四、简答题
1.碱基对间在生化和信息方面有什么区别?
2.在何种情况下有可能预测某一给定的核苷酸链中“G”的百分含量?
3.真核基因组的哪些参数影响 Cot1／2值?
4.请问哪些条件可促使 DNA复性(退火)?
5.为什么 DNA双螺旋中维持特定的沟很重要?
6.大肠杆菌染色体的分子量大约是2.5×109Da1)，核苷酸的平均分子量是330Da，两个邻近核苷酸对之间的距离是0.34mn；双螺旋每一转的高度(即螺距)是3.4nm，请问：
(l)该分子有多长?
(2)该 DNA有多少转?
7.曾经有一段时间认为，DNA无论来源如何，都是4个核甘酸的规则重复排列(如， ATCG．ATCG．ATCG．ATCG„)，所以 DNA缺乏作为遗传物质的特异性。第一个直接推翻该四核苷酸定理的证据是什么?
8.为什么在 DNA中通常只发现 A—T和 C—G碱基配对?
9.列出最先证实是 DNA(或RNA)而不是蛋白质是遗传物质的一些证据。
10.为什么只有 DNA适合作为遗传物质?
ll.什么是连锁群?举一个属于连锁基因座的例子。
12.什么是顺反子?用“互补”和“等位基因”说明“基因”这个概念。
13.对于所有具有催化能力的内含子，金属离子很重要。请举例说明金属离子是如何作用的。
14.列出真核生物mRNA与原核生物mRNA的区别。
15.列出各种tRNA所有相同的反应及个别 tRNA的特有反应。
16.在体内，rRNA和 tRNA都具有代谢的稳定性，而 mRNA的寿命却很短,原因何在?
17.为什么真核生物核糖体RNA基因具有很多拷贝?
18.为什么说信使RNA的命名源自对真核基因表达的研究，比说源自对原核基因表达的研究更为恰当?
19.说明为什么mRNA仅占细胞RNA总量的一小部分(3％一5％)。
20.为何rRNA和tRNA分子比 mRNA稳定?
21.起始tRNA具有哪两种与其他 tRNA不同的特性?
22.区别rRNA和mRNA在翻译中的作用。
23.氨基酸分子如何与正确的tRNA分子连接?
24.简要说明证明信使的存在及其本质为RNA的证据。
25.列举4种天然存在的具有催化活性的RNA。
26.Ⅰ型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着Ⅰ型内含子的催化中心有什么特点?
27．某些自剪接的内含子具有可读框，它们编码何种蛋白?这与内含子的移动有什么关系?
28.描述 Meselson-Stahl试验，说明这一实验加深我们对遗传理解的重要性。
29.请列举可以在线性染色体的末端建立线性复制的三种方式。
30.为什么一些细菌完成分裂的时间比细菌基因组的复制所需的时间要少?为什么在选择营养条件下，E. coli中可以存在多叉的染色体或多达4个以上的开环染色体拷贝， 而正常情况下染色体是单拷贝的?
31.在 DNA聚合酶Ⅲ催化新链合成以前发生了什么反应?
32.DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响?
33.请指出在 oriC或фX型起点起始的 DNA复制之间存在的重要差异。
34.大肠杆菌被 T2噬菌体感染，当它的 DNA复制开始后提取噬菌体的 DNA，发现一些RNA与 DNA紧紧结合在一起，为什么?
35.DNA连接酶对于 DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。
36.曾经认为 DNA的复制是全保留复制，每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样，在Meselson和 Stahl的实验中他们将得到什么结果?
37.描述 Matthew和Franklin所做的证明 DNA半保留复制的实验。
38.解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。
39．描述滚环复制过程及其特征。
40.假如发生了碱基对的错配会产生什么表型，它们怎样被修复?
41.为什么 DNA的甲基化状态可以为复制的调节和 DNA的修复所利用?
42.错配修复的方向可以怎样被调节(突变型到野生型或野生型到突变型)?
43.RecA蛋白是怎样调节 SOS反应的?
44.以图4.1A为例，画出图4.1B所示分子同源区域交叉重组的产物，图中用一条单线表示 DNA双螺旋，同源重组的靶位点用箭头标出。
图4.1 各种重组的底物
45.图4.2所示为两条同源的亲代双螺旋和两套可能的重组产物。请画图表示两亲代双螺旋间可以产生指定重组产物的 Holliday连接，在每条链的左端标明 Holliday连接的3’或5’端，这样亲代和重组双螺旋间的关系就比较清楚。请指明为了产生每套重组产物哪些链应被切去。最后，画出经过一轮 DNA复制后的重组产物。
图4.2 亲代与重组的双螺旋
46.为什么基因内互补只发生在：(1)某一基因座的等位基因间；(2)这些基因座的特殊等位基因对间?
47.有很多突变对于野生型基因是隐性的，也就是说，在一个含有突变型和野生型基因二倍体细胞中，野生型的特性能够得到表达。请根据对突变过程的认识解释这一事实。对于说明为什么有些突变是显性的，有何见解?
48.为了选择下面两种突变型，应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本培养基作何调整?
(1) leu—，亮氨酸营养缺陷型；
(3) gal—，不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。
49.写出利用突变研究以下问题的步骤：
(l)氨基酸 X的代谢途径；
(2)E．coli中细胞分裂的控制。
50.在工业微生物菌种的选育中，人们喜欢用诱变的方法筛选解除了酶合成阻遏的突变株，而不要解除了酶活性反馈抑制的突变株。请解释原因。
51.为什么一个基因座的正向突变发生的频率要比回复突变高?
52.一个基因间阻遏物突变怎样阻遏了一个错义突变?
53.为什么吖啶类染料诱导的突变较碱基类似物诱导的突变对生物体更有害?
54.羟胺对游离噬菌体和转化 DNA都是高度特异的致变剂。它只与 DNA中的C反应，使之转变成偶尔可与 A错配的形式。
(1)羟胺诱导的碱基替代是什么?
(2)推测羟胺是否可回复自身诱导的突变?
(3)羟胺可以回复5—溴尿嘧啶诱导的突变吗?
(4)5—溴尿嘧啶可以回复羟胺诱导的突变吗?
55.在下列哪些基因中你可以分离到温度敏感突变和琥珀突变?
(l) lacO；(2) lacZ; (3) lacP；(4) lacI
56.区别反向突变、回复突变和第二位点回复突变。
57.指出突变频率和突变率的区别。
58.简述大肠杆菌中的增变基因。
59.简述怎样利用化学诱变剂在细菌中的诱变来检测它们致癌作用。
60.简述 Muller—5技术，并说明如何利用它测得 X射线对果蝇突变频率的影响。
61.列举几种具以下特征突变：(1)不能合成特殊多肽；(2)组成型合成多肽。
62.突变能影响高等真核生物结构基因表达的几个水平?并指出每种突变最明显的分子表型。
63.当E.coli菌株 K同时被两个特异的 T4噬菌体 rⅡ突变体所感染时，感染细胞裂解并释放出正常数量的噬菌体后代。这些后代是重组的结果还是互补作用的结果?应怎 样辨别?
64.在E.coli中， A和 B基因座相隔了大约5％的基因组，另一对标记 C和 D间隔1％的基因组。哪对能被(1)共转化；(2)共转导?
65.当一个烈性噬菌体的所有基因全部表达时，如果不对转录进行时序性调控，将出现
什么问题?
66.为什么λ噬菌体感染产生的溶源菌通常对其他的λ噬菌体的感染有免疫?
67.请预测具有下列突变的λ噬菌体感染细菌的表型。并说明原因：
(1)产生一个抗蛋白酶的λ cⅡ蛋白的突变。
(2)具有阻止蛋白结合的λOR2的突变。
(3)使λN基因失去作用的突变。
(4)编码λ c I蛋白的基因突变。
68．鉴定化合物的致癌性的一个通用实验是爱姆斯试验，通过营养缺陷型菌的回复突变 确定其致癌性。用人噬菌体和E.coli设计一个实验使之能用于致癌物的检测。
69．为什么像流感病毒这样的RNA 病毒的生命周期，有力地支持了以下这一论点：与其说病毒是生命有机体，不如说它是“寄生的遗传因子”。
70.大肠杆菌噬菌体 T2的染色体是一个线性 DNA分子，它的两端都有冗余并且可作循 环变换。解释冗余的含义并说明这些分子是怎样产生的。
71.烈性噬菌体和温和噬菌体的区别是什么?
72.从噬菌体 MS2中提取出来的裸露染色体可以感染大肠杆菌的原生质球(去除胞壁的细菌)，这会产生和具感染能力的噬菌体一样的噬菌体颗粒。如果染色体先用RNA酶处理，就会失去感染能力；另外，如果标记感染的RNA，在子代中不出现标记。解释这些现象。
73.从λ噬菌体中提取的 DNA用两种只攻击单链 DNA的外切核酸酶处理。外切核酸酶 A只从突出的5’端消化 DNA，而外切核酸酶 B只攻击自由的3’端。这种处理对λ噬菌体 DNA的生物活性有什么影响?
74．比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么个同。
75．转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链 DNA是怎样被保护的。
76．概括说明ζ因子对启动子调节的辅助功能。
77．什么是增效与减效突变?
78．细菌促旋酶突变通常是致死的，但是促旋酶／拓扑异构酶Ⅰ突变却可以成活，其原何在?
79．解释因子是怎样选择专一性启动子共有序列而启动不同基因表达的(考虑对环境压力的应答)。
80． rpoN基因编码ζ因子:ζ54，它具有不同于已知原核生物的因子的特征。请与E. coli的因子：ζ70(RpoD)作比较讨论这些特征。
81．在原核生物中，核心酶与 DNA的松散结合和紧密结合之间存在—种平衡，为什么这比核心多聚酶自身形成游离与结合平衡更有利?
82．正调控和负调控的主要不同是什么?
83．区别(1)启动子增效突变与启动子减效突变；(2)上游序列和下游序列。
84．解释为什么操纵子和启动子是反式隐性、顺式显性的，而编码阻碍蛋白的基因既是反式显性又是顺式显性。
85．为什么只有 DNA双螺旋中的一条链能被正常的转录?
86．哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的?
