Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
目录:
1 系统的组成
系统组成及光路示意图
实物照片说明
2 系统的使用
2.1 开机顺序
2.2 软件的快速使用说明
2.3 显微镜的触摸屏控制
2.4 关机顺序
3 系统的维护
1 系统的组成
激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图:
电脑工作站
激光器
电动荧光显微镜 扫描检测单元
实物照片说明:
电动荧光显微镜
扫描检测单元
CO2 培养系统控制器
激光器
电脑工作站
2 系统的使用
2.1 开机顺序
(1)打开稳压电源(绿色按钮)
等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关
(2)主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON”
电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON”
扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON”
(3)打开 [ 电动显微镜开关 ]
打开 [ 荧光灯开关 ]
(注:具有5 档光强调节旋钮)
(4)Ar 离子激光器主开关 “ON”
顺时针旋转钥匙 至 “—”
预热等待约15分钟,
将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby”扳至
“Laser run”状态,即可正常使用
(5)打开 [ 电脑开关 ],进入操作系统
注:键盘上也具有 [ 电脑开关 ]
2.2 软件的快速使用说明
(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标
(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:
“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、
分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已
存图像数据的处理、分析。
(3)软件界面: 1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)
2 动作按钮;3 工具组(多维扫描控制);4 工具详细界面;5 状态栏;6 视窗切换按钮; 7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块
动作按钮:
Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。
Stop ——暂停/结束扫描。
New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。
激光连接状况检查
眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角):
Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。) Camera ——光路切换至相机。
LSM ——共聚焦扫描成像光路。
显微镜设置:
“Ocular”——>
“Light Path”——>
点击物镜图标,选择物镜——>
样品聚焦。
透射光控制(Transmitted Light Control)
反射光光闸控制(Reflected Light Shutter)
荧光激发块选择(Reflector)
共聚焦LSM 扫描设置
点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路:
光路设置:
Smart Setup —— 自动预设光路
选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法,
应用“Apply”。
(注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫
描。Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺
序扫描。Best compromise 为兼顾速度与信号的折
中式扫描。)
扫描图像参数设置:
每个通道的精细调节:
包括:
(1)Pinhole的调节(一般设为1AU。该值越大,则信号越强,但共聚焦图像效果会降低。原则上,
在保证图像质量的前提下,该值越接近于1AU 越好);
(2)Master Gain的调节(增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小。原则上,在保证图
像质量的前提下,Gain值越小越好);
(3)Digital Offset的调节(可扣除背景噪音,但标本信号也有一定程度的扣除。原则上,在保证图
像质量的前提下,Digital Offset值越接近于0越好);
(4)Digital Gain的调节(增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小。原则上,在保证图
像质量的前提下,Gain值越接近于1.0~1.2越好);
(5)另外,对于每个通道,需要灵活调节激光的强度(激光强度越高,则信号越强,但噪音也相应增
强,同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上,在保证图像质量的前提下,激光强度越低越好。) 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数。
如果预览图像的效果可以,则先“Stop” ,再点击“Single” 或“Start”
即可完成图像的扫描。
图像的保存:
三种方法:
(1)“File”菜单下,“Save”
或者“Save AS”。
(2)点击右下角按钮。
(3)点击工具栏按钮。
(如图所示)
另外,通过“File”菜单下的“Export”,也可将图像以其它格式输出。
2.3 显微镜的触摸屏控制
显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制:
