藻类叶绿素和类胡萝卜素的快速薄板层析法

桂肠 吸度山厚

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叩 口

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类藻叶 绿和素类 胡 萝 卜的快 速 薄 板 层 析法素 1 潘

敏俊 张宪(孔国中科 学 院生水生物 研究 所

,

武 拐汉0 7 0)

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”o

幻2 c7)

植 物

合色 素光 薄的 板层析 常 通采用

硅 缸 暗 中析 室温 下层 析 5 分 钟 0左右

二光谱 测

:

、硅 藻土

糖类和 纤 维等 素作为 制板 吸 附,

层析 斑色以 同 溶 剂

不 e

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l 应剂 用 中 发现用 上 述 附 吸 制 剂 板分 离 o 色

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分洗别 后

,脱

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光度 计 (本

素有 时不 足之 处且制 板亦 较繁 琐

, ,

津)扫 描可 见 吸 收 光谱

丙聚烯 胺酞 是 种 一 性 可 活中 化 的 附

它剂 已 广泛应 用 于蛋 质 白氨 基 等酸 层的析中

,

果与讨

论 硅藻 的色 素 析分 有已大 量 的 研 究

, ,

但 用

于色 素分析 不 太 多,

我们 用 国产 聚

根据

,

, 烯丙 酞 胺 单 片一 次向层性 硅析藻 的 色 素 获

报 道 用传统 吸附 剂单 或向 双 层 向析 结的果 a

认 为硅 藻含有 两 种 绿叶素 ( 和o )

,得

较 为 意 满 结的

果。

此 法

将能 杂色 藻类的光

a

,

和四

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合色 素 括包 种两叶 绿 素 (和 o和 多 类种 胡 )

类 胡萝卜 即 素

胡萝 卜 组 素份

,

外 不用同 方的 在 法

,不

卜 萝清晰地 分 又开省 去 了 制 的 板烦 麻 快素速 而便简 适 于 植用 色 物素 分 的析

,

,同

的 硅 种 类藻中

,

还可 能检 出数 目 不的同 类

。,

们 用简我 的 便国产聚 丙 烯

。酸

材料 方与法

1.

片单 一 向性 层 次析 小 环藻 的 色 素 提 物

取得到 了

8

个清

晰的色 斑 (劝 测 定各 斑 的 图色

n

样品 制备

,

, 一 种广 盐用 生 性 长 单

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值,

分并 别 洗对 液脱 扫描 其30 ~ 7 0

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细 胞

硅 藻 小 环 藻 如 劫阅t玩 D 岛 作)材 l 料e

室的

吸收光谱 别 是 叶 绿素 、

果 (表 1) 显见 上述 各 斑色分 a

纯内 培种 养悬 液经 离心 获得 约0s m

.

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压缩,

绿素 。B 胡 一 萝 素卜麦角

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,

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的氯取化 溶 液钠,

黄素 藻 硅 藻甲黄 素 藻硅黄 素新 墨角藻 素黄 和 一 种尚未 鉴 定 的类胡 萝 出卜类 色 素

从素 在 而 际实 应用中 层

析图

谱 和R

:

,

夜离 弃沉心淀 清液 加上 等体积 的 醚乙

,

再 加

倍1体积

01 。多

匀、

般 只进 层 行析并 根 据

,分

缩)相6

x

,

。取 无水 乙醚 层 备 用 (必 要 时 吹 氮 气浓

.

值计算 就可 以 步 判初断 藻

,

胞所含细色 素 种 的类2

层析板

:丙 烯聚酞 胺 片 下活 化4 小 时:

,

6K 5 或

在1色 素 提取过 的程

丙 中酮 处 理叶 绿 素

我 们用酶1 0 多

0 a

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,

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黄 岩化 学分析 料材 厂出 使品

・据 报

,道

样 可 以 失活 细 胞的 被转中变 叶绿

,成

用 在前

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,

6

0C

0

,

而防从止 叶绿

溶 剂 素系统。

提取 和分 析均 使 用分 析:

素 .酸

。 叶绿素 酸 极脂易 染污 叶绿素 。

使

层 析

用 有 机 溶 配剂比 为 8 油 醚 多 (~9 ℃一 )2外 正 醇丙一 5 7外 丙石 0 6 0纯有 机 剂溶.

在 66

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~

处 示 显收吸 峰 闭

酮 。一 52 外 醇甲

,

用 现 配

样 置 入后层

19 8 9 1 一1U

单现位 : 轻工 部制 盐工 业研 究所 (天津 塘沽)

表!

. .

. . . ..

兼环主要的色组素和份百果跳胺片层析 R 场 :位及以谱 光特

收吸

.

. .

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)

出 无斑均匀 层 析片

1

,

4在 ~ 6℃ 活 化0

0 。

,4

即,可得 到 使 较用满意 的 析效果层

溶系统 的 选 较 用为 复杂

和的所 用的 吸 附 剂

它 主妥 决取于 层 析 目

文 中诸献 家用所多 有不

,

同月0

。由于 尚未

见 聚丙 用酞烯胺 制板层 析藻 类

,,,

素 色 报 的 我道 们 参在 他 人 经 考验的 基 上础.

两 。 必

恤 皿

配 行 多 试 溶剂 种系 统经 反 过复比 才 较

选出 述上较 为满 意 的溶 剂 系统 。

绿素 是 一 c 些杂 藻色类 所特 的 有

光 色合

素从

理论 上 断

。:

,环 藻小的叶 绿

素。

应该 有

还和 伪

之分 田

。,,

文本层 法析 虽然 c,

出了叶绿素分

但 未 能

和将

:分开。

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.

