综合性（设计性）实验 实验名称：
姓 名：
指导教师：
专 业：
实验班级：
实验时间：
实验地点：
成 绩：实验报告 环境因素对微生物的影响 _________________________________
一．实验目的
1.了解温度，渗透压，及PH对微生物生长的影响。
2.了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱试验的基本方法。
3.了解常用化学消毒剂对微生物的影响，学习测定石炭酸系数的方法。
二．实验原理
微生物的生长繁殖受外界环境的影响，环境条件适宜时微生物生长良好，环境条件不适宜时，微生物生长受到抑制，甚至导致微生物死亡。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖机制不尽相同，而不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差异。
1.渗透压
微生物在等渗溶液中可正常生长；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，因为大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，细胞一般不会破裂，可以正常生长，但低渗溶液中溶质含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。
2.生物因素
抗生素是某些微生物在生长代谢过程中产生的能抑制或杀
死其它微生物的次生代谢产物。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌谱，例如青霉素只对革兰氏阳性菌具有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；另
一些抗生素对多种细菌具有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为广谱抗生素。
3.化学消毒剂
常用化学消毒剂包括（酚、醇、醛等）、重金属盐、卤素元素及其化合物、染料和表面活性剂等。（5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭）
三．实验器材
1. 金黄色葡萄球菌 土壤分离细菌B1,B2
斜面培养物，菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基（NaCl含量0.1%，0.5%，15%）。
2. 无菌滤纸片（条）， 无菌刮铲，镊子，接种环，酒精灯，吸管
3. 10g/L AgNO3溶液，40%石炭酸，2%甲酚皂，青霉素，链霉素（180万单位/mL）。
四．实验步骤
（一）渗透压对微生物的影响
① 培养基：制作培养基时取一部分分别加入0.5%，1%，15%NaCl，倒平板。
② 标记：标记菌种。
③ 接种：用接种环分别取上述菌种，接种到培养基内（注意无菌操作）
④ 培养、观察：37℃保温培养1-2天，观察菌种生长状况并记录。
（二）生物因素（抗生素）对微生物生长的影响
①倒平板：将牛肉膏蛋白胨培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养及厚度均匀。
②贴滤纸条：无菌操作，用镊子取无菌滤纸条进入青霉素溶液湿润，在容器内壁沥去多余溶液，再将滤纸条分别贴在平板上。
③接种：无菌操作，用接种环分别取金黄色葡萄球菌、土壤分离细菌B1,土壤分离细菌B2，从滤纸条边缘分别垂直向外划线接种（划线尽量靠近滤纸条，但不要接触）
④培养、观察：置于37℃保温培养1d，观察细菌生长状况并记录。
（三）化学消毒剂对微生物的影响
①菌液制备：无菌操作将金黄色葡萄球菌菌接种至装有5mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃培养18h。
②倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）
③涂平板：无菌操作吸取0.2mL金黄色葡萄球菌菌液加入上述平板，用无菌三角涂棒涂布均匀。
④标记：将上述平板皿底用记号笔分成四等分，分别标明一种消毒剂名称
⑤贴滤纸片：无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入各种消毒剂，在容器内壁沥去多余液体，再将滤纸片分别贴在平板上相应位置。（不要在培养基表面拖动滤纸片）
⑥培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养1d，观察并记录抑（杀）菌圈大
五．实验结果与结论
图1
图3
图2
图4
⑥培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养1d，观察并记录抑（杀）菌圈大 五．实验结果与结论
图1
图3
图2
图4
5
图5
图1：菌种在0.5% NaCl的培养基中生长状况。 图2：菌种在1% NaCl的培养基中生长状况。 图3：菌种在15% NaCl的培养基中生长状况。 图4：菌种在含青霉素滤纸条的培养基中生长状况。 图5：菌种在含各种化学消毒剂滤纸片的培养基中生长状况 1.实验结果
表1 渗透压对微生物的影响
表2 抗生素（青霉素）对微生物的影响
6
化学消毒剂对微生物的影响
2．实验结论
（1） 微生物在0.5% ，1% NaCl条件下生长良好，在15% NaCl条件下生长受到抑制。微生物在等渗溶液中可正常生长；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制。并且，不同类型的微生物对渗透压变化的适应能力不同。
（2）在青霉素滤纸条存在的培养基中，土壤分离细菌B1生长良好。
（3）在化学消毒剂滤纸片存在的培养基中，根据抑菌圈的大小可以知道化学消毒剂对微生物生长的影响情况。 六．实验分析
虽然实验比较简单，但是实验步骤很多，多个小实验穿插进行，所以我们学会实验前一定要进行全面的实验分析和设计。同时我们必须掌握各种微生物实验的基本技能，才能更好更快的完成实验。 七．参考文献
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陈金春，陈国强等.微生物学实验指导.清华大学出版社，2005. 沈萍，陈向东.微生物学实验「M」.3版.北京:高等教育出版社，1999. 沈萍.微生物学「M」.2版.北京:高等教育出版社，2006. 黄秀梨.微生物学实验指导「M」.北京:高等教育出版社，1999.
