药学实践杂志2012年5月25日第30卷第3期Journal of Pharmaceutical Practice ，Vol．30，No．2，May 25，2012
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西罗莫司纳米结构脂质载体分散液的制备及其体外释放度考察
吴
1，22
宋洪涛(1．福建医科大学福总临床医学院，昊，福建福州福建福州350025; 2．南京军区福州总医院药学科，
350025)
［摘要］目的其体外释放度。方法
SRL-NLC ) 分散液的处方，优化西罗莫司纳米结构脂质载体(sirolimus nanostructured lipid carriers ，并考察response surface methodology ，CCD-RSM ) 优化SRL-采用星点设计－效应面法(central composite design-NLC 分散液平均粒径82．54nm 、Zeta 电位-经优化的SRL-分布系数0．207，
NLC 分散液的处方，NLC 分散液在0．4%并以粒径、分布系数、载药量和包封率作为评价指标，采用正相透析袋法考察SRL-SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液中的释放度。结果论
18．0mv 、SRL-NLC 分散液在0．4%SDS 溶液中能持续释放120h ，载药量1．829%和包封率91．3%，累积释放量为60．1%。结
SRL-NLC 分散液在0．4%SDS 溶液中累积释放度为60．1%。经优化的处方可行性和重现性均较好，
［关键词］纳米结构脂质载体; 制备; 表征; 正相透析袋法; 体外释放［中图分类号］R927．1
［文献标志码］A
［文章编号］1006－0111(2012) 03－0189－05
［DOI ］10．3969/j．issn．1006－0111．2012．03．009
Preparation and in vitro releasing of sirolimus-nanostructured lipid carriers dis-pension
2
WU Hao 1，，SONG Hong-tao 2(1．Department of Pharmacy ，Fuzhou General Hospital ，Fujian Medical University ，Fuzhou 350025，Chi-
na ; 2．Department of Pharmacy ，General Hospital of Nanjing Military Region ，Fuzhou 350025，China )
［Abstract ］Objective
To optimize the preparation and study in vitro releasing of SRL-NLC dispersion．Methods
Central
composite design-response surface methodology was used to optimize dispersion formulation ，then in vitro releasing in 0．4%SDS (sodi-um lauryl sulfate ) solution was explored by normal phase dialysis bag method．Results
The optimal dispersion had PS (particle size )
∶82．54nm ，PI (polydisperity index ) ∶0．207，Zeta potential :－18．0mv ，DL (drug-loading ) :1．829%，and EE (entrapment effi-ciency ) :91．3%; SRL-NLC dispersion had a characterization of 60．1%accumulated releasing in 0．4%SDS solution．Conclusion The optimal formulation had good feasibility and reproducibility ，in vitro releasing curve showed SRL-NLC dispersion had a character-ization of 60．1%accumulated releasing in 0．4%SDS solution．
［Key words ］
NLC ; preparation ; characterization ; normal phase dialysis bag method ; in vitro releasing
SRL ) 是大环内酯类的免疫西罗莫司(sirolimus ，抑制剂，临床上用于器官移植抗排斥作用，美国惠氏公司的西罗莫司纳米结晶片，口服生物利用度仅为17%，由于该药属于药物生物药剂学分类系统(BCS ) Ⅱ类药物［1］，即溶解度差(37ħ 溶解度为0. 5726μg /ml) ，因此限制其口服吸收膜通透性好，
的主要因素是溶解度。本实验以固态和液态脂质为药物载体制备NLC ，它是一种平均粒径在纳米级别，粒径分布窄的载药脂质纳米粒，口服能提高药物
［2］的溶解度和溶出速率，并且脂质载体能增强淋巴
［3，4］
，转运，促进药物经淋巴转运途径吸收因此具有
RSM 法筛选最优处方，用CCD-并对其体外释放度
进行初步研究。11．1
材料与仪器
SRL 原料材料SRL 对照品(纯度:99．9%) 、
药(纯度:99．6%，批号:100401) 均由福建科瑞药业有限公司提供，西罗莫司纳米结晶片(commercial sirolimus tablet ，CST ，44/14(Geluci-美国惠氏公司) ，re 44/14，月桂酸聚乙二醇甘油酯，法国嘉法赛，批
) ，GTCC (crodamol GTCC ，号122189，中碳链脂肪酸
Tween-80(聚山梨甘油酯，英国Croda ，批号15013) ，酯80，湖南尔康制药有限公司，批号20100402) ，
