目 的:规范TU-1810DSPC型紫外可见分光光度计的操作,确保正确使用、维护和保养TU-1810DSPC型紫外可见分光光度计,保证测量数据的准确性。 适用范围:适用于TU-1810DSPC型紫外可见分光光度计的操作和维护。 职 责:质量部经理、QC化验员对本规程的实施负责。 内 容: 1操作步骤 1.1开机
打开稳压电源,等5-10秒,稳压电源稳定后依次打开打印机、计算机,等待计算机正常进入到桌面后,确认样品室内无挡光物,再打开仪器主机电源。 1.2仪器初始化
打开仪器主机电源后,确定样品池内没有挡光物(干燥袋或比色皿等)。双击桌面的“紫外软件”图标,(或点击“开始”菜单,选择“程序”,找到“Uvwin5紫外软件”,选择“Uvwin5紫外软件”);等待仪器进行初始化,每一项检查“正确”后进行测量。 1.3空白校正:
1.3.1正确放入空白溶液后,点击“校零”(在光谱扫描功能下是“基线”)键进行空白校正。 1.3.2空白校正完成后,正确放入样品,点击“开始”键(或按F9)进行测量。 1.4测量
1.4.1正确放入比色皿:TU-1810仪器是双光束分光光度计,要在两个样品池内都放入空白溶液(或参比溶液)进行空白校正。然后只取出外侧的比色皿,放入测量的样品进行读数。备注:样品池内侧的参比溶液在测量中不能取出,除非空白溶液改变或测量波长改变才拿出重新进行空白校正。 1.4.2选择测量功能:Uvwin5紫外软件提供了丰富的测量功能,根据需要在“工作室”内选择所需要的测量方式。(测量方式简介及相应参数设置见附录) 1.5图形处理 1.5.1一般性观察
(1)窗口的缩放:可以选择【图形】菜单下的【窗口缩放】来实现,也可以点击工具栏相应的图标来实现,还可以用【图形】菜单下的【坐标范围】来实现。
(2)距离测量:可以使用【图形】下的【距离测量】或相应的测距图标按钮来实现。
(3)峰值检出:是对图谱中的峰、谷值进行检查,并对符合要求的峰谷值进行标记。可以在【图形】菜单下的【峰值检出】进行显示,峰值检出后,图谱窗口被分为三部分,即:【图谱】、【检出表】和【设置栏】。
(4)读光谱:【图形】菜单下的【读光谱】是利用一条垂直的直线对光谱进行扫描,将直线与光谱
图交点的数据读出来并进行显示,可以左右拖动直线。
(5)读屏幕:【图形】下的【读屏幕】是将鼠标所在位置的坐标显示出来的命令。
(6)曲线显示:【图形】下的【曲线显示】提供对扫描曲线不同显示方式的选择。可供选择的显示方式有:点、线、交叉点、圆点和三角点。
(7)组合显示:【图形】下的【组合显示】是允许您将多条曲线重叠显示在图谱中。 1.5.2数学计算
(1)基本计算:提供加减乘除的计算,可以在【数学计算】菜单下选择。 源: 选择需要进行计算是光谱。 计算:选择计算方法。
光谱:在光谱中,可以输入一个值,表示与此数值进行计算,还可以选择一条光谱,表示与此光谱进行计算。
(2)高级计算:主要提供平滑、一次微分、二次微分、三次微分和四次微分的计算功能。 光谱:选择需要计算的光谱。 计算:选择计算方法。
点数:选择平滑或微分的计算点数,计算点数越多,计算结果就越好。
系数:设置计算结果的放大倍数。设为“1”,表示不放大,小于“1”表示缩小,大于“1”表示放大。
(3)附加计算:主要提供对数计算、倒数计算、和Abs与T%之间的转换计算功能。 光谱:选择需要计算的光谱。 计算:选择计算方法。 1.5.3 3D图谱
将多条曲线进行组合,并以3D的方式进行显示。点击【图形】菜单下的【创建三维光谱】来实现。 (1)菜单和工具栏简介
原始视角:将视角调整到最佳的显示状态。 透视投影:将投影方式设置为透视投影方式。 平行投影:将投影方式设置为平行投影方式。 显示光谱坐标轴:显示三维谱图的坐标轴和网格线。 显示光谱曲线:将三维光谱显示为曲线。 显示光谱曲面:将三维光谱显示为曲面。 显示光谱线框:将三维光谱显示为线框。
