1）在10cm培养皿中培养293T细胞，培养基为：DMEM高糖培养基+10%FBS（胎牛血清）+1%双抗（100×青霉素-链霉素混合溶液）；
2）待150mm培养皿中的293T细胞密度达80-90%时，更换培养基：DMEM高糖培养基+1%FBS+1%双抗；
3）更换培养基培养2-6小时后，用PEI分别将pWPXLd-CAR-EGFP质粒或空白对照质粒pWPXLd-EGFP分别与慢病毒包装辅助质粒pMD2.G、psPAX2共同转导入293T细胞，加入试剂及剂量如下：
4）分别于转化后24、48和72小时，收集培养基上清，并加入新鲜培养基（DMEM高糖培养基+1%FBS+1%双抗）；
5）培养基上清收集完毕，将上清2500g离心0.5小时后（可选步骤）；
6）取离心上清，用0.45um过滤器过滤后，备用。
1）T细胞的分离纯化：通过Ficoll密度梯度法分离出血液中的单个核细胞，经红细胞裂解液裂解去除红细胞后，再通过MACS Pan-T
磁珠分选出T细胞；
2）分选出来的T细胞用培养基（1640培养基+10%FBS+青霉素100U/ml+链霉素0.1mg/ml）稀释至细胞浓度2.5×106个/ml待用；
3）通过包被CD2、CD3、CD28抗体的磁珠（产品来源：德国美天旎）刺激T细胞，即包被磁珠与T细胞以1:2比例混合，T细胞最终密度应为5×106个/ml/cm2。混合后，置于37℃、5% CO2培养箱培养刺激48小时。
4）慢病毒转染T细胞：将激活的T细胞-磁珠混合液中的磁珠通过磁场作用去除，300g离心5min，去上清，用新鲜培养基重悬，分别加入表达CAR和GFP（空白对照）慢病毒后，加入8μg/ml的polybrene和300IU/ml IL-2。置于37℃，5% CO2培养箱培养24h后，300g离心5min，去上清，用含300IU/ml IL-2的新鲜培养基重悬，即得过表达CAR质粒的T细胞。
1）在10cm培养皿中培养293T细胞，培养基为：DMEM高糖培养基+10%FBS（胎牛血清）+1%双抗（100×青霉素-链霉素混合溶液）；
2）待150mm培养皿中的293T细胞密度达80-90%时，更换培养基：DMEM高糖培养基+1%FBS+1%双抗；
3）更换培养基培养2-6小时后，用PEI分别将pWPXLd-CAR-EGFP质粒或空白对照质粒pWPXLd-EGFP分别与慢病毒包装辅助质粒pMD2.G、psPAX2共同转导入293T细胞，加入试剂及剂量如下：
4）分别于转化后24、48和72小时，收集培养基上清，并加入新鲜培养基（DMEM高糖培养基+1%FBS+1%双抗）；
5）培养基上清收集完毕，将上清2500g离心0.5小时后（可选步骤）；
6）取离心上清，用0.45um过滤器过滤后，备用。
1）T细胞的分离纯化：通过Ficoll密度梯度法分离出血液中的单个核细胞，经红细胞裂解液裂解去除红细胞后，再通过MACS Pan-T
磁珠分选出T细胞；
2）分选出来的T细胞用培养基（1640培养基+10%FBS+青霉素100U/ml+链霉素0.1mg/ml）稀释至细胞浓度2.5×106个/ml待用；
3）通过包被CD2、CD3、CD28抗体的磁珠（产品来源：德国美天旎）刺激T细胞，即包被磁珠与T细胞以1:2比例混合，T细胞最终密度应为5×106个/ml/cm2。混合后，置于37℃、5% CO2培养箱培养刺激48小时。
4）慢病毒转染T细胞：将激活的T细胞-磁珠混合液中的磁珠通过磁场作用去除，300g离心5min，去上清，用新鲜培养基重悬，分别加入表达CAR和GFP（空白对照）慢病毒后，加入8μg/ml的polybrene和300IU/ml IL-2。置于37℃，5% CO2培养箱培养24h后，300g离心5min，去上清，用含300IU/ml IL-2的新鲜培养基重悬，即得过表达CAR质粒的T细胞。