铁皮石斛生根壮苗培养基优化及移栽基质选择

１６

广东农业科学２０１３年第２期

铁皮石斛生根壮苗培养基优化及移栽基质选择

韩晓红，孙金龙，段春红

（武汉生物工程学院生物工程系，湖北武汉４３０４１５）

摘要：以铁皮石斛无菌幼苗为材料，研究不同基本培养基、不同激素对铁皮石斛生根壮苗的影响。同时以优良的试管苗为试材，搭配不同比例的基质．研究其对铁皮石斛试管苗移栽成活率和生长状况的影响。结果显示，以培养基Ｎ６＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ

Ｏ．１

ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７ｇ／Ｌ＋ＡＣ

５

ｇ／Ｌ＋香蕉汁１００ｍＵＬ生根壮苗效果最佳．试管苗根粗叶绿．可达到出瓶效果：移栽基质火

山岩＋松树皮＋活苔藓效果最佳，石斛试管苗成活率可达９０％且长势优良．３０ｄ后有新芽萌发。

关键词：铁皮石斛：生根壮苗；移栽：基质筛选中图分类号：￥６８２．３ｌ

文献标识码：Ａ

文章编号：１００４—８７４Ｘ（２０１３）０２—００１６～０３

Ｒｏｏｔｉｎｇ

ｍｅｄｉｕｍｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇｍａｔｒｉｘ

ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ

ＨＡＮＸｉａｏ—ｈｏｎｇ，ＳＵＮＪｉｎ—ｌｏｎｇ，ＤＵＡＮＣｈｕｎ—ｈｏｎｇ

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Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＷｉｔｈＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍ

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ｖｉｔｒｏ

铁皮石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ）是兰科石斛属多年究，虽然已经成功培育出铁皮石斛试管苗，但还存在着试管苗质量难以保证、移栽成活率低等问题，极大地制约着铁皮石斛生产规模的扩大和生产水平的提高【２Ｉ。本试验通过对铁皮石斛进行试管苗生根壮苗培养基的优化，筛选出

能获得优质移栽试管苗的培养基；同时通过对铁皮石斛组

生附生草本植物，主要分布于两南和江南各省Ⅲ，是《中华

人民共和国药典》中收载的５种石斛属植物之一，素有

“中华仙草”和“药中黄金”之美称。它具有滋阴清热、生津

益胃、润肺止咳、润喉明目、延年益寿之功效Ｉｕ。现代中医学和中药药理学研究表明，铁皮石斛富含多糖、氨基酸、

培苗移栽基质进行各种组合，筛选出适合石斛试管苗移栽的基质。以期为铁皮石斛试管苗的大规模人工种植提供参

考和理论依据。

生物碱、微量元素等，在治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗肿瘤、降低血糖和治疗白内障等方面均有良好疗效Ｉ”。铁皮石斛的茎呈圆柱形、直立、绿色或铁灰色，果实为蒴果、种子小而多．种内胚发育不全或不成熟，无胚乳ｌ蝴。铁皮石

斛自然结实率很低１６１，何平荣等ｆ４１认为平均自然结实率为０．３ｌ％，其中以开花当天萼片还未完全展开时的人＿ＴＩ授粉

１材料与方法

铁皮石斛无菌试管幼苗由武汉生物工程学院植物细胞工程实验室提供。

结实率最高。铁皮石斛以异花授粉为主．其自花授粉成功率极低、仅３０％左右，而异花授粉成功率达１００％１６】。铁皮石斛野生种子的成活率很低。

随着铁皮石斛消费市场的日趋成熟，以铁皮石斛为

主要原料的铁皮石斛胶囊、铁皮枫斗颗粒、铁皮枫斗茶、铁皮枫斗浸膏等药品和保健食品成为市场热销产品，市场前景广阔Ｉ７Ｉ。但长期以来，药用石斛原料主要依赖其野生资源，由于资源匮乏，铁皮石斛已被列为国家级珍惜濒

１．１铁皮石斛生根壮苗培养基优化试验

供试材料为２～３ｃｍ无根或少量细根铁皮石斛无菌试管幼苗，在无菌条件下，将其取出，以每瓶２～３株为一个单位，分别接种到所配制的生根壮苗培养基中。

生根壮苗培养基设４个处理。分别为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ（ＡＩ）、１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ（Ａ２）、Ｎ６＋

ＮＡＡ

０．５

ｍｇ／Ｌ（Ｂ１）、Ｎ６＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ

０．１

ｍｇ／Ｌ

（Ｂ２）。每个处理培养基中均加入３０ｇ／Ｌ蔗糖、７ｇ／Ｌ琼脂、

５

危保护植物。铁皮石斛对生长环境要求苛刻，野生资源自

然更新恢复速度慢，而现在人工栽培技术还很不成熟，组

ｇ／Ｌ活性炭、１００ｍＬ／Ｌ香蕉汁，每个处理培养基接种２５

瓶。接种后置于培养温度为２５（±２）℃、光照强度１５００～２０００ｌｘ、光照时间１２ｈ／ｄ条件下培养。培养４０ｄ后．随机抽选１０瓶试管苗，统计幼苗生根率、生根数、根长和苗高。分析不同培养基对铁皮石斛生长情况的影响。１．２铁皮石斛试管苗移栽基质选择试验

培成为其目前繁殖的主要技术手段。通过多年的试验研

收稿日期：２０１２一１２—０５

作者简介：韩晓红（１９７７一），女．博士，讲师，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｏｎｇｘｉａｏｈａｎ

＠１２６．ｃｏｒｎ

１７

１．２．１预处理及炼苗将试管苗移至室外通风处进行２盆．对组培苗的生长状况进行观察分析。

周左右的炼苗，炼苗温度为１５—２５℃，移栽前２ｄ揭盖，让试管苗逐渐适应自然环境，待其叶色浓绿、生长健壮时出瓶。选取生长状况良好、株高３～６ｃｍ、根长３－４ｃｍ、每株

