【目的】
指导中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查。
【该SOP 变动程序】
本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
【用途】
1）鉴别白血病（低）和白血病样（高）反应。
2）鉴别淋巴瘤（高）和何杰金病。
3）鉴别细菌性感染（高）与病毒性感染。
【染色原理】
基质中β—甘油磷酸钠在碱性磷酸酶与触媒剂镁离子的存在下，水解成磷酸钠与甘油，磷酸钠再与氯化钙结合成不溶解的磷酸钙，再与硝酸钴形成磷酸钴，最后与硫化铵成为黑色的硫化钴沉淀。
【分布】
血细胞的碱性磷酸酶（简称“碱酶”）活性，主要见于成熟的中性粒细胞（故称NAP ），定位于胞浆中。但当碱酶的活性极强时，由于扩散作用常可使黑色沉淀遮盖于胞核上。其他细胞系均为阴性反应。
【试剂配置】
1. 作用液
3%甘油磷酸钠 10ml
2%巴比妥钠水溶液 10ml
蒸馏水 20ml
2%氯化钙 20ml
2%硫酸镁 2ml
PH9.2-9.5为适当。
2. 2%硝酸钴（冰箱保存可用1—2个月）。
3. 1%硫化铵（用时新配，每50ml 分装1瓶，冰箱保存）。
4. 0.5%伊红、1%藏红或2%甲绿溶液。
【染色步骤】
a) 新鲜干燥的涂片固定于95%酒精中10分钟。
b) 水洗数次，晾干。
c) 加入37℃作用液中，孵育4—6小时（作用液事先预温30分钟）。
d) 自来水缓缓冲洗数次，待干。
e) 2%硝酸钴5分钟。
f) 水洗，待干。
g) 1%硫化铵5分钟（此液只能用4小时）。
h) 自来水冲洗，再用蒸馏水涮洗，待干。
i) 0.5%伊红复染3分钟或2%甲绿复染10分钟。
j) 水洗，晾干，镜检。
【对照样本】
选择已知酶活性强的标本与被检标本同时染色，如所染阳性样本未呈现应有的阳性反应，说明染色技术有问题。
【结果判断】
1. 阳性颗粒呈棕黑色（与过氧化酶阳性颗粒相似，但粒小色淡），定位于成熟中性粒细胞胞浆内。
2. 计数方法，按碱酶活性强弱，分为5级。
0级 胞浆呈原色，无颗粒。
Ⅰ级 胞浆呈浅棕色和浅灰色，小颗粒占胞浆面积25—50%
Ⅱ级 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的50—75%。 Ⅲ级 胞浆充满棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的75—
100%。
Ⅳ级 胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占胞
浆面积的100％
每例的血片，均计数100个中性粒细胞，求出碱性磷酸酶阳性细胞的百分比（阳性率），并按碱酶活性的强弱不同，求得阳性指数（积分）。
【临床意义】
1. 正常人：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性较弱，阳性率为50%左右（20—80%），阳性强度多为+～++，积分为80左右（60—100）。
2. 炎症感染：各种化脓性感染，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性显著增加。病毒感染，则变化较小。
3. 白血病样反应：碱酶活性增高最显著，阳性率为50—100%。阳性强度全部为+++或++++，积分为200左右（80—380）。
4. 白血病
1）粒细胞性：急性、亚急性、慢性白血病和绿色瘤皆剧减，慢性之积分可降为0。接受治疗缓解时可恢复正常，复发时可再度降低。
2）单核细胞：血涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶活性降低（积分多为0）。
3）淋巴细胞性：急性白血病、淋巴肉瘤、中性粒细胞的碱性磷酸酶活性增强。
5．贫血：各种贫血，其中性粒细胞的碱性磷酸酶的活性皆增高，尤以再生障碍
性贫血最显著。
6. 其他疾患：如多发性骨髓瘤、原神经细胞瘤、风湿热、糖尿病、真性红细胞增多症，以及外科手术后，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性都有所增高。
【注意事项】
1. 含有β—甘油磷酸钠的基质作用液必须新鲜配置，置冰箱中待用，两天内有 效。
2. 作用液的PH 值，必须在9.4左右（以1N 或0.2mol/L NaOH纠正）。
3. 每次实验应同时作阳性标本为对照。
4. 中性粒细胞的碱性磷酸酶活性在不同状态下的改变：
年龄：1岁以下的幼儿较高，60岁以上的老人较低。
性别：女性较高。
时间：清晨到中午逐渐增高，到下午6时以后又开始降低。
当垂体、肾上腺皮质功能亢进时：中性粒细胞碱酶的活性剧增。
在体温增高、代谢旺盛、妇女的经期及妊娠时：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性均有所增高。
