对甲基苯磺酰氯柱前衍生法测定水中哌嗪

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年月

对甲基苯磺酰氯柱前衍生法测定水中哌嗪

李

欣，沈敏雅，杨

倩，蔡天明

*

（南京农业大学资源与环境科学学院，南京210095）

要:建立了一种高效液相柱前衍生化测定水中哌嗪含量的方法。选取对甲

TSC)为衍生试剂对哌嗪进行衍生化，基苯磺酰氯(p-衍生产物利用液质联用摘

(LC-MS)技术定性，C18色谱柱，高效液相色谱定量分析。方法采用UltimateXB-以甲醇－水(体积比60:40)为流动相，流速为0.8mL/min，检测波长为240nm，室温下检测。实验结果表明，哌嗪的衍生化产物与过量衍生化试剂分离良好，在

10～100mg/L的范围内，哌嗪的浓度与其衍生产物峰面积呈现良好的线性关系，相关系数r＞0.999。方法的检出限为0.09mg/L，定量限为0.30mg/L。回收率范围为88.2%～99.2%，相对标准偏差为2.5%～5.3%。通过正交反应试验确定了最佳衍生化条件:衍生温度为55℃，缓冲液pH为10.0，衍生时间10min。

关键词：哌嗪;对甲基苯磺酰氯;衍生化;高效液相;质谱

中图分类号：O657.63

文献标识码：A

文章编号：1000-0720（2012）12-048-05

哌嗪（pip），分子式C4H10N2，分子量为86，是一种无色透明针状或叶状结晶的有机杂环胺，易溶于水。哌嗪作为重要的医药中间体和精细化工原料被广泛应用的含量法

［4］

［2，3］

［1］

等

［17］

Cl作为荧光衍生化试剂得到了采用FMOC-［2］

哌嗪衍生物。Kopciuch和Lin等

［18］

都选取DNS-

Cl作为衍生化试剂测定哌嗪，而Lin利用的是LC-MS中选择反应监测（SRM）模式对哌嗪的单取代这对仪器条件的要求较高。产物进行定量分析，

目前，选取常用的衍生化试剂对甲基苯磺酰氯（p-TSC），并且使用常规的紫外（UV）检测器进行HPLC分析的哌嗪衍生化法测定水中哌嗪的研究TSC对国内尚无报道。本文建立的方法即采用p-HPLC-UV法测定哌嗪衍生物，哌嗪进行柱前衍生，

并对方法的精密度、检出限、回收率等进行了评价，同时探讨了最佳衍生反应条件和色谱分离条件。11.1

材料与方法主要仪器与试剂

AgilentG6410B型电喷雾－三重四极杆质谱Agilent1200系列分析系仪（美国Agilent公司），

统；FL2200高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器公XB-C18司），配紫外检测器和FL9500色谱工作站，

。因此，在最终医药产品纯度，废

水处理效果或者环境中残留等方面需要测定哌嗪

。

迄今报道的测定哌嗪的方法有非水滴定

［5］［2］［6，7］、、比色法、液相色谱法、气相色谱法

［8，9］

离子色谱法和紫外-可见光分光光度法

［12，13］

［10，11］

等。其中气相色谱和非水滴定法适用于无水条件下测定哌嗪。比色法

虽然简便但是反应试剂

的专一性不强，类似的化学结构会干扰测定且检测限较高。液相色谱具有方法简便、准确分离产物、重现性好等优点。此类在紫外-可见光区吸收极弱的杂环胺的测定方法多采用柱前衍生化高效液相

［14］

色谱（HPLC）分析，目前常用的柱前衍生试剂有

Cl）、邻苯二甲醛（OPA）、氯甲酸芴甲酯（FMOC-丹

［15，16］

Cl）、。Pietsch苯磺酰氯（TSC）等酰氯（DNS-

06-17；修订日期：2012-07-08收稿日期：2012-基金项目：江苏省省级环保科技项目（201005）资助作者简介：李

mail：2010103045@njau．edu．cn欣（1987－），女，硕士研究生；E-

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嗪（99.5%，国药集团化学试剂公司），对甲基苯磺酰氯（98.5%，国药集团化学试剂公司，无水乙醇重结晶提纯），甲醇和乙腈（色谱纯），水为二次蒸馏水。