具５－６条长根（４～５ｃｍ）的试管苗作为移栽材料。将培养

２结果与分析

２．１铁皮石斛生根壮苗培养基优化试验

接种在含有生长素的Ｉ／２ＭＳ培养基中的试管苗，在接

种后２８ｄ开始出现新根的分化，而含有生长素的Ｎ６培养基中的试管苗则在接种后１４ｄ有较明显的新根分化。在茎基部或节上出现浅黄绿色的突起，尖端的颜色较浅，长

基与小苗一起轻轻取出，先用自来水冲洗干净，然后再用

蒸馏水冲洗几次备用。

１．２．２移栽基质设计选用移栽基质火山岩、松树皮、泥

炭土、珍珠岩、活苔藓、陶粒，对其进行不同比例（体积比）搭配，设计成不同移栽基质。其中，活苔藓用于覆盖表面，陶粒除Ａ、Ｂ外，其余都铺在花盆底部（表１）。

表１

铁皮石斛移栽基质设计

度约１ｍｍ、直径约０．８ｍｍ。新根中短根为浅黄绿色，长根为浅绿色，培养基中的吸收根表面光滑。一些试管苗还长出较长的气生根，暴露于空气中。

由表２可知．接种后４０ｄ．以含有生长素的１／２ＭＳ为基本培养基的试管苗，平均根长在１．０～１．５ｃｍ，平均根直

径在１ｍｍ左右。其生根率最高为８８％。其中，Ａ１处理丛

额婀一Ａ

Ｂ

火山岩松树皮泥炭土珍珠岩篙陶粒体积比

一一

一一

一

生芽较多、生根率较低，且叶多为浅绿色（图１Ａ）；而Ａ２处理丛生芽较少且生根率较高，试管苗叶片增大、呈长椭圆

形，叶色由浅绿变为深绿，叶片变厚（图１Ｂ）。以含有生长

一一一一一

一

一一一

＋一

＋＋一一

ｃＤＥ

Ｆ

＋＋＋一一一

＋＋＋＋＋＋

●●

素的Ｎ６为基本培养基的试管苗，平均根长１．５～２．０ｃｍ，平均根直径在２ｍｍ左右，其生根率可达１００％。其中，Ｂ１和Ｂ２处理试管苗长势相似，但Ｂ２处理的根比Ｂｌ更长．更适于移栽（图１Ｃ、图ｌＤ）。可见，在相同培养基中，同时添加了激素ＩＢＡ和ＮＡＡ的试管苗比单独使用ＮＡＡ的试管苗的根多且长。因此，Ｂ２处理（Ｎ６＋ＮＡＡ０．５

ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７ｇ／Ｌ＋ＡＣ

ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１

一＋＋一

ｌｌ

Ｇ

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＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋２｝

●●

！

注：“一”表示无，“＋”并表示有：基质Ｃ、Ｄ、Ｅ中所用树皮为经过发酵的；苔藓覆盖于表面，不计人比例。

５玑＋香蕉汁１００

ｍｌｄＬ）

１．２．３移栽采用单个小盆进行移栽，每盆１丛（２—３株苗为１个单位）。将待移栽的试管苗移栽到含有火山岩、松树皮、泥炭土、珍珠岩、活苔藓、陶粒的不同基质中。移栽试验分两步进行，第ｌ步先进行初步筛选，每种基质移栽５盆，以成活率为基准，观察移栽后７ｄ的生长状况，初步筛选出较适合的移栽基质。第２步选择最适宜的移栽基质，由第１步得出的结果选择较适合的移栽基质进行大量移栽，每种基质移栽２０盆。移栽后将其放置在阴凉、湿度较高、干净且通风的环境．移栽后１ｄ浇透水。且盖膜保湿２ｄ，之后每天上下午各喷１次水，下午以浇透为准。

移栽后７ｄ和３０ｄ分别对铁皮石斛移栽苗成活率进行统计，凡叶片全部干枯、无新芽萌发的计为死亡．成活率（％）＝成活盆数／移栽盆数ｘ１００。移栽后３０ｄ随机抽取５

更适宜铁皮石斛试管苗生根壮苗。

表２铁皮石斛在不同生根壮苗培养基中的培养效果（培养后４０ｄ）

注：“＋＋”表示生长状况一般，新根少，根短，根细，茎细，叶片细长，叶较绿，叶质较薄丛生芽较多，生长较快：“＋＋＋”表示生长状况较好，新根少，但根长，有些许粗根，叶片宽厚浓绿．茎粗，节多，生长较快；“＋＋＋＋”表示生子长状况优良．新根多．根粗．但根短，叶片浓绿，茎较粗，节较多：“＋＋＋＋＋”表示生长状况优良，新根多，根较粗且长，叶片浓绿，茎较粗，节较多。

Ａ：Ａｌ培养基；Ｂ：Ａ２培养基；Ｃ：Ｂｌ培养基；Ｄ：Ｂ２培养基

图１

不同生根壮苗培养基上铁皮石斛试管苗的生长情况

１８

２．２铁皮石斛试管苗移栽基质选择试验

Ｇ等３种基质移栽效果良好。同时覆盖有活苔藓的基质比２．２．１

不同移栽基质对铁皮石斛试管苗成活率的影响

未覆盖的移栽成活率都要高。说明苔藓具有良好的保水移栽时．试管苗由人工控制温度、光照、水分和养分的理想效果：另外，可能是苔藓能提供铁皮石斛生长所需的共生化无菌环境逐步转换到自然条件，移栽后生长基质使根

菌，金辉等ｆ９ｊ、陈瑞蕊等【，ｏｌ认为，铁皮石斛共生菌能提高其

系在原培养基内被动吸收水分、养分转变为主动吸收，是

移栽成活率。

植株成活的关键因素旧。铁皮石斛试管苗的移栽基质应以２．２．２基质Ｄ、Ｅ及Ｇ对试管苗移栽成活率及生长状况

疏松通透性好且不易发霉长菌的原料为主、并配合使用的影响用初筛得到的Ｄ、Ｅ、Ｇ３种基质进行大量移栽，保水保肥的原料才能获得最佳成活率。以火山岩、松树皮、并对移栽后铁皮石斛的生长状况进行统计。结果（表３）显泥炭土、珍珠岩、活苔藓、陶粒等基质为材料，对铁皮石斛示，组培苗移栽后７ｄ，处理Ｄ成活率达到９５％，而处理Ｅ移栽基质进行初步筛选，结果显示，移栽后７ｄ，Ａ（陶粒）、和Ｇ的成活率也达到９０％，可见，在组培苗移栽后７ｄ内，Ｂ（陶粒＋活苔藓）、Ｃ（火山岩＋松树皮）、Ｆ（松树皮＋泥炭土＋这３种基质问成活率无明显差异。移栽后３０ｄ，处理Ｄ成珍珠岩＋陶粒）、Ｉ－Ｉ（松树皮＋泥炭土＋珍珠岩＋活苔藓＋陶粒）