SDS (十二烷基硫酸钠，湖南尔康制药有限公司，批MD34-14型透析袋(分子量:14000，号20101104) ，
美国Union Carbide 公司) 。甲醇，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
改善难溶性药物口服生物利用度的潜质。本实验采
［基金项目］福建省自然科学基金(2010J01218) ．
［作者简介］吴昊(1986-) ，男，硕士研究生．Tel :(0591) 22859972，
E-mail :woohau123@163．com．
mail :sohoto@vip．so-［通讯作者］宋洪涛．Tel :(0591) 22859459，E-hu．com．
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1．2
仪器Agilent1200高效液相色谱系统(UV 检
测器，美国Agilent 公司) ，高压匀质机(NS1001L2K ，1ml /min，检测波长为277nm ; 柱温50ħ ; 进样量为
20μl 。理论塔板数为1999，最低检测限20ng /ml。2．1．2
对照品溶液的配制取SRL 对照品适量，精密称定，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得对照精密称定供试品置于容量瓶中加适量甲醇超声处理15min ，放冷至室温，
意大利Niro Soavi 公司) ，梅特勒-分析天平(AL204，
托利多仪器(上海) 有限公司) ，集热式磁力搅拌器(HT-8，常州国华电器有限公司) ，纳米激光粒度测定仪(NICOMP 380ZLS ，美国NICOMP 公司) 。22．12．1．1
方法与结果含量测定
品溶液。
2．1．3供试品溶液的配制
继续加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。2．1．4方法专属性考察按照“2．1．2”项和“2. 1. 3”项配制SRL 的对照品溶液，供试品溶液和空白NLC 分散液的供试品溶液，分别进液相。结果表明辅料对SRL 测定无干扰，峰形好，保留时间6．6min ，结果见图1
。
［5］
Agilent1200高效液相色谱系统色谱条件
(UV 检测器，色谱柱:Eclipse 美国Agilent 公司) ，
5μm ，XDB-C 18(150mm ˑ 4．6mm ，美国Agilent 公
司) ，甲醇-水(45∶34∶21) 为流动相，流速为以乙腈-
图1高效液相色谱图
A-SRL 对照品溶液; C-SRL-NLC 分散液空白NLC 分散液; B-
2．1．5
线性范围精密称取SRL 对照品5．0mg ，
置50ml 量瓶中，加适量甲醇超声溶解，稀释至刻
度，得浓度为100μg /ml对照品溶液，分别移取0．1、0．4、0．8、1．2、1．6、2．0ml 置10ml 容量瓶中，加甲4、8、12、16、20μg /ml的对照品溶液，醇稀释成1、经0．45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液按“2．1．1”项测定，以浓度X (μg /ml) 为横坐标，峰面积Y 为纵坐标
表1
项目日内
浓度(μg /ml)
51015
日间
51015
14．9910．114．94．9610．015．1
进行线性回归，得回归方程Y =52．979X －9．9533
(r =0. 9999) ，说明在1 20μg /ml浓度范围内SRL 峰面积与浓度呈良好的线性关系。2．1．6
10和15μg /ml样精密度配制浓度为5、
品溶液，均连续进样5次，计算日内精密度，以后连
续5d 测定并计算日间精密度，结果见表1，日内和日间相对标准偏差RSD 均小于2%，精密度良好。
日内日间精密度测定结果（n =3）
24．97
编号34．9310．015．14．9410．115．1
44．9510．015．04．9110．015．1
54．9010．115．04．9210．115．2
平均值(μg /ml)
4．9510．015．04．9410．015．1
RSD (%) 0．700．550．470．650．550．36
10．015．04．9910．015．2
2．1．7
加样回收率精密移取100μg /ml对照品1、1．5ml 分别到10ml 空白NLC 分散液溶液0．5、
中进行加样回收率试验，测得平均加样回收率为(99．5ʃ 0．89) %、(100．0ʃ 0．80) %、(100．4ʃ
0. 46) %。2．1．8
Zeta 电位和平均粒径及其分布系数的测
NCL 分散液用蒸馏水稀释为载体含量定将SRL-约1%的溶液，用纳米激光粒度仪测定Zeta 电位，
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平均粒径及其分布系数。
2．1．9载药量和包封率采用Sephadex G50凝胶柱(15mm ˑ 70mm ) 测定NLC 分散液的载药量和包封率，均匀上样体积V (ml ) 的NLC 分散液，用流速
1min 收集一管，为1．0ml /min的蒸馏水洗脱，并用适量甲醇溶解稀释，超声15min 后按照“2．1．1”法
测定峰面积，以峰面积-时间做洗脱曲线，如图2
。
表2
因素X 1X 2X 3
－1．7321．3280．220．03
各因素水平代码及试验操作值
－120．20．05
水平
030．30．075
140．40．1
1．7324．6820．380．12
表3
Run 123456789
X [***********]2
试验设计及各指标测定结果（n =3）
X 20．20．30．30．220．30．40．30．380．30．40．20．30．40．20．20．30．30．4
X 30．1
Y 179．2
2340．4070．5480．4720．6210．2120．4860．360．5430．4890．5480．2530．2820．6070．9580．4280．2470．2790．3230．5480．314
1．342．882．32．161．091．81．511．81．72．881．41．752．23．11．581．81．91．572．881．74