1.2样品储备液制备与试样衍生化

哌嗪储备液：准确称取0.5g的无水哌嗪标准品（精确到0.01mg），用超纯水溶解并定容至50mL（10g/L），0.45μm滤膜过滤，4℃冰箱中保存。

衍生试剂储备液：准确称取2.5g的对甲基苯

0.45μm滤膜磺酰氯，乙腈溶解至50mL（50g/L），4℃冰箱中保存。0.1mol/L的NaOH溶液。过滤，

衍生化方法：移取100μL哌嗪储备液，置于10mL具塞磨口试管内，加入20μLNaOH溶液，200μL衍生试剂储备液，其余用纯水定容至5mL，封口后于50℃温水浴中反应10min，取出放冷后加入5mL二氯甲烷，充分震荡萃取后，取20μL有MS产物机相高效液相色谱测定；10μL进行LC-分析。1.3

MS条件色谱与LC-C18柱（4.6mm×200mm，高效液相：XB-240nm。

LC-MS条件：电喷雾离子源，正离子检测模式（ESI+），干燥气温度350℃，雾化气压0．21MPa，

毛细管电压4000V，碎片电压90V，气体流速10.0L/min，质量扫描范围：m/z50～400。AgilentXDB-C18（50mm×4.6mm）色谱柱，甲醇：水=60：40（体积比）流动相，0.2mL/min流速，240nm检测波长。1.4

衍生化条件优化

根据上述的衍生化方法，分别改变反应时间、反应温度、反应体系pH以及对甲基苯磺酰氯的用量，考察单因素对衍生率的影响；进而选取时间、温

pH和反应摩尔比等4因素3个水平进行试验，度、

4

利用正交表（L93）进行正交试验，以获得最佳的衍生化条件。

年月

22.1

结果与讨论

衍生产物的质谱鉴定

哌嗪属于低分子量杂环胺，即没有荧光发色基团也没有紫外发色基团，但是对甲苯磺酰氯可以与伯胺或仲胺基上的活泼氢反应，被磺酰基取代生成磺酰胺，脱掉一分子的HCl生成具有紫外光的衍生物，称为胺的磺酰化反应

［19］

，又称兴斯堡反应。

5μm）；流动相为甲醇：水（60：40）；流速

0.8mL/min；进样量：20μL；室温；检测波长：本文选取常用的磺酰化剂对甲苯磺酰氯对哌嗪进行衍生，反应如下

：

MS分析，按上述方法衍生化之后，进行HPLC-结果如图1所示。峰A和峰B分别代表过量的对甲基苯磺酰氯和哌嗪衍生化产物。质谱分析哌嗪

的衍生产物为m/z=395.6和241.4。对哌嗪衍生MS/MS见图2。结果表化产物进行二次质谱分析，

明衍生反应后哌嗪产生了单、双两种取代产物：单TSC+pip）的离子碎片峰分别为取代产物（p-57.2，85.1和155.2；双取代产物（p-TSC+pip+p-TSC）为84.2，155.2，和239.4。此结果与预期结表明衍生化成功。果相同，

2.2衍生化条件的优化

2.2.1

反应体系pH胺类衍生化反应多在碱性环

境中进行，所以考察了pH9～13范围内反应体系pH对衍生反应的影响。结果表明，随着pH升高，哌嗪衍生物的峰面积呈现先升高再降解的规律。pH11时，相对峰面积最大，达到173.5%，表明在此条件下衍生反应产率最高。导致此结果的原因分析可能有两方