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综合性（设计性）实验 实验名称：
姓 名：
指导教师：
专 业：
实验班级：
实验时间：
实验地点：
成 绩：实验报告 环境因素对微生物的影响 _________________________________
一．实验目的
1.了解温度，渗透压，及PH对微生物生长的影响。
2.了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱试验的基本方法。
3.了解常用化学消毒剂对微生物的影响，学习测定石炭酸系数的方法。
二．实验原理
微生物的生长繁殖受外界环境的影响，环境条件适宜时微生物生长良好，环境条件不适宜时，微生物生长受到抑制，甚至导致微生物死亡。物理，化学，生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖机制不尽相同，而不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差异。
1.渗透压
微生物在等渗溶液中可正常生长；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，因为大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，细胞一般不会破裂，可以正常生长，但低渗溶液中溶质含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。
2.生物因素
抗生素是某些微生物在生长代谢过程中产生的能抑制或杀
死其它微生物的次生代谢产物。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌谱，例如青霉素只对革兰氏阳性菌具有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；另
一些抗生素对多种细菌具有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为广谱抗生素。
3.化学消毒剂
常用化学消毒剂包括（酚、醇、醛等）、重金属盐、卤素元素及其化合物、染料和表面活性剂等。（5%石碳酸、1%来苏尔、75%乙醇、0.25%新洁尔灭）
三．实验器材
1. 金黄色葡萄球菌 土壤分离细菌B1,B2
斜面培养物，菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基（NaCl含量0.1%，0.5%，15%）。
2. 无菌滤纸片（条）， 无菌刮铲，镊子，接种环，酒精灯，吸管
3. 10g/L AgNO3溶液，40%石炭酸，2%甲酚皂，青霉素，链霉素（180万单位/mL）。
四．实验步骤
（一）渗透压对微生物的影响
① 培养基：制作培养基时取一部分分别加入0.5%，1%，15%NaCl，倒平板。
② 标记：标记菌种。
③ 接种：用接种环分别取上述菌种，接种到培养基内（注意无菌操作）
④ 培养、观察：37℃保温培养1-2天，观察菌种生长状况并记录。
（二）生物因素（抗生素）对微生物生长的影响
①倒平板：将牛肉膏蛋白胨培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养及厚度均匀。
②贴滤纸条：无菌操作，用镊子取无菌滤纸条进入青霉素溶液湿润，在容器内壁沥去多余溶液，再将滤纸条分别贴在平板上。
③接种：无菌操作，用接种环分别取金黄色葡萄球菌、土壤分离细菌B1,土壤分离细菌B2，从滤纸条边缘分别垂直向外划线接种（划线尽量靠近滤纸条，但不要接触）
④培养、观察：置于37℃保温培养1d，观察细菌生长状况并记录。
（三）化学消毒剂对微生物的影响
①菌液制备：无菌操作将金黄色葡萄球菌菌接种至装有5mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃培养18h。
②倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）
③涂平板：无菌操作吸取0.2mL金黄色葡萄球菌菌液加入上述平板，用无菌三角涂棒涂布均匀。
④标记：将上述平板皿底用记号笔分成四等分，分别标明一种消毒剂名称
⑤贴滤纸片：无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入各种消毒剂，在容器内壁沥去多余液体，再将滤纸片分别贴在平板上相应位置。（不要在培养基表面拖动滤纸片）
⑥培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养1d，观察并记录抑（杀）菌圈大
五．实验结果与结论
图1
图3
图2
图4
⑥培养，观察：将上述平板倒置于37℃保温培养1d，观察并记录抑（杀）菌圈大 五．实验结果与结论
图1
图3
图2
图4
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图5
图1：菌种在0.5% NaCl的培养基中生长状况。 图2：菌种在1% NaCl的培养基中生长状况。 图3：菌种在15% NaCl的培养基中生长状况。 图4：菌种在含青霉素滤纸条的培养基中生长状况。 图5：菌种在含各种化学消毒剂滤纸片的培养基中生长状况 1.实验结果
表1 渗透压对微生物的影响
表2 抗生素（青霉素）对微生物的影响
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化学消毒剂对微生物的影响
2．实验结论
（1） 微生物在0.5% ，1% NaCl条件下生长良好，在15% NaCl条件下生长受到抑制。微生物在等渗溶液中可正常生长；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制。并且，不同类型的微生物对渗透压变化的适应能力不同。
（2）在青霉素滤纸条存在的培养基中，土壤分离细菌B1生长良好。
（3）在化学消毒剂滤纸片存在的培养基中，根据抑菌圈的大小可以知道化学消毒剂对微生物生长的影响情况。 六．实验分析
虽然实验比较简单，但是实验步骤很多，多个小实验穿插进行，所以我们学会实验前一定要进行全面的实验分析和设计。同时我们必须掌握各种微生物实验的基本技能，才能更好更快的完成实验。 七．参考文献
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陈金春，陈国强等.微生物学实验指导.清华大学出版社，2005. 沈萍，陈向东.微生物学实验「M」.3版.北京:高等教育出版社，1999. 沈萍.微生物学「M」.2版.北京:高等教育出版社，2006. 黄秀梨.微生物学实验指导「M」.北京:高等教育出版社，1999.
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