显示迷你坐标轴:在窗口左下角显示一个小的坐标轴。 (2)光谱树:显示当前光谱的名称。
(3)峰值检出:是对三维图谱中的峰、谷值进行检查,并对符合要求的峰谷值进行标记。
(4)分层显示:在分层显示中,您可以设置每层的开关,还可以设置每层对应的数据范围和颜色,每一层都对应有一个上限值、一个下限值和一个颜色值可以设置。 (5)图形显示窗口:按住鼠标拖动,来根据鼠标移动的方向进行旋转。 1.6数据导出
选择【文件】菜单下的【导出数据】子菜单进行导出,可以选择导出文件和导出类型。 1.7完成
测量完成后根据需要保存、导出或打印测量数据。退出紫外程序后如果不保存数据将清除。 1.8关机
1.8.1一定要取出样品池内的所有比色皿,关闭Uvwin5紫外软件。
1.8.2退出紫外操作系统后,依次关掉主机、计算机 、打印机电源。最后关闭电源。 1.8.3仪器默认狭缝均设置为2nm。 1.9填写《设备使用记录》。 2注意事项
2.1仪器应置于稳固的工作台上,不应该有强震动源,室内无强电磁干扰源及有毒有害气体; 2.2当仪器停止工作时,必须切断电源,罩上防护罩; 2.3仪器使用前均需开机预热20分钟,再进行测量;
2.4仪器中样品及参比池,避免与酸、碱及强腐的有机溶剂接触;
2.5仪器开机状态不测定时应使样品室盖保持开启状态,否则会使光电管疲劳,数字显示不稳定; 2.6比色皿使用后及时取出,用蒸馏水清洗干净并保存好;
2.7境温度10C~30C,8小时内温度波动不超过±3℃,环境相对湿度低于85%,放尘; 2.8避免溶液泼在样品室内,如果溶液洒落,及时使用抹布将溶液清理干净; 2.9避免碰到光学镜面,氘灯能量低时,及时更换。 3维护保养
3.1每次测量完毕后,需将比色皿清洗干净,用专用擦镜纸擦干,放回盒子,关上开关,拔下电源;设备表面用无尘布擦拭,清洁干净后用75%乙醇擦拭消毒。
3.2每次使用后应检查仪器样品室是否有溢出的溶液,经常擦拭样品室,以防废液对部件或光路系统的腐蚀,用抹布清洁仪器表面及仪器台面,使不留污渍,使用完毕后罩上仪器防尘罩; 3.3仪器使用前后检查仪器状态是否良好,定期进行仪器性能指标检测(包括波长准确度、透射比正确度、稳定度),发现问题即与厂家或销售部门联系解决。
3.4要坚持实行“三防四定”制度,做到“防尘、防潮、防振”和“定人保管、定点存放、定期维护、定期检修”。
3.5维护保养周期:1次/月。 4相关文件:
《仪器设备校验管理制度》 GB-SMP-ZG-003 5相关记录:
GB-R-SB-003 设备使用记录 GB-R-SB-007 设备维护保养记录 GB-R-SB-008 设备设施清洁记录
附录:
测量方式简介及相应参数设置
1、光度测量:指在您指定的波长处读取并测量数据,即定点读数,可以做单个波长或多个波长下的吸光度(或透过率)测量。 参数设置:
(1)输入相应测量波长; (2)重复测量(是否取平均数); (3)光度模式(一般为Abs); (4)简单计算。
2、光谱扫描:是按照一定的波长间隔,对某个波段范围进行扫描,波长每变化一次,就读取一次测量数据。主要测量样品的图谱做定性分析,即寻找测量样品的最大吸收峰。 参数设置:
(1)波长范围(先输长波再输短波); (2)光度模式(一般为Abs); (3)扫描速度(一般为中速); (4)采样间隔(一般为1nm或0.5nm); (5)记录范围(一般为0-1)。
3、定量测定:用待测样品的测量值与标准样品的测量值进行比对,最后计算出待测样品的浓度值的一种测定方法,即通过测量标准样品自动建立工作曲线,来测量样品的浓度。 参数设置:
(1)测量方法(有单波长法、双波长法、双波长系数法、三波长法、一次微分法、二次微分法、三次微分法、四次微分法、双波长二次微分)一般使用单长波法; (2)输入测量波长;