活率仍最高、达９０％，处理Ｅ成活率为８５％，而处理Ｇ成５种基质移栽成活率分别为０％、２０％、２０％、４０％、４０％。可活率大幅降低至７０％。可见，移栽基质Ｄ、Ｅ适宜铁皮石斛

见，陶粒虽然疏松透气，但透水性过强，完全使用陶粒栽

移栽，且基质Ｄ移栽成活率最高。由处理Ｄ、Ｅ的移栽效果

培，不宜于石斛试管苗的移栽；而用Ｄ（火山岩＋松树皮＋活可知，陶粒作为基质，铺在底层对组培苗移栽成活率影响苔藓）、Ｅ（火山岩＋松树皮＋活苔藓＋陶粒）、Ｇ（松树皮＋泥炭不大。移栽后３０ｄ对组培苗生长状况的观察结果（图２）土＋珍珠岩＋活苔藓＋陶粒）３种基质进行移栽具有较高的表明，移栽基质Ｄ、Ｅ对铁皮石斛组培苗的移栽效果最好，成活率，分别为１００％、８０％和６０％，因此移栽初期以Ｄ、Ｅ、

且在移栽后３０ｄ有新芽萌发。

表３

３不同移栽基质对铁皮石斛成活率和生长情况的影响

高约５ｃｍ、茎粗４～５ｍｍ、带些许短细根的初始材料，无论是长势还是生根情况，都要优于其他试管苗，培养后５０

ｄ

苗高最高可达７—８ｃｍ、茎粗可达７—８ｍｉｌｌ、根可达６ｃｍ左

右。由此可知，选用株高约５ｃｍ、带少许短细根的初始材

料可缩短生根壮苗的时间．且出瓶苗生长情况较为理想。３．２移栽

栽培石斛的基质要以疏松透气、排水良好、肥料适量、

Ａ：基质Ｄ；Ｂ：基质Ｅ

无病菌和虫害潜藏者为宜Ｉｍｌ句。从移栽效果可以看出，基图２不同移栽基质上铁皮石斛组培苗的生长情况

质Ｄ（火山岩＋松树皮＋活苔藓）和基质Ｅ（火山岩＋松树皮＋活苔藓＋陶粒）移栽成活率最高，且组培苗的长势也较好，３结论与讨论

最适宜于作为移栽铁皮石斛组培苗的基质。基质Ｄ、Ｅ中，

３．１生根与壮苗

火山岩基质属多孔结构，密质适中，疏松透气，持水性及排

以基本培养基而言，Ｎ６培养基生根快，且新长出的吸

水能力均良好，ｐＨ值呈弱酸性且含有大量营养元素适宜收根粗壮；而１／２ＭＳ培养基生根缓慢，且新根较细。因此，兰科植物生长：树皮经发酵处理不易长菌，且保水保肥，可Ｎ６作为基本培养基更适宜于生根，这与刘骅等…】、张玲等能是其移栽成活率高、长势好的原因。但从移栽基质成本【ｔ≈的研究结果一致。激素ＩＢＡ对石斛试管苗生根具有促进来看，既然陶粒对移栽效果影响并不明显，则基质Ｄ（火山作用，这与张叔萍等Ｉ－３】的结论相似。而４个培养基处理中，

岩＋松树皮＋活苔藓）为最佳基质。

以培养基Ｎ６＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋参考文献：

琼脂７ｇ／Ｌ＋ＡＣ５

ｒ，／Ｌ＋香蕉汁１００ｍｌ＿／Ｌ生根壮苗效果最

【ｌ】张启香，方炎明．铁皮石斛组织培养及试管苗营养器官和原球茎

佳。

的结构观察叨．西北植物学报，２００５，２５（９）：１７６１—１７６５．

在试验中发现，在选用初始材料时，由于石斛的丛生【２】孙志蓉，王美云，金家兴，等．铁皮石斛试管苗生长发育动态研究

效应（丛生比单株操作，生长状况好且快），无法整齐划一，叨．北京中医药大学学报，２０１０，３３（２）：８３—８７．

大部分试管苗以高为２．３ｃｍ、无根或带少许短细根的２～［３】郁美娟，孟庆华，黄德音，等．石斛属植物有效成分及药理作用研

３株的丛苗为操作单位．但有少部分高约５Ｃ１ＴＩ的试管苗。

枷中成药，２００３，２５（１１）：９１８抛

（下转第２３页）

２３

辐射时间可以得到不同类型的突变体。ＵＶ—Ｃ照射甘蓝型

油菜种子ｌｈ主要诱发早开花突变体，照射种子５ｈ可诱

［２】ＫｏｓｔｉｎａＬ．Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆ

ｓｐａｃｅ

ｆｌｉｇｈｔｆａｃｔｏｒｓ

ｏｎ

ｖｉａｂｉｌｉｔｙａｎｄ

ｍｕｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｐｌａｎｔｓ【Ｊ】．ＡｄｖＳｐａｃｅＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８４，４（１０）：６５—７０．

