽灭菌（2分） 既要考虑消毒效果又要考虑材料的耐受能力（或保持外植体的活性）（2分）（2）真菌（2分） 不能（1分） 被污染的培养瓶用高压蒸汽灭菌后再清洗处理（2分） （3）萃取（1分） 水浴（1分） （4）平板划线法（1分） 稀释涂布平板法（1分） （5）透明圈的大小（2分）
10、（1）溶化 倒平板 （2）高压蒸汽灭菌 对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底（2分） （3）增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物（2分） 纤维素 刚果红 红色复合物 产生纤维素酶，能够
分解纤维素（2分） （4） 伊红美蓝 黑色
12、（1）（每空2分）醋酸菌 酵母菌 醋酸菌 酵母菌 （2）（每空2分）乙 乙醇（葡萄糖或乙醇） （3）（每空1分）甲 酸 重铬酸钾溶液
13、(1)纤维素 选择
(2) ①发酵 榨汁机要清洗干净并晾干 发酵装置要清洗干净，用体积分数为70%的酒精消毒或者用洗洁净洗涤。
②30～35 ℃ 充气 醋酸菌是好氧菌，醋酸发酵时需要氧的参与
14
（1）平板划线 纤维素酶 菌落周围出现透明圈
（2）斐林 不同酶的氨基酸序列不同（或不同酶的空间结构不同） 乙
（3）小 CaCl2 杂菌
(1)平板划线 稀释 (2)NaNO3 尿素和葡萄糖 氮、碳
(3)甲同学只涂布了两个平板，实验数据说服力不够；丙同学虽然涂布了三个平板，但 其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，实验数据缺乏正确性（3分）(4)1.165×109
）平板划线法和稀释涂布平板法（全部答出给2分） 选择（2分）
（2）萃取法（2分） 萃取剂易燃易爆（2分） 石灰水 （1分）
（3）根尖、芽尖（或形成层等分生能力强的细胞）（2分） 植物激素 (或生长素和细胞分裂素) （2分） （4）纤维素（1分） 刚果红（1分）
18、（1）毛霉 肽和氨基酸 脂肪酶
（2）析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬,同时抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质（2 分）
卤 汤（2 分）
（3）制作腐乳、果醋（2 分）
（4）使油水分层（2 分）
（5）萃取（2分）纸层析（2 分）
11
11、7 12
13
生物——选修1：生物技术实践 (每题15分)
1、回答下列关于生物技术实践的问题：
（1）传统发酵技术中，利用微生物发酵生产特定的产物，很多都是中华民族的传统食品。
请将下列微生物与对应的发酵产物联系起来：
①乳酸菌 ②根瘤菌 ③蓝藻 ④醋酸菌 ⑤毛霉 ⑥酵母菌 ⑦大肠杆菌 ⑧曲霉 制作果酒、果醋、腐乳、泡菜对应的微生物依次是 （填相应序号）；其中泡菜制作的原理是（用反应式表
示）： 。
（2）在培养基的配制过程中，具有如下步骤：①溶化 ②调pH ③加棉塞 ④包扎 ⑤分
装 ⑥称量正确的顺序为 ；倒平板操作中，平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是 。
（3）菊花的组织培养中要求无菌操作的目的是 ，在愈伤
组织形成过程中常用的培养基是MS培养基，并且需要添加 ；愈伤组织分化成根和芽，再由芽发育成叶和茎，这一过程称为__________，此过程 （填“需要”或“不需要”）光照。
2、（1）下面是某地农林科学院进行苹果试管苗培养的一般过程：
请填写a～c所表示的内容。 a． b． c． 。
（2）该过程中的启动关键在于培养基中所加生长素和细胞分裂素的浓度、以及 和 。
（3）实验室一般使用保存的培养基母液来制备MS固体培养基，配制母液时，需要将 浓缩100倍。
（4）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入____________指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入________________染料，培养几种菌后，培养基中出现现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。
（5）醋酸杆菌是生产苹果醋必用的菌种，可以从食醋中分离得到纯化的醋酸杆菌。扩大培养醋酸杆菌时，一般采用平板倒置培养，原因是 。
（6）在传统发酵技术中,果醋的制作往往在果酒制作基础上进行,请用相关反应式表示： 。
3、请分析回答下列有关生物技术实践的问题：
（1）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基时，倒平板操作的步骤是：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出 ；右手拿锥形瓶，将 迅速通过火焰；用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的________倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖；等待平板冷却
后，将平板倒过来放置，使在上。
（2）植物的组织培养除需营养和激素外，______、 、 等外界条件也很重要。
（3）制作果酒用的酵母菌属于兼性厌氧型微生物的依据是： 。
（4）用萃取法提取胡萝卜素的实验中，要将胡萝卜进行粉碎和干燥的目的
是： ；过滤萃取液的目的是： 。
4、（15分）下图表示葡萄酒酿制的简单过程，请据图分析：
（1）从上图可知，甲图是为了使酵母菌进行 ，以增加酵母
菌的数量，乙图是为了使酵母菌 获得葡萄酒。最后，可以用
__________试剂检验是否有酒精生成。整个酿制过程一般将温度控制在
18-25℃,原因是_________________。
（2）甲图中葡萄汁和白糖的混合液为酵母菌提供的营养成分有
__________________。为防止发酵液被污染，对使用的器具要
并晾干，并用___________消毒。
（3）从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌时, 最常用的接种方法有_________和__________两
种。接种后，培养基上会出现一些分别由一个酵母菌繁殖而成的菌落,在生态学上,这些
菌落被称为______________。
（4）工业生产上为提高葡萄出汁率并使果汁变得澄清，生产中常需用到____________。为
了能反复利用酵母菌,需要将纯化后并经过繁殖培育得到的酵母菌与海藻酸钠溶液混
合制成“凝胶珠”，这是使用___________法来固定酵母细胞.
