第24卷1期2001年3月
文章编号：（2001）1001-244301-0071-02
安徽师范大学学报（自然科学版）
JOurnaI Of Anhui NOrmaI UniversiIy （NaIuraI Science ）VOI.24NO.1Mar . 2001
蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进
华田苗，刘再群
（安徽师范大学生命科学学院，安徽芜湖
241000）
摘要：采用“先离体法”和“后离体法”两种方法制备蛙坐骨神经-腓肠肌标本，通过实验记录，对标潜伏期和舒张期时程缩本的收缩机能进行了比较. 结果表明后离体法制备的标本单收缩幅度高，短，并对其原因进行了分析与讨论. 关键词：蛙；坐骨神经-腓肠肌；标本制备中图分类号：@422
文献标识码：C
上滴任氏液以保持神经润湿. 第三步，双毁髓，即用探针毁坏脑与脊髓. 第四步，在蛙颈椎部剪断脊柱，沿脊柱两侧剪开体壁，并一起剥去内脏和后肢皮肤，看准坐骨神经发出的部位剪下发出坐骨神经的一小块脊柱骨，快速游离坐骨神经并将其搭在腓肠肌上，滴任氏液润湿. 第五步，沿膝关节剪去股骨周围肌肉，保留股骨的下2/3剪断股骨，再剪断腓肠肌肌
腱，取出坐骨神经-腓肠肌标本.
将制备好的标本固定在肌槽上，立即进行单收缩实验. 用二道生理记录仪在刻度记录纸上记录单收缩曲线，走纸速度均为74. 0mm /秒，调试刺激强度为50伏. 打开刺激器，用手控开关单脉冲刺激标本的坐骨神经，每隔2分钟刺激一次，中间用任氏液润湿标本，每个标本记录前五次刺激的肌肉收缩曲线，测量并计算其收缩幅度的平均值以及潜伏期、收缩期和舒张期时程的平均值.
在“骨骼肌单收缩与强直收缩”实验中，坐骨神经-腓肠肌标本制备方法有必要改进. 按实验指导的要求，在蛙双毁髓后，先剪断脊柱、去除内脏、剥离皮肤，再分离后肢，最后分离坐骨神经和腓肠肌（本文称该方法为“先离体法”）。这样做，即使经常用任氏液润湿神经和肌肉，做出的标本机能仍然较差甚至机能丧失，进行单收缩或强直收缩实验效果不好，成功率较低。为此，设想采用活体蛙粗分离坐骨神经和腓肠肌，再双毁髓细分离坐骨神经—腓肠肌（本文称该方法为“后离体法”）.
! 材料和方法
20只活动正常的黑斑蛙于1999年6月从芜湖
市郊捕获，体重均在50-51克之间. 实验分两组进行，每组10只蛙. 一组用“后离体法”制备坐骨神经另一组用“先离体法”制备标本-腓肠肌标本10个，10个作实验对照.
“后离体法”制备坐骨神经-腓肠肌标本按如下五个步骤进行：第一步，取活体蛙，用眼科剪小心将蛙后肢背面皮肤剪开，用玻璃解剖针将皮肤稍向两侧分离，粗分离出腓肠肌，并用细线结扎好肌腱，经常滴任氏液润湿腓肠肌. 第二步，沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的缝隙找出坐骨神经并沿股部作粗分离，沿途将坐骨神经上分支的小神经剪断。粗分离的坐骨神经下垫上小脱脂棉条，经常向棉条
表1
标本号先离体法后离体法
19.711.2
210.514.1
39.112.2
48.811.3
511.312.8
6
"
" . !
结果
收缩幅度
两种方法制备标本的单收缩幅度见表1. 后离
体法制备标本的单收缩幅度比先离体法的显著增高，平均增幅约20%以上. I 检验结果表明：两种方法制备标本的单收缩幅度差异极其显著［I =5. 78>I 0.001. （两侧）=3.92］" . "
收缩时程
710.312.4
89.210.6
99.413.5
109.611.5
平均值9.8012.29
方差0.6151.392
后离体法和先离体法制备标本的单收缩幅度（单位：mm ）
10.113.3
收稿日期：2000-01-04
基金项目：安徽师范大学专业课教材改革研究经费资助作者简介：华田苗（1965-），男，安徽桐城人，副教授，硕士.