87．说明因 RNA聚合酶—启动子不同的相互作用如何导致不同基因的转录。
88．原核生物的核糖体 RNA和 tRNA的相对较稳定并且半衰期长，而 mRNA却不稳定，很快被降解，请解释这种稳定性的差异。
89．列举两种受调控蛋白控制的、与氨基酸的生物合成有关的操纵子。
90．什么是安慰诱导物?
91．葡萄糖是如何影响涉及糖代谢的操纵子(葡萄糖敏感型操纵子)的表达?
92．在大多数细菌操纵子中，结构基因通常紧靠在一起并由单个操纵序列—启动子区调控，而在一些例子中结构基因分散在染色体上。请问这些基因是如何以简单的方式达到协同调节的。
93. 反转录病毒与反转录转座子有什么不同?
94. gag和pol基因的蛋白产物是怎样生成的? mRNA编码的 Env蛋白是怎样生成的?
95. 蛋白酶为什么对反转录病毒生活史很重要?
96. 列出转化病毒正链RNA掺入到宿主双链 DNA的详细过程。
97. 噬菌体整合到宿主基因组后，4～6个宿主 DNA的核苷酸被复制，这是为什么?这与转座子插入新位点有何相似之处?另外，两个核苷酸从5’U3的5’和3’被切除，这意味着遗传信息从反转录病毒中被丢失吗?
98．反转录病毒怎样获得像onc基因这样的细胞基因?获得此类基因会对反转录病毒基 因产生影响吗?一个反转录病毒怎样才会丢失如 pol和 env这样的重要的基因而复制?
99．描述酵母 Ty元件的结构。它与反转录病毒有何相似之处?为什么它不形成感染粒子?
100．你如何证明 Ty元件在转座时经历了一个RNA中间体?
101．FB元件与copia因子有何不同?
102．列出病毒和非病毒超家族反转录转座子之间的4种差异。
103．为什么说 Alu元件可能作为 DNA复制的起点?有什么理由不支持这种假说呢?
104．描述两种转座子引起基因组重排的方式。
105． IS元件整合到靶位点时会发生什么?
106．一个复合转座子和一个 IS元件之间的关系是什么?
107．列出一个转座子插入到一个新位点所要求的步骤。
108．当(l)DNA在两个定向重复之间(2)DNA在两个反向重复之间发生重组的效应各是什么?
109．在什么过程中会形成一个共整合体?它的结构是什么?
110．Tn10元件只有在自己的转座酶基因具有活性时发生转座(与利用基因组中 Tn10元件表达的转座酶的情况正好相反)，这种偏爱的原因是什么?
111．什么是杂种不育?是什么引起的?
112．即使不携带癌基因，反转录病毒依然会导致癌变转化。列举这种现象发生的三种方式。
113．简述大肠杆菌的插入序列，并指出它们对自发突变的重要性。
114．比较基因组的大小和基因组复杂性的不同：
—个基因组有两个序列，一个是 A，另—个是 B，各将2000bP长。其中—个是由400bp
的序列重复5次而成，另一个则由50bp的序列重复40次而成，问：
(1)这个基因组的大小怎样?
(2)这个基因组的复杂性如何?
115. 一个基因如何产生两种不同类型的mRNA分子?
116. 在一个克隆基因的分析中发现：—个含有转录位点上游3.8kb DNA的克隆，其 mRNA直接转录活性比仅含有3.1kb上游 DNA的克隆的转录活性大50倍。这表明了什么?
117．被加工的假基因与其他假基因有哪些不同?它是如何产生的？
118．非转录间隔区与转录间隔区分别位于 rRNA重复的什么位置?转录间隔区与内含子 有何区别?
119．请描述 C值矛盾，并举一个例说明。
120．在酵母基因中，其生活必需基因占多大比例?为什么有些基因可能是不必要的?
121．酵母mRNA的大小一般与基因的大小相—致。而哺乳动物 mRNA比对应的基因明显小。为什么?
122．在一个基因复制后，外显子发生突变的机率比内含子小。但是，所有 DNA的突变率是相同的。请解释原因。
123．什么证据表明外显子与蛋白质的功能结构域相一致?这一证据如何支持外显子改组 (exon shuffling)假说?
124．为什么卫星 DNA在密度梯度离心时会形成一个清晰的峰?
125. 为什么基因组 DNA在用限制性内切核酸酶消化时，哺乳类的卫星 DNA会产生特 异的带?
126．举例说明什么是梯级重复，这样的序列是如何产生的?
127．跳跃复制的结果是什么?
128．重复序列并不是在选择压力下存在，因此能快速积累突变。这些特性表明重复序列相互间应存在很大的不同，但事实并不是这样的。请举例说明。
129．哪些细胞器带有自身基因组?为什么这些细胞器带有自身的基因组?
130．线粒体 DNA的突变率与细胞核 DNA突变率有什么不同?为什么?
131．人线粒体 DNA的哪些特征表明了其基因组的组织方式具有经济性?
132． RNA分子能被运到细胞器中吗?
133．什么证据表明细胞器与原核生物关系比真核生物关系密切?
134．酵母 rho—小菌落突变株的线粒体DNA发生了什么变化?
135．除了自身免疫疾病，机体如何实现不对“自己”产生免疫?
136. 简述重链免疫球蛋白基因重排的步骤。
137．列举产生免疫多样性的途径。
138．当J区与 V区发生重排后，其5’端的命运如何?3’端呢?
139. 假设免疫球蛋白是由基因组中完整的基因编码，而不是多个片段组装而成，那么人 体识别百万个不同的抗原需要多少个基因参与免疫反应?这些基因占人基因组的多 大比率?
140．地中海贫血症是一类因α和β珠蛋白合成降低而导致的疾病，什么类型的 DNA重排能引发这些疾病?
141．列举一个已知的 DNA序列编码一种以上蛋白质的三种方法。
142．哺乳动物中，从母亲与父亲遗传而来的基因是差异表达的，这种现象的理论基础是什么?
143．简述 T—DNA转化所需的细菌及质粒基因。
144．氨甲蝶呤对哺乳动物细胞有何作用?细胞是如何对这种药物产生抗性的?其中稳定 和不稳定抗性有什么不同?
145．一个tRNA基因的启动子序列突变将会分别对(l)基因产物和(2)细胞或生物体的表型有什么影响?
146．列举原核生物同真核生物转录的差异。
147．增强子具有哪些特点?
148．哪些转录因子含有 TBP?为什么它们被称为定位因子?请用一个模型解释为什么所 有三种RNA聚合酶都能与 TBP发生作用?
149．什么是转录起始前复合体?
150．RNA聚合酶的内部启动子位于起始位点下游50个核苷酸的位置，它是如何被定位并正确起始转录的?
151．对带有内部启动子的RNA聚合酶Ⅲ基因有什么样的编码限制因素?
152．当一段活性转录 DNA受损时，模板首先被修复。请用一个模型解释这一现象。
153．真核生物中，基因的表达受不同水平的调控，请列举其中3种。
154．甾醇类转录因子与锌指蛋白类转录因子的区别是什么?
155．亮氨酸拉链蛋白所识别的 DNA有何特点?如何理解亮氨酸拉链转录因子的二聚体结构同识别位点的关系?
156．虽然同源异型蛋白与锌指蛋白差别很大，但是它们识别 DNA序列的结构元件相
似的，这个元件是什么?
157．协同控制(coordinate control)下的基因是如何被同时激活的?
158．列出调控转录因子被激活的7种途径，并各举一例。
159．许多转录因子是细胞原癌基因的产物，为什么突变的转录因子可能导致癌变?
160．转录因子能够与装配成核小体的 DNA序列结合吗?
161．有两个模型可以解释染色质中的基因是如何被转录的。优先模型(preemptive model)中，转录因子和RNA聚合酶是如何与启动子结合的?为什么在动态模型中需要ATP?
162．为什么酵母SWI与SNF基因的突变会影响不同靶基因的转录?
163．一般认为，染色体中具有多个调控基因表达的结构域。每个结构域中可以找到哪些功能位点，它们的作用如何?
164．MyoD是一种 bHLH蛋白，对肌肉细胞的发育很重要，它的活性是如何被调控的?
165．酵母 U6 sRNA基因有一个TATA盒位于上游，在基因内有一个弱的 A盒，基因下游的远端还有一个保守的 B盒。体外实验时，RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ都可以转录这个基因，但体内实验发现只有RNA聚合酶Ⅲ可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性?
166．举例说明单链核酸中形成茎环结构的重要性。
167．用负超螺旋环状 DNA样品进行体外转录实验。但是预实验中并没有获得满意的结果，试讨论改进实验的可行方法。
168．组蛋白 H2A基因在所有细胞中都进行表达，而免疫球蛋白基因只在淋巴样细胞中表达。两类基因的启动子都含有转录因子 Oct-1的结合位点， Oct-1也存在于这两类细胞中，但为什么免疫球蛋白只在淋巴样细胞中表达?
169．RNA聚合酶Ⅱ起始转录后，起始复合物必须转变为延伸复合物。因此聚合酶复合 物必须解旋一小段 DNA。在线性 DNA上，解旋需要ATP， TFⅡE， TFⅡH和解旋酶活性。然而，超螺旋 DNA的转录并不需要这些因子。请解释这一现象。
170．RNA聚合酶Ⅲ特异性地转录小分子RNA，但为什么不转录5.8S rRNA?
171．当剪接的分支位点被移到内含子内的另一个位置，其活性将会消失。相反，正确位置附近隐藏的一个分支位点被激活。请作出解释。
172．请列举剪接体组装过程中的各个步骤，其中哪一个复合物是具有活性的剪接体?
173． Ul SnRNP与5’剪接位点间作用的基础是什么?如何证明?
174．列举前体mRNA剪接过程中发生的6种RNA-RNA相互作用?
175．通过遗传筛选，在酵母中分离得到许多与前体mRNA剪接有关的基因。其中几个基因编码RNA解旋酶。如何解释前体mRNA的剪接需要多个RNA解旋酶?这些酶可能在哪一步反应中起作用?
176．前体mRNA剪接体的催化中心是什么?它是如何形成的?有什么证据可以证明这 个模型?
177．据说前体mRNA的剪接是从Ⅱ型剪接进化而来的。有什么证据可以证明这一点?是如何发生的?这种进化为什么对生物体有利?
178．可变剪接如何控制果蝇中的性别分化?