5、下列是对土壤微生物开展探究恬动的三个案例，请在相应的空白处作答。
（1）案例I：探究落叶在土壤微生物的作用下是否发生腐烂（分解）。
设计思路：
对实验组土壤应该进行__________处理，尽可能排除__________的作用。
（2）案侧II：探究土壤微生物对淀粉的分解作用。
实验步骤：
①将取自农田的土壤制成土壤浸出液，放在烧杯中静置一段时间。
②另取两只烧杯，编号为A、B，放入等量的淀粉糊。在A烧杯中加入30 mL土壤浸出
液，B烧杯中加入__________。
③在室温条件下放置7天后，从A烧杯中取
20 mL溶液，分别加入A1和A2两支试管
各10 mL；从B烧杯中取20 mL溶液，分别加入B1和B2两支试管各10mL。
④在A1和B1中加入碘液；在A2和B2中加入__________，并进行__________处理。
⑤观察各试管的__________，记录实验结果。
（3）案例III：探究土壤微生物中是否含有分解纤维素的细菌的实验过程中，应将土壤浸出
液接种在以__________为唯一碳源的培养基上，并用__________（试剂）加以鉴别
6、同学们为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：
（1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，细菌合成的 将尿素分解为 ，pH升高使指示剂变
为 色。
（2）培养基中加入尿素的目的是筛选 ， 这种培养基属于 培养基。
（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 和 ，实验中需要振荡培养，原因是 。
（4）转为固体培养基时，常采用 或 接种，获得 菌落后继续筛选。
（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行 处理后，才能倒掉。 7、生物技术的迅速发展，给社会带来了巨大的经济效益，受到社会的广泛重视，请问答下列生物技术方面的问题：
(1) DNA提取时，可以利用DNA在浓度为_____NaCl溶液中溶解度小而析出的特性。为
了纯化提取的DNA，向DNA滤液中加入嫩肉粉，目的是________________，DNA鉴定时，可以使用________试剂并在沸水中加热产生蓝色沉淀。
(2) 绿茶是一种不经发酵制成的茶。在制作绿茶的工艺中，有一道工序是迅速将温度提高
到70℃左右，目的是_______ _____，从而保持茶叶鲜绿的颜色。由于原料的焦糊，从茶籽中提取茶油一般采用 法
(3) 微生物培养过程中，获得纯培养物的关键是_ ，其中对培养皿进行
灭菌常用的方法是______ ____ 。
(4)欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入 制成选择
培养基进行分离。血红蛋白的提取方法可以采用____________，该方法主要是利用血红
蛋白与其他物质的_____________不同的特性将它们分开，洗涤红细胞的目的是____
__ ___。
8、下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：
（1）植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和具体采用哪种方法要根据
植物原料的特点来决定。玫瑰精油适合用 提取。蒸馏时收集的蒸馏液（是、不是）纯的玫瑰精油，原因是。向该蒸馏液中加入
NaCl的作用是。加入无水硫酸钠的作用
是 。
（2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提
取量的主要因素有蒸馏时间和 。当原料量等其他条件
一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是 。
（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会原因是____ 。
（4）密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度 的地方，目的是。 （5）某植物花中精油的相对含量随花的不同生长发育时期的变化趋势如图所示。提取
精油时采摘花的最合适时间为 天左右。
9、下图为胡萝卜素粗品鉴定装置示意图，请回答胡萝卜粗提取和鉴定的相关问题。
（1）乙醇和丙酮作为萃取剂属于 。
（2）萃取的效率主要取决于_ ，同时也受原料颗粒的大小、紧密程度、含
水量、萃取的温度和时间等条件的影响。
（3）通过 加热，β一胡萝卜素溶解在萃取液中，经 得到萃
取液，再经过 后，可得到纯净的β一胡萝卜素。
（4）提取的胡萝卜素可通过 法进行鉴定，在鉴定过程中需要在A、D处用 对照。
（5）图中①的作用是 ，⑤为 ，⑥为 ，常用 。
10、研究发现紫草素和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如
图所示。
