CD133和缺氧诱导因子
【摘要】目的:探讨脑肿瘤干细胞标记物cd133、缺氧诱导因子
-1α(hif-1α)在人脑胶质瘤中的表达情况,分析两者的关系及
其意义。方法:应用免疫组化方法分析66例人脑胶质瘤中的cd133、
hif-1α的表达情况。结果:脑肿瘤干细胞标记物cd133,hif-1α
在正常脑组织中未见表达,在低级别脑胶质瘤中低表达,在高级别
脑胶质瘤中高表达,各组之间表达有显著性差异(p
表达与hif-1α表达之间有相关性,两者呈正相关( p
结论:cd133和hif-1α表达呈正相关性,两者与人脑胶质瘤的病
理分级呈正相关。
【关键词】cd133;缺氧诱导因子-1α;胶质瘤 ;免疫组化
【中图分类号】r453【文献标识码】b【文章编号】1004-4949(2013)
02-0001-03
人脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,易复发,浸润性生长,手
术、放疗、化疗等均难以根除,致其预后较差。近年来有研究表明,
cd133蛋白阳性表达的肿瘤干细胞是一种具有肿瘤再生潜能的细
胞,具有自我更新和多向分化的特征,是肿瘤侵袭性生长、复发及
转移的根源[1]。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1
α, hif-1α)是调节肿瘤细胞缺氧反应的主要转录因子,研究发
现在多数恶性肿瘤均有表达,并与恶性肿瘤新生血管的生成有关
[2]。本研究通过免疫组织化学的方法,检测脑肿瘤干细胞标记物
cd133、hif-1α在不同病理级别的脑胶质瘤中的表达情况。探讨人
脑胶质瘤中cd133、hif-1α蛋白的表达在肿瘤的侵袭性生长、复发
及转移中的作用,为判断预后提供临床指导,并为胶质瘤的侵袭性
生长、复发及转移机制的研究提供帮助。
1 资料与方法
1.1病例资料: 研究对象为河北省沧州中西医结合医院神经外科
2005 年5月~2011 年6 月住院手术切除且保存完好的胶质瘤组织
的石蜡包埋标本,临床资料完整,男性36例,女性30例,脑胶质
瘤组织学分析根据2000年修改的who神经系统肿瘤分级标准对其
进行组织学的分类分级,其中i级10例, ii级20例, iii级16
例、iv级20例,包括星形胶质细胞瘤42例,节细胞胶质瘤1例,
脉络丛乳头状瘤5例,少突胶质细胞瘤11例,室管膜瘤5例,髓
母细胞瘤2例。男38例,女28例,年龄3-64岁,中位年龄43岁。
另取沧州中西医结合医院神经外科因颅脑损伤行内减压术患者8例
正常脑组织作对照,所有胶质瘤患者术前均未接受过化疗或放疗等
辅助治疗。所有标本经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,4
微米厚切片编码备用。
1.2 主要试剂: 兔抗人cd133单克隆抗体(浓缩型)购自博士德
公司,鼠抗人hif-1α抗体(浓缩型)购自北京中杉生物技术有限
公司, sp免疫组化染色试剂盒购自河北博海生物公司,dab试剂
盒、pbs缓冲液和柠檬酸盐抗原修复液,均购自北京中杉生物技术
有限公司。
1.3 免疫组织化学染色: 石蜡切片常规脱蜡水化,蒸馏水漂洗
3min,切片置0.01mol/l,枸橼酸缓冲液(ph6.0)中用煮沸(95℃,
15-20min)进行抗原修复,自然冷却20min以上,再用冷水冲洗缸
子,加快冷却至室温。取出切片,蒸馏水冲洗两次,每次3min,用
0.01 mol/lpbs液冲洗2次共5min。使用3%双氧水阻断灭活内源性
过氧化物酶,cd133一抗稀释度为1:200,hif-1α一抗稀释度1:
150,按照试剂盒说明进行操作(用pbs缓冲液代替一抗作阴性对
照),甩去pbs液,每张片滴加2滴新配制的dab溶液(按说明书
配制),3-5min后显微镜下观察显色情况。蒸馏水充分冲洗,苏木
精轻度复染1min,常规脱水,透明,干燥,封片。
1.4 结果判定: cd133染色阳性标准:以细胞膜中出现突出于背
景的棕黄色颗粒为阳性。hif-1α染色阳性标准:以细胞核中出现
浅黄色、棕色、棕褐色颗粒为阳性。低倍和高倍镜下观察并在高倍
镜(400x)下随机选择5个视野,计算出阳性细胞所占的百分率。
结果判定标准:(-):肿瘤组织完全不着色;(+)阳性细胞数小于
25%;(++):肿瘤组织阳性细胞数25%—50%;阳性(+++):肿瘤组
织阳性细胞数51%—75%;强阳性(++++):肿瘤组织阳性数大于75%。
分别计分为0、1、2、3、4分。
1.5 统计学方法: 全部实验数据均采用spss17.0统计软件分析
处理。根据比较对象的不同,分别使用χ2 检验和sperman相关性
分析等方法。各组间两两比较使用非参数检验。
2 结果