179．比较RNA聚合酶 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ催化的转录终止过程和转录产物3’端的形成。
180．组蛋白mRNA3’端的加工需要什么样的RNA结构?如何证明所涉及的是RNA的二级结构而不是初级结构?在其他反应中会形成类似的结构吗?
181．为什么把同样的第一外显子(SL外显子)加在所有mRNA上对锥虫是有利的?
182．如何确定在一个多内含子基因的剪接过程中，内含子被切除的顺序?
183．为什么mRNA的翻译起始密码子的上游必须含有不被翻译的核糖核苷酸?
184．在RNA编辑中，向导RNA(gRNA)的作用是什么?它的哪些部分分别与：(1)编辑前mRNA；(2)编辑后的前体 mRNA互补?
185．指出下列序列中的3’剪接位点：
5’—ACGUACUAACAUUCUAUUCCUUAAG/UUCAUAAGUUGAGUC—3’
如果3’剪接位点的保守序列发生突变，附近的一个“隐藏”3’剪接位点通常取而代之。这个位点在哪里?这将对该前体mRNA所编码的蛋白产生什么影响?
186．既然真核rRNA的 poly(A)尾不是由 DNA编码的，为什么能将它准确地加到3’末端上呢?
187. 解释什么是“套索结构”，在内含子套索中的磷酸二酯键有什么特别之处?
188．哪一种真核生物RNA不需要加工?
189．为什么剪接是一个精确的过程?
191. 如果剪接发生在一个内含子的 GU序列与相邻内含子的AG序列间，会有什么结果?
192． N—甲酰甲硫氨酸—tRNA的功能是什么?
193. 解释核糖体肽基转移反应。
194．简述真核细胞中翻译终止的过程。
195．真核与原核核糖体的主要区别是什么?
196．简述真核与原核细胞中翻译起始的主要区别。
197．氨酰tRNA合成酶的功能是什么?
198．有两个系统发育上十分接近的物种，它们染色体中的(G十C)%含量不同， A株(G+C)含量为55％而 B株是68％。同源及异源转化／重组实验表明：来自(G+C)％低的DNA易于转化入(G十C)％高的生物体/基因组中，反之则不然。请说明原因。
199．根据翻译过程所涉及的各个步骤，设计出至少六种抑制翻译的方案。
200．根据遗传密码字典，将mRNA序列5’-AUGUUCCAGAGCACGGGCCCUAAA-3’翻译成多肽，假定翻译从5’端的 AUG开始。如果：
(1) C改成 G；
(2) C改成 A；
(3) C被缺失。
上述变化对多肽有何影响?
201．在大肠杆菌的一个无细胞蛋白质合成系统中，耗尽内源 mRNA后与 poly(AG)的随机多聚体共温育，其中 A∶G=3∶1。预测何种氨基酸能够掺人到多肽中，以及它们的相对掺入频率。
202．为什么说翻译后氨基酸的化学修饰与蛋白质总体构象的形成有关?
203．说明氨基酸残基的磷酸化怎样调节蛋白质的活性?
204．比较并指出O-连接和N-连接合成途径的异同。
205．为什么大多数移码突变导致多肽链的提前终止?
206．为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的?
207．重组 DNA的含义是什么?
208．如何理解基因工程的两个特点?
209．在 Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoR Ⅰ切割了 R6—5质粒，然后转化正E.coliC600，在卡那霉素抗性平板上筛选到了 pSC102，它是由 R6—5的三个E.coR Ⅰ片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性：
210．什么是动物乳腺生物反应器?
211．现分离到Ｘ82噬菌体的一个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这两种噬菌体的 DNA，请设计一个实验，初步鉴定是点突变、插人突变还是缺失突变?
212．说明 Sanger DNA测序法的原理。
213．在酶切反应缓冲液中加入 BSA的目的是什么?机理是什么?
214． Fredrick和 McClarin等用一个由13个碱基对的 DNA片段与EcoR Ⅰ反应，然后分离到酶和 DNA共结晶的复合物，通过 X射线分析发现了什么?
215. 有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为 噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用?
216．某学生在用EcoR Ⅰ切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?
217．在序列5’—CGAACATATGGAGT-3’中含有一个6bp的 Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?
218．下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识另别序列：
GAATCG，AAATTT， GATATC，ACGGCA?为什么?
219．用连接酶将Sau 3AI(↓GATC)切割的 DNA与经BamHⅠ(G↓GATCC)切割的DNA连接起来后，能够被BamH Ⅰ切割的机率有多大(用百分比表示)?
220．用Klenow酶填补的办法可使5’粘性末端转变成平末端。这种方法常使 DNA上的 某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失?BamH (G ↓ GATCC)；Taq Ⅰ(T ↓ CGA)，BssH Ⅱ(G↓ CGCGC)。
221．请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证?
222．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?
223．按适当的顺序，列出将一种mRNA的 cDNA克隆到表达载体所用到的酶。
224．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?
225．什么是测序酶(sequenaseTM)?
226. 什么是 S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?
227. 基因工程中，为什么不喜欢用 BAP来脱去 DNA的5’端的磷酸基团?
228．RNase A和RNase H在催化活性和应用上有何不同?
229．切口移位(nick translation)标记 DNA前，用 DNase Ⅰ处理 DNA时，应注意什么?
230．核酸酶与外切核酸酶Ⅲ用于系列缺失突变有什么不同?
231．YAC载体具有什么样的功能性 DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性?
232．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
233．什么叫穿梭载体?
234．说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。
235．虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。
236．为什么来自 Hfr× F—的重组体几乎总是 F—?
237．解释为什么不同的 Hfr菌株具有不同的转移起点和方向?
238．怎样从一个 E．coli的 Hfr菌株中分离到一个 F’gal+的菌株?
239．你已经分离了一个新的 F’因子，怎样用最简便的方法知道最初的 F因子的部分 DNA已经被切除，并被一个外源 DNA(也就是细菌 DNA)所替代?
240．你能用哪一种基因转移的方法确定
(1) E．coli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置；
(2)一个新分离的突变在基因内的位置。
241．用加有注释的图表说明 F质粒是怎样从一个 F+细胞转移到 F—细胞。并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。
242．在转导过程中，通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性培养基上，为什么?
243．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?
244．用salⅠ切割从噬菌体 J2分离的 DNA时，得到8个片段，分别是：1.3、2.8、3.6、
5.3、7.4、7.6、8.1和 11．4kb。但是，用Sal Ⅰ切割从被感染的寄主细胞中分离到的 J2噬菌体 DNA时，只得到7个片段，分别是：1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和 11.4kb，根据这些结果，您得到哪些信息?
245．在cⅠ基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑?
246．λ噬菌体 DNA被包装到噬菌体的头部，需要哪些基本条件?为什么?
247． PCR反应包括引物与 DNA模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物—DNA双螺旋稳定性的影响及对 PCR产率的影响。
248． Sanger的双脱氧法测序的原理。
249． 分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的 EDTA和蔗糖?
250． PCR的基本原理是什么?用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?
251． 说明合成接头在基因工程中的主要作用。
252． 从细菌中分离总 DNA，应采取哪些指施获得高分子量的 DNA?
253. 用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间?
254. 分离 pBR322 DNA可考虑用氯霉素扩增，分离 pUC18质粒 DNA则不必用氯霉素扩增，为什么?
255．溶菌酶是破碎细菌细胞的有效方法。但有些细菌的孢子对溶菌酶不敏感，应该如何处理?
256．假定你从粘质沙雷氏菌中克隆了一个基因，并推测可能是依赖于锌的金属蛋白酶， 因为它含有两个组氨酸和一个谷氨酸与锌形成锌指结构。请你设计一个方案，改变其中一个组氨酸看看是否改变蛋白酶的活性?
257．你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA，请从所列出的引物中选出合适的一
对。
5’-GACCTGTGGAAGC-----CATACGGGATTG-3’
3’-CTGGACACCTTCG-----GTATGCCCTAAC-5’
引物 1 引物2
5’-GACCTGTGGAAGC 5’-CATACGGGATTG
5’-CTGGACACCTTCG 5’-GTATGCCCTAAC
5’-CGAAGGTGTCCAG 5’-GTTAGGGCATAC
5’-GCTTCCACAGGTC 5’-CAATCCCGTATG
258. cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
259．怎样将一个平末端 DNA片段插入到EcoR Ⅰ限制位点中去?
260．有哪些可能的原因使一个基因在 DNA库中丢失?
261．简述以粘粒为载体构建基因文库的原理。
262．一个双链 DNA分子(为5’突出端)可采用哪些方法使之加上 dA100～120的尾巴?
263．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?
264．何谓YAC?主要特性是什么?
265. Muller的 PCR反应同大肠杆菌体内的 DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?
266．在构建 CDNA文库时，为什么常用GC接尾而不用 AT接尾法连接?
267．用限制性内切核酸酶切割 DNA后，经电泳检查，发现有拖尾现象，其可能的原因是什么?
268．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如Ecoli助中进行表达，克隆时应注意哪些问题?
269．假定你分离到一个Ecoli的 Thy—突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一个方案用 PCR从染色体 DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：E.coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)
270. 点印迹与 Southern印迹相比，有何优点和缺点?
271．你在做 Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用 NaOH溶液浸泡凝胶，使 DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接将 DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?
272．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
273．插人失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么?
274．一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉索基因中有识别位点的 EcoR Ⅰ消化。消化物与酵母 DNA连接后转化对两种抗生索都敏感的E coli菌株。
(l)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞?
(2)怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆?
275．用互E.coR Ⅰ和HindⅢ分别切割同一来源的染色体 DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到 A基因，但在后者的克隆中未筛选到 A基因，请说明原因。
276．什么是Western印迹?它与 Southern印迹有什么不同?
277. 用一限制性内切核酸酶切割 Lac+ Tetr的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，
并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac+ Tetr受体菌，筛选 Tetr转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。
278．严谨杂交实验是如何控制的?
279．RNA与基因组 DNA复性已被广泛用于检测不同类 DNA的转录。 DNA驱动的复性 实验与RNA驱动的复性实验有何不同?
280．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用 cDNA而不用基因组 DNA?为什么要在 cDNA前加上细菌的启动子?