操作人员 部门主管 质量负责人
姓名 王烈 日期 04年07月15日
【目的】
指导中性粒细胞碱性磷酸酶染色检查。
【该SOP 变动程序】
本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
【用途】
1）鉴别白血病（低）和白血病样（高）反应。
2）鉴别淋巴瘤（高）和何杰金病。
3）鉴别细菌性感染（高）与病毒性感染。
【染色原理】
基质中β—甘油磷酸钠在碱性磷酸酶与触媒剂镁离子的存在下，水解成磷酸钠与甘油，磷酸钠再与氯化钙结合成不溶解的磷酸钙，再与硝酸钴形成磷酸钴，最后与硫化铵成为黑色的硫化钴沉淀。
【分布】
血细胞的碱性磷酸酶（简称“碱酶”）活性，主要见于成熟的中性粒细胞（故称NAP ），定位于胞浆中。但当碱酶的活性极强时，由于扩散作用常可使黑色沉淀遮盖于胞核上。其他细胞系均为阴性反应。
【试剂配置】
1. 作用液
3%甘油磷酸钠 10ml
2%巴比妥钠水溶液 10ml
蒸馏水 20ml
2%氯化钙 20ml
2%硫酸镁 2ml
PH9.2-9.5为适当。
2. 2%硝酸钴（冰箱保存可用1—2个月）。
3. 1%硫化铵（用时新配，每50ml 分装1瓶，冰箱保存）。
4. 0.5%伊红、1%藏红或2%甲绿溶液。
【染色步骤】
a) 新鲜干燥的涂片固定于95%酒精中10分钟。
b) 水洗数次，晾干。
c) 加入37℃作用液中，孵育4—6小时（作用液事先预温30分钟）。
d) 自来水缓缓冲洗数次，待干。
e) 2%硝酸钴5分钟。
f) 水洗，待干。
g) 1%硫化铵5分钟（此液只能用4小时）。
h) 自来水冲洗，再用蒸馏水涮洗，待干。
i) 0.5%伊红复染3分钟或2%甲绿复染10分钟。
j) 水洗，晾干，镜检。
【对照样本】
选择已知酶活性强的标本与被检标本同时染色，如所染阳性样本未呈现应有的阳性反应，说明染色技术有问题。
【结果判断】
1. 阳性颗粒呈棕黑色（与过氧化酶阳性颗粒相似，但粒小色淡），定位于成熟中性粒细胞胞浆内。
2. 计数方法，按碱酶活性强弱，分为5级。
0级 胞浆呈原色，无颗粒。
Ⅰ级 胞浆呈浅棕色和浅灰色，小颗粒占胞浆面积25—50%
Ⅱ级 胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的50—75%。 Ⅲ级 胞浆充满棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的75—
100%。
Ⅳ级 胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占胞
浆面积的100％
每例的血片，均计数100个中性粒细胞，求出碱性磷酸酶阳性细胞的百分比（阳性率），并按碱酶活性的强弱不同，求得阳性指数（积分）。
【临床意义】
1. 正常人：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性较弱，阳性率为50%左右（20—80%），阳性强度多为+～++，积分为80左右（60—100）。
2. 炎症感染：各种化脓性感染，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性显著增加。病毒感染，则变化较小。
3. 白血病样反应：碱酶活性增高最显著，阳性率为50—100%。阳性强度全部为+++或++++，积分为200左右（80—380）。
4. 白血病
1）粒细胞性：急性、亚急性、慢性白血病和绿色瘤皆剧减，慢性之积分可降为0。接受治疗缓解时可恢复正常，复发时可再度降低。
2）单核细胞：血涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶活性降低（积分多为0）。
3）淋巴细胞性：急性白血病、淋巴肉瘤、中性粒细胞的碱性磷酸酶活性增强。
5．贫血：各种贫血，其中性粒细胞的碱性磷酸酶的活性皆增高，尤以再生障碍
性贫血最显著。
6. 其他疾患：如多发性骨髓瘤、原神经细胞瘤、风湿热、糖尿病、真性红细胞增多症，以及外科手术后，中性粒细胞的碱性磷酸酶活性都有所增高。
【注意事项】
1. 含有β—甘油磷酸钠的基质作用液必须新鲜配置，置冰箱中待用，两天内有 效。
2. 作用液的PH 值，必须在9.4左右（以1N 或0.2mol/L NaOH纠正）。
3. 每次实验应同时作阳性标本为对照。
4. 中性粒细胞的碱性磷酸酶活性在不同状态下的改变：
年龄：1岁以下的幼儿较高，60岁以上的老人较低。
性别：女性较高。
时间：清晨到中午逐渐增高，到下午6时以后又开始降低。
当垂体、肾上腺皮质功能亢进时：中性粒细胞碱酶的活性剧增。
在体温增高、代谢旺盛、妇女的经期及妊娠时：中性粒细胞的碱性磷酸酶活性均有所增高。
操作人员 部门主管 质量负责人
姓名 王烈 日期 04年07月15日