66．895．876．171．784．360．437．759．436．295．835．287．273．977．878．990．163．152．295．843．6
0．075108．90．075110．60．075126．80．0750．050．0750．050．10．120．10．050．050．030．1
71．592．598．368．291．6101．1203．285．884．984．195．3
0．075105．50．075114．80．075108．9
4．6820．3
图2峰面积-时间洗脱曲线
[***********]1920
由上图2可知，收集5 16min 的洗脱液可计算得体积V (ml ) NLC 分散液的药物包载量M 包载(g ) ，测定分散液的总密度为ρ(g /ml) ，故NLC 分散液脂质含量M 脂质(g ) =0．1ρV (脂质总用量:10%) ，载药量DL (%) =10M 包载/ρV 。测定体积V (ml ) NLC 分散液中SRL 总浓度C (μg /ml) ，计算包封率EE (%) =10M 包载/CV。2．2
称取处方量的固态脂质44/14和液态脂质GTCC 在75ħ 水浴条件下加热至脂质完全熔融后，加入SRL 原料药搅拌均匀
SRL-NLC 分散液的制备
5
1．3280．30．075100．70．075108．9
2．3．2
用Design Expert 8．0．5．0软件
对表3中的试验数据进行多元线性和非线性拟合，
模型拟合
多元线性方程:Y =b 0+b 1X 1+b 2X 2
二次多项式:Y =b 0+b 1X 1+b 2X 2+b 3X 1X 2+
b 4X 12+b 5X 22
2
三次多项式:Y =b 0+b 1X 1+b 2X 2+b 3X 1+
80的水溶液迅速倒成澄明油相，再将同温度Tween-30min 条件下磁力搅拌制备入油相，在300r /min，初乳，经高压匀质机90MPa 乳匀5次，最后于4ħ
NLC 分散液。同法不加药制得空白下冷藏得SRL-NLC 分散液。2．32．3．1
处方优化星点设计
根据单因素考察试验结果，已经
确定处方中固体脂质:44/14，液体脂质:GTCC ，脂质
模型如下:
b 4X 22+b 5X 1X 2+b 6X 12X 2+b 7X 1X 22+b 8X 13+b 9X 23
以方程的回归系数r 最大且p 最小为原则，结
果二次多项式拟合最好，得拟合方程如下:
Y 1=109．48+8．49X 1+11．92X 2+12．19X 3+
11．89X 1X 2+14．86X 1X 3+17．21X 2X 3+2. 26X 12－7．94X 22－5．22X 32(r =0．8931，P =0．0245＜0．05)
Y 2=0．52+0．10X 1+0．072X 2+0．084X 3+
0. 029X 1X 2+0．087X 1X 3+0．081X 2X 3－0. 028X 12－0．063X 22－0．023X 32(r =0. 9217，P =0．0041＜0．05)
Y 3=1．55+0．022X 1+0．062X 2+0．069X 3+
0. 081X 1X 2+0．051X 1X 3+0．098X 2X 3－
30min 磁力搅总用量为10%，工艺条件:300r /min，
拌，高压匀质机90MPa 乳匀5次。由于固液脂质比例，投药量和乳化剂用量对粒径及其分布系数，载药量和包封率的影响显著，且这三个因素确定，处方组成就基本确定，因此，以固液脂质比(X 1) ，投药量(X 2) ，平均粒径(Y 1) ，乳化剂(X 3) 作为自变量，粒径分布(Y 2) ，载药量(Y 3) 和包封率(Y 4) 为因变量，采用三因素五水平的星点设计进行处方优化，因素的极大值和极小值已由单因素试验结果确定，其代码和水平设计见表2，按照星点设计安排20个试验，每个样品做3次，结果见表3。
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0. 041X 12－0．13X 22－0．061X 32(r =0．8602，P =0．0436＜0．05)
Y 4=80．48+1．07X 1－15．35X 2+5．13X 3+
7. 91X 1X 2+3．44X 1X 3+7．94X 2X 3－P 4. 20X 12－6．73X 22－5．74X 32(r =0. 8690，=0. 0341＜0．05)
2．3．3
采用Design Expert 8．0．5．0
软件绘制以上拟合方程的效应面图和等高线，结果
效应面优化
图7
最佳范围等高线
如图3至图7
。
图7左下角的白色部分为最佳范围，经软件筛选X 2=0．21，X 3=7．33，按照上述最优处方:X 1=2．10，
NLC 分散液，处方制备SRL-比较各指标的预测值和
实测值，对模型的预测能力进行验证，结果见表4。
表4
图3
粒径效应面和等高线
指标平均粒径(nm ) 分布系数载药量(%) 包封率(%)
预测值与实测值比较
预测值90．520．2372．03790．7
实测值83．200．2231．89291．0
误差(%) 8．15．917．1－0．33
误差(%) =(预测值－实测值) /预测值ˑ 100
各参数预测值与实测值之间的误差由表4可知，
均小于10%，说明建立的模型具有较好的预测能力。2．4
图4
分布系数效应面和等高线
最优处方工艺的验证按照最优处方:X 1=
2. 10，X 2=0．21，X 3=7．33制备3批SRL-NLC 分散液，比较每批间各指标的差异，结果如下表5。
表5
批号123
3批SRL-NLC 分散液指标考察结果（x ʃ s ，n =3）珋
粒径
(nm )
分布系数
载药量(%)
包封率(%)
Zeta 电位(mv )
83．52ʃ0．2 40．198ʃ0．2 411．860ʃ0．1 190．8ʃ0．1 5-17．3ʃ0．3 581．60ʃ0．3 30．213ʃ0．2 241．795ʃ0．2 491．8ʃ0．2 7-18．9ʃ0．4 582．50ʃ0．3 60．210ʃ0．3 181．831ʃ0．1 591．2ʃ0．1 9-17．7ʃ0．3 1