ｃｒｉｔｉｃａｌｒｅｖｉｅｗ［Ｊ】

发晚开花和矮杆突变体，这可能是因为紫外线辐射使

ＤＮＡ分子形成嘧啶二聚体．阻碍碱基问的正常配对，从而引起突变。多雄蕊突变体主要出现在始花期。盛花期雄蕊

【３】ＨａｇｅｎＶ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎｂｉｏｌｏｇｙ

ＡｄｖＳｐａｃｅ

ｉｎ

ｓｐａｃｅ——Ａ

Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９８９，９（１０）：３—８．

［４］刘录祥，郑企成．农作物空间诱变的生物效应及其育种应用研究

【Ａ１．航天育种论文集［Ｃ１．１９９５：２０２—２０６．

［５】杨雪艳，王宝书，崔显成．长春市紫外线辐射强度变化特征及影响

因子分析ｆＪｌ．吉林气象，２００６（４）：２９—３１．

［６】杜慧芳，程智慧，刘波．紫外线照射对黄瓜幼苗生长和光合特性的

影响［Ｊ１．植物生理科学，２００５，２１（７）：２１０－２１２．【７】

ＡｈｍａｄＬ，Ｄａｙａｎｄ

ＵＶ

Ｊ

Ｐ，ＭａｃＤｏｎａｌｄ

ｉｎ

又恢复正常，这一现象可能和材料本身的特性或与种植的环境有关，具体机理还有待于进一步的试验验证。试验中还观祭到ＵＶ—Ｃ照射４—５ｈ时．萌发出的幼苗生长扭曲并失去背地性，不能直立生长。综上说明，ＵＶ—Ｃ处理对植物的影响是多方面的。此外，杜慧芳等［６１研究发现紫外线诱变效率与紫外灯的强度和离照射材料的距离有关．所以不同材料诱变的最佳时间还有待具体研究。

Ｍ．处理后，发现照射ｌ～３ｈ的幼苗在田间长势整齐，照射４～５ｈ的幼苗部分生长扭曲。不能直立生长，植株的

Ｍ

Ｖ，ｅｔ

ａ１．Ｈａｐｌｏｉｄ

ｎａｐｕｓ

ｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒ

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ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｒａｐｉｄ２ｃｙｅｌｉｎｇ

ｔｏ

Ｂｒａｓｓｉｃａ

ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ

ｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｏｆ

ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎａｎｄＡｌｔｅｒｎａｒｉａ

ｆＪ］．Ａｎｎａｌｓ

Ｂ，Ｃｏｕｍａｎｓ

Ｂｏｔａｎｙ，１９９ｌ，６７：５２ｌ一５２５．

ＭＰ．Ｔｈｅ

ｎａｐｕｓ

［８】Ｓｗａｎｓｏｎ

ｔｏｌｅｒａｎｔ

Ｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ

Ｌ．＂ａｆｔｅｒ

ｉｎ

ｏｆｈｅｒｂｉｃｉｄｅ

ｏｆ

整体高度明显低于对照。该结果已被广泛证实ｌ】ｑ，原因可能是紫外线照射使植株体内生长素光氧化．形成的氧化产物抑制了茎的伸长。

目前，通过理化因素诱发构建突变体库的方法已成为创建新型种质资源的一种有效手段，本试验利用ＵＶ—Ｃ诱

导甘蓝型油菜品种ＳＷＵ７。经Ｍ，筛选。获得雄性不育、矮

【９】

ｐｌａｎｔｓｉｎ

Ｂｒ砸ｓｉｃａｖｉｔｒｏｓｅｌｅｃｔｉｏｎ

ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅｓ

ａｎｄｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ【Ｊ】．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ

Ｊ

Ｅ．Ｄｏｕｂｌｅｄ

ｅｒｕｅｉｃ

Ｒｅｐ，１９８８，７：８３—８７．

Ｂａｒｒｏ

ｃａｒｉｎａｔａ

Ｆ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｗｉｔｈ

ｈａｐｌｏｉｄ

ｃｏｎｔｅｎｔ

ｌｉｎｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａ

ｍｏｄｉｆｉｅｄａｃｉｄ

ｔｈｒｏｕｇｈ

ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ

ｂｙＥＭＳｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ２００１．１２０：２６２—２６４．

ｉｓｏｌａｔｅｄ

ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅｓ

ｆＪ】．ＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，

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ｅｒｕｃｉｃｃａｒｉｎａｔａ

Ｆ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚａｃｉｄ

ｃｏｎｔｅｎｔｓ

Ｊ

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Ｅ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｄｏｕｂｌｅｄ

ｏｆ

ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｌｉｎｅｓ

ｏｆ

ａｎｄ

杆、多雄蕊、花瓣畸形、浅色花瓣及早和晚开花等突变体，总变异频率达３．８６％，诱变效率略低于化学诱变。尽管ＥＭＳ作为一种常用的化学诱变技术，诱变频率较高，诱变作用具有特异性，但存在价格昂贵、毒性较大等缺陷【１６１。本试验中ＵＶ—Ｃ来源于紫外线杀菌灯（４０Ｗ，２５４ｎｍ）．操作简单，方便经济，能够快速诱发突变效应且毒害和污染很小，缺陷是突变效率偏低。但只要确定合适的照射时间、强度和紫外灯与材料之间的距离．ＵＶ—Ｃ诱变技术将具有

广阔的应用前景。

参考文献：【１】

Ｑｉａｎｗ，ＭｅｎｇＪ，Ｌｉ

ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ

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２００３．１２９：１—６．

【１１１和江明，王敬乔．用ＥＭＳ诱变和小孢子培养快速获得甘蓝型油

菜高油酸种质材料的研究【Ｊ】．西南农业学报，２００３，１６（２）：３４—３６．［１２】石淑稳，吴江生，孙秀丽，等．，Ｊ、孢子离体培养和诱变产生的甘蓝

型油菜突变体．［Ｊ】．中国油料作物学报，２００８，３０（１０）：１９１—１９３．［１３】高捍东．种子活力测定方法及其评价【Ｊ】．种子，１９９０（６）：３３—３５．【１４】ＳＡＳ

Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ＳＡＳ

ｔｅｃｈｎｉｃａｌ

ｒｅｐｏｒｔ．ＳＡＳ

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Ｃｈａｎｇｅｓａｎｄｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｓ，Ｒｅｌｅａｓｅ６．０７［Ｒ】．Ｃａｒｙ：ＳＡＳ

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［１５】

ａ１．Ｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ

ｒａｐａ

ｏｆ

ｔｏ

ＭｕｒａｌｉＮＳ．ＴｅｒａｍｕｒａＡＨ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＵＶ２Ｂ

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ｐｈｏｓｐｈｅｒｕｓ

ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ

ｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅ

ｉｎ

ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ

ｗｉｄｅｎｉｎｇ

Ｏｆｆ

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ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｔｈｅ

ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ

ｏｆ

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铁皮石斛生根壮苗培养基优化及移栽基质选择

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

韩晓红， 孙金龙， 段春红， HAN Xiao-hong， SUN Jin-long， DUAN Chun-hong武汉生物工程学院生物工程系,湖北武汉,430415广东农业科学

Guangdong Agricultural Sciences2013,40(2)

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_gdnykx201302007.aspx

１６

广东农业科学２０１３年第２期

铁皮石斛生根壮苗培养基优化及移栽基质选择

韩晓红，孙金龙，段春红

（武汉生物工程学院生物工程系，湖北武汉４３０４１５）

摘要：以铁皮石斛无菌幼苗为材料，研究不同基本培养基、不同激素对铁皮石斛生根壮苗的影响。同时以优良的试管苗为试材，搭配不同比例的基质．研究其对铁皮石斛试管苗移栽成活率和生长状况的影响。结果显示，以培养基Ｎ６＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ

Ｏ．１

ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７ｇ／Ｌ＋ＡＣ

５

ｇ／Ｌ＋香蕉汁１００ｍＵＬ生根壮苗效果最佳．试管苗根粗叶绿．可达到出瓶效果：移栽基质火

山岩＋松树皮＋活苔藓效果最佳，石斛试管苗成活率可达９０％且长势优良．３０ｄ后有新芽萌发。

关键词：铁皮石斛：生根壮苗；移栽：基质筛选中图分类号：￥６８２．３ｌ

文献标识码：Ａ

文章编号：１００４—８７４Ｘ（２０１３）０２—００１６～０３

Ｒｏｏｔｉｎｇ

ｍｅｄｉｕｍｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇｍａｔｒｉｘ

ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ

ＨＡＮＸｉａｏ—ｈｏｎｇ，ＳＵＮＪｉｎ—ｌｏｎｇ，ＤＵＡＮＣｈｕｎ—ｈｏｎｇ

（ＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＷｕｈａｎＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｗｕｈｏｎ４３０４１５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＷｉｔｈＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍ

ｇｒｏｗｔｈ

ｃｏｍｌｉｄｕｍｓｅｅｄｌｉｎｇｓ

ｗａｓ

ａｓ

ｍａｔｅｒｉａｌｓ．ｔｈｅｅｆｆｅｃｔ０｝ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｋｉｎｄｓｏｆｂａｓｉｃｍｅｄｉｕｍａｎｄｈｏｒｍｏｎｅｓｆｏｒｔｈｅ

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ｓｕｉｔａｂｌｅｍａｔｒｉｘ

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ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１

ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｅｒｏｓｅ３０

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ｕｓｅｄ

ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙ。Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ

ｗａｓ

Ｎ６＋ＮＡＡ０，５

５∥Ｌ＋ｂａｎａｎａｊｕｉｅｅ

１００ｍＬ／Ｌｔｈｅｍｏｓｔｓｕｉｔａｂｌｅｍｅｄｉｕｍ

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ｒｏｏｔｓ

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ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｏｌｃａｎｉｃ：ｒｏｃｋ，ｐｉｎｅｂａｒｋａｎｄｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆｌ：１（ｃｏｖｅｒｅｄｗｉｔｈｌｉｖｅｍｏｓｓ）ｗａｓｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｍａｔｒｉｘｆｏｒｔｈｅｉｎｐｌａｎｔｌｅｔＤ．ｃａｒｕｌｉｄｕｍｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｄｕｃｅｄｈｉｇｈｅｒｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ（９０％）ａｎｄｖｉｇｏｒｏｕｓｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｇｒｏｗｔｈ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ；ｇｒｏｖｃｔｈａｎｄｒｏｏｔｉｎｇ；ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ；ｍａｔｒｉｘｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ

ｖｉｔｒｏ

铁皮石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ）是兰科石斛属多年究，虽然已经成功培育出铁皮石斛试管苗，但还存在着试管苗质量难以保证、移栽成活率低等问题，极大地制约着铁皮石斛生产规模的扩大和生产水平的提高【２Ｉ。本试验通过对铁皮石斛进行试管苗生根壮苗培养基的优化，筛选出

能获得优质移栽试管苗的培养基；同时通过对铁皮石斛组

生附生草本植物，主要分布于两南和江南各省Ⅲ，是《中华

人民共和国药典》中收载的５种石斛属植物之一，素有

“中华仙草”和“药中黄金”之美称。它具有滋阴清热、生津

益胃、润肺止咳、润喉明目、延年益寿之功效Ｉｕ。现代中医学和中药药理学研究表明，铁皮石斛富含多糖、氨基酸、

培苗移栽基质进行各种组合，筛选出适合石斛试管苗移栽的基质。以期为铁皮石斛试管苗的大规模人工种植提供参

考和理论依据。

生物碱、微量元素等，在治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗肿瘤、降低血糖和治疗白内障等方面均有良好疗效Ｉ”。铁皮石斛的茎呈圆柱形、直立、绿色或铁灰色，果实为蒴果、种子小而多．种内胚发育不全或不成熟，无胚乳ｌ蝴。铁皮石

斛自然结实率很低１６１，何平荣等ｆ４１认为平均自然结实率为０．３ｌ％，其中以开花当天萼片还未完全展开时的人＿ＴＩ授粉

１材料与方法

铁皮石斛无菌试管幼苗由武汉生物工程学院植物细胞工程实验室提供。

结实率最高。铁皮石斛以异花授粉为主．其自花授粉成功率极低、仅３０％左右，而异花授粉成功率达１００％１６】。铁皮石斛野生种子的成活率很低。

随着铁皮石斛消费市场的日趋成熟，以铁皮石斛为

主要原料的铁皮石斛胶囊、铁皮枫斗颗粒、铁皮枫斗茶、铁皮枫斗浸膏等药品和保健食品成为市场热销产品，市场前景广阔Ｉ７Ｉ。但长期以来，药用石斛原料主要依赖其野生资源，由于资源匮乏，铁皮石斛已被列为国家级珍惜濒

１．１铁皮石斛生根壮苗培养基优化试验

供试材料为２～３ｃｍ无根或少量细根铁皮石斛无菌试管幼苗，在无菌条件下，将其取出，以每瓶２～３株为一个单位，分别接种到所配制的生根壮苗培养基中。

生根壮苗培养基设４个处理。分别为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ（ＡＩ）、１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ（Ａ２）、Ｎ６＋