面：一方面是哌嗪的pKb=9.8，当pH＞9.8时抑制其水解，保持为有机形态，有利于衍生化反应；另一方面是对甲基苯磺酰氯在碱性条件稳定性逐渐变差，所以

衍生化反应率降低。说明此反应适合当pH＞11时，在pH10～11左右。

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年月

图1

Fig．1

哌嗪衍生化的液质UV色谱图和产物B的一级质谱图．

LC-MS-DADchromatogramofderivatizationandmassspectrumofproduct

B

图2

Fig．2

哌嗪单取代（a）和双取代（b）产物的二级质谱．

Second-ordermassspectraofmono-substituted（a）andbis-substituted（b）derivatives．

2.2.2

衍生温度按1.3的方法，改变衍生化温

35，45，55，65和75℃，度，分别设置为25，结果表尽量使反应完全。基苯磺酰氯过量，

2.2.5正交试验优化结果正交试验的直观分析其次是衍生剂结果表明pH对衍生效率影响最大，

用量和时间。2.3

方法学考察

对分析方法的线性、检出限、精密度和回收率进行了考察。在本试验条件下，哌嗪与对甲基苯磺酰氯衍生化反应后的典型HPLC色谱图见图3a，衍生物与过量衍生剂可以完全分离开不干扰样品测定。在最优反应条件下，绘制标准曲线图，哌嗪在10～100mg/L浓度范围内时，其浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性方程y=222739.86ρ+328551.99，R2=0.999。

方法的检出限（3σ）和定量限（10σ）分别为0.09和0.30mg/L。在相同条件下，对100mg/L哌嗪衍生物进行6次平行测定，保留时间的RSD

55～75℃时衍生明温度对反应的影响不是很大，

物产率较高。2.2.3

10，衍生时间改变时间，分别设置为5，

20，30和40min，结果表明反应10min时，衍生产物最多，随着时间的延长峰面积减少再升高。可能是由于衍生产物稳定性导致反应时间不宜过长。Lin［18］等用丹酰氯做衍生化试剂时，分别考察了5，10，15，20min等不同时间下衍生物产量问题，结果同样是10min时产率最高。

2.2.4衍生剂用量改变对甲基苯磺酰氯的用TSC：pip的摩尔比从1：1增加到10：1，量，使p-结

果显示，衍生剂的用量对衍生效率的影响很大，随着用量的增加，衍生产物增加，当摩尔比达到10：1时，产物量接近稳定。表明衍生化反应时应使对甲—50—

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在实际水样中添加3个浓度水平（25．0、50.0、100．0mg/L）的标准样品，按本方法所确定的实验条件，对每个添加浓度平行测定5次，各浓88.2%和99.2%，度的平均回收率为90.2%、相对

2.5%和5.2%。标准偏差为5.3%、

2.4

实际样品的测定

图3（b）为经过生物降解后的含有哌嗪污染物

年月

的含盐废水实际样品测定色谱图，与标准色谱图（图3a）对比，经过降解后水中产生新的降解产物3，哌嗪含量为87.5mg/L

。

图3Fig．3

（a）哌嗪与对甲基苯磺酰氯衍生反应的典型HPLC色谱图；（b）实际废水样品色谱图

1－对甲基苯磺酰氯；2－哌嗪衍生物；3－未知降解产物

（a）HPLCchromatogramofpiperazineafterderivatizationwithp-tosylchloride；（b）HPLCchromatogramofawastewatersample

参考文献

［1］熊

2004，（2）：29剑．江西化工，

［2］RenataGadzala－Kopciuch．JLiquidChromatogr＆

RelatedTechnol，2005，28：2211［3］任

2006，源，韦朝海，吴超飞，等．环境科学学报，26（11）：1785

［4］PiferCW，WollishEG．AnalChem，1952，2：300［5］倪慕慈．中国现代应用药学，1986，3（6）：44［6］陈志华，1982，（11）：9陶孝铮．中国医药工业杂志，［7］王丽华．理化检验：化学分册，1998，34（6）：249［8］RainerKadnar．JChromatogrA，1999，850：289［9］朱岩，1994，（3）：150刘学健，陆州舜，等．化学世界，［10］黄川徽，徐铜文．南京工业大学学报，2005，