请回答： 抑菌试验 （1）配制诱导愈伤组织的固体培养基，分装后要进行 ；接种前，要对紫草
茎切块进行消毒处理，用于消毒处理的药剂和时间都应根据所选材料分别对待，原因
是 。
（2）用于离体培养的茎切块，接种培养3－4后发现少数培养基被污染，若是在材料附
近的培养基中出现白、黑或绿等不同颜色疏松，成绒毛状菌落，则可判断属于 （选细菌∕真菌）污染，此时 （能、不能）打开培养瓶，如何继续操作 。
（3）紫草素易溶于水溶性（亲水性）有机溶剂，从培养物干粉中提取紫草素宜选用 法，操作时宜采用 加热。
（4）筛选乳酸菌A时可选用 或 接种。
（5）可用金黄色葡萄球菌来分别检验紫草素和乳酸菌素抑菌特性，抑菌实验时，在长满
致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定 来比较紫草素和乳酸菌素的抑菌效果。
11、(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、 、灭菌、 ；
(2) 培养基灭菌的常用方法是。如何证明所用培养基已经彻底灭菌？ （2分）。
(3)分解纤维素的微生物可以从土壤中分离获得，分离的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。其中选择培养的目的是 ，选择培养所用的培养基中唯一的碳源是 。鉴别纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是 ，该物质能够与纤维素反应生成 ；如果某个菌落的周围出现了透明圈，说明该种微生物能够 。
(4) 食品安全检测时通常采用大肠杆菌作为致病微生物的指示菌，为测定哪些菌落属于大肠杆菌，可选用 培养基对该菌落进行鉴定，大肠杆菌的菌落在该培养基上呈现 色。
12、伴随着生命科学的新突破，现代生物技术已经广泛地应用于工业、农牧业、医药、环保
等众多领域，产生了巨大的经济和社会效益。请回答下列生物技术方面的问题：
（1）在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是。
（2）在微生物的实验室培养中通常要进行消毒和灭菌的工作，常用的消毒方法有 （写出2种）；灭菌是指用 杀死环境和物体内外 。
（3）某同学在分离土壤微生物的过程中，发现培养基上出现了几种不同的细菌。若在以
尿素为唯一氮源的培养基中培养这几种细菌一段时间后，加入 指示剂，指示
剂变红就可以确定其中含有能够分解尿素的细菌；若在以纤维素为唯一
碳源的培养基中培养这几种细菌一段时间后，加入 染料，培养基中出现透明圈，
就可以确定其中含有纤维素分解菌。上述过程使用的培养基，按功能来分属于 培养基。
（4）右图为提取胡萝卜素的萃取样品通过纸层析鉴定的结果示意图，
请据图回答问题：
I．该图所示的鉴定方法的基线一般距底边。
Ⅱ．A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是
层析谱中，图中②代表的物质是 。
Ⅲ．该层析的目的是 ，而“叶绿体中色素的提取和分离”的实验中层析的目的
是 。
13、生物技术在食品加工中的应用十分广泛，如果酒、果醋的制作就是生活中常见的例子。如图A是果酒和果醋制作的实验流程，图B是一个果酒制果醋的发酵装置。请分析回答：
甲
通入 空气
乙
丙 图B 图A
（1）果醋发酵的微生物是 ，果酒发酵的微生物是 ，这两类微生物在代谢方式上的主要区别是 是好氧生物， 是兼性厌氧型生物。
（2）果醋是在图Ｂ 中产生的，发酵的微生物利用的碳源主要是 。
（3）图Ａ①过程是在图Ｂ中 内进行的，发酵产物酒精要在 （选填:酸/中/碱）性条件下用 来鉴定。
14、 微生物在生产实践中应用广泛，请回答下列有关问题：
（1）从土壤中分离纤维素分解菌，所用的培养基应以 作为唯一碳源。这种培养基属于 培养基(依据用途划分)。
（2）制作葡萄醋的工艺流程如下：
挑选葡萄→冲洗→榨汁→发酵→过滤灭菌。
①在此过程中最关键的步骤是工作： 、 等。
②发酵时温度应控制在，并且要适时是 。
15、农作物秸秆在生产实践中具有多种用途。在特定微生物产生的纤维素酶的催化下，秸秆中的纤维素可被分解为葡萄糖，经发酵后形成乙醇，再加工即可制成燃料乙醇，减少了人类生活对石油资源的依赖。请分析回答：
（1）欲从土壤中分离获取上述特定微生物，可采用稀释涂布法或________法进行接种，所用培养基以纤维素为唯一碳源，目的是只允许能产生________的微生物生长，而其他微生物均不能生长。在培养基中加入适量的刚果红染料，若观察到________即可初步筛选到目的菌。
（2）某研究人员经上述培养获得了三种微生物（甲、乙、丙），现通过如下实验比较三种微 生物所产生纤维素酶的活性大小。
①将甲、乙、丙三种微生物经离心等方法处理后，制成酶浓度相同的纤维素酶提取液，取等体积的三种提取液分别与等量的纤维素悬浮液混合，在相同且适宜的pH和温度条件下放置一段时间。
②利用________试剂检测产物中的葡萄糖，并通过比较颜色深浅程度判断酶活性的大小。 ③实验结果如下：