281．从某种意义上讲，生物体的空间密码较三联体密码具有更广泛的简并性。
282．原核生物的RNA polymerase中δ(sigma)因子具正、负两方面的效应
283．Ⅱ、Ⅲ型Intron的Branch site中A具有高度保守性。
284．一般认为luxury gene才具Enhancer。
285．5BrU诱发“复制错误”（Replication error）的突变频率低于诱发“掺入错误”（incorporation error）的突变频率。
286．Lac operon的O+/Oc部分二倍体的E. coli细胞中，Oc对O+具有Cis-dominant效应。
287．将重组的苏云金杆菌δ毒素基因转化到植物细胞内，可以正确表达，但毒素蛋白合成效率较低。
288．采用“加、减法”进行DNA序列分析时，在“+A”系统中，所合成的片段末端均为A。
289．将CHS（色苷合成酶）反义DNA基因导入红花烟草原生质体中，诱导培养出白花植株，并对红花植株具显性效应。
290．在具Spm转座系统的玉米籽粒中，发现在无色胚乳的背景上出现有色斑圈。
291．E. Coli trp合成酶操纵子的trp L29突变株（第29dNt发生G的转换突变）表现型为trp缺陷型。
292．一段Poly dG-dc双链DNA分子在体外，4.0M NaCl及含有Br原子的条件下，可以形成稳定的Z—DNA构型，转入体内生理条件下，也能保持其结构的稳定性并制备Z—DNA抗体。
293．E. Coli在Histidine缺乏时，体内至少有三套调控系统启动，以控制对这种环境的适 应。
294．利用改良的RNA Driven技术体系，可以估算出真核生物基因表达的数目及其丰富度。
295．利用某一随机引物分子进行某一生物总DNA的PCR反应时，选用45℃ anneal temperature所显示的带纹数较选用35℃所显示的带纹数要少。
296．λ E. Coli C λ—C E.Coli K λ—K
eop=1 eop=1
297. 真核生物中，mRNA×DNA出现R—Loop的电镜图象。
298．原核生物中具有Direct Repeats的Tn9复合因子较具Inverted Repeats的Tn10复合因子的稳定性差。
299．E. Coli在仅Arg饥饿时也会合成trp。
300．通过二点或三点测验测定的基因间的遗传图距与物理图距之间存在非对应的线性关系。
301．pseudo gene是重复基因家簇中无功能的基因成员。
302．原核生物基因转录的强终止子，在行使其功能时，不一定需要Rho因子。
303． 近代研究发现若干Anti-Central dogma的现象，从而丰富和发展了１９５７年Ｃrick提出的Ｃentrol dogma理论。
304．将复制进行一半的E. Coli转接于含利福平的培养基上，E.Coli可以完成该周期的DNA的复制，但不能进入下一周期的复制。
305．生物体的翻译体系能在mRNA中UCU, UCC, UCA, UCA, UCG,AGU,AGC等6个密码子处准确聚合Ser。
306．并非所有氨基酰tRNA合成酶的Amino Acio Site都具有双筛功能。
307．yeast Alg4具有7个非全同等位基因，研究表明它们发生基因转换的频率，从5ˊ→3ˊ呈递减的趋势。
308．E. Coli的SOS修复系统的表达，必须受到紫外线诱导。
309．将转导噬菌体P1（h1-a、H2-b）·Fla感染沙门氏菌（H1—c、h2—d）fla菌株，获得33个Fla转导子，血清反应检测其中11个为H1—a相，22个为H1—c相。
提示：Fla:鞭毛蛋白基因，与H1基因紧因紧密连锁，控制沙门氏菌的运动。
（H1—a、h2—b）为H2相基因表达，血清型为a型
（H1—c、h2—d）为H1相基因表达，血清型为c型
310．从λphage溶源，裂解途径选择的分子机制中，你得到哪些有关生物基因表达调控的启示。
311．E. coli在含有Glucose和Lactose的培养基中，Lactose不被分解利用。
312．E. coli,K菌株被T4 phage的rⅡa,rⅡb两种突变体双重感染后，细菌裂解，并放出正常数量的T4 phage。
313．羟胺（HA）不能使终止突变的a基因发生回复突变。
314．从寄主菌中分离提取PBR322质粒DNA，经电泳检则，出现了三条迁移率不同的带纹。
315．tRNA作为adaptor，保证了蛋白质合成过程中氨基酸的准确聚合。
316．核糖体可以准确地在mRNA5’端第一个AUG密码处起译蛋白质。
317．选用10个碱基的随机引物进行PCR反应时，在50℃退火温度下较37℃退火温度下扩增出的带纹少。
318．DNA复制时，新生单链DNA总是从5’端向3’端延伸。
319．假基因也称为Retrogene，并且只在真核生物的重复基因家族中发现有假基因存在。
320.玉米中，由DS引起的插入突变基因，也称为Non-Autonomous mutable gene。
321．A，a1, a2, a3是一组非全同复等位基因，研究发现它们发生基因转换的频率为a1> a3> a2
322. 真核生物的基因在转录水平上的表达调控往往采用Positive control方式，而原核生物多采用Negative control方式。
323. Z-DNA在活体细胞内能稳定存在。
324．两种GC%含量相同的DNA分子，分别在pH=12和pH=7的变性缓冲液中进行的变性反应，测得的Tm值不同。
325．进行DNA复性动力学研究时，应保持缓冲液的Na+浓度为0.18～0.2M，复性反应的
温度一般控制在低于Tm值25℃左右。
326．合成与高度重复的卫星DNA（satellite DNA）两侧序列互补的特异引物，进行PCR反应的技术，是研究DNA多型性的一种分子标记技术（SSR，Simple Sequence Repeats）。
327．各种类型的转座因子均具有“限制转座频率的负控制”机制。
328．同相重叠基因可以产生长度不同，序列相似的isoform protein，而异相重叠基因仅能产生结构与功能完全不同的蛋白质。
329．Enhancer的启动具有严格的组织特异性。
330．生物体能保证DNA复制的错误机率小于10-11。
331．E. coli 组氨酸合成酶操纵子的引导区内存在一个编码16氨基酸的orf，并且其中有7个组氨酸的密码子连续排列。
332．Neuraspora A type 与a type杂交，形成的八核子囊孢子出现了A∶a=5∶3, 2∶6, 6∶2, 4∶4的多种分离的类型。
333．DNA复制过程中，新生单链DNA的延伸是从5’端向3’端方向进行的。
334．将提取的某种DNA分别置于含有与不含EB（溴化乙锭）的琼脂糖凝胶中电泳，发现其迁移率不同。
335．真核生物染色体的端粒结构有效地防止了染色体DNA复制中5’端短缩的问题。
336．E. coli在色氨酸缺乏的条件下至少有三种调控机制被启动。
337．codon usage既有物种的共性规律，又有物种的个性特点。
338．一个真核生物的基因要在受体菌(E. Coli)中将到准确的表达，一般是：
1）用该基因的cDNA导入，而不用分离出来的DNA。
2）导入的cDNA必须与载体的某一基因的启动子和引导序列组成重组DNA。
3）载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对
P O
G
C
P O
GG
CC
P O
GGG
CCC
当外来的目的基因连接的末端径S1酶（专化性酶切S.SDNA）消化后，与载体连接，导入受体细胞后，即可筛选到准确表达的克隆。
339. 已知AGA是Arg的密码，AGC是Ser的密码，你认为tRNAser的反密码子是否可能为ICA？为什么？
340．分离真核生物基因的方法，以提出mRNA后制备cDNA的技术为主，其中有两条技术路线。
其一，利用固定有poly u的亲合柱层析分离mRNA。
其二，（以Adh基因为例）将Adh酶纯化，制备Adh抗体，再与翻译体系混合，离心收集复合物，然后使复合物解体从中分离mRNA，它们的理论据是什么？
341．利用分离到的mRNA制备成cDNA,但这种cDNA不能代表真正的基因，加以利用，必须将它制成探针与总DNA进行分子杂交。才能获得真正的目的基因，这是为什么？
342．采用双脱氧法进行DNA序列分析时，A系统反应液中每一DNA片段的3’—末端都为A，为什么？
343．一般都利用限制性核酸内切酶和连接酶将质粒DNA与目的基因构成重组DNA分子，理论依据是什么？
344．将带有启动子和终止子在内的玉米Adh完整基因导入E. coli细胞内没有得到表达，其主要原因是什么？
345．说明下列基因操作技术的分子遗传学原理。
A、运用Southern Blot技术在68℃（High Stringency）的条件下杂交，洗膜，可以确定真核生物单拷贝基因DNA酶切片段的电泳位置。
运用羟基磷灰石柱层析法法，对在50℃(Low Stringency)条件复性的DNA分子进行层析，可以分离出单拷贝基因的DNA分子。
B、E.coli的质粒PBR322的AmpR和TctR基因中分别具有PStI和 BamHI的切点，如果以PBR322作外来目的基因的载体，制备目的基因的克隆，一般是将目的基因片段插入pStI或BamHI的切口内。
C、载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对
P O
G
C
P O
GG
CC
P O
GGG
CCC
当外来目的基因的连接末端S1酶（专化性酶切单链DNA分子）消化后，在连接酶作用下，与载体接头重组，导入受体细胞内，即可筛选到准确表达的克隆
346．Repetive gene 形成的三种假说。
347．复制型转座因子与逆转录型转座因子。
348．Prokaryotic promoter与Eukaryotic promoter的基本结构。
349．Enhancer与Attenuator的功能与原理。
350．paracodon与codon in codon的特点与功能。
351．Rifampin是RNA转录的抑制剂。
A C
352．反向重叠基， 同向重叠基因 各具有不同的基因表达方式。
B D
353．生活细胞内DNA分子在结构上的不均一性体现在：
dNt conformation, Helical form, Hydrogen bond, Superhelical direction,
Dnase Sensitivity, chromatin structure.
354．两种DNA分子的GC%相同，但Tm值不同。
两种DNA分子的Tm值相同，但Cot1/2值不同。
两种DNA分子的Cot1/2值相同，但Tm值不同。
两种DNA分子的经随机引物扩增的片段长度相同，但DNA Sequence不同。
355．Yeast的cyt. b gene在E. coli内不能表达。苏云金芽胞杆菌的ICP基因在E. coli内的表达量降低。
356．DNA复制的ε≤10-11，蛋白质翻译的ε≤10-4。
357．丝氨酸tRNA的anti-codon不会为ICU （AGA为Arg的codon, AGC为Ser的codon）
四、简答题
1.碱基对间在生化和信息方面有什么区别?