27（2）：22

［11］吴伶俐，魏献军，高林晓，2009，28（6）：53等．，［12］RogersEW．MedicalJ，1958，136：18

［13］StevensWH，KirstenSkov．Analyst，1965，90：182［14］屠春燕，2010，袁艳娟，吴燕娇，等．分析试验室，

2（3）：96

［15］丁卓平，刘辰麒，陈

25（4）：59

［16］董伟峰，李宪臻，林维宣．大连轻工业学院学报，

2005，24（2）：115

［17］PietschJ，HampelS，SchmidtW，etal．FreseniusJ

AnalChem，1996，355：164

［18］LinH，TianY，ZhangZJ，etal．AnalChimActa，

2010，664：40

［19］徐寿昌．有机化学．北京：高等教育出版社，1993：78

2006，迪，等．分析测试学报，

Determinationofpiperazineinwaterusingpre-columnderivatizationwithP-tosylchloride

LIXin，SHENMin-ya，YANGQianandCAITian-ming*（CollegeofResourcesandEnvironmentalSciences，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095），FenxiShiyanshi，2012，31（12）：48～52

Abstract：Asimplepre-columnderivatization-highperformanceliquidchromatographic（HPLC）methodwithp-tosylchlorideasaderivativeagentwasestablishedforthedeterminationofanhydrouspiperazineinwater．Afteradditionofp-tosylchlorideasthederivativeagent，piperazinewasderivatized．ThederivativeswereanalyzedforqualitationandquantitationusingLC-MSandHPLC，respectively．SeparationwasachievedatambienttemperatureusinganultimateXB-C18column，andisocraticelutionwithmethanol–water（60：40，V/V）ata

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Keywords：Piperazine；P-tosylchloride；Derivatization；HPLC；Massspectrum

年月

2012慕尼黑上海分析生化展圆满落幕

盛况空前用户云集，

第六届慕尼黑上海分析生化展（analyticaChina）于2012年10月18日在上海新国际博览中心圆满落

较上届展会增加20%，再创历史新高。为幕。本届展会云集了来自22个国际和地区的580家知名企业，

940名专业观众前来参观及采购。同时，期三天的展会共接待了来自66个国家和地区的16，展会同期成150余位国内外知名的专家、509名参会者分别对分析化功举办了14场高质量的学术研讨会，学者及2，

蛋白质组学、干细胞技术、食品安全、色谱技术、实验室认证等多个专题进行深入探讨，获得了业内同仁学、

的高度关注，成为展会的又一亮点。

“今年是analyticaChina进入中国的十周年。展会无论在规模、展商及观众数目都突破了历届纪录，”慕尼黑展览（上海）有限公司董事总经理罗维强先生表我们很高兴看到展会能取得这样可喜的成绩。。“analyticaChina的飞速发展，示主要源于中国市场的蓬勃发展。我们将继续秉承植根于中国及亚洲市”力求为国内外的企业与终端用户创造更多的交流与发展契机。场的发展策略，

展会规模再创历史新高

analyticaChina2012继承以往佳绩，000平方米。本届展会中的三规模再创历史新高，展示面积达25，大展区：实验室技术、生物技术和生命科学、分析和质量控制，分别为参会者展示了当今实验室技术、分析、诊断领域的最新产品与领先技术，以及在食品安全、环境分析、生物技术、教育科研、公共卫生等不同应用领域的解决方案与发展趋势。同时，今年的“生物技术与生命科学馆”现场反响热烈，获得参会者的一致好评，成为展会一大亮点。展区展示了包括生物技术应用、生物实验、生物信息学、生化药剂、医学研究诊断等领域的尖端产品与技术。

专业用户云集，创造更多商机

analyticaChina凭借在业内多年的影响力、多元化的展品、以及丰富多彩的同期活动，吸引着越来越多analyticaChina共迎来16，940名来自不同领域专业人士特别是终端用户的关注。在为期3天的展会里，的终端用户前来观摩。

精彩同期活动，聚焦行业热点

高质量的学术研讨会一直是analyticaChina的亮点之一。在本届展会中慕尼黑国际博览集团联合中

、“中德复国化学会、中国生物化学与分子生物学会蛋白质组学专业委员会（CNHUPO）、上海市食品学会509多名杂样品分离分析”联合研究中心等众多杰出科学机构，成功举办14场高水平的学术会议，共有2，