(3)校正曲线选项①选择曲线方程;②选择浓度单位;③选择方程次数(一般为一次方程);④选择是否插入零点。
4、时间扫描:是按照一定的时间间隔,进行连续采样,并将采样数据以图形的方式进行显示的一种测量方法,即测量样品在一定波长下随时间的变化曲线。也称动力学测量。 参数设置:
(1)光度模式(一般为Abs); (2)设置时间扫描的波长点;
(3)扫描方式分为单次扫描、重复扫描、自动扫描;
(4)显示范围:根据样品产生的数值大小设置时间扫描图谱中纵坐标的范围;
(5)时间选项:包括时间单位、显示方式、自动模式、扫描时间、采样数、时间间隔。 注:上述设置中光度模式有:Abs(吸光度模式)、T%(透过率模式)、Es(能量模式-样品光)、Er(能量模式-参比光)、R%(参比光透过率-积分球附件专用)。 5、DNA蛋白质测定
(1)启动DNA蛋白质测定:将样品放入样品池,点击【应用】菜单下的【DNA蛋白质分析】子菜单,便可打开相应测量窗口,点击测量按钮可进行一次测量,多次点击完成多次测量。 (2)参数设置
点击【设置】按钮进入参数设置面板。
“方法一”和“方法二”为标准的测定方法参数,“自定义”选项可以输入相应的参数。 参数简介:WL(A1,A2):表示DNA蛋白质的两个测定波长。 Df(A1,A2):表示DNA的两个校正系数。 Pf(A1,A2):表述蛋白质的两个校正系数。 (3)DNA蛋白质的计算方法: >不进行320nm校正: DNA浓度= Df1×A1- Df2×A2 蛋白质浓度= Pf2×A2- Pf1×A1
>进行320nm校正:(A1=A1-A320,A2=A2-A320) DNA浓度= Df1×A1- Df2×A2 蛋白质浓度= Pf2×A2- Pf1×A1
注:校正系数为采用短光程比色皿或稀释样品测量时的校正吸收:测量时计算用吸光度为测量吸光度×校正系数。
目 的:规范TU-1810DSPC型紫外可见分光光度计的操作,确保正确使用、维护和保养TU-1810DSPC型紫外可见分光光度计,保证测量数据的准确性。 适用范围:适用于TU-1810DSPC型紫外可见分光光度计的操作和维护。 职 责:质量部经理、QC化验员对本规程的实施负责。 内 容: 1操作步骤 1.1开机
打开稳压电源,等5-10秒,稳压电源稳定后依次打开打印机、计算机,等待计算机正常进入到桌面后,确认样品室内无挡光物,再打开仪器主机电源。 1.2仪器初始化
打开仪器主机电源后,确定样品池内没有挡光物(干燥袋或比色皿等)。双击桌面的“紫外软件”图标,(或点击“开始”菜单,选择“程序”,找到“Uvwin5紫外软件”,选择“Uvwin5紫外软件”);等待仪器进行初始化,每一项检查“正确”后进行测量。 1.3空白校正:
1.3.1正确放入空白溶液后,点击“校零”(在光谱扫描功能下是“基线”)键进行空白校正。 1.3.2空白校正完成后,正确放入样品,点击“开始”键(或按F9)进行测量。 1.4测量
1.4.1正确放入比色皿:TU-1810仪器是双光束分光光度计,要在两个样品池内都放入空白溶液(或参比溶液)进行空白校正。然后只取出外侧的比色皿,放入测量的样品进行读数。备注:样品池内侧的参比溶液在测量中不能取出,除非空白溶液改变或测量波长改变才拿出重新进行空白校正。 1.4.2选择测量功能:Uvwin5紫外软件提供了丰富的测量功能,根据需要在“工作室”内选择所需要的测量方式。(测量方式简介及相应参数设置见附录) 1.5图形处理 1.5.1一般性观察
(1)窗口的缩放:可以选择【图形】菜单下的【窗口缩放】来实现,也可以点击工具栏相应的图标来实现,还可以用【图形】菜单下的【坐标范围】来实现。
(2)距离测量:可以使用【图形】下的【距离测量】或相应的测距图标按钮来实现。