72安徽师范大学学报（自然科学版）2001年
两种方法制备标本的单收缩时程（包括潜伏期、收缩期和舒张期时程）见表2. 后离体法制备标本的单收缩潜伏期平均比先离体法的缩短1. 08毫秒（ms ），两种方法制备标本的单收缩t 检验结果表明，潜伏期时程差异很显著［t =2.91，2.878=t 0.01（两侧）
表2
标本号先
离体法后离体法
潜伏期收缩期舒张期潜伏期收缩期舒张期
111.448.563.210.549.562.2
211.848.563.711.451.361.8
312.549.265.111.748.659.8
411.348.166.212.249.860.9
513.251.462.09.952.459.3
6
收缩期时程与先离体法的很接近，经t 检验，两者差异不显著［t =0.187t 0.001. （两侧）=3.92］
两种方法制备标本的单收缩时程（单位：ms ）
711.648.863.412.849.060.5
812.352.164.010.748.360.1
913.150.365.111.251.359.7
1012.949.664.810.348.460.6
平均值12.2349.6264.4611.1549.7560.46
方差0.5432.142.510.8282.671.135
12.249.767.110.848.959.7
3讨论
可兴奋细胞兴奋性及传导性的维持主要依赖于
标本的单收缩潜伏期及舒张期时程比“先离体法”的缩短.
两种方法制备标本的单收缩收缩期时程无明显差异，但“后离体法”制备标本的单收缩幅度比“先离体法”的收缩幅度显著增大，其原因可能有两个方面：一是由于“后离体法”制备的标本脱离体循环时间较短，参与收缩的每根纤维中ATP 贮存相对较多，收缩时横桥摆动次数较多；二是由于“后离体法”制备的标本脱离体循环时间较短，神经及肌肉组织中堆积的代谢废物减少，因此中毒或死亡的神经纤维及肌纤维数减少，参与收缩的运动单位数较多.
细胞上Na +泵的活动来逆向转运Na +、K +离子. 骨
骼肌舒缩活动中舒张期的形成是由于肌细胞纵管膜上Ca 2+泵的活动将肌桨中的Ca 2+泵回到终池中贮存的缘故. Na +泵及Ca 2+泵的活动都需要分解ATP 消耗能量“先离体法”制备标本的过程中，一开始就. 毁髓、去除内脏和剥去皮肤，标本脱离体循环的时间很长，坐骨神经和腓肠肌得不到营养和氧气的补充，本身贮存的能量（ATP ）消耗较多，糖原和磷酸肌醇的分解以及脂肪酸氧化等一系列反应受抑制，致使神经及肌肉中ATP 合成减少，Na +泵及Ca 2+泵活动减弱，神经和肌肉纤维的兴奋传导速度减慢，肌桨中因此肌肉单收缩Ca 2+被泵回至终池的速度亦减慢，的潜伏期和舒张期延长，反过来说，“后离体法”制备
参考文献：
［1］解景田. 生理学实验指导［M ］高等教育出版社，. 北京：1987. ［2］王玢. 人体及动物生理学［M ］高等教育出版社，. 北京：1994. ［3］周衍椒，张镜如. 生理学［M ］人民卫生出版社，. 北京：1989.
IMPROVEMENT IN THE METHOD OF PREP R TION
FOR NERVE-MUSCLE SPECIMEN OF FROG
HUA Tian-miao ，LIU Zai-gun
（Coiiege of Life Science ，Anhui Normai University ，Wuhu ，Anhui ，241000，China ）
bstract：Nerve-muscie specimens of frogs were prepared by two distinct methods ：First detachment of specimen from the body ，and iast detachemnt. According to the record of experiments ，contracting functions of specimens prepared by the
“Last detachment ”specimens showed a higher average two ways were compared. It was found that singie muscie twitch of
of contraction range but a shorter average of time in iatent and reiaxation periods than that of “First detachment ”ones. Some reiative reasons were anaiysed and discussed.