由表分析，三种微生物产生的纤维素酶活性不同，最可能的原因是________。其中产生酶 活性最强的微生物是________。
（3）通过酶工程可将脂肪酶酶利用酶的固定化技术用于生产实践。从酶的固定方式来看，
吸附法比化学结合法对酶活性影响 ，如果在固定化过程中，是使用海藻酸钠凝胶珠的话，需要用无菌水冲洗，目的是除去 和 。
16、下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径，请据图回答有关问题：
（1）选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素，一般来说选用_________期的
花粉可提高成功率。选择花粉时，一般要通过____________来确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是________。
（2）花药经脱分化是产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中___________的种类及其
浓度配比。
（3）胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于 的细胞排列疏松无规则，是一种
高度液泡化的薄壁细胞。胚状体的结构类似于种子中的 （种皮、胚、胚乳、胚轴）。
（4）无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素。下列各项需要灭菌的是 （填编号）。
① 培养基 ②培养皿 ③接种环 ④花蕾 ⑤实验操作者的双手 ⑥三角锥形瓶
17、在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。
（1）如图是利用法进行微生物接种，把聚集的菌种
逐步 分散到培养基的表面。
（2）分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、
MgSO4·7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于培养分解尿素
的细菌，则应除去上述 成分，并加入 ，以补充 源。
（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为106
的培养基中，得到以下统计结果：甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233；丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；在三位同学的统计中，只有一位同学的统计是正确的，指出另两位同学的统计为什么不正确。 。
（4）若在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为233，那么每毫升样品中
的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 。
18、胡萝卜营养价值高，被国内外营养专家脊为“小人参”，其中含有丰富的天然胡萝卜素，不溶于水,易溶于有机溶剂.三七是一种名贵中药，其有效成分是三七皂苷,是一种非脂质 有机物,易溶于水。请问答有关问题： (1)为了更容易地榨取胡萝卜汁,提髙澄淸度,溶要加入果胶酶，该酶通常从真菌细胞中提取,筛选真菡细胞时常用的两种接种方法是____，从功能看,所用培养基为_____培养基。
(2)从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是________。采用该方法时需要加热，一般不用酒精灯直接加热而用水浴加热，因为________。而从三七中提取三七皂苷时,提取前应对三七材料用________浸泡，以提髙提取率。
(3)欲大量繁殖脱毒的高品质胡萝卜植株和三七植株，应选择植株的________部分进行组织培养。在配置好的培养基中，除了营养物质之外常常还需要添加________
(4)进行植物组织培养时，由于操作失误，某同学发现培养基上感染了微生物,欲确定其中是否含有纤维素分解菌。把微生物培养在以________为唯一碳源的培养基中，并加入________染料,培养后,培养基中出现透明^，表明其中含有纤维素分解菌。
19、（1）在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是 。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的 。 可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
（2）在腐乳制作时，要加盐腌制，其目的是 。要制作出色香味俱全的腐乳，关键在于 的配制。
（3）在制作腐乳、果醋、泡菜的过程中，需要氧气的是 。
（4）在提取玫瑰精油的实验流程中，向乳化液中加入NaCl的目的是 。
（5）胡萝卜素易溶于有机溶剂中，据此可用 的方法提取。提取的胡萝卜素粗品可通过 进行鉴定。
1、（除标注外，每空2分，共15分）
