几种常用的染色方法
1．美蓝染色法 在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。
2．革兰氏染色法
（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。
（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。
（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。
（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。
（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
3．抗酸性染色法
（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。
（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。
（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。
（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。
以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。
对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。
4．瑞氏染色法
（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可
稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。
（2）另一方法 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。
5．姬姆萨染色法
（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。
（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。
6．克利特氏荚膜染色法
（1）染色液配制
①美蓝溶液 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。
②碱性复红溶液 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。
（2）染色法
①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。
②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。
③水洗后、吸干、镜检。
④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。
7.结晶紫福尔马林荚膜染色法
（1）染色配制
①结晶紫福尔马林染色液 结晶紫10g，福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解，隔夜过滤。
②碱性复红溶液 见前：克利特氏荚膜染色法
（2）染色法
①涂片用结晶紫福尔马林染色液染色0.5—1min。
②水洗后，以碱性复红染色液复染15—30s。
③水洗、吸干、镜检。
④染色后，菌体呈深蓝色，荚膜呈淡红色。
8.番红染色液荚膜染色法
（1）染液配制 番红（或沙黄）0.7g，95％酒精20ml，蒸馏水15ml。 将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。
（2）染色法
①涂片滴加番红染色液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。 ②水洗、吸干、镜检。
③染色后，菌体呈暗红色，荚膜呈淡黄色。
9.赫斯氏荚膜染色法
（1）染色液配制
①龙胆紫酒精溶液 龙胆紫酒精饱和液5ml，蒸馏水95ml。
②硫酸铜水溶液 硫酸铜20g，蒸馏水100ml。
（2）染色法
①涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。
②用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。
③染色后，菌体呈深紫色，荚膜呈浅蓝色。
10．安沙尼氏荚膜染色法
（1）染色液配制
①1％结晶紫水溶液。
②20％硫酸铜水溶液。
（2）染色法
①将涂片在空气中自然干燥。
②以1％结晶紫水溶液染色2min（不必加热），再以20％硫酸铜代水冲洗染液。
③吸干、镜检。
④染色后，菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色。
11．苗列尔氏芽孢染色法
（1）染色液配制
①媒染液 5％铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml）
②染色液 石炭酸复红液
③脱色液 2％硫酸液（纯硫酸2ml，加蒸馏水98ml）
④复染液 碱性美蓝
（2）染色法
涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染色10min，充分水洗，用炭酸酸复红液加温染色（最好在标本上覆盖一张滤纸）2min，水洗，用脱色剂脱色10s，水洗，用美蓝液复染1min，水洗，干燥、镜检。
结果：芽孢呈红色，菌体呈蓝色。
12．孔雀绿沙黄芽孢染色法
（1）染色液 5％孔雀绿液，0.5％沙黄液。
（2）染色法