ＮＡＡ

０．５

ｍｇ／Ｌ（Ｂ１）、Ｎ６＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ

０．１

ｍｇ／Ｌ

（Ｂ２）。每个处理培养基中均加入３０ｇ／Ｌ蔗糖、７ｇ／Ｌ琼脂、

５

危保护植物。铁皮石斛对生长环境要求苛刻，野生资源自

然更新恢复速度慢，而现在人工栽培技术还很不成熟，组

ｇ／Ｌ活性炭、１００ｍＬ／Ｌ香蕉汁，每个处理培养基接种２５

瓶。接种后置于培养温度为２５（±２）℃、光照强度１５００～２０００ｌｘ、光照时间１２ｈ／ｄ条件下培养。培养４０ｄ后．随机抽选１０瓶试管苗，统计幼苗生根率、生根数、根长和苗高。分析不同培养基对铁皮石斛生长情况的影响。１．２铁皮石斛试管苗移栽基质选择试验

培成为其目前繁殖的主要技术手段。通过多年的试验研

收稿日期：２０１２一１２—０５

作者简介：韩晓红（１９７７一），女．博士，讲师，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｏｎｇｘｉａｏｈａｎ

＠１２６．ｃｏｒｎ

１７

１．２．１预处理及炼苗将试管苗移至室外通风处进行２盆．对组培苗的生长状况进行观察分析。

周左右的炼苗，炼苗温度为１５—２５℃，移栽前２ｄ揭盖，让试管苗逐渐适应自然环境，待其叶色浓绿、生长健壮时出瓶。选取生长状况良好、株高３～６ｃｍ、根长３－４ｃｍ、每株

具５－６条长根（４～５ｃｍ）的试管苗作为移栽材料。将培养

２结果与分析

２．１铁皮石斛生根壮苗培养基优化试验

接种在含有生长素的Ｉ／２ＭＳ培养基中的试管苗，在接

种后２８ｄ开始出现新根的分化，而含有生长素的Ｎ６培养基中的试管苗则在接种后１４ｄ有较明显的新根分化。在茎基部或节上出现浅黄绿色的突起，尖端的颜色较浅，长

基与小苗一起轻轻取出，先用自来水冲洗干净，然后再用

蒸馏水冲洗几次备用。

１．２．２移栽基质设计选用移栽基质火山岩、松树皮、泥

炭土、珍珠岩、活苔藓、陶粒，对其进行不同比例（体积比）搭配，设计成不同移栽基质。其中，活苔藓用于覆盖表面，陶粒除Ａ、Ｂ外，其余都铺在花盆底部（表１）。

表１

铁皮石斛移栽基质设计

度约１ｍｍ、直径约０．８ｍｍ。新根中短根为浅黄绿色，长根为浅绿色，培养基中的吸收根表面光滑。一些试管苗还长出较长的气生根，暴露于空气中。

由表２可知．接种后４０ｄ．以含有生长素的１／２ＭＳ为基本培养基的试管苗，平均根长在１．０～１．５ｃｍ，平均根直

径在１ｍｍ左右。其生根率最高为８８％。其中，Ａ１处理丛

额婀一Ａ

Ｂ

火山岩松树皮泥炭土珍珠岩篙陶粒体积比

一一

一一

一

生芽较多、生根率较低，且叶多为浅绿色（图１Ａ）；而Ａ２处理丛生芽较少且生根率较高，试管苗叶片增大、呈长椭圆

形，叶色由浅绿变为深绿，叶片变厚（图１Ｂ）。以含有生长

一一一一一

一

一一一

＋一

＋＋一一

ｃＤＥ

Ｆ

＋＋＋一一一

＋＋＋＋＋＋

●●

素的Ｎ６为基本培养基的试管苗，平均根长１．５～２．０ｃｍ，平均根直径在２ｍｍ左右，其生根率可达１００％。其中，Ｂ１和Ｂ２处理试管苗长势相似，但Ｂ２处理的根比Ｂｌ更长．更适于移栽（图１Ｃ、图ｌＤ）。可见，在相同培养基中，同时添加了激素ＩＢＡ和ＮＡＡ的试管苗比单独使用ＮＡＡ的试管苗的根多且长。因此，Ｂ２处理（Ｎ６＋ＮＡＡ０．５

ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋琼脂７ｇ／Ｌ＋ＡＣ

ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１

一＋＋一

ｌｌ

Ｇ

Ｈ

＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋２｝

●●

！

注：“一”表示无，“＋”并表示有：基质Ｃ、Ｄ、Ｅ中所用树皮为经过发酵的；苔藓覆盖于表面，不计人比例。

５玑＋香蕉汁１００

ｍｌｄＬ）

１．２．３移栽采用单个小盆进行移栽，每盆１丛（２—３株苗为１个单位）。将待移栽的试管苗移栽到含有火山岩、松树皮、泥炭土、珍珠岩、活苔藓、陶粒的不同基质中。移栽试验分两步进行，第ｌ步先进行初步筛选，每种基质移栽５盆，以成活率为基准，观察移栽后７ｄ的生长状况，初步筛选出较适合的移栽基质。第２步选择最适宜的移栽基质，由第１步得出的结果选择较适合的移栽基质进行大量移栽，每种基质移栽２０盆。移栽后将其放置在阴凉、湿度较高、干净且通风的环境．移栽后１ｄ浇透水。且盖膜保湿２ｄ，之后每天上下午各喷１次水，下午以浇透为准。

移栽后７ｄ和３０ｄ分别对铁皮石斛移栽苗成活率进行统计，凡叶片全部干枯、无新芽萌发的计为死亡．成活率（％）＝成活盆数／移栽盆数ｘ１００。移栽后３０ｄ随机抽取５

更适宜铁皮石斛试管苗生根壮苗。

表２铁皮石斛在不同生根壮苗培养基中的培养效果（培养后４０ｄ）

注：“＋＋”表示生长状况一般，新根少，根短，根细，茎细，叶片细长，叶较绿，叶质较薄丛生芽较多，生长较快：“＋＋＋”表示生长状况较好，新根少，但根长，有些许粗根，叶片宽厚浓绿．茎粗，节多，生长较快；“＋＋＋＋”表示生子长状况优良．新根多．根粗．但根短，叶片浓绿，茎较粗，节较多：“＋＋＋＋＋”表示生长状况优良，新根多，根较粗且长，叶片浓绿，茎较粗，节较多。