words ：frog ；nerve-muscie specimen ；preparation method
蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
华田苗， 刘再群
安徽师范大学生命科学学院，安徽芜湖 241000安徽师范大学学报(自然科学版)CHINA INFORMATION REVIEW2001,24(1)1次
参考文献(3条)
1. 解景田 生理学实验指导 19872. 王玢 人体及动物生理学 19943. 周衍椒;张镜如 生理学 1989
本文读者也读过(9条)
1. 曹丽. 陈玉芬 浅谈坐骨神经腓肠肌标本制备在实验室教学中的几点注意事项[期刊论文]-科技信息2010(15)2. 陈月菲. 郑恒. 卢广兴. 肖行贞 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制备的不同与应用[期刊论文]-卫生职业教育2003,21(6)3. 路玉兰 制备坐骨神经--腓肠肌标本方法的改进[期刊论文]-廊坊师范学院学报2001,17(4)
4. 张志琴. 刘政政. 赵磊. 李丽. 马秀敏 坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改良[期刊论文]-石河子大学学报（自然科学版）2004,22(5)
5. 陈彤. 黄仁美. Chen Tong. Huang Renmei 温度对牛蛙腓肠肌收缩性的影响[期刊论文]-福建畜牧兽医2008,30(6)6. 钟以举. 卢成英 一种检验坐骨神经—腓肠肌标本功能的新方法[期刊论文]-生物学通报2002,37(5)7. 蒋贵川 坐骨神经-腓肠肌标本制作的改进[期刊论文]-中国科技纵横2010(20)
8. 邹容. 周希平. 保泽辂. 王国卿 运用Medlab生物信号采集处理系统对蛙神经肌肉机能测定的实验分析[期刊论文]-苏州大学学报(医学版)2004,24(4)
9. 朱兵. 贲卉. 徐卫东. 荣培晶. 李宇清 神经—肌肉继发性兴奋的时间总和——"循经感传"机制研究(Ⅱ)[期刊论文]-中国针灸2001,21(5)
引证文献(1条)
1. 蒋贵川 坐骨神经-腓肠肌标本制作的改进[期刊论文]-中国科技纵横 2010(20)
引用本文格式：华田苗. 刘再群 蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进[期刊论文]-安徽师范大学学报(自然科学版) 2001(1)
第24卷1期2001年3月
文章编号：（2001）1001-244301-0071-02
安徽师范大学学报（自然科学版）
JOurnaI Of Anhui NOrmaI UniversiIy （NaIuraI Science ）VOI.24NO.1Mar . 2001
蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进
华田苗，刘再群
（安徽师范大学生命科学学院，安徽芜湖
241000）
摘要：采用“先离体法”和“后离体法”两种方法制备蛙坐骨神经-腓肠肌标本，通过实验记录，对标潜伏期和舒张期时程缩本的收缩机能进行了比较. 结果表明后离体法制备的标本单收缩幅度高，短，并对其原因进行了分析与讨论. 关键词：蛙；坐骨神经-腓肠肌；标本制备中图分类号：@422
文献标识码：C
上滴任氏液以保持神经润湿. 第三步，双毁髓，即用探针毁坏脑与脊髓. 第四步，在蛙颈椎部剪断脊柱，沿脊柱两侧剪开体壁，并一起剥去内脏和后肢皮肤，看准坐骨神经发出的部位剪下发出坐骨神经的一小块脊柱骨，快速游离坐骨神经并将其搭在腓肠肌上，滴任氏液润湿. 第五步，沿膝关节剪去股骨周围肌肉，保留股骨的下2/3剪断股骨，再剪断腓肠肌肌
腱，取出坐骨神经-腓肠肌标本.
将制备好的标本固定在肌槽上，立即进行单收缩实验. 用二道生理记录仪在刻度记录纸上记录单收缩曲线，走纸速度均为74. 0mm /秒，调试刺激强度为50伏. 打开刺激器，用手控开关单脉冲刺激标本的坐骨神经，每隔2分钟刺激一次，中间用任氏液润湿标本，每个标本记录前五次刺激的肌肉收缩曲线，测量并计算其收缩幅度的平均值以及潜伏期、收缩期和舒张期时程的平均值.