图5
包封率效应面和等高线
18．0ʃ0．6 8平均值82．54ʃ0．7 80．207ʃ0．0 061．829ʃ0．0 391．3ʃ0．4 1-2．901．640．453．78RSD (%) 0．94
由表5可知，按照最优处方工艺制备的3批样
品各指标均较好，且RSD 值均小于5%，说明该处方工艺是百通期刊网稳定可靠的。3
体外释放度考察
NLC (含SRL 1．0mg ) 分精密移取550μl SRL-图6
载药量效应面和等高线
散液和一片CST 分别置于分子量14000的透析袋中，按照2010年版中国药典溶出度测定XC 第三法，参考已上市西罗莫司纳米结晶片的质量标准，以0．4%SDS 溶液250ml 为溶出介质，转速100r /min，
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温度(37ʃ 0．5) ħ 条件下进行体外释放度试验。分
0．25、0．5、0．75、1、2、4、6、8、12、24、36、48、别考察0、
60、72、84、96、108、120h 的累积释药度，具体数据见表6。
表6
SRL-NLC 分散液和CST 的累积
ʃ s ，n =3）释放度数据（x 珋
累积释放度(%)
SRL-NLC 分散液
000000
9．3ʃ 1．0012．9ʃ 9．10015．6ʃ 10．7119．8ʃ 12．3235．4ʃ 13．8447．8ʃ 9．83052．6ʃ 7．90056．8ʃ 14．6257．2ʃ 13．7258．1ʃ 18．9159．3ʃ 17．2160．1ʃ 14．9460．1ʃ 18．43
CST 22．7ʃ 0．0557．4ʃ 0．0979．6ʃ 0．2080．1ʃ 0．2390．2ʃ 0．1592．6ʃ 0．2298．1ʃ 0．3499．2ʃ 0．5199．2ʃ 0．2599．2ʃ 0．1699．2ʃ 0．2799．1ʃ 0．1799．2ʃ 0．2299．2ʃ 0．1498．9ʃ 0．1398．8ʃ 0．1098．9ʃ 0．1498．7ʃ 0．1598．6ʃ 0．12
具有较好的预测能力。
4．2从图4可知，CST 的累积释放度能在1h 内，
NLC 分散液在4h 时累积释达到90．2%，而SRL-放度为9．3%，且120h 内的累积释放量也较CST SRL 从NLC 中溶出需借助低，分析原因是:首先，脂质载体的缓慢溶蚀而释放出来，药物释放速率
NLC 分散液的释放速率较CST 慢; 其较慢，故SRL-次，溶出的SRL 除一部分透析外，还有一部分可能
在SDS 的作用下再次与脂质形成乳滴，因此SRL-NLC 分散液的累积释放度较低，仅为60．1%; 最后，由于脂质载体经口服后，在刺激淋巴转运的同时也能刺激胆汁和消化酶的分泌，消化酶能分解脂质载体释放出其中的药物，胆汁中胆盐，磷脂等内源性表面活性剂能起到增溶药物的作用，因此
NLC 借助粒径小分布广，与SRL-比表面积大这种
［2］
“主动”增溶的作用相比，利用脂质消化过程中产生内源性表面活性剂“被动”增溶的作用也是
取点时间(h )
00．250．50．[***********][1**********]
NLC 改善难溶性药物溶解度和溶出度的重要机
，制，这对于提高难溶性药物的“向水性”增加其口服吸收具有重要意义
［6］
，因此，在0．4%SDS 溶液
中体外释放度的多少和释放时间的长短并不能完
全评价NLC 对SRL 的增溶能力。CST 是将SRL 的纳米结晶均匀喷洒在空白乳糖片心上制得，所以漏槽条件是该制剂体外释放度的决定因素，这与SRL-NLC 的体外释药机制不完全相同。SRL-NLC 分散液在0．4%SDS 溶液中的体外溶出度试验仅NLC 体外评价方法的一个初步探讨，是SRL-可为
NLC 固体制剂体外评价方法提供参后期建立SRL-考和借鉴。【参考文献】
［1］梁文权．生物药剂学与药物动力学［M ］．第3版．北京:人民
2007:50．教育出版社，
［2］Zhuang CY ，Li N ，Wang M ，et al ．Preparation and characteriza-
时间作累积释放曲线，见图8
。以累积释放度-
图8累积释放曲线图
tion of vinpocetine loaded nanostructured lipid carriers (NLC ) for improved oral bioavailiability ［J ］．Int J Pharm ，2010(394) :183．［3］Zhang ZW ，Bu HH ，Gao ZW ，et al ．The characteristics and mech-anism of simvastatin loaded lipid nanoparticles to increase oral bioavailability in rats ［J ］．Int J Pharm ，2010(394) :149．［4］Natalie LT ，William NC ，Christopher JHP．Lipid-based delivery
systems and intestinal lymphatic drug transport :A mechanistic update ［J ］．Adv Drug Deli Rev ，2008(60) :712．［5］王
娟，张
晶，宋洪涛，等．西罗莫司单层高分子渗透泵控
2010，21释片的制备及其体外释放特性研究［J ］．中国药房，(37) :3503．
［6］David JH．Oral lipid-based formulations ［J ］．Adv Drug Deli Rev ，
2007(59) :668．
［2012-02-14收稿日期］
［2012-03-23修回日期］
—●—CST ; —▲—SRL-NLC 分散液
4讨论
4．1
本考察以固液脂质比、投药量、乳化剂作为
自变量，平均粒径，粒径分布，载药量和包封率为因变量，采用三因素五水平的星点设计安排试验，NLC 分散液最优处方，配以效应面法筛选SRL-结果最优处方:固液脂质比为2．10，投药量为
0. 21%，表面活性剂用量为7．33%，且拟合方程均P 值均小于0．05，符合多次二项式，拟合性良好，且预测值与实测值的误差均小于10%，说明建立的模型对粒径及其分布系数，载药量和包封率均