CD133和缺氧诱导因子
【摘要】目的:探讨脑肿瘤干细胞标记物cd133、缺氧诱导因子
-1α(hif-1α)在人脑胶质瘤中的表达情况,分析两者的关系及
其意义。方法:应用免疫组化方法分析66例人脑胶质瘤中的cd133、
hif-1α的表达情况。结果:脑肿瘤干细胞标记物cd133,hif-1α
在正常脑组织中未见表达,在低级别脑胶质瘤中低表达,在高级别
脑胶质瘤中高表达,各组之间表达有显著性差异(p
表达与hif-1α表达之间有相关性,两者呈正相关( p
结论:cd133和hif-1α表达呈正相关性,两者与人脑胶质瘤的病
理分级呈正相关。
【关键词】cd133;缺氧诱导因子-1α;胶质瘤 ;免疫组化
【中图分类号】r453【文献标识码】b【文章编号】1004-4949(2013)
02-0001-03
人脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,易复发,浸润性生长,手
术、放疗、化疗等均难以根除,致其预后较差。近年来有研究表明,
cd133蛋白阳性表达的肿瘤干细胞是一种具有肿瘤再生潜能的细
胞,具有自我更新和多向分化的特征,是肿瘤侵袭性生长、复发及
转移的根源[1]。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1
α, hif-1α)是调节肿瘤细胞缺氧反应的主要转录因子,研究发
现在多数恶性肿瘤均有表达,并与恶性肿瘤新生血管的生成有关
[2]。本研究通过免疫组织化学的方法,检测脑肿瘤干细胞标记物
cd133、hif-1α在不同病理级别的脑胶质瘤中的表达情况。探讨人
脑胶质瘤中cd133、hif-1α蛋白的表达在肿瘤的侵袭性生长、复发
及转移中的作用,为判断预后提供临床指导,并为胶质瘤的侵袭性
生长、复发及转移机制的研究提供帮助。
1 资料与方法
1.1病例资料: 研究对象为河北省沧州中西医结合医院神经外科
2005 年5月~2011 年6 月住院手术切除且保存完好的胶质瘤组织
的石蜡包埋标本,临床资料完整,男性36例,女性30例,脑胶质
瘤组织学分析根据2000年修改的who神经系统肿瘤分级标准对其
进行组织学的分类分级,其中i级10例, ii级20例, iii级16
例、iv级20例,包括星形胶质细胞瘤42例,节细胞胶质瘤1例,
脉络丛乳头状瘤5例,少突胶质细胞瘤11例,室管膜瘤5例,髓
母细胞瘤2例。男38例,女28例,年龄3-64岁,中位年龄43岁。
另取沧州中西医结合医院神经外科因颅脑损伤行内减压术患者8例
正常脑组织作对照,所有胶质瘤患者术前均未接受过化疗或放疗等
辅助治疗。所有标本经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,4
微米厚切片编码备用。
1.2 主要试剂: 兔抗人cd133单克隆抗体(浓缩型)购自博士德
公司,鼠抗人hif-1α抗体(浓缩型)购自北京中杉生物技术有限
公司, sp免疫组化染色试剂盒购自河北博海生物公司,dab试剂
盒、pbs缓冲液和柠檬酸盐抗原修复液,均购自北京中杉生物技术
有限公司。
1.3 免疫组织化学染色: 石蜡切片常规脱蜡水化,蒸馏水漂洗
3min,切片置0.01mol/l,枸橼酸缓冲液(ph6.0)中用煮沸(95℃,
15-20min)进行抗原修复,自然冷却20min以上,再用冷水冲洗缸
子,加快冷却至室温。取出切片,蒸馏水冲洗两次,每次3min,用
0.01 mol/lpbs液冲洗2次共5min。使用3%双氧水阻断灭活内源性
过氧化物酶,cd133一抗稀释度为1:200,hif-1α一抗稀释度1:
150,按照试剂盒说明进行操作(用pbs缓冲液代替一抗作阴性对
照),甩去pbs液,每张片滴加2滴新配制的dab溶液(按说明书
配制),3-5min后显微镜下观察显色情况。蒸馏水充分冲洗,苏木
精轻度复染1min,常规脱水,透明,干燥,封片。
1.4 结果判定: cd133染色阳性标准:以细胞膜中出现突出于背
景的棕黄色颗粒为阳性。hif-1α染色阳性标准:以细胞核中出现
浅黄色、棕色、棕褐色颗粒为阳性。低倍和高倍镜下观察并在高倍
镜(400x)下随机选择5个视野,计算出阳性细胞所占的百分率。
结果判定标准:(-):肿瘤组织完全不着色;(+)阳性细胞数小于
25%;(++):肿瘤组织阳性细胞数25%—50%;阳性(+++):肿瘤组
织阳性细胞数51%—75%;强阳性(++++):肿瘤组织阳性数大于75%。
分别计分为0、1、2、3、4分。
1.5 统计学方法: 全部实验数据均采用spss17.0统计软件分析
处理。根据比较对象的不同,分别使用χ2 检验和sperman相关性
分析等方法。各组间两两比较使用非参数检验。
2 结果