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若 要 分开 电 电

和 完成

。能

,

,至 少 要双需 层 析向 才是由于

,

此、外 本实验 的 中叶 绿素

小、环 藻 叶绿 素 和的 类 胡 萝卜 在 素

丙烯聚 酞胺 片 上 的 单 向层析一

,.

本基上 滞 留 点原 被 而分 出的,

且用甲 醇

色 1 月 胡 斑萝卜素 ( 色橙) 2叶 绿 素a 绿 色 ( 3) 墨 角藻黄 素( 色橙 ) 4 未知 胡类萝 卜素 ( 淡 色黄 石 硅) 藻黄甲素 ( 黄 色)6 硅藻 素 黄( 淡 色 ) 橙7 新 墨角 藻 黄素 ( 橙色) 8叶 绿 素叮 绿 色 ) 层 析 亮 溶 系剂 统方法见 3

.

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,

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氯仿等 多 种 机 有溶剂 不 将

能,

.

其脱洗而 只 有使用 毗陡才 将 之能洗 脱 溶解

一这方 面显 示 绿 叶素,

,

,.

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.

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组份

与聚 酞胺 吸 附

,。

合结比 较 固牢 另 方 一 面也 很可 能 由于 在

层 本析中 绿 叶 。素 得到 了 纯化 。

层析 之

,

丙 烯 胺片酞 要经 过严 挑

据报 道纯化

,

选和 处

理 约为

6

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般 的商品 聚 胺酞片 的 合 格 大率8

沁的叶

绿 素

仅溶 毗于咤

氢 喃吠种类 等溶

矛~

我 们 暗 中在 光对检

,

剂中

,

不于溶 用 一 般 于色素 的 述上 几种

1’ 用 溶 剂[

。以设可想。,

,

若 如制备 结 晶 的 式高

,

此 计简易 速 薄 层 层 析快方法

种光 合色

素。

,

也 应适 用

纯 叶绿素度

使用 聚 烯 酞胺丙 层柱 析 或

。 层 于 其析他 种 类的 类藻乃 高至植 等物中 的 多

以 略 省 许 去 多 存除 在于 叶 绿

,中

脂 类的

合 物 的 繁琐步 从 而 简骤化 纯 过程

藻类在 光 合 色 素的 分析 中

,

般 单 层

向1.

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种 子 在萌 发早 期 放出 挥 的发性 醛的 多

少,

与其 活力 的 低高 有关

,

因而 测定 发性

挥、

的 量 被含 认 为 是 种一简 易 速 和快实 用

的测 定 种子 活 的方力 法即 它 具有 设 备 单 快

速 。 重和复 性好 等特 点

的子力活

,

能准 区 确 不分同 批种,

有 关 定测种子 发挥 性醛 的 研究

。 ,

内尚未见 报道

本文 介绍 两测种定 种 子

萌发早 期 出 的放 挥发性 醛 量 方的法

并加比以

图 工

1.

通气 流 法吸 挥 发性收醛 的 装 置

2.

吸胀

萌 发 的种子

装 有 BM T 溶H 液的吸 收

,

,

o 放在Z CS 的恒 温箱 中过

。24

铝或小时 ,

测 定 方

1法.

后取

准另 备一 个2 5 On li

.

滤 瓶 抽内 放装o

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挥发 醛 的 收性集

三 动 收 法 (吸 气流 法) 通 ,

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部 放底 两层 纸

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简称

,

量种 的和适量 蒸子 水 使馏 种 子胀吸 发 萌 气抽 瓶 的 气嘴 用乳胶 管 套 上 夹紧 ; 同时 用带 有 活 塞二通 玻 管 的 橡 胶塞 瓶将口 塞

紧,

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收 挥 性发 醛用

收稿

198 9

按1

装好

,

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论 硅藻 的色 素 析分 有已大 量 的 研 究

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我们 用 国产 聚

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报 道 用传统 吸附 剂单 或向 双 层 向析 结的果 a

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此 法

将能 杂色 藻类的光

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还可 能检 出数 目 不的同 类

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文 中诸献 家用所多 有不

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见 聚丙 用酞烯胺 制板层 析藻 类

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选出 述上较 为满 意 的溶 剂 系统 。

绿素 是 一 c 些杂 藻色类 所特 的 有

光 色合

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理论 上 断

。:

,环 藻小的叶 绿

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应该 有

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文本层 法析 虽然 c,

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:分开。

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本基上 滞 留 点原 被 而分 出的,

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仅溶 毗于咤

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此 计简易 速 薄 层 层 析快方法

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使用 聚 烯 酞胺丙 层柱 析 或

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以 略 省 许 去 多 存除 在于 叶 绿

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种 子 在萌 发早 期 放出 挥 的发性 醛的 多

少,

与其 活力 的 低高 有关

,

因而 测定 发性

挥、

的 量 被含 认 为 是 种一简 易 速 和快实 用

的测 定 种子 活 的方力 法即 它 具有 设 备 单 快

速 。 重和复 性好 等特 点

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,

能准 区 确 不分同 批种,

有 关 定测种子 发挥 性醛 的 研究

。 ,

内尚未见 报道

本文 介绍 两测种定 种 子

萌发早 期 出 的放 挥发性 醛 量 方的法

并加比以

图 工

1.

通气 流 法吸 挥 发性收醛 的 装 置

2.

吸胀

萌 发 的种子

装 有 BM T 溶H 液的吸 收

,

,

o 放在Z CS 的恒 温箱 中过

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测 定 方

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后取

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简称

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紧,

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作吸

收 挥 性发 醛用

收稿

198 9

按1

装好

,

通 以

空气

上活

年8


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