在“骨骼肌单收缩与强直收缩”实验中，坐骨神经-腓肠肌标本制备方法有必要改进. 按实验指导的要求，在蛙双毁髓后，先剪断脊柱、去除内脏、剥离皮肤，再分离后肢，最后分离坐骨神经和腓肠肌（本文称该方法为“先离体法”）。这样做，即使经常用任氏液润湿神经和肌肉，做出的标本机能仍然较差甚至机能丧失，进行单收缩或强直收缩实验效果不好，成功率较低。为此，设想采用活体蛙粗分离坐骨神经和腓肠肌，再双毁髓细分离坐骨神经—腓肠肌（本文称该方法为“后离体法”）.
! 材料和方法
20只活动正常的黑斑蛙于1999年6月从芜湖
市郊捕获，体重均在50-51克之间. 实验分两组进行，每组10只蛙. 一组用“后离体法”制备坐骨神经另一组用“先离体法”制备标本-腓肠肌标本10个，10个作实验对照.
“后离体法”制备坐骨神经-腓肠肌标本按如下五个步骤进行：第一步，取活体蛙，用眼科剪小心将蛙后肢背面皮肤剪开，用玻璃解剖针将皮肤稍向两侧分离，粗分离出腓肠肌，并用细线结扎好肌腱，经常滴任氏液润湿腓肠肌. 第二步，沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的缝隙找出坐骨神经并沿股部作粗分离，沿途将坐骨神经上分支的小神经剪断。粗分离的坐骨神经下垫上小脱脂棉条，经常向棉条
表1
标本号先离体法后离体法
19.711.2
210.514.1
39.112.2
48.811.3
511.312.8
6
"
" . !
结果
收缩幅度
两种方法制备标本的单收缩幅度见表1. 后离
体法制备标本的单收缩幅度比先离体法的显著增高，平均增幅约20%以上. I 检验结果表明：两种方法制备标本的单收缩幅度差异极其显著［I =5. 78>I 0.001. （两侧）=3.92］" . "
收缩时程
710.312.4
89.210.6
99.413.5
109.611.5
平均值9.8012.29
方差0.6151.392
后离体法和先离体法制备标本的单收缩幅度（单位：mm ）
10.113.3
收稿日期：2000-01-04
基金项目：安徽师范大学专业课教材改革研究经费资助作者简介：华田苗（1965-），男，安徽桐城人，副教授，硕士.
72安徽师范大学学报（自然科学版）2001年
两种方法制备标本的单收缩时程（包括潜伏期、收缩期和舒张期时程）见表2. 后离体法制备标本的单收缩潜伏期平均比先离体法的缩短1. 08毫秒（ms ），两种方法制备标本的单收缩t 检验结果表明，潜伏期时程差异很显著［t =2.91，2.878=t 0.01（两侧）
表2
标本号先
离体法后离体法
潜伏期收缩期舒张期潜伏期收缩期舒张期
111.448.563.210.549.562.2
211.848.563.711.451.361.8
312.549.265.111.748.659.8
411.348.166.212.249.860.9
513.251.462.09.952.459.3
6
收缩期时程与先离体法的很接近，经t 检验，两者差异不显著［t =0.187t 0.001. （两侧）=3.92］
两种方法制备标本的单收缩时程（单位：ms ）
711.648.863.412.849.060.5
812.352.164.010.748.360.1
913.150.365.111.251.359.7
1012.949.664.810.348.460.6
平均值12.2349.6264.4611.1549.7560.46
方差0.5432.142.510.8282.671.135
12.249.767.110.848.959.7
3讨论
可兴奋细胞兴奋性及传导性的维持主要依赖于
标本的单收缩潜伏期及舒张期时程比“先离体法”的缩短.
两种方法制备标本的单收缩收缩期时程无明显差异，但“后离体法”制备标本的单收缩幅度比“先离体法”的收缩幅度显著增大，其原因可能有两个方面：一是由于“后离体法”制备的标本脱离体循环时间较短，参与收缩的每根纤维中ATP 贮存相对较多，收缩时横桥摆动次数较多；二是由于“后离体法”制备的标本脱离体循环时间较短，神经及肌肉组织中堆积的代谢废物减少，因此中毒或死亡的神经纤维及肌纤维数减少，参与收缩的运动单位数较多.