（1）⑥④⑤① C6H12O6 → 2C3H6O3（乳酸）
（2）⑥①②⑤③④ 防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
（3）避免微生物在培养基上与离体培养的植物组织竞争 植物激素
再分化（1分） 需要
2、（15分，除标注外每空2分）
（1）微生物发酵
（2）过滤（1分） 有机溶剂遇明火易发生爆炸
（3）防止加热时有机溶剂挥发
（4）石油醚 性质和使用量
（5）纸层析法 胡萝卜素溶解在层析液中
3、（1）棉塞 （1分） 瓶口（1分） 培养基（1分） 凝固（1分） 皿盖（1分）
皿底（1分） （2）pH、温度、光照 ；（3分）
（3）酵母菌在有氧、无氧条件下都能生存（2分）
（4）使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度（2分）；除去萃取液中的不溶物（2分）
4、（1）有氧呼吸（1分） 发酵（1分） 重铬酸钾（1分）
这一温度最适合酵母菌生长和繁殖（1分）
（2）碳源、氮源、水、无机盐和生长因子（2分） 清洗干净（1分） 70%酒精（1分） （3）平板划线法（2分） 稀释涂布平板法（2分） 种群（1分）
（4）果胶酶（1分） 包埋（1分）
5（1）灭菌 土壤微生物
（2） 30 mL(等量)蒸馏水(无菌水) （等量的）斐林试剂 水浴加热 颜色变化
（3）纤维素 刚果红
6、（1）酚红 脲酶 氨 红
（2）目的菌 选择 （3）尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气
（4）稀释涂布平板法（2分） 平板划线法（2分） 单
（5）灭菌
6、（1）0.14mol/L 分解蛋白质 二苯胺
（2）通过高温使（氧化）酶失活，防止色素被分解 压榨
（3）无菌技术（或防止外来杂菌干扰）干热灭菌法
（4）（每空2分）有机磷农药 凝胶色谱法 相对分子质量大小 去除杂蛋白 8（15分，除标注外每空1分）
(1) 水溶性萃取剂（2分） (2)萃取剂的性质和使用量（2分）
(3)水浴 过滤 蒸馏 （4）纸层析 标准样品
（5）防止层析液挥发（2分） 样品原点（2分） 溶剂 石油醚
9、（1）高压蒸汽灭菌（2分） 既要考虑消毒效果又要考虑材料的耐受能力（或保持外植体的活性）（2分）（2）真菌（2分） 不能（1分） 被污染的培养瓶用高压蒸汽灭菌后再清洗处理（2分） （3）萃取（1分） 水浴（1分） （4）平板划线法（1分） 稀释涂布平板法（1分） （5）透明圈的大小（2分）
10、（1）溶化 倒平板 （2）高压蒸汽灭菌 对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基灭菌彻底（2分） （3）增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物（2分） 纤维素 刚果红 红色复合物 产生纤维素酶，能够
分解纤维素（2分） （4） 伊红美蓝 黑色
12、（1）（每空2分）醋酸菌 酵母菌 醋酸菌 酵母菌 （2）（每空2分）乙 乙醇（葡萄糖或乙醇） （3）（每空1分）甲 酸 重铬酸钾溶液
13、(1)纤维素 选择
(2) ①发酵 榨汁机要清洗干净并晾干 发酵装置要清洗干净，用体积分数为70%的酒精消毒或者用洗洁净洗涤。
②30～35 ℃ 充气 醋酸菌是好氧菌，醋酸发酵时需要氧的参与
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（1）平板划线 纤维素酶 菌落周围出现透明圈
（2）斐林 不同酶的氨基酸序列不同（或不同酶的空间结构不同） 乙
（3）小 CaCl2 杂菌
(1)平板划线 稀释 (2)NaNO3 尿素和葡萄糖 氮、碳
(3)甲同学只涂布了两个平板，实验数据说服力不够；丙同学虽然涂布了三个平板，但 其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明操作过程出现错误，实验数据缺乏正确性（3分）(4)1.165×109
）平板划线法和稀释涂布平板法（全部答出给2分） 选择（2分）
（2）萃取法（2分） 萃取剂易燃易爆（2分） 石灰水 （1分）
（3）根尖、芽尖（或形成层等分生能力强的细胞）（2分） 植物激素 (或生长素和细胞分裂素) （2分） （4）纤维素（1分） 刚果红（1分）
18、（1）毛霉 肽和氨基酸 脂肪酶
（2）析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬,同时抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质（2 分）
卤 汤（2 分）
（3）制作腐乳、果醋（2 分）
（4）使油水分层（2 分）
（5）萃取（2分）纸层析（2 分）
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11、7 12
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