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宋洪涛(1．福建医科大学福总临床医学院，昊，福建福州福建福州350025; 2．南京军区福州总医院药学科，
350025)
［摘要］目的其体外释放度。方法
SRL-NLC ) 分散液的处方，优化西罗莫司纳米结构脂质载体(sirolimus nanostructured lipid carriers ，并考察response surface methodology ，CCD-RSM ) 优化SRL-采用星点设计－效应面法(central composite design-NLC 分散液平均粒径82．54nm 、Zeta 电位-经优化的SRL-分布系数0．207，
NLC 分散液的处方，NLC 分散液在0．4%并以粒径、分布系数、载药量和包封率作为评价指标，采用正相透析袋法考察SRL-SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液中的释放度。结果论
18．0mv 、SRL-NLC 分散液在0．4%SDS 溶液中能持续释放120h ，载药量1．829%和包封率91．3%，累积释放量为60．1%。结
SRL-NLC 分散液在0．4%SDS 溶液中累积释放度为60．1%。经优化的处方可行性和重现性均较好，
［关键词］纳米结构脂质载体; 制备; 表征; 正相透析袋法; 体外释放［中图分类号］R927．1
［文献标志码］A
［文章编号］1006－0111(2012) 03－0189－05
［DOI ］10．3969/j．issn．1006－0111．2012．03．009
Preparation and in vitro releasing of sirolimus-nanostructured lipid carriers dis-pension
2
WU Hao 1，，SONG Hong-tao 2(1．Department of Pharmacy ，Fuzhou General Hospital ，Fujian Medical University ，Fuzhou 350025，Chi-
na ; 2．Department of Pharmacy ，General Hospital of Nanjing Military Region ，Fuzhou 350025，China )
［Abstract ］Objective
To optimize the preparation and study in vitro releasing of SRL-NLC dispersion．Methods
Central
composite design-response surface methodology was used to optimize dispersion formulation ，then in vitro releasing in 0．4%SDS (sodi-um lauryl sulfate ) solution was explored by normal phase dialysis bag method．Results
The optimal dispersion had PS (particle size )
∶82．54nm ，PI (polydisperity index ) ∶0．207，Zeta potential :－18．0mv ，DL (drug-loading ) :1．829%，and EE (entrapment effi-ciency ) :91．3%; SRL-NLC dispersion had a characterization of 60．1%accumulated releasing in 0．4%SDS solution．Conclusion The optimal formulation had good feasibility and reproducibility ，in vitro releasing curve showed SRL-NLC dispersion had a character-ization of 60．1%accumulated releasing in 0．4%SDS solution．
［Key words ］
NLC ; preparation ; characterization ; normal phase dialysis bag method ; in vitro releasing
SRL ) 是大环内酯类的免疫西罗莫司(sirolimus ，抑制剂，临床上用于器官移植抗排斥作用，美国惠氏公司的西罗莫司纳米结晶片，口服生物利用度仅为17%，由于该药属于药物生物药剂学分类系统(BCS ) Ⅱ类药物［1］，即溶解度差(37ħ 溶解度为0. 5726μg /ml) ，因此限制其口服吸收膜通透性好，
的主要因素是溶解度。本实验以固态和液态脂质为药物载体制备NLC ，它是一种平均粒径在纳米级别，粒径分布窄的载药脂质纳米粒，口服能提高药物
［2］的溶解度和溶出速率，并且脂质载体能增强淋巴
［3，4］
，转运，促进药物经淋巴转运途径吸收因此具有
RSM 法筛选最优处方，用CCD-并对其体外释放度
进行初步研究。11．1
材料与仪器
SRL 原料材料SRL 对照品(纯度:99．9%) 、
药(纯度:99．6%，批号:100401) 均由福建科瑞药业有限公司提供，西罗莫司纳米结晶片(commercial sirolimus tablet ，CST ，44/14(Geluci-美国惠氏公司) ，re 44/14，月桂酸聚乙二醇甘油酯，法国嘉法赛，批
) ，GTCC (crodamol GTCC ，号122189，中碳链脂肪酸
Tween-80(聚山梨甘油酯，英国Croda ，批号15013) ，酯80，湖南尔康制药有限公司，批号20100402) ，
SDS (十二烷基硫酸钠，湖南尔康制药有限公司，批MD34-14型透析袋(分子量:14000，号20101104) ，