2.在何种情况下有可能预测某一给定的核苷酸链中“G”的百分含量?
3.真核基因组的哪些参数影响 Cot1／2值?
4.请问哪些条件可促使 DNA复性(退火)?
5.为什么 DNA双螺旋中维持特定的沟很重要?
6.大肠杆菌染色体的分子量大约是2.5×109Da1)，核苷酸的平均分子量是330Da，两个邻近核苷酸对之间的距离是0.34mn；双螺旋每一转的高度(即螺距)是3.4nm，请问：
(l)该分子有多长?
(2)该 DNA有多少转?
7.曾经有一段时间认为，DNA无论来源如何，都是4个核甘酸的规则重复排列(如， ATCG．ATCG．ATCG．ATCG„)，所以 DNA缺乏作为遗传物质的特异性。第一个直接推翻该四核苷酸定理的证据是什么?
8.为什么在 DNA中通常只发现 A—T和 C—G碱基配对?
9.列出最先证实是 DNA(或RNA)而不是蛋白质是遗传物质的一些证据。
10.为什么只有 DNA适合作为遗传物质?
ll.什么是连锁群?举一个属于连锁基因座的例子。
12.什么是顺反子?用“互补”和“等位基因”说明“基因”这个概念。
13.对于所有具有催化能力的内含子，金属离子很重要。请举例说明金属离子是如何作用的。
14.列出真核生物mRNA与原核生物mRNA的区别。
15.列出各种tRNA所有相同的反应及个别 tRNA的特有反应。
16.在体内，rRNA和 tRNA都具有代谢的稳定性，而 mRNA的寿命却很短,原因何在?
17.为什么真核生物核糖体RNA基因具有很多拷贝?
18.为什么说信使RNA的命名源自对真核基因表达的研究，比说源自对原核基因表达的研究更为恰当?
19.说明为什么mRNA仅占细胞RNA总量的一小部分(3％一5％)。
20.为何rRNA和tRNA分子比 mRNA稳定?
21.起始tRNA具有哪两种与其他 tRNA不同的特性?
22.区别rRNA和mRNA在翻译中的作用。
23.氨基酸分子如何与正确的tRNA分子连接?
24.简要说明证明信使的存在及其本质为RNA的证据。
25.列举4种天然存在的具有催化活性的RNA。
26.Ⅰ型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着Ⅰ型内含子的催化中心有什么特点?
27．某些自剪接的内含子具有可读框，它们编码何种蛋白?这与内含子的移动有什么关系?
28.描述 Meselson-Stahl试验，说明这一实验加深我们对遗传理解的重要性。
29.请列举可以在线性染色体的末端建立线性复制的三种方式。
30.为什么一些细菌完成分裂的时间比细菌基因组的复制所需的时间要少?为什么在选择营养条件下，E. coli中可以存在多叉的染色体或多达4个以上的开环染色体拷贝， 而正常情况下染色体是单拷贝的?
31.在 DNA聚合酶Ⅲ催化新链合成以前发生了什么反应?
32.DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响?
33.请指出在 oriC或фX型起点起始的 DNA复制之间存在的重要差异。
34.大肠杆菌被 T2噬菌体感染，当它的 DNA复制开始后提取噬菌体的 DNA，发现一些RNA与 DNA紧紧结合在一起，为什么?
35.DNA连接酶对于 DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。
36.曾经认为 DNA的复制是全保留复制，每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样，在Meselson和 Stahl的实验中他们将得到什么结果?
37.描述 Matthew和Franklin所做的证明 DNA半保留复制的实验。
38.解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。
39．描述滚环复制过程及其特征。
40.假如发生了碱基对的错配会产生什么表型，它们怎样被修复?
41.为什么 DNA的甲基化状态可以为复制的调节和 DNA的修复所利用?
42.错配修复的方向可以怎样被调节(突变型到野生型或野生型到突变型)?
43.RecA蛋白是怎样调节 SOS反应的?
44.以图4.1A为例，画出图4.1B所示分子同源区域交叉重组的产物，图中用一条单线表示 DNA双螺旋，同源重组的靶位点用箭头标出。
图4.1 各种重组的底物
45.图4.2所示为两条同源的亲代双螺旋和两套可能的重组产物。请画图表示两亲代双螺旋间可以产生指定重组产物的 Holliday连接，在每条链的左端标明 Holliday连接的3’或5’端，这样亲代和重组双螺旋间的关系就比较清楚。请指明为了产生每套重组产物哪些链应被切去。最后，画出经过一轮 DNA复制后的重组产物。
图4.2 亲代与重组的双螺旋
46.为什么基因内互补只发生在：(1)某一基因座的等位基因间；(2)这些基因座的特殊等位基因对间?
47.有很多突变对于野生型基因是隐性的，也就是说，在一个含有突变型和野生型基因二倍体细胞中，野生型的特性能够得到表达。请根据对突变过程的认识解释这一事实。对于说明为什么有些突变是显性的，有何见解?
48.为了选择下面两种突变型，应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本培养基作何调整?
(1) leu—，亮氨酸营养缺陷型；
(3) gal—，不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。
49.写出利用突变研究以下问题的步骤：
(l)氨基酸 X的代谢途径；
(2)E．coli中细胞分裂的控制。
50.在工业微生物菌种的选育中，人们喜欢用诱变的方法筛选解除了酶合成阻遏的突变株，而不要解除了酶活性反馈抑制的突变株。请解释原因。
51.为什么一个基因座的正向突变发生的频率要比回复突变高?
52.一个基因间阻遏物突变怎样阻遏了一个错义突变?
53.为什么吖啶类染料诱导的突变较碱基类似物诱导的突变对生物体更有害?
54.羟胺对游离噬菌体和转化 DNA都是高度特异的致变剂。它只与 DNA中的C反应，使之转变成偶尔可与 A错配的形式。
(1)羟胺诱导的碱基替代是什么?
(2)推测羟胺是否可回复自身诱导的突变?
(3)羟胺可以回复5—溴尿嘧啶诱导的突变吗?
(4)5—溴尿嘧啶可以回复羟胺诱导的突变吗?
55.在下列哪些基因中你可以分离到温度敏感突变和琥珀突变?
(l) lacO；(2) lacZ; (3) lacP；(4) lacI
56.区别反向突变、回复突变和第二位点回复突变。
57.指出突变频率和突变率的区别。
58.简述大肠杆菌中的增变基因。
59.简述怎样利用化学诱变剂在细菌中的诱变来检测它们致癌作用。
60.简述 Muller—5技术，并说明如何利用它测得 X射线对果蝇突变频率的影响。
61.列举几种具以下特征突变：(1)不能合成特殊多肽；(2)组成型合成多肽。
62.突变能影响高等真核生物结构基因表达的几个水平?并指出每种突变最明显的分子表型。
63.当E.coli菌株 K同时被两个特异的 T4噬菌体 rⅡ突变体所感染时，感染细胞裂解并释放出正常数量的噬菌体后代。这些后代是重组的结果还是互补作用的结果?应怎 样辨别?
64.在E.coli中， A和 B基因座相隔了大约5％的基因组，另一对标记 C和 D间隔1％的基因组。哪对能被(1)共转化；(2)共转导?
65.当一个烈性噬菌体的所有基因全部表达时，如果不对转录进行时序性调控，将出现
什么问题?
66.为什么λ噬菌体感染产生的溶源菌通常对其他的λ噬菌体的感染有免疫?
67.请预测具有下列突变的λ噬菌体感染细菌的表型。并说明原因：
(1)产生一个抗蛋白酶的λ cⅡ蛋白的突变。
(2)具有阻止蛋白结合的λOR2的突变。
(3)使λN基因失去作用的突变。
(4)编码λ c I蛋白的基因突变。
68．鉴定化合物的致癌性的一个通用实验是爱姆斯试验，通过营养缺陷型菌的回复突变 确定其致癌性。用人噬菌体和E.coli设计一个实验使之能用于致癌物的检测。
69．为什么像流感病毒这样的RNA 病毒的生命周期，有力地支持了以下这一论点：与其说病毒是生命有机体，不如说它是“寄生的遗传因子”。
70.大肠杆菌噬菌体 T2的染色体是一个线性 DNA分子，它的两端都有冗余并且可作循 环变换。解释冗余的含义并说明这些分子是怎样产生的。
71.烈性噬菌体和温和噬菌体的区别是什么?
72.从噬菌体 MS2中提取出来的裸露染色体可以感染大肠杆菌的原生质球(去除胞壁的细菌)，这会产生和具感染能力的噬菌体一样的噬菌体颗粒。如果染色体先用RNA酶处理，就会失去感染能力；另外，如果标记感染的RNA，在子代中不出现标记。解释这些现象。
73.从λ噬菌体中提取的 DNA用两种只攻击单链 DNA的外切核酸酶处理。外切核酸酶 A只从突出的5’端消化 DNA，而外切核酸酶 B只攻击自由的3’端。这种处理对λ噬菌体 DNA的生物活性有什么影响?
74．比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么个同。
75．转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链 DNA是怎样被保护的。
76．概括说明ζ因子对启动子调节的辅助功能。
77．什么是增效与减效突变?
78．细菌促旋酶突变通常是致死的，但是促旋酶／拓扑异构酶Ⅰ突变却可以成活，其原何在?
79．解释因子是怎样选择专一性启动子共有序列而启动不同基因表达的(考虑对环境压力的应答)。
80． rpoN基因编码ζ因子:ζ54，它具有不同于已知原核生物的因子的特征。请与E. coli的因子：ζ70(RpoD)作比较讨论这些特征。
81．在原核生物中，核心酶与 DNA的松散结合和紧密结合之间存在—种平衡，为什么这比核心多聚酶自身形成游离与结合平衡更有利?
82．正调控和负调控的主要不同是什么?
83．区别(1)启动子增效突变与启动子减效突变；(2)上游序列和下游序列。
84．解释为什么操纵子和启动子是反式隐性、顺式显性的，而编码阻碍蛋白的基因既是反式显性又是顺式显性。
85．为什么只有 DNA双螺旋中的一条链能被正常的转录?
86．哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的?
87．说明因 RNA聚合酶—启动子不同的相互作用如何导致不同基因的转录。
88．原核生物的核糖体 RNA和 tRNA的相对较稳定并且半衰期长，而 mRNA却不稳定，很快被降解，请解释这种稳定性的差异。
89．列举两种受调控蛋白控制的、与氨基酸的生物合成有关的操纵子。
90．什么是安慰诱导物?