细胞上Na +泵的活动来逆向转运Na +、K +离子. 骨
骼肌舒缩活动中舒张期的形成是由于肌细胞纵管膜上Ca 2+泵的活动将肌桨中的Ca 2+泵回到终池中贮存的缘故. Na +泵及Ca 2+泵的活动都需要分解ATP 消耗能量“先离体法”制备标本的过程中，一开始就. 毁髓、去除内脏和剥去皮肤，标本脱离体循环的时间很长，坐骨神经和腓肠肌得不到营养和氧气的补充，本身贮存的能量（ATP ）消耗较多，糖原和磷酸肌醇的分解以及脂肪酸氧化等一系列反应受抑制，致使神经及肌肉中ATP 合成减少，Na +泵及Ca 2+泵活动减弱，神经和肌肉纤维的兴奋传导速度减慢，肌桨中因此肌肉单收缩Ca 2+被泵回至终池的速度亦减慢，的潜伏期和舒张期延长，反过来说，“后离体法”制备
参考文献：
［1］解景田. 生理学实验指导［M ］高等教育出版社，. 北京：1987. ［2］王玢. 人体及动物生理学［M ］高等教育出版社，. 北京：1994. ［3］周衍椒，张镜如. 生理学［M ］人民卫生出版社，. 北京：1989.
IMPROVEMENT IN THE METHOD OF PREP R TION
FOR NERVE-MUSCLE SPECIMEN OF FROG
HUA Tian-miao ，LIU Zai-gun
（Coiiege of Life Science ，Anhui Normai University ，Wuhu ，Anhui ，241000，China ）
bstract：Nerve-muscie specimens of frogs were prepared by two distinct methods ：First detachment of specimen from the body ，and iast detachemnt. According to the record of experiments ，contracting functions of specimens prepared by the
“Last detachment ”specimens showed a higher average two ways were compared. It was found that singie muscie twitch of
of contraction range but a shorter average of time in iatent and reiaxation periods than that of “First detachment ”ones. Some reiative reasons were anaiysed and discussed.
words ：frog ；nerve-muscie specimen ；preparation method
蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
华田苗， 刘再群
安徽师范大学生命科学学院，安徽芜湖 241000安徽师范大学学报(自然科学版)CHINA INFORMATION REVIEW2001,24(1)1次
参考文献(3条)
1. 解景田 生理学实验指导 19872. 王玢 人体及动物生理学 19943. 周衍椒;张镜如 生理学 1989
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1. 曹丽. 陈玉芬 浅谈坐骨神经腓肠肌标本制备在实验室教学中的几点注意事项[期刊论文]-科技信息2010(15)2. 陈月菲. 郑恒. 卢广兴. 肖行贞 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制备的不同与应用[期刊论文]-卫生职业教育2003,21(6)3. 路玉兰 制备坐骨神经--腓肠肌标本方法的改进[期刊论文]-廊坊师范学院学报2001,17(4)
4. 张志琴. 刘政政. 赵磊. 李丽. 马秀敏 坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改良[期刊论文]-石河子大学学报（自然科学版）2004,22(5)
5. 陈彤. 黄仁美. Chen Tong. Huang Renmei 温度对牛蛙腓肠肌收缩性的影响[期刊论文]-福建畜牧兽医2008,30(6)6. 钟以举. 卢成英 一种检验坐骨神经—腓肠肌标本功能的新方法[期刊论文]-生物学通报2002,37(5)7. 蒋贵川 坐骨神经-腓肠肌标本制作的改进[期刊论文]-中国科技纵横2010(20)
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9. 朱兵. 贲卉. 徐卫东. 荣培晶. 李宇清 神经—肌肉继发性兴奋的时间总和——"循经感传"机制研究(Ⅱ)[期刊论文]-中国针灸2001,21(5)
引证文献(1条)
1. 蒋贵川 坐骨神经-腓肠肌标本制作的改进[期刊论文]-中国科技纵横 2010(20)
引用本文格式：华田苗. 刘再群 蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进[期刊论文]-安徽师范大学学报(自然科学版) 2001(1)