观众出席本次研讨会。

下届慕尼黑上海分析生化展将于2014年9月24－26日在上海举办。更多展会资料，请浏览官方网

www．analytica－china．com．站www．a－c．cn、—52—

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对甲基苯磺酰氯柱前衍生法测定水中哌嗪

李

欣，沈敏雅，杨

倩，蔡天明

*

（南京农业大学资源与环境科学学院，南京210095）

要:建立了一种高效液相柱前衍生化测定水中哌嗪含量的方法。选取对甲

TSC)为衍生试剂对哌嗪进行衍生化，基苯磺酰氯(p-衍生产物利用液质联用摘

(LC-MS)技术定性，C18色谱柱，高效液相色谱定量分析。方法采用UltimateXB-以甲醇－水(体积比60:40)为流动相，流速为0.8mL/min，检测波长为240nm，室温下检测。实验结果表明，哌嗪的衍生化产物与过量衍生化试剂分离良好，在

10～100mg/L的范围内，哌嗪的浓度与其衍生产物峰面积呈现良好的线性关系，相关系数r＞0.999。方法的检出限为0.09mg/L，定量限为0.30mg/L。回收率范围为88.2%～99.2%，相对标准偏差为2.5%～5.3%。通过正交反应试验确定了最佳衍生化条件:衍生温度为55℃，缓冲液pH为10.0，衍生时间10min。

关键词：哌嗪;对甲基苯磺酰氯;衍生化;高效液相;质谱

中图分类号：O657.63

文献标识码：A

文章编号：1000-0720（2012）12-048-05

哌嗪（pip），分子式C4H10N2，分子量为86，是一种无色透明针状或叶状结晶的有机杂环胺，易溶于水。哌嗪作为重要的医药中间体和精细化工原料被广泛应用的含量法

［4］

［2，3］

［1］

等

［17］

Cl作为荧光衍生化试剂得到了采用FMOC-［2］

哌嗪衍生物。Kopciuch和Lin等

［18］

都选取DNS-

Cl作为衍生化试剂测定哌嗪，而Lin利用的是LC-MS中选择反应监测（SRM）模式对哌嗪的单取代这对仪器条件的要求较高。产物进行定量分析，

目前，选取常用的衍生化试剂对甲基苯磺酰氯（p-TSC），并且使用常规的紫外（UV）检测器进行HPLC分析的哌嗪衍生化法测定水中哌嗪的研究TSC对国内尚无报道。本文建立的方法即采用p-HPLC-UV法测定哌嗪衍生物，哌嗪进行柱前衍生，

并对方法的精密度、检出限、回收率等进行了评价，同时探讨了最佳衍生反应条件和色谱分离条件。11.1

材料与方法主要仪器与试剂

AgilentG6410B型电喷雾－三重四极杆质谱Agilent1200系列分析系仪（美国Agilent公司），

统；FL2200高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器公XB-C18司），配紫外检测器和FL9500色谱工作站，

。因此，在最终医药产品纯度，废

水处理效果或者环境中残留等方面需要测定哌嗪

。

迄今报道的测定哌嗪的方法有非水滴定

［5］［2］［6，7］、、比色法、液相色谱法、气相色谱法

［8，9］

离子色谱法和紫外-可见光分光光度法

［12，13］

［10，11］

等。其中气相色谱和非水滴定法适用于无水条件下测定哌嗪。比色法

虽然简便但是反应试剂

的专一性不强，类似的化学结构会干扰测定且检测限较高。液相色谱具有方法简便、准确分离产物、重现性好等优点。此类在紫外-可见光区吸收极弱的杂环胺的测定方法多采用柱前衍生化高效液相