91．葡萄糖是如何影响涉及糖代谢的操纵子(葡萄糖敏感型操纵子)的表达?
92．在大多数细菌操纵子中，结构基因通常紧靠在一起并由单个操纵序列—启动子区调控，而在一些例子中结构基因分散在染色体上。请问这些基因是如何以简单的方式达到协同调节的。
93. 反转录病毒与反转录转座子有什么不同?
94. gag和pol基因的蛋白产物是怎样生成的? mRNA编码的 Env蛋白是怎样生成的?
95. 蛋白酶为什么对反转录病毒生活史很重要?
96. 列出转化病毒正链RNA掺入到宿主双链 DNA的详细过程。
97. 噬菌体整合到宿主基因组后，4～6个宿主 DNA的核苷酸被复制，这是为什么?这与转座子插入新位点有何相似之处?另外，两个核苷酸从5’U3的5’和3’被切除，这意味着遗传信息从反转录病毒中被丢失吗?
98．反转录病毒怎样获得像onc基因这样的细胞基因?获得此类基因会对反转录病毒基 因产生影响吗?一个反转录病毒怎样才会丢失如 pol和 env这样的重要的基因而复制?
99．描述酵母 Ty元件的结构。它与反转录病毒有何相似之处?为什么它不形成感染粒子?
100．你如何证明 Ty元件在转座时经历了一个RNA中间体?
101．FB元件与copia因子有何不同?
102．列出病毒和非病毒超家族反转录转座子之间的4种差异。
103．为什么说 Alu元件可能作为 DNA复制的起点?有什么理由不支持这种假说呢?
104．描述两种转座子引起基因组重排的方式。
105． IS元件整合到靶位点时会发生什么?
106．一个复合转座子和一个 IS元件之间的关系是什么?
107．列出一个转座子插入到一个新位点所要求的步骤。
108．当(l)DNA在两个定向重复之间(2)DNA在两个反向重复之间发生重组的效应各是什么?
109．在什么过程中会形成一个共整合体?它的结构是什么?
110．Tn10元件只有在自己的转座酶基因具有活性时发生转座(与利用基因组中 Tn10元件表达的转座酶的情况正好相反)，这种偏爱的原因是什么?
111．什么是杂种不育?是什么引起的?
112．即使不携带癌基因，反转录病毒依然会导致癌变转化。列举这种现象发生的三种方式。
113．简述大肠杆菌的插入序列，并指出它们对自发突变的重要性。
114．比较基因组的大小和基因组复杂性的不同：
—个基因组有两个序列，一个是 A，另—个是 B，各将2000bP长。其中—个是由400bp
的序列重复5次而成，另一个则由50bp的序列重复40次而成，问：
(1)这个基因组的大小怎样?
(2)这个基因组的复杂性如何?
115. 一个基因如何产生两种不同类型的mRNA分子?
116. 在一个克隆基因的分析中发现：—个含有转录位点上游3.8kb DNA的克隆，其 mRNA直接转录活性比仅含有3.1kb上游 DNA的克隆的转录活性大50倍。这表明了什么?
117．被加工的假基因与其他假基因有哪些不同?它是如何产生的？
118．非转录间隔区与转录间隔区分别位于 rRNA重复的什么位置?转录间隔区与内含子 有何区别?
119．请描述 C值矛盾，并举一个例说明。
120．在酵母基因中，其生活必需基因占多大比例?为什么有些基因可能是不必要的?
121．酵母mRNA的大小一般与基因的大小相—致。而哺乳动物 mRNA比对应的基因明显小。为什么?
122．在一个基因复制后，外显子发生突变的机率比内含子小。但是，所有 DNA的突变率是相同的。请解释原因。
123．什么证据表明外显子与蛋白质的功能结构域相一致?这一证据如何支持外显子改组 (exon shuffling)假说?
124．为什么卫星 DNA在密度梯度离心时会形成一个清晰的峰?
125. 为什么基因组 DNA在用限制性内切核酸酶消化时，哺乳类的卫星 DNA会产生特 异的带?
126．举例说明什么是梯级重复，这样的序列是如何产生的?
127．跳跃复制的结果是什么?
128．重复序列并不是在选择压力下存在，因此能快速积累突变。这些特性表明重复序列相互间应存在很大的不同，但事实并不是这样的。请举例说明。
129．哪些细胞器带有自身基因组?为什么这些细胞器带有自身的基因组?
130．线粒体 DNA的突变率与细胞核 DNA突变率有什么不同?为什么?
131．人线粒体 DNA的哪些特征表明了其基因组的组织方式具有经济性?
132． RNA分子能被运到细胞器中吗?
133．什么证据表明细胞器与原核生物关系比真核生物关系密切?
134．酵母 rho—小菌落突变株的线粒体DNA发生了什么变化?
135．除了自身免疫疾病，机体如何实现不对“自己”产生免疫?
136. 简述重链免疫球蛋白基因重排的步骤。
137．列举产生免疫多样性的途径。
138．当J区与 V区发生重排后，其5’端的命运如何?3’端呢?
139. 假设免疫球蛋白是由基因组中完整的基因编码，而不是多个片段组装而成，那么人 体识别百万个不同的抗原需要多少个基因参与免疫反应?这些基因占人基因组的多 大比率?
140．地中海贫血症是一类因α和β珠蛋白合成降低而导致的疾病，什么类型的 DNA重排能引发这些疾病?
141．列举一个已知的 DNA序列编码一种以上蛋白质的三种方法。
142．哺乳动物中，从母亲与父亲遗传而来的基因是差异表达的，这种现象的理论基础是什么?
143．简述 T—DNA转化所需的细菌及质粒基因。
144．氨甲蝶呤对哺乳动物细胞有何作用?细胞是如何对这种药物产生抗性的?其中稳定 和不稳定抗性有什么不同?
145．一个tRNA基因的启动子序列突变将会分别对(l)基因产物和(2)细胞或生物体的表型有什么影响?
146．列举原核生物同真核生物转录的差异。
147．增强子具有哪些特点?
148．哪些转录因子含有 TBP?为什么它们被称为定位因子?请用一个模型解释为什么所 有三种RNA聚合酶都能与 TBP发生作用?
149．什么是转录起始前复合体?
150．RNA聚合酶的内部启动子位于起始位点下游50个核苷酸的位置，它是如何被定位并正确起始转录的?
151．对带有内部启动子的RNA聚合酶Ⅲ基因有什么样的编码限制因素?
152．当一段活性转录 DNA受损时，模板首先被修复。请用一个模型解释这一现象。
153．真核生物中，基因的表达受不同水平的调控，请列举其中3种。
154．甾醇类转录因子与锌指蛋白类转录因子的区别是什么?
155．亮氨酸拉链蛋白所识别的 DNA有何特点?如何理解亮氨酸拉链转录因子的二聚体结构同识别位点的关系?
156．虽然同源异型蛋白与锌指蛋白差别很大，但是它们识别 DNA序列的结构元件相
似的，这个元件是什么?
157．协同控制(coordinate control)下的基因是如何被同时激活的?
158．列出调控转录因子被激活的7种途径，并各举一例。
159．许多转录因子是细胞原癌基因的产物，为什么突变的转录因子可能导致癌变?
160．转录因子能够与装配成核小体的 DNA序列结合吗?
161．有两个模型可以解释染色质中的基因是如何被转录的。优先模型(preemptive model)中，转录因子和RNA聚合酶是如何与启动子结合的?为什么在动态模型中需要ATP?
162．为什么酵母SWI与SNF基因的突变会影响不同靶基因的转录?
163．一般认为，染色体中具有多个调控基因表达的结构域。每个结构域中可以找到哪些功能位点，它们的作用如何?
164．MyoD是一种 bHLH蛋白，对肌肉细胞的发育很重要，它的活性是如何被调控的?
165．酵母 U6 sRNA基因有一个TATA盒位于上游，在基因内有一个弱的 A盒，基因下游的远端还有一个保守的 B盒。体外实验时，RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ都可以转录这个基因，但体内实验发现只有RNA聚合酶Ⅲ可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性?
166．举例说明单链核酸中形成茎环结构的重要性。
167．用负超螺旋环状 DNA样品进行体外转录实验。但是预实验中并没有获得满意的结果，试讨论改进实验的可行方法。
168．组蛋白 H2A基因在所有细胞中都进行表达，而免疫球蛋白基因只在淋巴样细胞中表达。两类基因的启动子都含有转录因子 Oct-1的结合位点， Oct-1也存在于这两类细胞中，但为什么免疫球蛋白只在淋巴样细胞中表达?
169．RNA聚合酶Ⅱ起始转录后，起始复合物必须转变为延伸复合物。因此聚合酶复合 物必须解旋一小段 DNA。在线性 DNA上，解旋需要ATP， TFⅡE， TFⅡH和解旋酶活性。然而，超螺旋 DNA的转录并不需要这些因子。请解释这一现象。
170．RNA聚合酶Ⅲ特异性地转录小分子RNA，但为什么不转录5.8S rRNA?
171．当剪接的分支位点被移到内含子内的另一个位置，其活性将会消失。相反，正确位置附近隐藏的一个分支位点被激活。请作出解释。
172．请列举剪接体组装过程中的各个步骤，其中哪一个复合物是具有活性的剪接体?
173． Ul SnRNP与5’剪接位点间作用的基础是什么?如何证明?
174．列举前体mRNA剪接过程中发生的6种RNA-RNA相互作用?
175．通过遗传筛选，在酵母中分离得到许多与前体mRNA剪接有关的基因。其中几个基因编码RNA解旋酶。如何解释前体mRNA的剪接需要多个RNA解旋酶?这些酶可能在哪一步反应中起作用?
176．前体mRNA剪接体的催化中心是什么?它是如何形成的?有什么证据可以证明这 个模型?
177．据说前体mRNA的剪接是从Ⅱ型剪接进化而来的。有什么证据可以证明这一点?是如何发生的?这种进化为什么对生物体有利?
178．可变剪接如何控制果蝇中的性别分化?
179．比较RNA聚合酶 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ催化的转录终止过程和转录产物3’端的形成。
180．组蛋白mRNA3’端的加工需要什么样的RNA结构?如何证明所涉及的是RNA的二级结构而不是初级结构?在其他反应中会形成类似的结构吗?