Ａ：Ａｌ培养基；Ｂ：Ａ２培养基；Ｃ：Ｂｌ培养基；Ｄ：Ｂ２培养基

图１

不同生根壮苗培养基上铁皮石斛试管苗的生长情况

１８

２．２铁皮石斛试管苗移栽基质选择试验

Ｇ等３种基质移栽效果良好。同时覆盖有活苔藓的基质比２．２．１

不同移栽基质对铁皮石斛试管苗成活率的影响

未覆盖的移栽成活率都要高。说明苔藓具有良好的保水移栽时．试管苗由人工控制温度、光照、水分和养分的理想效果：另外，可能是苔藓能提供铁皮石斛生长所需的共生化无菌环境逐步转换到自然条件，移栽后生长基质使根

菌，金辉等ｆ９ｊ、陈瑞蕊等【，ｏｌ认为，铁皮石斛共生菌能提高其

系在原培养基内被动吸收水分、养分转变为主动吸收，是

移栽成活率。

植株成活的关键因素旧。铁皮石斛试管苗的移栽基质应以２．２．２基质Ｄ、Ｅ及Ｇ对试管苗移栽成活率及生长状况

疏松通透性好且不易发霉长菌的原料为主、并配合使用的影响用初筛得到的Ｄ、Ｅ、Ｇ３种基质进行大量移栽，保水保肥的原料才能获得最佳成活率。以火山岩、松树皮、并对移栽后铁皮石斛的生长状况进行统计。结果（表３）显泥炭土、珍珠岩、活苔藓、陶粒等基质为材料，对铁皮石斛示，组培苗移栽后７ｄ，处理Ｄ成活率达到９５％，而处理Ｅ移栽基质进行初步筛选，结果显示，移栽后７ｄ，Ａ（陶粒）、和Ｇ的成活率也达到９０％，可见，在组培苗移栽后７ｄ内，Ｂ（陶粒＋活苔藓）、Ｃ（火山岩＋松树皮）、Ｆ（松树皮＋泥炭土＋这３种基质问成活率无明显差异。移栽后３０ｄ，处理Ｄ成珍珠岩＋陶粒）、Ｉ－Ｉ（松树皮＋泥炭土＋珍珠岩＋活苔藓＋陶粒）

活率仍最高、达９０％，处理Ｅ成活率为８５％，而处理Ｇ成５种基质移栽成活率分别为０％、２０％、２０％、４０％、４０％。可活率大幅降低至７０％。可见，移栽基质Ｄ、Ｅ适宜铁皮石斛

见，陶粒虽然疏松透气，但透水性过强，完全使用陶粒栽

移栽，且基质Ｄ移栽成活率最高。由处理Ｄ、Ｅ的移栽效果

培，不宜于石斛试管苗的移栽；而用Ｄ（火山岩＋松树皮＋活可知，陶粒作为基质，铺在底层对组培苗移栽成活率影响苔藓）、Ｅ（火山岩＋松树皮＋活苔藓＋陶粒）、Ｇ（松树皮＋泥炭不大。移栽后３０ｄ对组培苗生长状况的观察结果（图２）土＋珍珠岩＋活苔藓＋陶粒）３种基质进行移栽具有较高的表明，移栽基质Ｄ、Ｅ对铁皮石斛组培苗的移栽效果最好，成活率，分别为１００％、８０％和６０％，因此移栽初期以Ｄ、Ｅ、

且在移栽后３０ｄ有新芽萌发。

表３

３不同移栽基质对铁皮石斛成活率和生长情况的影响

高约５ｃｍ、茎粗４～５ｍｍ、带些许短细根的初始材料，无论是长势还是生根情况，都要优于其他试管苗，培养后５０

ｄ

苗高最高可达７—８ｃｍ、茎粗可达７—８ｍｉｌｌ、根可达６ｃｍ左

右。由此可知，选用株高约５ｃｍ、带少许短细根的初始材

料可缩短生根壮苗的时间．且出瓶苗生长情况较为理想。３．２移栽

栽培石斛的基质要以疏松透气、排水良好、肥料适量、

Ａ：基质Ｄ；Ｂ：基质Ｅ

无病菌和虫害潜藏者为宜Ｉｍｌ句。从移栽效果可以看出，基图２不同移栽基质上铁皮石斛组培苗的生长情况

质Ｄ（火山岩＋松树皮＋活苔藓）和基质Ｅ（火山岩＋松树皮＋活苔藓＋陶粒）移栽成活率最高，且组培苗的长势也较好，３结论与讨论

最适宜于作为移栽铁皮石斛组培苗的基质。基质Ｄ、Ｅ中，

３．１生根与壮苗

火山岩基质属多孔结构，密质适中，疏松透气，持水性及排

以基本培养基而言，Ｎ６培养基生根快，且新长出的吸

水能力均良好，ｐＨ值呈弱酸性且含有大量营养元素适宜收根粗壮；而１／２ＭＳ培养基生根缓慢，且新根较细。因此，兰科植物生长：树皮经发酵处理不易长菌，且保水保肥，可Ｎ６作为基本培养基更适宜于生根，这与刘骅等…】、张玲等能是其移栽成活率高、长势好的原因。但从移栽基质成本【ｔ≈的研究结果一致。激素ＩＢＡ对石斛试管苗生根具有促进来看，既然陶粒对移栽效果影响并不明显，则基质Ｄ（火山作用，这与张叔萍等Ｉ－３】的结论相似。而４个培养基处理中，

岩＋松树皮＋活苔藓）为最佳基质。

以培养基Ｎ６＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋参考文献：

琼脂７ｇ／Ｌ＋ＡＣ５

ｒ，／Ｌ＋香蕉汁１００ｍｌ＿／Ｌ生根壮苗效果最

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效应（丛生比单株操作，生长状况好且快），无法整齐划一，叨．北京中医药大学学报，２０１０，３３（２）：８３—８７．