［14］

色谱（HPLC）分析，目前常用的柱前衍生试剂有

Cl）、邻苯二甲醛（OPA）、氯甲酸芴甲酯（FMOC-丹

［15，16］

Cl）、。Pietsch苯磺酰氯（TSC）等酰氯（DNS-

06-17；修订日期：2012-07-08收稿日期：2012-基金项目：江苏省省级环保科技项目（201005）资助作者简介：李

mail：2010103045@njau．edu．cn欣（1987－），女，硕士研究生；E-

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嗪（99.5%，国药集团化学试剂公司），对甲基苯磺酰氯（98.5%，国药集团化学试剂公司，无水乙醇重结晶提纯），甲醇和乙腈（色谱纯），水为二次蒸馏水。

1.2样品储备液制备与试样衍生化

哌嗪储备液：准确称取0.5g的无水哌嗪标准品（精确到0.01mg），用超纯水溶解并定容至50mL（10g/L），0.45μm滤膜过滤，4℃冰箱中保存。

衍生试剂储备液：准确称取2.5g的对甲基苯

0.45μm滤膜磺酰氯，乙腈溶解至50mL（50g/L），4℃冰箱中保存。0.1mol/L的NaOH溶液。过滤，

衍生化方法：移取100μL哌嗪储备液，置于10mL具塞磨口试管内，加入20μLNaOH溶液，200μL衍生试剂储备液，其余用纯水定容至5mL，封口后于50℃温水浴中反应10min，取出放冷后加入5mL二氯甲烷，充分震荡萃取后，取20μL有MS产物机相高效液相色谱测定；10μL进行LC-分析。1.3

MS条件色谱与LC-C18柱（4.6mm×200mm，高效液相：XB-240nm。

LC-MS条件：电喷雾离子源，正离子检测模式（ESI+），干燥气温度350℃，雾化气压0．21MPa，

毛细管电压4000V，碎片电压90V，气体流速10.0L/min，质量扫描范围：m/z50～400。AgilentXDB-C18（50mm×4.6mm）色谱柱，甲醇：水=60：40（体积比）流动相，0.2mL/min流速，240nm检测波长。1.4

衍生化条件优化

根据上述的衍生化方法，分别改变反应时间、反应温度、反应体系pH以及对甲基苯磺酰氯的用量，考察单因素对衍生率的影响；进而选取时间、温

pH和反应摩尔比等4因素3个水平进行试验，度、

4

利用正交表（L93）进行正交试验，以获得最佳的衍生化条件。

年月

22.1

结果与讨论

衍生产物的质谱鉴定

哌嗪属于低分子量杂环胺，即没有荧光发色基团也没有紫外发色基团，但是对甲苯磺酰氯可以与伯胺或仲胺基上的活泼氢反应，被磺酰基取代生成磺酰胺，脱掉一分子的HCl生成具有紫外光的衍生物，称为胺的磺酰化反应

［19］

，又称兴斯堡反应。

5μm）；流动相为甲醇：水（60：40）；流速

0.8mL/min；进样量：20μL；室温；检测波长：本文选取常用的磺酰化剂对甲苯磺酰氯对哌嗪进行衍生，反应如下

：

MS分析，按上述方法衍生化之后，进行HPLC-结果如图1所示。峰A和峰B分别代表过量的对甲基苯磺酰氯和哌嗪衍生化产物。质谱分析哌嗪

的衍生产物为m/z=395.6和241.4。对哌嗪衍生MS/MS见图2。结果表化产物进行二次质谱分析，

明衍生反应后哌嗪产生了单、双两种取代产物：单TSC+pip）的离子碎片峰分别为取代产物（p-57.2，85.1和155.2；双取代产物（p-TSC+pip+p-TSC）为84.2，155.2，和239.4。此结果与预期结表明衍生化成功。果相同，

2.2衍生化条件的优化

2.2.1

反应体系pH胺类衍生化反应多在碱性环

境中进行，所以考察了pH9～13范围内反应体系pH对衍生反应的影响。结果表明，随着pH升高，哌嗪衍生物的峰面积呈现先升高再降解的规律。pH11时，相对峰面积最大，达到173.5%，表明在此条件下衍生反应产率最高。导致此结果的原因分析可能有两方