(3)峰值检出:是对图谱中的峰、谷值进行检查,并对符合要求的峰谷值进行标记。可以在【图形】菜单下的【峰值检出】进行显示,峰值检出后,图谱窗口被分为三部分,即:【图谱】、【检出表】和【设置栏】。
(4)读光谱:【图形】菜单下的【读光谱】是利用一条垂直的直线对光谱进行扫描,将直线与光谱
图交点的数据读出来并进行显示,可以左右拖动直线。
(5)读屏幕:【图形】下的【读屏幕】是将鼠标所在位置的坐标显示出来的命令。
(6)曲线显示:【图形】下的【曲线显示】提供对扫描曲线不同显示方式的选择。可供选择的显示方式有:点、线、交叉点、圆点和三角点。
(7)组合显示:【图形】下的【组合显示】是允许您将多条曲线重叠显示在图谱中。 1.5.2数学计算
(1)基本计算:提供加减乘除的计算,可以在【数学计算】菜单下选择。 源: 选择需要进行计算是光谱。 计算:选择计算方法。
光谱:在光谱中,可以输入一个值,表示与此数值进行计算,还可以选择一条光谱,表示与此光谱进行计算。
(2)高级计算:主要提供平滑、一次微分、二次微分、三次微分和四次微分的计算功能。 光谱:选择需要计算的光谱。 计算:选择计算方法。
点数:选择平滑或微分的计算点数,计算点数越多,计算结果就越好。
系数:设置计算结果的放大倍数。设为“1”,表示不放大,小于“1”表示缩小,大于“1”表示放大。
(3)附加计算:主要提供对数计算、倒数计算、和Abs与T%之间的转换计算功能。 光谱:选择需要计算的光谱。 计算:选择计算方法。 1.5.3 3D图谱
将多条曲线进行组合,并以3D的方式进行显示。点击【图形】菜单下的【创建三维光谱】来实现。 (1)菜单和工具栏简介
原始视角:将视角调整到最佳的显示状态。 透视投影:将投影方式设置为透视投影方式。 平行投影:将投影方式设置为平行投影方式。 显示光谱坐标轴:显示三维谱图的坐标轴和网格线。 显示光谱曲线:将三维光谱显示为曲线。 显示光谱曲面:将三维光谱显示为曲面。 显示光谱线框:将三维光谱显示为线框。
显示迷你坐标轴:在窗口左下角显示一个小的坐标轴。 (2)光谱树:显示当前光谱的名称。
(3)峰值检出:是对三维图谱中的峰、谷值进行检查,并对符合要求的峰谷值进行标记。
(4)分层显示:在分层显示中,您可以设置每层的开关,还可以设置每层对应的数据范围和颜色,每一层都对应有一个上限值、一个下限值和一个颜色值可以设置。 (5)图形显示窗口:按住鼠标拖动,来根据鼠标移动的方向进行旋转。 1.6数据导出
选择【文件】菜单下的【导出数据】子菜单进行导出,可以选择导出文件和导出类型。 1.7完成
测量完成后根据需要保存、导出或打印测量数据。退出紫外程序后如果不保存数据将清除。 1.8关机
1.8.1一定要取出样品池内的所有比色皿,关闭Uvwin5紫外软件。
1.8.2退出紫外操作系统后,依次关掉主机、计算机 、打印机电源。最后关闭电源。 1.8.3仪器默认狭缝均设置为2nm。 1.9填写《设备使用记录》。 2注意事项
2.1仪器应置于稳固的工作台上,不应该有强震动源,室内无强电磁干扰源及有毒有害气体; 2.2当仪器停止工作时,必须切断电源,罩上防护罩; 2.3仪器使用前均需开机预热20分钟,再进行测量;
2.4仪器中样品及参比池,避免与酸、碱及强腐的有机溶剂接触;
2.5仪器开机状态不测定时应使样品室盖保持开启状态,否则会使光电管疲劳,数字显示不稳定; 2.6比色皿使用后及时取出,用蒸馏水清洗干净并保存好;
2.7境温度10C~30C,8小时内温度波动不超过±3℃,环境相对湿度低于85%,放尘; 2.8避免溶液泼在样品室内,如果溶液洒落,及时使用抹布将溶液清理干净; 2.9避免碰到光学镜面,氘灯能量低时,及时更换。 3维护保养
3.1每次测量完毕后,需将比色皿清洗干净,用专用擦镜纸擦干,放回盒子,关上开关,拔下电源;设备表面用无尘布擦拭,清洁干净后用75%乙醇擦拭消毒。