大部分试管苗以高为２．３ｃｍ、无根或带少许短细根的２～［３】郁美娟，孟庆华，黄德音，等．石斛属植物有效成分及药理作用研

３株的丛苗为操作单位．但有少部分高约５Ｃ１ＴＩ的试管苗。

枷中成药，２００３，２５（１１）：９１８抛

（下转第２３页）

２３

辐射时间可以得到不同类型的突变体。ＵＶ—Ｃ照射甘蓝型

油菜种子ｌｈ主要诱发早开花突变体，照射种子５ｈ可诱

［２】ＫｏｓｔｉｎａＬ．Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆ

ｓｐａｃｅ

ｆｌｉｇｈｔｆａｃｔｏｒｓ

ｏｎ

ｖｉａｂｉｌｉｔｙａｎｄ

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ｃｒｉｔｉｃａｌｒｅｖｉｅｗ［Ｊ】

发晚开花和矮杆突变体，这可能是因为紫外线辐射使

ＤＮＡ分子形成嘧啶二聚体．阻碍碱基问的正常配对，从而引起突变。多雄蕊突变体主要出现在始花期。盛花期雄蕊

【３】ＨａｇｅｎＶ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎｂｉｏｌｏｇｙ

ＡｄｖＳｐａｃｅ

ｉｎ

ｓｐａｃｅ——Ａ

Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９８９，９（１０）：３—８．

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ＡｈｍａｄＬ，Ｄａｙａｎｄ

ＵＶ

Ｊ

Ｐ，ＭａｃＤｏｎａｌｄ

ｉｎ

又恢复正常，这一现象可能和材料本身的特性或与种植的环境有关，具体机理还有待于进一步的试验验证。试验中还观祭到ＵＶ—Ｃ照射４—５ｈ时．萌发出的幼苗生长扭曲并失去背地性，不能直立生长。综上说明，ＵＶ—Ｃ处理对植物的影响是多方面的。此外，杜慧芳等［６１研究发现紫外线诱变效率与紫外灯的强度和离照射材料的距离有关．所以不同材料诱变的最佳时间还有待具体研究。

Ｍ．处理后，发现照射ｌ～３ｈ的幼苗在田间长势整齐，照射４～５ｈ的幼苗部分生长扭曲。不能直立生长，植株的

Ｍ

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ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎａｎｄＡｌｔｅｒｎａｒｉａ

ｆＪ］．Ａｎｎａｌｓ

Ｂ，Ｃｏｕｍａｎｓ

Ｂｏｔａｎｙ，１９９ｌ，６７：５２ｌ一５２５．

ＭＰ．Ｔｈｅ

ｎａｐｕｓ

［８】Ｓｗａｎｓｏｎ

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Ｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ

Ｌ．＂ａｆｔｅｒ

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ｏｆｈｅｒｂｉｃｉｄｅ

ｏｆ

整体高度明显低于对照。该结果已被广泛证实ｌ】ｑ，原因可能是紫外线照射使植株体内生长素光氧化．形成的氧化产物抑制了茎的伸长。

目前，通过理化因素诱发构建突变体库的方法已成为创建新型种质资源的一种有效手段，本试验利用ＵＶ—Ｃ诱

导甘蓝型油菜品种ＳＷＵ７。经Ｍ，筛选。获得雄性不育、矮

【９】

ｐｌａｎｔｓｉｎ

Ｂｒ砸ｓｉｃａｖｉｔｒｏｓｅｌｅｃｔｉｏｎ

ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅｓ

ａｎｄｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ【Ｊ】．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ

Ｊ

Ｅ．Ｄｏｕｂｌｅｄ

ｅｒｕｅｉｃ

Ｒｅｐ，１９８８，７：８３—８７．

Ｂａｒｒｏ

ｃａｒｉｎａｔａ

Ｆ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚｗｉｔｈ

ｈａｐｌｏｉｄ

ｃｏｎｔｅｎｔ

ｌｉｎｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａ

ｍｏｄｉｆｉｅｄａｃｉｄ

ｔｈｒｏｕｇｈ

ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ

ｂｙＥＭＳｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ２００１．１２０：２６２—２６４．

ｉｓｏｌａｔｅｄ

ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅｓ

ｆＪ】．ＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，

［１０】Ｂａｒｒｏ

ｅｒｕｃｉｃｃａｒｉｎａｔａ

Ｆ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚａｃｉｄ

ｃｏｎｔｅｎｔｓ

Ｊ

ｉｎ

Ｅ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｄｏｕｂｌｅｄ

ｏｆ

ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｌｉｎｅｓ

ｏｆ

ａｎｄ

杆、多雄蕊、花瓣畸形、浅色花瓣及早和晚开花等突变体，总变异频率达３．８６％，诱变效率略低于化学诱变。尽管ＥＭＳ作为一种常用的化学诱变技术，诱变频率较高，诱变作用具有特异性，但存在价格昂贵、毒性较大等缺陷【１６１。本试验中ＵＶ—Ｃ来源于紫外线杀菌灯（４０Ｗ，２５４ｎｍ）．操作简单，方便经济，能够快速诱发突变效应且毒害和污染很小，缺陷是突变效率偏低。但只要确定合适的照射时间、强度和紫外灯与材料之间的距离．ＵＶ—Ｃ诱变技术将具有

广阔的应用前景。

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ｏｆ

ｔｏ

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ｏｎ

ｉｒｒａｄｉａｎｃｅｇｒｏｗｔｈ

ａｎｄ

ｇｅｎｏｍｉｃ

ｏｎｓｏｙｂｅａｎ

ＶＩＩｎｆｌｕｅｎｃｅ

ｏｆ

ｐｈｏｓｐｈｅｒｕｓ

ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ

ｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅ

ｉｎ

ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ

ｗｉｄｅｎｉｎｇ

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铁皮石斛生根壮苗培养基优化及移栽基质选择

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

韩晓红， 孙金龙， 段春红， HAN Xiao-hong， SUN Jin-long， DUAN Chun-hong武汉生物工程学院生物工程系,湖北武汉,430415广东农业科学

Guangdong Agricultural Sciences2013,40(2)

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_gdnykx201302007.aspx