涂片火焰固定，加5％孔雀绿液微微加温染色30s—1min，至发生蒸气为止，待冷后水洗，再加沙黄液复染30s，水洗，干燥后镜检。
结果：芽孢呈绿色，菌体其它部分呈淡红色。
13．李富逊氏鞭毛染色法
（1）染色液配制 5％钾明矾水溶液10ml，20％鞣酸水溶液10ml，1％碱性复红酒杯精溶液10ml。
将上述三种溶液按次混合配成，如发生沉淀，用其上清液，本染液保存1周，复染液可用下列染液：美蓝0.1g，硼砂0.5g
，蒸馏水100ml。
（2）染色法
①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天，用镊子取出后以清水冲洗干净（冲洗时切勿用手捏玻片），然后斜插于木架上，置37度温箱中任其干燥后备用。
②菌液最好用10—16h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落，则用接种环挑取少许，置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液，切忌用接种环多作搅动，以免损伤鞭毛。
③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环，轻置于玻片一滴，玻片作倾斜放置，使菌液沿玻片面顺向下流，自成一薄菌膜，置37度恒温箱内干燥。 ④将上述染液滴加于涂片上，染10—15min，染色时间的长短随室温的高低而不同，如在冬季，可置于37度温箱内染色。
⑤轻轻地水洗1—2min。
⑥在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检，细菌菌体及鞭毛呈红色。 ⑦如需复染色，则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后，染色10min，用水冲洗，干燥后作镜检。菌体呈蓝色，鞭毛呈红色。
⑧良好的鞭毛染色涂片，应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。
14．过碘酸锡夫氏真菌染色法
（1）染色液配制 甲液：1％过碘酸液 乙液：碱性复红0.1g，95％乙醇5ml，蒸馏水95ml 丙液：亚硫酸氢锌1g，酒石酸0.5g
，蒸馏水100ml
丁液：1.22％饱和苦味酸液
（2）染色法
将标本在甲液中染10min，水洗后再用乙液染2—3min，置丙液中染30—40min，至玻片呈淡红色为合适，水洗1min，再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄色液体为止。脱水、透明，树胶封固后镜检。
结果：真菌组织染色鲜红色。
15．中国蓝真菌染色法
（1）染色液 纯石炭酸20ml，乳酸20ml，甘油40ml，蒸馏水20ml。 将上述成分混合，加温溶解后加入中国蓝0.05g，混合振荡即成。
（2）染色法
先将染色液加在载玻片上，将培养物被检样放在玻片上的染色液中，涂匀后覆盖盖玻片，微加温后镜检。
16．黑色素螺旋体染色法
（1）染色液配制 黑色素5g，蒸馏水50ml。混合加热使其溶解，在溶液中加1％福尔马林作防腐剂，临用前过滤。
（2）染色法 取被检物一滴，墨汁一滴混合后涂片，室温下放干燥后镜检。 结果：螺旋体无色发亮，背景呈黑色。
17．墨汁螺旋体染色法
（1）染色液 印度墨汁5ml，蒸馏水20ml，震荡混合而成。
（2）染色法 取被检物一滴，墨汁一滴混合后涂片，室温下放干燥后镜检。 结果：螺旋体无色发亮，背景呈黑色。
几种常用的染色方法
1．美蓝染色法 在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。
2．革兰氏染色法
（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。
（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。
（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。
（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。
（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
3．抗酸性染色法
（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。
（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。
（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。
（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。
以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。
对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。
4．瑞氏染色法
（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可
稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。
（2）另一方法 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。
5．姬姆萨染色法
（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。
（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。