181．为什么把同样的第一外显子(SL外显子)加在所有mRNA上对锥虫是有利的?
182．如何确定在一个多内含子基因的剪接过程中，内含子被切除的顺序?
183．为什么mRNA的翻译起始密码子的上游必须含有不被翻译的核糖核苷酸?
184．在RNA编辑中，向导RNA(gRNA)的作用是什么?它的哪些部分分别与：(1)编辑前mRNA；(2)编辑后的前体 mRNA互补?
185．指出下列序列中的3’剪接位点：
5’—ACGUACUAACAUUCUAUUCCUUAAG/UUCAUAAGUUGAGUC—3’
如果3’剪接位点的保守序列发生突变，附近的一个“隐藏”3’剪接位点通常取而代之。这个位点在哪里?这将对该前体mRNA所编码的蛋白产生什么影响?
186．既然真核rRNA的 poly(A)尾不是由 DNA编码的，为什么能将它准确地加到3’末端上呢?
187. 解释什么是“套索结构”，在内含子套索中的磷酸二酯键有什么特别之处?
188．哪一种真核生物RNA不需要加工?
189．为什么剪接是一个精确的过程?
191. 如果剪接发生在一个内含子的 GU序列与相邻内含子的AG序列间，会有什么结果?
192． N—甲酰甲硫氨酸—tRNA的功能是什么?
193. 解释核糖体肽基转移反应。
194．简述真核细胞中翻译终止的过程。
195．真核与原核核糖体的主要区别是什么?
196．简述真核与原核细胞中翻译起始的主要区别。
197．氨酰tRNA合成酶的功能是什么?
198．有两个系统发育上十分接近的物种，它们染色体中的(G十C)%含量不同， A株(G+C)含量为55％而 B株是68％。同源及异源转化／重组实验表明：来自(G+C)％低的DNA易于转化入(G十C)％高的生物体/基因组中，反之则不然。请说明原因。
199．根据翻译过程所涉及的各个步骤，设计出至少六种抑制翻译的方案。
200．根据遗传密码字典，将mRNA序列5’-AUGUUCCAGAGCACGGGCCCUAAA-3’翻译成多肽，假定翻译从5’端的 AUG开始。如果：
(1) C改成 G；
(2) C改成 A；
(3) C被缺失。
上述变化对多肽有何影响?
201．在大肠杆菌的一个无细胞蛋白质合成系统中，耗尽内源 mRNA后与 poly(AG)的随机多聚体共温育，其中 A∶G=3∶1。预测何种氨基酸能够掺人到多肽中，以及它们的相对掺入频率。
202．为什么说翻译后氨基酸的化学修饰与蛋白质总体构象的形成有关?
203．说明氨基酸残基的磷酸化怎样调节蛋白质的活性?
204．比较并指出O-连接和N-连接合成途径的异同。
205．为什么大多数移码突变导致多肽链的提前终止?
206．为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的?
207．重组 DNA的含义是什么?
208．如何理解基因工程的两个特点?
209．在 Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoR Ⅰ切割了 R6—5质粒，然后转化正E.coliC600，在卡那霉素抗性平板上筛选到了 pSC102，它是由 R6—5的三个E.coR Ⅰ片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性：
210．什么是动物乳腺生物反应器?
211．现分离到Ｘ82噬菌体的一个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这两种噬菌体的 DNA，请设计一个实验，初步鉴定是点突变、插人突变还是缺失突变?
212．说明 Sanger DNA测序法的原理。
213．在酶切反应缓冲液中加入 BSA的目的是什么?机理是什么?
214． Fredrick和 McClarin等用一个由13个碱基对的 DNA片段与EcoR Ⅰ反应，然后分离到酶和 DNA共结晶的复合物，通过 X射线分析发现了什么?
215. 有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为 噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用?
216．某学生在用EcoR Ⅰ切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?
217．在序列5’—CGAACATATGGAGT-3’中含有一个6bp的 Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?
218．下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识另别序列：
GAATCG，AAATTT， GATATC，ACGGCA?为什么?
219．用连接酶将Sau 3AI(↓GATC)切割的 DNA与经BamHⅠ(G↓GATCC)切割的DNA连接起来后，能够被BamH Ⅰ切割的机率有多大(用百分比表示)?
220．用Klenow酶填补的办法可使5’粘性末端转变成平末端。这种方法常使 DNA上的 某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失?BamH (G ↓ GATCC)；Taq Ⅰ(T ↓ CGA)，BssH Ⅱ(G↓ CGCGC)。
221．请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证?
222．当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?
223．按适当的顺序，列出将一种mRNA的 cDNA克隆到表达载体所用到的酶。
224．为什么反转录酶在聚合反应中会出错?
225．什么是测序酶(sequenaseTM)?
226. 什么是 S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?
227. 基因工程中，为什么不喜欢用 BAP来脱去 DNA的5’端的磷酸基团?
228．RNase A和RNase H在催化活性和应用上有何不同?
229．切口移位(nick translation)标记 DNA前，用 DNase Ⅰ处理 DNA时，应注意什么?
230．核酸酶与外切核酸酶Ⅲ用于系列缺失突变有什么不同?
231．YAC载体具有什么样的功能性 DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性?
232．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
233．什么叫穿梭载体?
234．说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。
235．虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。请举一例说明之。
236．为什么来自 Hfr× F—的重组体几乎总是 F—?
237．解释为什么不同的 Hfr菌株具有不同的转移起点和方向?
238．怎样从一个 E．coli的 Hfr菌株中分离到一个 F’gal+的菌株?
239．你已经分离了一个新的 F’因子，怎样用最简便的方法知道最初的 F因子的部分 DNA已经被切除，并被一个外源 DNA(也就是细菌 DNA)所替代?
240．你能用哪一种基因转移的方法确定
(1) E．coli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置；
(2)一个新分离的突变在基因内的位置。
241．用加有注释的图表说明 F质粒是怎样从一个 F+细胞转移到 F—细胞。并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。
242．在转导过程中，通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性培养基上，为什么?
243．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?
244．用salⅠ切割从噬菌体 J2分离的 DNA时，得到8个片段，分别是：1.3、2.8、3.6、
5.3、7.4、7.6、8.1和 11．4kb。但是，用Sal Ⅰ切割从被感染的寄主细胞中分离到的 J2噬菌体 DNA时，只得到7个片段，分别是：1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和 11.4kb，根据这些结果，您得到哪些信息?
245．在cⅠ基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑?
246．λ噬菌体 DNA被包装到噬菌体的头部，需要哪些基本条件?为什么?
247． PCR反应包括引物与 DNA模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物—DNA双螺旋稳定性的影响及对 PCR产率的影响。
248． Sanger的双脱氧法测序的原理。
249． 分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的 EDTA和蔗糖?
250． PCR的基本原理是什么?用 PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?
251． 说明合成接头在基因工程中的主要作用。
252． 从细菌中分离总 DNA，应采取哪些指施获得高分子量的 DNA?
253. 用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间?
254. 分离 pBR322 DNA可考虑用氯霉素扩增，分离 pUC18质粒 DNA则不必用氯霉素扩增，为什么?
255．溶菌酶是破碎细菌细胞的有效方法。但有些细菌的孢子对溶菌酶不敏感，应该如何处理?
256．假定你从粘质沙雷氏菌中克隆了一个基因，并推测可能是依赖于锌的金属蛋白酶， 因为它含有两个组氨酸和一个谷氨酸与锌形成锌指结构。请你设计一个方案，改变其中一个组氨酸看看是否改变蛋白酶的活性?
257．你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA，请从所列出的引物中选出合适的一
对。
5’-GACCTGTGGAAGC-----CATACGGGATTG-3’
3’-CTGGACACCTTCG-----GTATGCCCTAAC-5’
引物 1 引物2
5’-GACCTGTGGAAGC 5’-CATACGGGATTG
5’-CTGGACACCTTCG 5’-GTATGCCCTAAC
5’-CGAAGGTGTCCAG 5’-GTTAGGGCATAC
5’-GCTTCCACAGGTC 5’-CAATCCCGTATG
258. cDNA克隆与基因组克隆有何不同?
259．怎样将一个平末端 DNA片段插入到EcoR Ⅰ限制位点中去?
260．有哪些可能的原因使一个基因在 DNA库中丢失?
261．简述以粘粒为载体构建基因文库的原理。
262．一个双链 DNA分子(为5’突出端)可采用哪些方法使之加上 dA100～120的尾巴?
263．酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?
264．何谓YAC?主要特性是什么?
265. Muller的 PCR反应同大肠杆菌体内的 DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?
266．在构建 CDNA文库时，为什么常用GC接尾而不用 AT接尾法连接?
267．用限制性内切核酸酶切割 DNA后，经电泳检查，发现有拖尾现象，其可能的原因是什么?
268．欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如Ecoli助中进行表达，克隆时应注意哪些问题?
269．假定你分离到一个Ecoli的 Thy—突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计一个方案用 PCR从染色体 DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：E.coli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)
270. 点印迹与 Southern印迹相比，有何优点和缺点?
271．你在做 Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用 NaOH溶液浸泡凝胶，使 DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接将 DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?
272．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
273．插人失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么?
274．一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉索基因中有识别位点的 EcoR Ⅰ消化。消化物与酵母 DNA连接后转化对两种抗生索都敏感的E coli菌株。
(l)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞?
(2)怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆?
275．用互E.coR Ⅰ和HindⅢ分别切割同一来源的染色体 DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到 A基因，但在后者的克隆中未筛选到 A基因，请说明原因。
276．什么是Western印迹?它与 Southern印迹有什么不同?
277. 用一限制性内切核酸酶切割 Lac+ Tetr的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，
并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac+ Tetr受体菌，筛选 Tetr转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。
278．严谨杂交实验是如何控制的?
279．RNA与基因组 DNA复性已被广泛用于检测不同类 DNA的转录。 DNA驱动的复性 实验与RNA驱动的复性实验有何不同?
280．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用 cDNA而不用基因组 DNA?为什么要在 cDNA前加上细菌的启动子?