美国Union Carbide 公司) 。甲醇，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
改善难溶性药物口服生物利用度的潜质。本实验采
［基金项目］福建省自然科学基金(2010J01218) ．
［作者简介］吴昊(1986-) ，男，硕士研究生．Tel :(0591) 22859972，
E-mail :woohau123@163．com．
mail :sohoto@vip．so-［通讯作者］宋洪涛．Tel :(0591) 22859459，E-hu．com．
190
药学实践杂志2012年5月25日第30卷第3期Journal of Pharmaceutical Practice ，Vol．30，No．2，May 25，2012
1．2
仪器Agilent1200高效液相色谱系统(UV 检
测器，美国Agilent 公司) ，高压匀质机(NS1001L2K ，1ml /min，检测波长为277nm ; 柱温50ħ ; 进样量为
20μl 。理论塔板数为1999，最低检测限20ng /ml。2．1．2
对照品溶液的配制取SRL 对照品适量，精密称定，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，即得对照精密称定供试品置于容量瓶中加适量甲醇超声处理15min ，放冷至室温，
意大利Niro Soavi 公司) ，梅特勒-分析天平(AL204，
托利多仪器(上海) 有限公司) ，集热式磁力搅拌器(HT-8，常州国华电器有限公司) ，纳米激光粒度测定仪(NICOMP 380ZLS ，美国NICOMP 公司) 。22．12．1．1
方法与结果含量测定
品溶液。
2．1．3供试品溶液的配制
继续加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。2．1．4方法专属性考察按照“2．1．2”项和“2. 1. 3”项配制SRL 的对照品溶液，供试品溶液和空白NLC 分散液的供试品溶液，分别进液相。结果表明辅料对SRL 测定无干扰，峰形好，保留时间6．6min ，结果见图1
。
［5］
Agilent1200高效液相色谱系统色谱条件
(UV 检测器，色谱柱:Eclipse 美国Agilent 公司) ，
5μm ，XDB-C 18(150mm ˑ 4．6mm ，美国Agilent 公
司) ，甲醇-水(45∶34∶21) 为流动相，流速为以乙腈-
图1高效液相色谱图
A-SRL 对照品溶液; C-SRL-NLC 分散液空白NLC 分散液; B-
2．1．5
线性范围精密称取SRL 对照品5．0mg ，
置50ml 量瓶中，加适量甲醇超声溶解，稀释至刻
度，得浓度为100μg /ml对照品溶液，分别移取0．1、0．4、0．8、1．2、1．6、2．0ml 置10ml 容量瓶中，加甲4、8、12、16、20μg /ml的对照品溶液，醇稀释成1、经0．45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液按“2．1．1”项测定，以浓度X (μg /ml) 为横坐标，峰面积Y 为纵坐标
表1
项目日内
浓度(μg /ml)
51015
日间
51015
14．9910．114．94．9610．015．1
进行线性回归，得回归方程Y =52．979X －9．9533
(r =0. 9999) ，说明在1 20μg /ml浓度范围内SRL 峰面积与浓度呈良好的线性关系。2．1．6
10和15μg /ml样精密度配制浓度为5、
品溶液，均连续进样5次，计算日内精密度，以后连
续5d 测定并计算日间精密度，结果见表1，日内和日间相对标准偏差RSD 均小于2%，精密度良好。
日内日间精密度测定结果（n =3）
24．97
编号34．9310．015．14．9410．115．1
44．9510．015．04．9110．015．1
54．9010．115．04．9210．115．2
平均值(μg /ml)
4．9510．015．04．9410．015．1
RSD (%) 0．700．550．470．650．550．36
10．015．04．9910．015．2
2．1．7
加样回收率精密移取100μg /ml对照品1、1．5ml 分别到10ml 空白NLC 分散液溶液0．5、
中进行加样回收率试验，测得平均加样回收率为(99．5ʃ 0．89) %、(100．0ʃ 0．80) %、(100．4ʃ
0. 46) %。2．1．8
Zeta 电位和平均粒径及其分布系数的测
NCL 分散液用蒸馏水稀释为载体含量定将SRL-约1%的溶液，用纳米激光粒度仪测定Zeta 电位，
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191
平均粒径及其分布系数。
2．1．9载药量和包封率采用Sephadex G50凝胶柱(15mm ˑ 70mm ) 测定NLC 分散液的载药量和包封率，均匀上样体积V (ml ) 的NLC 分散液，用流速
1min 收集一管，为1．0ml /min的蒸馏水洗脱，并用适量甲醇溶解稀释，超声15min 后按照“2．1．1”法
测定峰面积，以峰面积-时间做洗脱曲线，如图2
。
表2
因素X 1X 2X 3
－1．7321．3280．220．03
各因素水平代码及试验操作值
－120．20．05
水平
030．30．075
140．40．1
1．7324．6820．380．12
表3
Run 123456789
X [***********]2
试验设计及各指标测定结果（n =3）
X 20．20．30．30．220．30．40．30．380．30．40．20．30．40．20．20．30．30．4
X 30．1
Y 179．2
2340．4070．5480．4720．6210．2120．4860．360．5430．4890．5480．2530．2820．6070．9580．4280．2470．2790．3230．5480．314
1．342．882．32．161．091．81．511．81．72．881．41．752．23．11．581．81．91．572．881．74