面：一方面是哌嗪的pKb=9.8，当pH＞9.8时抑制其水解，保持为有机形态，有利于衍生化反应；另一方面是对甲基苯磺酰氯在碱性条件稳定性逐渐变差，所以

衍生化反应率降低。说明此反应适合当pH＞11时，在pH10～11左右。

—49—



年月

图1

Fig．1

哌嗪衍生化的液质UV色谱图和产物B的一级质谱图．

LC-MS-DADchromatogramofderivatizationandmassspectrumofproduct

B

图2

Fig．2

哌嗪单取代（a）和双取代（b）产物的二级质谱．

Second-ordermassspectraofmono-substituted（a）andbis-substituted（b）derivatives．

2.2.2

衍生温度按1.3的方法，改变衍生化温

35，45，55，65和75℃，度，分别设置为25，结果表尽量使反应完全。基苯磺酰氯过量，

2.2.5正交试验优化结果正交试验的直观分析其次是衍生剂结果表明pH对衍生效率影响最大，

用量和时间。2.3

方法学考察

对分析方法的线性、检出限、精密度和回收率进行了考察。在本试验条件下，哌嗪与对甲基苯磺酰氯衍生化反应后的典型HPLC色谱图见图3a，衍生物与过量衍生剂可以完全分离开不干扰样品测定。在最优反应条件下，绘制标准曲线图，哌嗪在10～100mg/L浓度范围内时，其浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性方程y=222739.86ρ+328551.99，R2=0.999。

方法的检出限（3σ）和定量限（10σ）分别为0.09和0.30mg/L。在相同条件下，对100mg/L哌嗪衍生物进行6次平行测定，保留时间的RSD

55～75℃时衍生明温度对反应的影响不是很大，

物产率较高。2.2.3

10，衍生时间改变时间，分别设置为5，

20，30和40min，结果表明反应10min时，衍生产物最多，随着时间的延长峰面积减少再升高。可能是由于衍生产物稳定性导致反应时间不宜过长。Lin［18］等用丹酰氯做衍生化试剂时，分别考察了5，10，15，20min等不同时间下衍生物产量问题，结果同样是10min时产率最高。

2.2.4衍生剂用量改变对甲基苯磺酰氯的用TSC：pip的摩尔比从1：1增加到10：1，量，使p-结

果显示，衍生剂的用量对衍生效率的影响很大，随着用量的增加，衍生产物增加，当摩尔比达到10：1时，产物量接近稳定。表明衍生化反应时应使对甲—50—

小于1%，峰面积的RSD小于6%。

在实际水样中添加3个浓度水平（25．0、50.0、100．0mg/L）的标准样品，按本方法所确定的实验条件，对每个添加浓度平行测定5次，各浓88.2%和99.2%，度的平均回收率为90.2%、相对

2.5%和5.2%。标准偏差为5.3%、

2.4

实际样品的测定

图3（b）为经过生物降解后的含有哌嗪污染物

年月

的含盐废水实际样品测定色谱图，与标准色谱图（图3a）对比，经过降解后水中产生新的降解产物3，哌嗪含量为87.5mg/L

。

图3Fig．3

（a）哌嗪与对甲基苯磺酰氯衍生反应的典型HPLC色谱图；（b）实际废水样品色谱图

1－对甲基苯磺酰氯；2－哌嗪衍生物；3－未知降解产物

（a）HPLCchromatogramofpiperazineafterderivatizationwithp-tosylchloride；（b）HPLCchromatogramofawastewatersample

参考文献

［1］熊

2004，（2）：29剑．江西化工，

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2006，迪，等．分析测试学报，

Determinationofpiperazineinwaterusingpre-columnderivatizationwithP-tosylchloride

LIXin，SHENMin-ya，YANGQianandCAITian-ming*（CollegeofResourcesandEnvironmentalSciences，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095），FenxiShiyanshi，2012，31（12）：48～52