281．从某种意义上讲，生物体的空间密码较三联体密码具有更广泛的简并性。
282．原核生物的RNA polymerase中δ(sigma)因子具正、负两方面的效应
283．Ⅱ、Ⅲ型Intron的Branch site中A具有高度保守性。
284．一般认为luxury gene才具Enhancer。
285．5BrU诱发“复制错误”（Replication error）的突变频率低于诱发“掺入错误”（incorporation error）的突变频率。
286．Lac operon的O+/Oc部分二倍体的E. coli细胞中，Oc对O+具有Cis-dominant效应。
287．将重组的苏云金杆菌δ毒素基因转化到植物细胞内，可以正确表达，但毒素蛋白合成效率较低。
288．采用“加、减法”进行DNA序列分析时，在“+A”系统中，所合成的片段末端均为A。
289．将CHS（色苷合成酶）反义DNA基因导入红花烟草原生质体中，诱导培养出白花植株，并对红花植株具显性效应。
290．在具Spm转座系统的玉米籽粒中，发现在无色胚乳的背景上出现有色斑圈。
291．E. Coli trp合成酶操纵子的trp L29突变株（第29dNt发生G的转换突变）表现型为trp缺陷型。
292．一段Poly dG-dc双链DNA分子在体外，4.0M NaCl及含有Br原子的条件下，可以形成稳定的Z—DNA构型，转入体内生理条件下，也能保持其结构的稳定性并制备Z—DNA抗体。
293．E. Coli在Histidine缺乏时，体内至少有三套调控系统启动，以控制对这种环境的适 应。
294．利用改良的RNA Driven技术体系，可以估算出真核生物基因表达的数目及其丰富度。
295．利用某一随机引物分子进行某一生物总DNA的PCR反应时，选用45℃ anneal temperature所显示的带纹数较选用35℃所显示的带纹数要少。
296．λ E. Coli C λ—C E.Coli K λ—K
eop=1 eop=1
297. 真核生物中，mRNA×DNA出现R—Loop的电镜图象。
298．原核生物中具有Direct Repeats的Tn9复合因子较具Inverted Repeats的Tn10复合因子的稳定性差。
299．E. Coli在仅Arg饥饿时也会合成trp。
300．通过二点或三点测验测定的基因间的遗传图距与物理图距之间存在非对应的线性关系。
301．pseudo gene是重复基因家簇中无功能的基因成员。
302．原核生物基因转录的强终止子，在行使其功能时，不一定需要Rho因子。
303． 近代研究发现若干Anti-Central dogma的现象，从而丰富和发展了１９５７年Ｃrick提出的Ｃentrol dogma理论。
304．将复制进行一半的E. Coli转接于含利福平的培养基上，E.Coli可以完成该周期的DNA的复制，但不能进入下一周期的复制。
305．生物体的翻译体系能在mRNA中UCU, UCC, UCA, UCA, UCG,AGU,AGC等6个密码子处准确聚合Ser。
306．并非所有氨基酰tRNA合成酶的Amino Acio Site都具有双筛功能。
307．yeast Alg4具有7个非全同等位基因，研究表明它们发生基因转换的频率，从5ˊ→3ˊ呈递减的趋势。
308．E. Coli的SOS修复系统的表达，必须受到紫外线诱导。
309．将转导噬菌体P1（h1-a、H2-b）·Fla感染沙门氏菌（H1—c、h2—d）fla菌株，获得33个Fla转导子，血清反应检测其中11个为H1—a相，22个为H1—c相。
提示：Fla:鞭毛蛋白基因，与H1基因紧因紧密连锁，控制沙门氏菌的运动。
（H1—a、h2—b）为H2相基因表达，血清型为a型
（H1—c、h2—d）为H1相基因表达，血清型为c型
310．从λphage溶源，裂解途径选择的分子机制中，你得到哪些有关生物基因表达调控的启示。
311．E. coli在含有Glucose和Lactose的培养基中，Lactose不被分解利用。
312．E. coli,K菌株被T4 phage的rⅡa,rⅡb两种突变体双重感染后，细菌裂解，并放出正常数量的T4 phage。
313．羟胺（HA）不能使终止突变的a基因发生回复突变。
314．从寄主菌中分离提取PBR322质粒DNA，经电泳检则，出现了三条迁移率不同的带纹。
315．tRNA作为adaptor，保证了蛋白质合成过程中氨基酸的准确聚合。
316．核糖体可以准确地在mRNA5’端第一个AUG密码处起译蛋白质。
317．选用10个碱基的随机引物进行PCR反应时，在50℃退火温度下较37℃退火温度下扩增出的带纹少。
318．DNA复制时，新生单链DNA总是从5’端向3’端延伸。
319．假基因也称为Retrogene，并且只在真核生物的重复基因家族中发现有假基因存在。
320.玉米中，由DS引起的插入突变基因，也称为Non-Autonomous mutable gene。
321．A，a1, a2, a3是一组非全同复等位基因，研究发现它们发生基因转换的频率为a1> a3> a2
322. 真核生物的基因在转录水平上的表达调控往往采用Positive control方式，而原核生物多采用Negative control方式。
323. Z-DNA在活体细胞内能稳定存在。
324．两种GC%含量相同的DNA分子，分别在pH=12和pH=7的变性缓冲液中进行的变性反应，测得的Tm值不同。
325．进行DNA复性动力学研究时，应保持缓冲液的Na+浓度为0.18～0.2M，复性反应的
温度一般控制在低于Tm值25℃左右。
326．合成与高度重复的卫星DNA（satellite DNA）两侧序列互补的特异引物，进行PCR反应的技术，是研究DNA多型性的一种分子标记技术（SSR，Simple Sequence Repeats）。
327．各种类型的转座因子均具有“限制转座频率的负控制”机制。
328．同相重叠基因可以产生长度不同，序列相似的isoform protein，而异相重叠基因仅能产生结构与功能完全不同的蛋白质。
329．Enhancer的启动具有严格的组织特异性。
330．生物体能保证DNA复制的错误机率小于10-11。
331．E. coli 组氨酸合成酶操纵子的引导区内存在一个编码16氨基酸的orf，并且其中有7个组氨酸的密码子连续排列。
332．Neuraspora A type 与a type杂交，形成的八核子囊孢子出现了A∶a=5∶3, 2∶6, 6∶2, 4∶4的多种分离的类型。
333．DNA复制过程中，新生单链DNA的延伸是从5’端向3’端方向进行的。
334．将提取的某种DNA分别置于含有与不含EB（溴化乙锭）的琼脂糖凝胶中电泳，发现其迁移率不同。
335．真核生物染色体的端粒结构有效地防止了染色体DNA复制中5’端短缩的问题。
336．E. coli在色氨酸缺乏的条件下至少有三种调控机制被启动。
337．codon usage既有物种的共性规律，又有物种的个性特点。
338．一个真核生物的基因要在受体菌(E. Coli)中将到准确的表达，一般是：
1）用该基因的cDNA导入，而不用分离出来的DNA。
2）导入的cDNA必须与载体的某一基因的启动子和引导序列组成重组DNA。
3）载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对
P O
G
C
P O
GG
CC
P O
GGG
CCC
当外来的目的基因连接的末端径S1酶（专化性酶切S.SDNA）消化后，与载体连接，导入受体细胞后，即可筛选到准确表达的克隆。
339. 已知AGA是Arg的密码，AGC是Ser的密码，你认为tRNAser的反密码子是否可能为ICA？为什么？
340．分离真核生物基因的方法，以提出mRNA后制备cDNA的技术为主，其中有两条技术路线。
其一，利用固定有poly u的亲合柱层析分离mRNA。
其二，（以Adh基因为例）将Adh酶纯化，制备Adh抗体，再与翻译体系混合，离心收集复合物，然后使复合物解体从中分离mRNA，它们的理论据是什么？
341．利用分离到的mRNA制备成cDNA,但这种cDNA不能代表真正的基因，加以利用，必须将它制成探针与总DNA进行分子杂交。才能获得真正的目的基因，这是为什么？
342．采用双脱氧法进行DNA序列分析时，A系统反应液中每一DNA片段的3’—末端都为A，为什么？
343．一般都利用限制性核酸内切酶和连接酶将质粒DNA与目的基因构成重组DNA分子，理论依据是什么？
344．将带有启动子和终止子在内的玉米Adh完整基因导入E. coli细胞内没有得到表达，其主要原因是什么？
345．说明下列基因操作技术的分子遗传学原理。
A、运用Southern Blot技术在68℃（High Stringency）的条件下杂交，洗膜，可以确定真核生物单拷贝基因DNA酶切片段的电泳位置。
运用羟基磷灰石柱层析法法，对在50℃(Low Stringency)条件复性的DNA分子进行层析，可以分离出单拷贝基因的DNA分子。
B、E.coli的质粒PBR322的AmpR和TctR基因中分别具有PStI和 BamHI的切点，如果以PBR322作外来目的基因的载体，制备目的基因的克隆，一般是将目的基因片段插入pStI或BamHI的切口内。
C、载体分子的连接末端一般接上3种不同长度的人工聚合的同聚核苷酸对
P O
G
C
P O
GG
CC
P O
GGG
CCC
当外来目的基因的连接末端S1酶（专化性酶切单链DNA分子）消化后，在连接酶作用下，与载体接头重组，导入受体细胞内，即可筛选到准确表达的克隆
346．Repetive gene 形成的三种假说。
347．复制型转座因子与逆转录型转座因子。
348．Prokaryotic promoter与Eukaryotic promoter的基本结构。
349．Enhancer与Attenuator的功能与原理。
350．paracodon与codon in codon的特点与功能。
351．Rifampin是RNA转录的抑制剂。
A C
352．反向重叠基， 同向重叠基因 各具有不同的基因表达方式。
B D
353．生活细胞内DNA分子在结构上的不均一性体现在：
dNt conformation, Helical form, Hydrogen bond, Superhelical direction,
Dnase Sensitivity, chromatin structure.
354．两种DNA分子的GC%相同，但Tm值不同。
两种DNA分子的Tm值相同，但Cot1/2值不同。
两种DNA分子的Cot1/2值相同，但Tm值不同。
两种DNA分子的经随机引物扩增的片段长度相同，但DNA Sequence不同。
355．Yeast的cyt. b gene在E. coli内不能表达。苏云金芽胞杆菌的ICP基因在E. coli内的表达量降低。
356．DNA复制的ε≤10-11，蛋白质翻译的ε≤10-4。
357．丝氨酸tRNA的anti-codon不会为ICU （AGA为Arg的codon, AGC为Ser的codon）