3.2每次使用后应检查仪器样品室是否有溢出的溶液,经常擦拭样品室,以防废液对部件或光路系统的腐蚀,用抹布清洁仪器表面及仪器台面,使不留污渍,使用完毕后罩上仪器防尘罩; 3.3仪器使用前后检查仪器状态是否良好,定期进行仪器性能指标检测(包括波长准确度、透射比正确度、稳定度),发现问题即与厂家或销售部门联系解决。
3.4要坚持实行“三防四定”制度,做到“防尘、防潮、防振”和“定人保管、定点存放、定期维护、定期检修”。
3.5维护保养周期:1次/月。 4相关文件:
《仪器设备校验管理制度》 GB-SMP-ZG-003 5相关记录:
GB-R-SB-003 设备使用记录 GB-R-SB-007 设备维护保养记录 GB-R-SB-008 设备设施清洁记录
附录:
测量方式简介及相应参数设置
1、光度测量:指在您指定的波长处读取并测量数据,即定点读数,可以做单个波长或多个波长下的吸光度(或透过率)测量。 参数设置:
(1)输入相应测量波长; (2)重复测量(是否取平均数); (3)光度模式(一般为Abs); (4)简单计算。
2、光谱扫描:是按照一定的波长间隔,对某个波段范围进行扫描,波长每变化一次,就读取一次测量数据。主要测量样品的图谱做定性分析,即寻找测量样品的最大吸收峰。 参数设置:
(1)波长范围(先输长波再输短波); (2)光度模式(一般为Abs); (3)扫描速度(一般为中速); (4)采样间隔(一般为1nm或0.5nm); (5)记录范围(一般为0-1)。
3、定量测定:用待测样品的测量值与标准样品的测量值进行比对,最后计算出待测样品的浓度值的一种测定方法,即通过测量标准样品自动建立工作曲线,来测量样品的浓度。 参数设置:
(1)测量方法(有单波长法、双波长法、双波长系数法、三波长法、一次微分法、二次微分法、三次微分法、四次微分法、双波长二次微分)一般使用单长波法; (2)输入测量波长;
(3)校正曲线选项①选择曲线方程;②选择浓度单位;③选择方程次数(一般为一次方程);④选择是否插入零点。
4、时间扫描:是按照一定的时间间隔,进行连续采样,并将采样数据以图形的方式进行显示的一种测量方法,即测量样品在一定波长下随时间的变化曲线。也称动力学测量。 参数设置:
(1)光度模式(一般为Abs); (2)设置时间扫描的波长点;
(3)扫描方式分为单次扫描、重复扫描、自动扫描;
(4)显示范围:根据样品产生的数值大小设置时间扫描图谱中纵坐标的范围;
(5)时间选项:包括时间单位、显示方式、自动模式、扫描时间、采样数、时间间隔。 注:上述设置中光度模式有:Abs(吸光度模式)、T%(透过率模式)、Es(能量模式-样品光)、Er(能量模式-参比光)、R%(参比光透过率-积分球附件专用)。 5、DNA蛋白质测定
(1)启动DNA蛋白质测定:将样品放入样品池,点击【应用】菜单下的【DNA蛋白质分析】子菜单,便可打开相应测量窗口,点击测量按钮可进行一次测量,多次点击完成多次测量。 (2)参数设置
点击【设置】按钮进入参数设置面板。
“方法一”和“方法二”为标准的测定方法参数,“自定义”选项可以输入相应的参数。 参数简介:WL(A1,A2):表示DNA蛋白质的两个测定波长。 Df(A1,A2):表示DNA的两个校正系数。 Pf(A1,A2):表述蛋白质的两个校正系数。 (3)DNA蛋白质的计算方法: >不进行320nm校正: DNA浓度= Df1×A1- Df2×A2 蛋白质浓度= Pf2×A2- Pf1×A1
>进行320nm校正:(A1=A1-A320,A2=A2-A320) DNA浓度= Df1×A1- Df2×A2 蛋白质浓度= Pf2×A2- Pf1×A1
注:校正系数为采用短光程比色皿或稀释样品测量时的校正吸收:测量时计算用吸光度为测量吸光度×校正系数。