6．克利特氏荚膜染色法
（1）染色液配制
①美蓝溶液 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。
②碱性复红溶液 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。
（2）染色法
①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。
②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。
③水洗后、吸干、镜检。
④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。
7.结晶紫福尔马林荚膜染色法
（1）染色配制
①结晶紫福尔马林染色液 结晶紫10g，福尔马林溶液100ml。混合使其完全溶解，隔夜过滤。
②碱性复红溶液 见前：克利特氏荚膜染色法
（2）染色法
①涂片用结晶紫福尔马林染色液染色0.5—1min。
②水洗后，以碱性复红染色液复染15—30s。
③水洗、吸干、镜检。
④染色后，菌体呈深蓝色，荚膜呈淡红色。
8.番红染色液荚膜染色法
（1）染液配制 番红（或沙黄）0.7g，95％酒精20ml，蒸馏水15ml。 将番红溶解于酒精内，再加蒸馏水混合而成。
（2）染色法
①涂片滴加番红染色液，将玻片置火焰上加热至发生蒸气约5min。 ②水洗、吸干、镜检。
③染色后，菌体呈暗红色，荚膜呈淡黄色。
9.赫斯氏荚膜染色法
（1）染色液配制
①龙胆紫酒精溶液 龙胆紫酒精饱和液5ml，蒸馏水95ml。
②硫酸铜水溶液 硫酸铜20g，蒸馏水100ml。
（2）染色法
①涂片加热固定，将龙胆紫酒精溶液滴加于玻片。将玻片置火焰上微加热至见蒸气并保持蒸气约20min。
②用硫酸铜液代替水冲洗染液，用吸水纸吸干、镜检。
③染色后，菌体呈深紫色，荚膜呈浅蓝色。
10．安沙尼氏荚膜染色法
（1）染色液配制
①1％结晶紫水溶液。
②20％硫酸铜水溶液。
（2）染色法
①将涂片在空气中自然干燥。
②以1％结晶紫水溶液染色2min（不必加热），再以20％硫酸铜代水冲洗染液。
③吸干、镜检。
④染色后，菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色。
11．苗列尔氏芽孢染色法
（1）染色液配制
①媒染液 5％铬酸液（铬酸5ml，加蒸馏水95ml）
②染色液 石炭酸复红液
③脱色液 2％硫酸液（纯硫酸2ml，加蒸馏水98ml）
④复染液 碱性美蓝
（2）染色法
涂片，干燥，火焰固定，用媒染液染色10min，充分水洗，用炭酸酸复红液加温染色（最好在标本上覆盖一张滤纸）2min，水洗，用脱色剂脱色10s，水洗，用美蓝液复染1min，水洗，干燥、镜检。
结果：芽孢呈红色，菌体呈蓝色。
12．孔雀绿沙黄芽孢染色法
（1）染色液 5％孔雀绿液，0.5％沙黄液。
（2）染色法
涂片火焰固定，加5％孔雀绿液微微加温染色30s—1min，至发生蒸气为止，待冷后水洗，再加沙黄液复染30s，水洗，干燥后镜检。
结果：芽孢呈绿色，菌体其它部分呈淡红色。
13．李富逊氏鞭毛染色法
（1）染色液配制 5％钾明矾水溶液10ml，20％鞣酸水溶液10ml，1％碱性复红酒杯精溶液10ml。
将上述三种溶液按次混合配成，如发生沉淀，用其上清液，本染液保存1周，复染液可用下列染液：美蓝0.1g，硼砂0.5g
，蒸馏水100ml。
（2）染色法
①所用的载玻片必须十分清洁无油脂、无划痕。可将玻片先浸于重铬酸钾清洁液数天，用镊子取出后以清水冲洗干净（冲洗时切勿用手捏玻片），然后斜插于木架上，置37度温箱中任其干燥后备用。
②菌液最好用10—16h的幼年肉汤培养物。若取自琼脂培养基上的菌落，则用接种环挑取少许，置蒸馏水中制成轻度混浊的细菌悬液，切忌用接种环多作搅动，以免损伤鞭毛。
③挑取肉汤培养物或细菌悬液一环，轻置于玻片一滴，玻片作倾斜放置，使菌液沿玻片面顺向下流，自成一薄菌膜，置37度恒温箱内干燥。 ④将上述染液滴加于涂片上，染10—15min，染色时间的长短随室温的高低而不同，如在冬季，可置于37度温箱内染色。
⑤轻轻地水洗1—2min。
⑥在室温或37度温箱内任其干燥后作镜检，细菌菌体及鞭毛呈红色。 ⑦如需复染色，则用上述美蓝硼砂复染液在水洗后，染色10min，用水冲洗，干燥后作镜检。菌体呈蓝色，鞭毛呈红色。
⑧良好的鞭毛染色涂片，应在显微镜的视野中见到大部分细菌菌体均附有鞭毛。
14．过碘酸锡夫氏真菌染色法
（1）染色液配制 甲液：1％过碘酸液 乙液：碱性复红0.1g，95％乙醇5ml，蒸馏水95ml 丙液：亚硫酸氢锌1g，酒石酸0.5g
，蒸馏水100ml
丁液：1.22％饱和苦味酸液
（2）染色法
将标本在甲液中染10min，水洗后再用乙液染2—3min，置丙液中染30—40min，至玻片呈淡红色为合适，水洗1min，再置于丁液中染3min。充分水洗至无黄色液体为止。脱水、透明，树胶封固后镜检。
结果：真菌组织染色鲜红色。
15．中国蓝真菌染色法
（1）染色液 纯石炭酸20ml，乳酸20ml，甘油40ml，蒸馏水20ml。 将上述成分混合，加温溶解后加入中国蓝0.05g，混合振荡即成。
（2）染色法
先将染色液加在载玻片上，将培养物被检样放在玻片上的染色液中，涂匀后覆盖盖玻片，微加温后镜检。
16．黑色素螺旋体染色法
（1）染色液配制 黑色素5g，蒸馏水50ml。混合加热使其溶解，在溶液中加1％福尔马林作防腐剂，临用前过滤。
（2）染色法 取被检物一滴，墨汁一滴混合后涂片，室温下放干燥后镜检。 结果：螺旋体无色发亮，背景呈黑色。
17．墨汁螺旋体染色法
（1）染色液 印度墨汁5ml，蒸馏水20ml，震荡混合而成。
（2）染色法 取被检物一滴，墨汁一滴混合后涂片，室温下放干燥后镜检。 结果：螺旋体无色发亮，背景呈黑色。