由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面,
触摸屏常用控制界面:
TFT触摸屏控制
直观、便捷。
Objectives物镜控制
TL透射光光闸
RL反射光光闸
Reflector荧光激发块控制
荧光观察时,需要选择相应的
荧光激发块
(或者激发波长、发射波长相
近的荧光激发块)
Light path光路设置
触摸控制,可将光路切换至“Eyepiece”
目镜观察筒,或者将光路切换至左侧共聚
焦光路“Sideport L”,或者将光路切换至
前侧“Frontport”相机。
2.4 关机顺序:
(1)关闭软件:主菜单“File”——>“Exit”,退出共聚焦软件ZEN。
(2)关闭主电脑操作系统、显示器电源。
(3)关闭 [荧光灯电源 ]。
(4)关闭 [电动显微镜电源]。
(5)关闭Ar 激光器:
先将 [扳钮] 从 “Laser run” 扳到 “Standby” 状态;
再将 [钥匙] 逆时针从“—”旋转到“O”状态;
等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后(切记!),
将 主开关 按钮按到“OFF”。
(6)扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“OFF”
电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“OFF”
主开关 [ MAIN SWITCH ]“OFF”
(7)等 [灯箱] 充分冷却后,再放防尘罩。
(8)如果系统长时间(超过5个小时)不使用,则关闭稳压电源。
3 系统的维护
主要注意事项如下:
(1)打开稳压电源时,应等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关。
(2)严格遵守[激光器]的开、关流程(详见“2.1、2.4 开/关机顺序”)。
(3)如果使用过[油镜],或者物镜表面较脏,则需用[擦镜纸]擦干净物镜的前表 面(清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液,混合比例:无水乙醇30%、 无水乙醚70%)。
(4)不使用荧光时,不打开[荧光灯]。避免频繁开/关荧光灯。
(5)必须等灯箱充分冷却后,再小心地盖上[防尘罩]。
(6)显微镜可由[TFT触摸屏]控制,使用触摸屏时注意:
①手指保持清洁、干燥状态,并且为了保证他人使用安全,触摸时严禁配 戴有可能接触污染物或危险样品的手套;
②触摸屏已足够灵敏,不要大力按压触摸屏;
③不要旋转、插拔触摸屏。
(7)刻录图像数据资料:应使用刻录光驱刻录,实验前应准备好刻录光盘。 切记:为了防止计算机病毒,严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或 者上网!!!
(8)未经授权,严禁自行安装任何软件!!!
(9)实验室温度应保持在22℃±2℃,湿度40%-60%。
(10)避免空调直接对着显微镜吹风。
(11)整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
目录:
1 系统的组成
系统组成及光路示意图
实物照片说明
2 系统的使用
2.1 开机顺序
2.2 软件的快速使用说明
2.3 显微镜的触摸屏控制
2.4 关机顺序
3 系统的维护
1 系统的组成
激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图:
电脑工作站
激光器
电动荧光显微镜 扫描检测单元
实物照片说明:
电动荧光显微镜
扫描检测单元
CO2 培养系统控制器
激光器
电脑工作站
2 系统的使用
2.1 开机顺序
(1)打开稳压电源(绿色按钮)
等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关
(2)主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON”
电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON”
扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON”
(3)打开 [ 电动显微镜开关 ]
打开 [ 荧光灯开关 ]
(注:具有5 档光强调节旋钮)
(4)Ar 离子激光器主开关 “ON”
顺时针旋转钥匙 至 “—”
预热等待约15分钟,
将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby”扳至
“Laser run”状态,即可正常使用
(5)打开 [ 电脑开关 ],进入操作系统
注:键盘上也具有 [ 电脑开关 ]
2.2 软件的快速使用说明
(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标
(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:
“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、
分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已
存图像数据的处理、分析。
(3)软件界面: 1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)
2 动作按钮;3 工具组(多维扫描控制);4 工具详细界面;5 状态栏;6 视窗切换按钮; 7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块
动作按钮:
Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。
Stop ——暂停/结束扫描。
New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。
激光连接状况检查
眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角):
Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。) Camera ——光路切换至相机。
LSM ——共聚焦扫描成像光路。
显微镜设置:
“Ocular”——>
“Light Path”——>
点击物镜图标,选择物镜——>
样品聚焦。
透射光控制(Transmitted Light Control)
反射光光闸控制(Reflected Light Shutter)
荧光激发块选择(Reflector)
共聚焦LSM 扫描设置
点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路:
光路设置:
Smart Setup —— 自动预设光路
选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法,
应用“Apply”。
(注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫
描。Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺
序扫描。Best compromise 为兼顾速度与信号的折
中式扫描。)
扫描图像参数设置:
每个通道的精细调节:
包括:
(1)Pinhole的调节(一般设为1AU。该值越大,则信号越强,但共聚焦图像效果会降低。原则上,
在保证图像质量的前提下,该值越接近于1AU 越好);
(2)Master Gain的调节(增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小。原则上,在保证图
像质量的前提下,Gain值越小越好);
(3)Digital Offset的调节(可扣除背景噪音,但标本信号也有一定程度的扣除。原则上,在保证图
像质量的前提下,Digital Offset值越接近于0越好);
(4)Digital Gain的调节(增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小。原则上,在保证图
像质量的前提下,Gain值越接近于1.0~1.2越好);
(5)另外,对于每个通道,需要灵活调节激光的强度(激光强度越高,则信号越强,但噪音也相应增
强,同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上,在保证图像质量的前提下,激光强度越低越好。) 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数。
如果预览图像的效果可以,则先“Stop” ,再点击“Single” 或“Start”
即可完成图像的扫描。
图像的保存:
三种方法:
(1)“File”菜单下,“Save”
或者“Save AS”。
(2)点击右下角按钮。
(3)点击工具栏按钮。
(如图所示)
另外,通过“File”菜单下的“Export”,也可将图像以其它格式输出。
2.3 显微镜的触摸屏控制
显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制:
由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面,
触摸屏常用控制界面:
TFT触摸屏控制
直观、便捷。
Objectives物镜控制
TL透射光光闸
RL反射光光闸
Reflector荧光激发块控制
荧光观察时,需要选择相应的
荧光激发块
(或者激发波长、发射波长相
近的荧光激发块)
Light path光路设置
触摸控制,可将光路切换至“Eyepiece”
目镜观察筒,或者将光路切换至左侧共聚
焦光路“Sideport L”,或者将光路切换至
前侧“Frontport”相机。
2.4 关机顺序:
(1)关闭软件:主菜单“File”——>“Exit”,退出共聚焦软件ZEN。
(2)关闭主电脑操作系统、显示器电源。
(3)关闭 [荧光灯电源 ]。
(4)关闭 [电动显微镜电源]。
(5)关闭Ar 激光器:
先将 [扳钮] 从 “Laser run” 扳到 “Standby” 状态;
再将 [钥匙] 逆时针从“—”旋转到“O”状态;
等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后(切记!),
将 主开关 按钮按到“OFF”。
(6)扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“OFF”
电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“OFF”
主开关 [ MAIN SWITCH ]“OFF”
(7)等 [灯箱] 充分冷却后,再放防尘罩。
(8)如果系统长时间(超过5个小时)不使用,则关闭稳压电源。
3 系统的维护
主要注意事项如下:
(1)打开稳压电源时,应等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关。
(2)严格遵守[激光器]的开、关流程(详见“2.1、2.4 开/关机顺序”)。
(3)如果使用过[油镜],或者物镜表面较脏,则需用[擦镜纸]擦干净物镜的前表 面(清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液,混合比例:无水乙醇30%、 无水乙醚70%)。
(4)不使用荧光时,不打开[荧光灯]。避免频繁开/关荧光灯。
(5)必须等灯箱充分冷却后,再小心地盖上[防尘罩]。
(6)显微镜可由[TFT触摸屏]控制,使用触摸屏时注意:
①手指保持清洁、干燥状态,并且为了保证他人使用安全,触摸时严禁配 戴有可能接触污染物或危险样品的手套;
②触摸屏已足够灵敏,不要大力按压触摸屏;
③不要旋转、插拔触摸屏。
(7)刻录图像数据资料:应使用刻录光驱刻录,实验前应准备好刻录光盘。 切记:为了防止计算机病毒,严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或 者上网!!!
(8)未经授权,严禁自行安装任何软件!!!
(9)实验室温度应保持在22℃±2℃,湿度40%-60%。
(10)避免空调直接对着显微镜吹风。
(11)整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。