66．895．876．171．784．360．437．759．436．295．835．287．273．977．878．990．163．152．295．843．6
0．075108．90．075110．60．075126．80．0750．050．0750．050．10．120．10．050．050．030．1
71．592．598．368．291．6101．1203．285．884．984．195．3
0．075105．50．075114．80．075108．9
4．6820．3
图2峰面积-时间洗脱曲线
[***********]1920
由上图2可知，收集5 16min 的洗脱液可计算得体积V (ml ) NLC 分散液的药物包载量M 包载(g ) ，测定分散液的总密度为ρ(g /ml) ，故NLC 分散液脂质含量M 脂质(g ) =0．1ρV (脂质总用量:10%) ，载药量DL (%) =10M 包载/ρV 。测定体积V (ml ) NLC 分散液中SRL 总浓度C (μg /ml) ，计算包封率EE (%) =10M 包载/CV。2．2
称取处方量的固态脂质44/14和液态脂质GTCC 在75ħ 水浴条件下加热至脂质完全熔融后，加入SRL 原料药搅拌均匀
SRL-NLC 分散液的制备
5
1．3280．30．075100．70．075108．9
2．3．2
用Design Expert 8．0．5．0软件
对表3中的试验数据进行多元线性和非线性拟合，
模型拟合
多元线性方程:Y =b 0+b 1X 1+b 2X 2
二次多项式:Y =b 0+b 1X 1+b 2X 2+b 3X 1X 2+
b 4X 12+b 5X 22
2
三次多项式:Y =b 0+b 1X 1+b 2X 2+b 3X 1+
80的水溶液迅速倒成澄明油相，再将同温度Tween-30min 条件下磁力搅拌制备入油相，在300r /min，初乳，经高压匀质机90MPa 乳匀5次，最后于4ħ
NLC 分散液。同法不加药制得空白下冷藏得SRL-NLC 分散液。2．32．3．1
处方优化星点设计
根据单因素考察试验结果，已经
确定处方中固体脂质:44/14，液体脂质:GTCC ，脂质
模型如下:
b 4X 22+b 5X 1X 2+b 6X 12X 2+b 7X 1X 22+b 8X 13+b 9X 23
以方程的回归系数r 最大且p 最小为原则，结
果二次多项式拟合最好，得拟合方程如下:
Y 1=109．48+8．49X 1+11．92X 2+12．19X 3+
11．89X 1X 2+14．86X 1X 3+17．21X 2X 3+2. 26X 12－7．94X 22－5．22X 32(r =0．8931，P =0．0245＜0．05)
Y 2=0．52+0．10X 1+0．072X 2+0．084X 3+
0. 029X 1X 2+0．087X 1X 3+0．081X 2X 3－0. 028X 12－0．063X 22－0．023X 32(r =0. 9217，P =0．0041＜0．05)
Y 3=1．55+0．022X 1+0．062X 2+0．069X 3+
0. 081X 1X 2+0．051X 1X 3+0．098X 2X 3－
30min 磁力搅总用量为10%，工艺条件:300r /min，
拌，高压匀质机90MPa 乳匀5次。由于固液脂质比例，投药量和乳化剂用量对粒径及其分布系数，载药量和包封率的影响显著，且这三个因素确定，处方组成就基本确定，因此，以固液脂质比(X 1) ，投药量(X 2) ，平均粒径(Y 1) ，乳化剂(X 3) 作为自变量，粒径分布(Y 2) ，载药量(Y 3) 和包封率(Y 4) 为因变量，采用三因素五水平的星点设计进行处方优化，因素的极大值和极小值已由单因素试验结果确定，其代码和水平设计见表2，按照星点设计安排20个试验，每个样品做3次，结果见表3。
192
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0. 041X 12－0．13X 22－0．061X 32(r =0．8602，P =0．0436＜0．05)
Y 4=80．48+1．07X 1－15．35X 2+5．13X 3+
7. 91X 1X 2+3．44X 1X 3+7．94X 2X 3－P 4. 20X 12－6．73X 22－5．74X 32(r =0. 8690，=0. 0341＜0．05)
2．3．3
采用Design Expert 8．0．5．0
软件绘制以上拟合方程的效应面图和等高线，结果
效应面优化
图7
最佳范围等高线
如图3至图7
。
图7左下角的白色部分为最佳范围，经软件筛选X 2=0．21，X 3=7．33，按照上述最优处方:X 1=2．10，
NLC 分散液，处方制备SRL-比较各指标的预测值和
实测值，对模型的预测能力进行验证，结果见表4。
表4
图3
粒径效应面和等高线
指标平均粒径(nm ) 分布系数载药量(%) 包封率(%)
预测值与实测值比较
预测值90．520．2372．03790．7
实测值83．200．2231．89291．0
误差(%) 8．15．917．1－0．33
误差(%) =(预测值－实测值) /预测值ˑ 100
各参数预测值与实测值之间的误差由表4可知，
均小于10%，说明建立的模型具有较好的预测能力。2．4
图4
分布系数效应面和等高线
最优处方工艺的验证按照最优处方:X 1=
2. 10，X 2=0．21，X 3=7．33制备3批SRL-NLC 分散液，比较每批间各指标的差异，结果如下表5。
表5
批号123
3批SRL-NLC 分散液指标考察结果（x ʃ s ，n =3）珋
粒径
(nm )
分布系数
载药量(%)
包封率(%)
Zeta 电位(mv )
83．52ʃ0．2 40．198ʃ0．2 411．860ʃ0．1 190．8ʃ0．1 5-17．3ʃ0．3 581．60ʃ0．3 30．213ʃ0．2 241．795ʃ0．2 491．8ʃ0．2 7-18．9ʃ0．4 582．50ʃ0．3 60．210ʃ0．3 181．831ʃ0．1 591．2ʃ0．1 9-17．7ʃ0．3 1
图5
包封率效应面和等高线