Abstract：Asimplepre-columnderivatization-highperformanceliquidchromatographic（HPLC）methodwithp-tosylchlorideasaderivativeagentwasestablishedforthedeterminationofanhydrouspiperazineinwater．Afteradditionofp-tosylchlorideasthederivativeagent，piperazinewasderivatized．ThederivativeswereanalyzedforqualitationandquantitationusingLC-MSandHPLC，respectively．SeparationwasachievedatambienttemperatureusinganultimateXB-C18column，andisocraticelutionwithmethanol–water（60：40，V/V）ata

—51—

flowrateof0.8mL/min．TheUVdetectionwavelengthwas240nm．Resultsshowedthatp-TSCandthepiperazinederivativeswereseparatedwellandthecorrelationcoefficient（r）ofpiperazinederivativewithalinearrangeof10～100mg/Lwasover0.999．Thelimitsofdetectionandquantificationwere0.09mg/Land0.30mg/L，respectively．Theaveragerecoveriesofpiperazinewereintherangeof88.2%～99.2%withtherelativestandarddeviations（RSDs）of2.5%～5.3%．Moreover，theresultsoforthogonalexperimentrevealedthattheoptimumconditionsofderivatizationreactionwere：reactiontemperatureof55℃，bufferofpH10andreactiontimeof10min．

Keywords：Piperazine；P-tosylchloride；Derivatization；HPLC；Massspectrum

年月

2012慕尼黑上海分析生化展圆满落幕

盛况空前用户云集，

第六届慕尼黑上海分析生化展（analyticaChina）于2012年10月18日在上海新国际博览中心圆满落

较上届展会增加20%，再创历史新高。为幕。本届展会云集了来自22个国际和地区的580家知名企业，

940名专业观众前来参观及采购。同时，期三天的展会共接待了来自66个国家和地区的16，展会同期成150余位国内外知名的专家、509名参会者分别对分析化功举办了14场高质量的学术研讨会，学者及2，

蛋白质组学、干细胞技术、食品安全、色谱技术、实验室认证等多个专题进行深入探讨，获得了业内同仁学、

的高度关注，成为展会的又一亮点。

“今年是analyticaChina进入中国的十周年。展会无论在规模、展商及观众数目都突破了历届纪录，”慕尼黑展览（上海）有限公司董事总经理罗维强先生表我们很高兴看到展会能取得这样可喜的成绩。。“analyticaChina的飞速发展，示主要源于中国市场的蓬勃发展。我们将继续秉承植根于中国及亚洲市”力求为国内外的企业与终端用户创造更多的交流与发展契机。场的发展策略，

展会规模再创历史新高

analyticaChina2012继承以往佳绩，000平方米。本届展会中的三规模再创历史新高，展示面积达25，大展区：实验室技术、生物技术和生命科学、分析和质量控制，分别为参会者展示了当今实验室技术、分析、诊断领域的最新产品与领先技术，以及在食品安全、环境分析、生物技术、教育科研、公共卫生等不同应用领域的解决方案与发展趋势。同时，今年的“生物技术与生命科学馆”现场反响热烈，获得参会者的一致好评，成为展会一大亮点。展区展示了包括生物技术应用、生物实验、生物信息学、生化药剂、医学研究诊断等领域的尖端产品与技术。

专业用户云集，创造更多商机

analyticaChina凭借在业内多年的影响力、多元化的展品、以及丰富多彩的同期活动，吸引着越来越多analyticaChina共迎来16，940名来自不同领域专业人士特别是终端用户的关注。在为期3天的展会里，的终端用户前来观摩。

精彩同期活动，聚焦行业热点

高质量的学术研讨会一直是analyticaChina的亮点之一。在本届展会中慕尼黑国际博览集团联合中

、“中德复国化学会、中国生物化学与分子生物学会蛋白质组学专业委员会（CNHUPO）、上海市食品学会509多名杂样品分离分析”联合研究中心等众多杰出科学机构，成功举办14场高水平的学术会议，共有2，

观众出席本次研讨会。

下届慕尼黑上海分析生化展将于2014年9月24－26日在上海举办。更多展会资料，请浏览官方网

www．analytica－china．com．站www．a－c．cn、—52—