18．0ʃ0．6 8平均值82．54ʃ0．7 80．207ʃ0．0 061．829ʃ0．0 391．3ʃ0．4 1-2．901．640．453．78RSD (%) 0．94
由表5可知，按照最优处方工艺制备的3批样
品各指标均较好，且RSD 值均小于5%，说明该处方工艺是百通期刊网稳定可靠的。3
体外释放度考察
NLC (含SRL 1．0mg ) 分精密移取550μl SRL-图6
载药量效应面和等高线
散液和一片CST 分别置于分子量14000的透析袋中，按照2010年版中国药典溶出度测定XC 第三法，参考已上市西罗莫司纳米结晶片的质量标准，以0．4%SDS 溶液250ml 为溶出介质，转速100r /min，
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温度(37ʃ 0．5) ħ 条件下进行体外释放度试验。分
0．25、0．5、0．75、1、2、4、6、8、12、24、36、48、别考察0、
60、72、84、96、108、120h 的累积释药度，具体数据见表6。
表6
SRL-NLC 分散液和CST 的累积
ʃ s ，n =3）释放度数据（x 珋
累积释放度(%)
SRL-NLC 分散液
000000
9．3ʃ 1．0012．9ʃ 9．10015．6ʃ 10．7119．8ʃ 12．3235．4ʃ 13．8447．8ʃ 9．83052．6ʃ 7．90056．8ʃ 14．6257．2ʃ 13．7258．1ʃ 18．9159．3ʃ 17．2160．1ʃ 14．9460．1ʃ 18．43
CST 22．7ʃ 0．0557．4ʃ 0．0979．6ʃ 0．2080．1ʃ 0．2390．2ʃ 0．1592．6ʃ 0．2298．1ʃ 0．3499．2ʃ 0．5199．2ʃ 0．2599．2ʃ 0．1699．2ʃ 0．2799．1ʃ 0．1799．2ʃ 0．2299．2ʃ 0．1498．9ʃ 0．1398．8ʃ 0．1098．9ʃ 0．1498．7ʃ 0．1598．6ʃ 0．12
具有较好的预测能力。
4．2从图4可知，CST 的累积释放度能在1h 内，
NLC 分散液在4h 时累积释达到90．2%，而SRL-放度为9．3%，且120h 内的累积释放量也较CST SRL 从NLC 中溶出需借助低，分析原因是:首先，脂质载体的缓慢溶蚀而释放出来，药物释放速率
NLC 分散液的释放速率较CST 慢; 其较慢，故SRL-次，溶出的SRL 除一部分透析外，还有一部分可能
在SDS 的作用下再次与脂质形成乳滴，因此SRL-NLC 分散液的累积释放度较低，仅为60．1%; 最后，由于脂质载体经口服后，在刺激淋巴转运的同时也能刺激胆汁和消化酶的分泌，消化酶能分解脂质载体释放出其中的药物，胆汁中胆盐，磷脂等内源性表面活性剂能起到增溶药物的作用，因此
NLC 借助粒径小分布广，与SRL-比表面积大这种
［2］
“主动”增溶的作用相比，利用脂质消化过程中产生内源性表面活性剂“被动”增溶的作用也是
取点时间(h )
00．250．50．[***********][1**********]
NLC 改善难溶性药物溶解度和溶出度的重要机
，制，这对于提高难溶性药物的“向水性”增加其口服吸收具有重要意义
［6］
，因此，在0．4%SDS 溶液
中体外释放度的多少和释放时间的长短并不能完
全评价NLC 对SRL 的增溶能力。CST 是将SRL 的纳米结晶均匀喷洒在空白乳糖片心上制得，所以漏槽条件是该制剂体外释放度的决定因素，这与SRL-NLC 的体外释药机制不完全相同。SRL-NLC 分散液在0．4%SDS 溶液中的体外溶出度试验仅NLC 体外评价方法的一个初步探讨，是SRL-可为
NLC 固体制剂体外评价方法提供参后期建立SRL-考和借鉴。【参考文献】
［1］梁文权．生物药剂学与药物动力学［M ］．第3版．北京:人民
2007:50．教育出版社，
［2］Zhuang CY ，Li N ，Wang M ，et al ．Preparation and characteriza-
时间作累积释放曲线，见图8
。以累积释放度-
图8累积释放曲线图
tion of vinpocetine loaded nanostructured lipid carriers (NLC ) for improved oral bioavailiability ［J ］．Int J Pharm ，2010(394) :183．［3］Zhang ZW ，Bu HH ，Gao ZW ，et al ．The characteristics and mech-anism of simvastatin loaded lipid nanoparticles to increase oral bioavailability in rats ［J ］．Int J Pharm ，2010(394) :149．［4］Natalie LT ，William NC ，Christopher JHP．Lipid-based delivery
systems and intestinal lymphatic drug transport :A mechanistic update ［J ］．Adv Drug Deli Rev ，2008(60) :712．［5］王
娟，张
晶，宋洪涛，等．西罗莫司单层高分子渗透泵控
2010，21释片的制备及其体外释放特性研究［J ］．中国药房，(37) :3503．
［6］David JH．Oral lipid-based formulations ［J ］．Adv Drug Deli Rev ，
2007(59) :668．
［2012-02-14收稿日期］
［2012-03-23修回日期］
—●—CST ; —▲—SRL-NLC 分散液
4讨论
4．1
本考察以固液脂质比、投药量、乳化剂作为
自变量，平均粒径，粒径分布，载药量和包封率为因变量，采用三因素五水平的星点设计安排试验，NLC 分散液最优处方，配以效应面法筛选SRL-结果最优处方:固液脂质比为2．10，投药量为
0. 21%，表面活性剂用量为7．33%，且拟合方程均P 值均小于0．05，符合多次二项式，拟合性良好，且预测值与实测值的误差均小于10%，说明建立的模型对粒径及其分布系数，载药量和包封率均